生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)2.血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定.?？?/h1>

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血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定實(shí)驗(yàn)二血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定

丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）是體內(nèi)最重要的轉(zhuǎn)氨酶之一，正常情況下，丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶主要存在于各組織細(xì)胞中（以肝細(xì)胞中含量最多，心肌細(xì)胞中次之），只有極少量釋放入血，所以血清中此酶活力很低。當(dāng)這些組織病變、細(xì)胞壞死或通透性增加時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的此類酶即可大量釋放入血液中，使血清中該酶活力顯著增高。因此在患各種肝炎急性病、藥物中毒性干細(xì)胞壞死等疾病時(shí)，血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶活力明顯增高。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.掌握血清丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶測定的原理和方法2.熟悉722G型可見光分光光度計(jì)的使用二、實(shí)驗(yàn)原理

血清中的丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT），在37℃、pH7.4的條件下，可催化基質(zhì)（底物）液中的丙氨酸與α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸。

在足量底物作用下，生成產(chǎn)物越多表明酶活力越大，酶濃度越高。一般以在一定時(shí)間內(nèi)丙酮酸的生成量代表血清ALT活力的大小

生成的丙酮酸可與2,4二硝基苯肼（起終止和顯色作用）發(fā)生加成反應(yīng)，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，進(jìn)而在堿性環(huán)境中生成紅棕色的苯腙硝醌化合物，其顏色的深淺在一定范圍內(nèi)與丙酮酸的生成量成正比關(guān)系。二、實(shí)驗(yàn)原理

然而反應(yīng)底物α-酮戊二酸也能與2,4二硝基苯肼作用，但因其量不多，加之對520nm的吸光度遠(yuǎn)不如丙酮酸生成的苯腙硝醌化合物強(qiáng)，為了減少α-酮戊二酸所形成苯腙的干擾作用，選擇520nm波長處進(jìn)行比色。(一）試劑

1、小牛血清

2、ALT底物液、2,4-二硝基苯肼溶液

0.4mol/LNaOH三、試劑和儀器(二）儀器

722G型可見光分光光度計(jì)、恒溫水浴箱四、操作步驟1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制（不做）。2.血清ALT活力測定取兩支試管按下表操作：

試劑（ml）測定管對照管血清0.10.1ALT底物液0.5-混勻，置37℃水浴保溫30min2,4-二硝基苯肼0.50.5ALT底物液-0.5混勻，置37℃水浴保溫20min0.4mol/LNaOH5.05.0

混勻，靜置室溫10min，以蒸餾水調(diào)零，在520nm波長處進(jìn)行比色。五、結(jié)果與分析查標(biāo)準(zhǔn)曲線測定管吸光度減去對照管吸光度

：A=A測定－A對照從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查出酶活力單位。本法正常值：0~30單位。注意事項(xiàng)加完試劑需要將試管內(nèi)溶液混勻注意水浴的溫度及時(shí)間分光光度計(jì)的正確使用【臨床意義】肝細(xì)胞中含ALT最豐富，因此當(dāng)肝臟疾病致肝細(xì)胞受損傷時(shí)，ALT即大量釋放入血液，致使血清中ALT活性增高。測定ALT是檢查肝功能的重要指標(biāo)之一。ALT顯著增高見于各種急性肝炎及藥物中毒性肝細(xì)胞壞死，