生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告

生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告供檢驗(yàn)護(hù)理專業(yè)使用班級(jí)姓名鄭州大學(xué)護(hù)理學(xué)院實(shí)驗(yàn)一血清蛋白質(zhì)醋酸纖維薄膜電泳[目的][原理][儀器組成][操作與結(jié)果][結(jié)果粘貼]實(shí)驗(yàn)二酶的特異性[目的][原理][操作與結(jié)果]將以上1、2、3號(hào)試管置于37℃水浴箱保溫10分鐘。然后向各管中加班氏試劑20滴，沸水中煮沸10分鐘，取出勿振搖試管，觀察結(jié)果并記錄。[分析]三管結(jié)果及原因。實(shí)驗(yàn)三溫度、pH、激活劑、抑制劑對酶反應(yīng)的影響[目的][原理][操作與結(jié)果]（一）溫度對酶反應(yīng)的影響[分析各管的顏色變化原因]（二）pH對酶反應(yīng)的影響[分析各管的顏色變化原因]（三）激活劑、抑制劑對酶反應(yīng)的影響[分析各管的顏色變化原因]實(shí)驗(yàn)四721型分光光度計(jì)的使用[目的][原理][構(gòu)造][使用]實(shí)驗(yàn)五血清葡萄糖的測定[目的][原理][操作]將上述各管混勻，置于37℃水浴箱中保溫15分鐘，取出分別倒入0.5cm的比色杯中，選擇波長λ=505nm，用空白管調(diào)節(jié)“0”及“100”，分別讀取標(biāo)準(zhǔn)管及測定管的吸光度A標(biāo)、A測。[計(jì)算][臨床意義]實(shí)驗(yàn)六琥珀酸脫氫酶的作用及抑制[目的][原理][操作]取三支試管按下表操作[思考]1、液體石蠟起什么作用？2、各管顏色變化的原因？實(shí)驗(yàn)七肝臟中酮體的生成作用[目的][原理][操作][分析各管顏色變化的原因]實(shí)驗(yàn)八血漿CO2CP測定[目的][原理][操作][計(jì)算][意義]實(shí)驗(yàn)九血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶測定[目的][原理][操作]將空白管、測定管分別混勻，置入37℃水浴箱保溫30分鐘，取出加入2.4二硝基笨肼的鹽酸溶液各0.5ml混勻后再置入37℃水浴保溫20分鐘。取出加入0.4M的NaOH5ml，混勻。選擇波長λ=505nm，用空白管調(diào)節(jié)“0”及“100”，讀取測定管的吸光度A測。查標(biāo)準(zhǔn)曲線。[結(jié)果][意義]實(shí)驗(yàn)十血清鉀、鈉測定[目的][原理][操作]1、鈉測定計(jì)算2、鉀測定計(jì)算[思考題]血清K+、Na+測定有何臨床意義？第二篇：生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告論文3600字生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)報(bào)告論文班級(jí):質(zhì)量121學(xué)號(hào):20120844119姓名:張瑤瑤一、前言生物化學(xué)是一門聯(lián)系生物和化學(xué)的一門科學(xué)學(xué)科，學(xué)習(xí)生物化學(xué)可以提高我們嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)分析以及熟練的實(shí)驗(yàn)操作，本文主要講了金黃色葡萄球菌核糖核酸酶的分離實(shí)驗(yàn)，金黃色葡萄球菌是人類的一種重要病原菌，屬于葡萄球菌屬，可引起許多嚴(yán)重污染，本文主要通過核酸酶活性的測定，考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白質(zhì)溶液濃度，DEAE-纖維素的處理及裝柱，蛋白質(zhì)亞基分子量測定SDS凝膠電泳二、實(shí)驗(yàn)材料準(zhǔn)備共分為四組，了解實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、方案、原理?.1、取已配制好的金黃色葡萄球菌于離心管內(nèi)，8000rpm離心除掉菌體，保留上清（留1-2ml,p1）,用作后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2.2、將錐形瓶中的金黃色葡萄球菌液體放到沸水中煮30分鐘，10000rpm離心，保留上清液（留1-2ml,p2）,用作后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2.3、將離心好的上清液取60ml進(jìn)行75%硫酸銨飽和度沉淀實(shí)驗(yàn)，放置離心管，配平后4度冰箱中放置24小時(shí)。將硫酸銨沉淀液10000rpm離心，去上清，保留沉淀，緩沖液洗滌，方法是在第一支離心管中加入2ml緩沖液混勻倒入第二支離心管中，再取2ml于第一支離心管中洗一次，再倒入第二支離心管中，最后在第二支離心管中再加入2ml緩沖液。終體積為6ml（留0.5ml,p3）。2.4、DEAE-纖維素的處理及裝柱2.4.1、處理本實(shí)驗(yàn)采用的是DEAE-纖維素DE52是弱酸型陰離子交換劑，具體處理方法為:先將DE52陰離子交換劑干粉浸泡于蒸餾水中，去除雜質(zhì)；再在0.5N的Hcl溶液中浸泡1h,再用無離子水或蒸餾水洗至pH4以上，并將其在抽濾中抽干；將抽干的離子交換劑浸在0.5N的NaOH溶液中1h,再用無離子水或蒸餾水將其洗至中性。2.4.2、裝柱將層析柱清洗干凈垂直固定到層析架上，加1/3體積的無離子水，打開下出液口，水流暢通，即刻將小燒杯中裝有適宜濃度的柱才，輕輕倒入層析柱中，凝膠自然慢慢沉降在層析柱底部；凝膠沉積至高度10cm處，停止裝柱；夾上止液夾。2.4.3、平衡在柱層析上樣前必須對層析柱進(jìn)行平衡，將平衡緩沖液泵入到層析柱內(nèi)，打開層析柱下端的出口，當(dāng)下出口流出液的PH值與平衡緩沖液的PH值一致時(shí)（大于50ml平衡液），層析柱達(dá)到了平衡。在本實(shí)驗(yàn)中，用0.001MTris-HCl緩沖液PH9.0（內(nèi)含0.0001MEDTA）,預(yù)先將DE-52柱進(jìn)行平衡。2.5、上樣平衡液50ml用于收集，收集30-40ml即可。然后裝入透析袋，PEG2包埋，濃縮。收集濃縮液p4-x；2.6、透析袋預(yù)處理新的透析袋在沸水中煮沸10min.即可進(jìn)行透析。三、核酸酶活性的測定將甲苯胺藍(lán)核酸瓊脂溶化后，倒入平板中，凝固后，用直徑為2mm的打孔器打孔，將瓊脂取出，將待檢酶液10ul,滴入孔中，置于加有濕棉紗的濕盒內(nèi)，在37℃培養(yǎng)4h,陽性反應(yīng)在孔的周圍會(huì)出現(xiàn)1mm以上的粉紅圈，測量粉紅圈的直徑。四、考馬斯亮藍(lán)法測定蛋白質(zhì)濃度4.1、實(shí)驗(yàn)原理考馬斯亮藍(lán)能與蛋白質(zhì)的疏水微區(qū)相結(jié)合，這種結(jié)合具有高度敏感性?？捡R斯亮藍(lán)G250的磷酸溶液呈棕紅色，最大吸收峰在465nm。當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合形成復(fù)合物時(shí)呈藍(lán)色，其最大吸收峰改變?yōu)?95nm,考馬斯亮G250-蛋白質(zhì)復(fù)合物的高消光效應(yīng)導(dǎo)致了蛋白質(zhì)定量測定的高度敏感度。在一定范圍內(nèi)，考馬斯亮藍(lán)G250-蛋白質(zhì)復(fù)合物呈色后，在595nm下，吸光度與蛋白質(zhì)含量呈線性關(guān)系，故可用于蛋白質(zhì)濃度的測定。4.2、實(shí)驗(yàn)儀器及用品實(shí)驗(yàn)試劑:（1）水；（2）標(biāo)準(zhǔn)蛋白液:牛血清蛋白（0.1mg/ml