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文檔簡介

血清丙氨酸氨基轉移酶測定實驗二血清丙氨酸氨基轉移酶測定

丙氨酸氨基轉移酶（ALT）是體內最重要的轉氨酶之一，正常情況下，丙氨酸氨基轉移酶主要存在于各組織細胞中（以肝細胞中含量最多，心肌細胞中次之），只有極少量釋放入血，所以血清中此酶活力很低。當這些組織病變、細胞壞死或通透性增加時，細胞內的此類酶即可大量釋放入血液中，使血清中該酶活力顯著增高。因此在患各種肝炎急性病、藥物中毒性干細胞壞死等疾病時，血清丙氨酸氨基轉移酶活力明顯增高。一、實驗目的1.掌握血清丙氨酸氨基轉移酶測定的原理和方法2.熟悉722G型可見光分光光度計的使用二、實驗原理

血清中的丙氨酸氨基轉移酶（ALT），在37℃、pH7.4的條件下，可催化基質（底物）液中的丙氨酸與α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸。

在足量底物作用下，生成產物越多表明酶活力越大，酶濃度越高。一般以在一定時間內丙酮酸的生成量代表血清ALT活力的大小

生成的丙酮酸可與2,4二硝基苯肼（起終止和顯色作用）發(fā)生加成反應，生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙，進而在堿性環(huán)境中生成紅棕色的苯腙硝醌化合物，其顏色的深淺在一定范圍內與丙酮酸的生成量成正比關系。二、實驗原理

然而反應底物α-酮戊二酸也能與2,4二硝基苯肼作用，但因其量不多，加之對520nm的吸光度遠不如丙酮酸生成的苯腙硝醌化合物強，為了減少α-酮戊二酸所形成苯腙的干擾作用，選擇520nm波長處進行比色。(一）試劑

1、小牛血清

2、ALT底物液、2,4-二硝基苯肼溶液

0.4mol/LNaOH三、試劑和儀器(二）儀器

722G型可見光分光光度計、恒溫水浴箱四、操作步驟1.標準曲線的繪制（不做）。2.血清ALT活力測定取兩支試管按下表操作：

試劑（ml）測定管對照管血清0.10.1ALT底物液0.5-混勻，置37℃水浴保溫30min2,4-二硝基苯肼0.50.5ALT底物液-0.5混勻，置37℃水浴保溫20min0.4mol/LNaOH5.05.0

混勻，靜置室溫10min，以蒸餾水調零，在520nm波長處進行比色。五、結果與分析查標準曲線測定管吸光度減去對照管吸光度

：A=A測定－A對照從標準曲線上查出酶活力單位。本法正常值：0~30單位。注意事項加完試劑需要將試管內溶液混勻注意水浴的溫度及時間分光光度計的正確使用【臨床意義】肝細胞中含ALT最豐富，因此當肝臟疾病致肝細胞受損傷時，ALT即大量釋放入血液，致使血清中ALT活性增高。測定ALT是檢查肝功能的重要指標之一。ALT顯著增高見于各種急性肝炎及藥物中毒性肝細胞壞死，

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