微生物檢驗基本知識-實驗室生物安全

實驗室生物安全概述

一、實驗室生物安全與保障

（一）實驗室生物安全的概念和防護措施1．實驗室生物安全的概念

：實驗室生物安全是指用以防止實驗室發(fā)生病原體或毒素意外暴露及釋放的防護原則、技術及實踐。實驗室生物安全概述

?安全設備和個人防護（一）實驗室生物安全的概念和防護措施2．實驗室生物安全防護措施?實驗室設計與建造?實驗室生物安全管理規(guī)章制度?安全操作規(guī)程生物安全柜實驗室生物安全概述

1.概念：即單位和個人為防止病原體或毒素丟失、被竊、濫用、轉移或有意釋放而采取的安全措施。2.措施：

?

病原體和毒素的貯存位置、接觸人員資料、使用記錄、運送記錄、對材料進行滅活和（或）丟棄等情況的最新調(diào)查結果；

?相關人員的作用和責任；

?必要時公共衛(wèi)生和安全保障管理部門在發(fā)生違反安全保障事件時的介入程度、作用和責任等；

?調(diào)查并糾正違規(guī)行為。（二）實驗室生物安全保障的概念和措施二、微生物危害評估進行微生物危害度評估最有用的工具之一就是列出微生物的危險度等級。適當時還應考慮以下因素：

?病原微生物的致病性和感染量；?暴露的潛在后果；?自然傳播途徑；?實驗室操作所致的其他感染途徑；?病原微生物在環(huán)境中的穩(wěn)定性；實驗室生物安全概述

?所操作病原微生物的濃度；?病原微生物的宿主；?從動物研究和實驗室感染報告或臨床報告中得到的信息；?擬進行的實驗操作（如超聲處理、離心等）；?可能會擴大微生物的宿主范圍或改變病原微生物對于已知有效治療方案敏感性的所有基因技術；?當?shù)厥欠衲苓M行有效的預防或治療。實驗室生物安全概述

三、病原微生物的分類管理實驗室生物安全概述

國內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較《病原微生物實驗室生物安全管理條例》《實驗室生物安全通用要求》(GB19489-2004)WHO《生物安全手冊》(第三版，2004)四類在通常情況下不會引起人類或者動物疾病的微生物。

Ⅰ級（低個體危害，低群體危害）不會導致健康工作者和動物致病的細菌、真菌、病毒和寄生蟲等生物因子。Ⅰ級（無或極低的個體和群體危險）不太可能引起人或動物致病的微生物。

三類能夠引起人類或者動物疾病，但一般情況下對人、動物或者環(huán)境不構成嚴重危害，傳播風險有限，實驗室感染后很少引起嚴重疾病，并且具備有效治療和預防措施的微生物。

Ⅱ級(中等個體危害，有限群體危害)能引起人或動物發(fā)病，但一般情況下對健康工作者、群體、家畜或環(huán)境不會引起嚴重危害的病原微生物。實驗室感染不導致嚴重疾病，具備有效治療和預防措施，并且傳播風險有限。

Ⅱ級（個體危險中等，群體危險低）病原微生物能夠對人或動物致病，但對實驗室工作人員、社區(qū)、牲畜或環(huán)境不易導致嚴重危害。實驗室暴露也許會引起嚴重感染，但對感染有有效的預防和治療措施，并且疾病傳播的危險有限。管理條例 通用要求 WHO安全手冊實驗室生物安全概述

二類能夠引起人類或者動物嚴重疾病，比較容易直接或者間接在人與人、動物與人、動物與動物間傳播的微生物。Ⅲ級（高個體危害，低群體危害）能引起人類或動物嚴重疾病，或造成嚴重經(jīng)濟損失，但通常不能因偶然接觸而在個體間傳播，或能使用抗生素、抗寄生蟲藥治療的病原微生物。Ⅲ級（個體危險高，群體危險低）病原微生物通常能引起人或動物的嚴重疾病，但一般不會發(fā)生感染個體向其他個體的傳播，并且對感染有有效的預防和治療措施。管理條例 通用要求 WHO安全手冊實驗室生物安全概述

一類能夠引起人類或動物嚴重疾病的微生物，以及我國尚未發(fā)現(xiàn)或者已經(jīng)宣布消滅的微生物。

Ⅳ級(高個體危害，高群體危害)能引起人類或動物非常嚴重的疾病，一般不能治愈，容易直接或間接或因偶然接觸在人與人，人與動物，動物與動物間傳播的病原微生物。Ⅳ級（個體和群體的危險均高）病原微生物通常能引起人或動物的嚴重疾病，并且很容易發(fā)生個體之間的直接或間接傳播，對感染一般沒有有效的預防和治療措施。管理條例 通用要求 WHO安全手冊實驗室生物安全概述

四、實驗室生物安全的重要意義實驗室生物安全概述

是建立病原微生物研究安全平臺的需要是生物防護（國防）的需要是出入境檢驗檢疫的需要是動物防疫的需要是傳染病的預防與控制的需要是醫(yī)院感染控制的需要GOARN監(jiān)測網(wǎng)絡離不開生物安全實驗室生物安全實驗室操作技術規(guī)范

一、實驗室準入要求1.禁止非工作人員進入實驗室。參觀實驗室等特殊情況須經(jīng)實驗室負責人批準后方可進入。2.實驗室的門應保持關閉。3.BSL-2實驗室入口處應貼有國際通用的生物危害警告標志，其下部應注明實驗室的生物安全等級、實驗室名稱、負責人姓名和聯(lián)系電話等有關信息

4.進入動物房應當經(jīng)過特殊批準，禁止將無關動物帶入實驗室。二、實驗室操作要求1.所有實驗操作要按盡量減少微小液滴和氣溶膠產(chǎn)生的方式來進行。2.以移液器吸取液體，禁止舔標簽。3.應限制使用皮下注射針頭和注射器。4.盡可能應用一次性注射器，用過的針頭禁止折彎、剪斷、折斷、重新蓋帽，禁止用手從注射器上取下針頭。用過的針頭必須放入防穿透的銳器盒中。非一次性利器必須放入銳器盒中并運送到特定區(qū)域進行高壓滅菌。5.禁止用手處理破碎的玻璃器具。裝有污染針、利器及破碎玻璃的容器在丟棄之前必須高壓滅菌。二、實驗室操作要求6.實驗室必須制定并嚴格執(zhí)行處理溢出物的標準操作規(guī)程。7.在處理完感染性實驗材料和動物以及其他有害物質后，脫掉手套后及離開實驗室前，都必須洗手。8.禁止在實驗室工作區(qū)進食、飲水、吸煙、處理隱形眼鏡、化妝及儲存食物。9.每天工作結束后應消毒工作臺面，具有潛在危害性的材料濺出后要隨時消毒。二、實驗室操作要求10.所有培養(yǎng)物、廢棄物在運出實驗室之前必須進行高壓滅菌。需運出實驗室滅菌的物品必須放在專用密閉防漏的容器內(nèi)儲存、運輸。11.實驗室的文件紙張只有保證未受到污染才可帶出。12.將生物安全程序納入標準操作規(guī)范或生物安全手冊，由實驗室負責人專門保管，工作人員在進入實驗室之前要閱讀規(guī)范并按照規(guī)范要求操作。13.工作人員要接受有關的潛在危險知識的培訓，掌握預防暴露以及暴露后的處理程序。每年要接受一次最新的培訓。三、感染性物質的操作與處理

（一）感染性物質的操作

1.標本采集：必須有掌握相關職業(yè)知識和操作技能的工作人員進行采集，并根據(jù)采集的標本中可能含有病原微生物的危害程度而采取相應的個人防護。2.標本運送：采集的標本應采取防止污染工作人員、患者及環(huán)境的方式在醫(yī)療機構內(nèi)運送。（一）感染性物質的操作3.標本接收和打開：需要接收大量標本的實驗室應當設專門的房間或空間。標本的內(nèi)層容器應在生物安全柜內(nèi)打開，并備好消毒劑。

（一）感染性物質的操作

4.血清分離：操作時應戴手套并注意眼睛和黏膜的防護。

5.感染性物質凍干管的開啟和儲存：凍干管的開啟應在生物安全柜中進行。首先清潔外表面，在管上靠近棉花或纖維塞的中部銼一痕跡，用一團酒精浸泡的棉花將管包起來以保護雙手，然后從銼痕處打開。將頂部小心移去并按污染材料處理。緩慢向管中加入液體重懸凍干物，避免出現(xiàn)泡沫。（二）暴露的處理

1．銳器傷及其他損傷：受傷人員應立即停止工作，脫防護服；清洗雙手和受傷部位，如有傷口，應當在傷口旁端輕輕擠壓，盡可能擠出損傷處的血液，再用洗手液和流動水沖洗，禁止進行傷口的局部擠壓；受傷部位的傷口沖洗后，使用皮膚消毒劑，如75%乙醇或者0.5%碘伏進行消毒，必要時進行醫(yī)學處理；應記錄受傷原因及相關微生物，并保留完整的醫(yī)療記錄。（二）暴露的處理

2．潛在感染性物質的食入

：應立即脫防護服并進行醫(yī)學處理，要報告食入材料的特性和暴露細節(jié)，并保留完整的醫(yī)療記錄。3．潛在危險性氣溶膠釋放：所有人員必須立即撤離現(xiàn)場，并及時通知實驗室負責人和生物安全負責人，暴露者接受醫(yī)學咨詢。應張貼“禁止進入”的標志，待氣溶膠排出、粒子沉降（約1小時）后方可入內(nèi)。清除污染時應穿戴適當?shù)姆雷o裝備。（二）暴露的處理4.潛在感染性物質溢出：處理溢出的人員必須穿防護服，戴手套，必要時需對面部和眼睛進行保護。首先用布或紙巾覆蓋，由外圍向中心傾倒消毒劑，作用一定時間（約30分鐘）后，將布、紙巾以及破損物品清理掉，玻璃碎片應用鑷子或硬的厚紙板等工具清理并置于銳器盒中，切勿直接用手，以免刺破皮膚。再用消毒劑擦拭污染區(qū)域。用于清理的布、紙巾、抹布及厚紙板應放在盛放污染性廢棄物的容器內(nèi)，污染的文件（包括記錄）復制后，將原件丟入放污染物廢棄物的容器。（二）暴露的處理5．離心管破碎：

如果正在運行時非封閉離心桶的離心機內(nèi)盛有潛在感染性物質的離心管發(fā)生破裂，應關閉機器電源，停止后密閉離心桶約30分鐘，待氣溶膠沉降后開蓋。

若離心機停止時發(fā)現(xiàn)離心管破碎，應立即蓋上離心機，密閉30分鐘。隨后操作都應戴結實手套。玻璃碎片用鑷子等工具清除，所有破碎的離心管、玻璃碎片、離心桶、十字軸和轉子都應放在無腐蝕性、已知對相關微生物具有殺滅活性的消毒劑內(nèi)，消毒30分鐘。

未破損的帶蓋離心管應放在另一裝有消毒劑的容器內(nèi)，然后回收。離心機內(nèi)腔應用適當濃度的同種消毒劑反復擦拭，然后用水沖洗并干燥。（三）感染性物質的運輸

感染性物質運輸要求按內(nèi)層、中層、外層三層進行包裝。（四）感染性廢棄物的處理

感染性廢棄物處理的首要原則是必須在實驗室內(nèi)清除污染后丟棄。高壓蒸汽滅菌是清除污染時首選的方法。所有感染性廢棄物都應裝入可高壓滅菌的黃色塑料袋，并置于防滲漏的容器內(nèi)進行高壓滅菌后，放到運輸容器內(nèi)運輸至焚燒爐。（四）感染性廢棄物的處理

每個工作臺應放置盛放廢棄物的容器、盤子或廣口瓶，最好是不易破損的容器并有生物危害標記。實驗過程產(chǎn)生的感染性廢棄物，宜置于盛有適宜消毒液的防碎裂的容器中浸泡，廢棄物應保持和消毒液直接接觸狀態(tài)，并根據(jù)消毒劑的種類與特點確定浸泡時間，

將消毒液及廢棄物分別置于合適的容器中進行高壓滅菌或焚燒處理。污染的或可能污染的玻璃碎片、注射針等銳器應置于耐扎銳器盒內(nèi)，按以上原則處理。生物安全實驗室與設備要求

一、實驗室生物安全防護水平分級

《實驗室生物安全通用要求》（GB19489-2008）根據(jù)生物安全實驗室所操作的生物因子的危害程度及采取的防護措施，將生物安全實驗室的生物安全防護水平分為4級。分級處理對象BSL-1對個體和群體低危害，不具有對健康成人、動物致病的致病因子。BSL-2對個體中等危害，對群體危害較低，對人和動物有致病性，但對健康成人、動物和環(huán)境不會造成嚴重危害。具有有效的預防和治療措施。BSL-3對個體高度危害，對群體危害程度較高。通過直接接觸或氣溶膠使人傳染上嚴重的甚至是致命疾病的致病因子，通常有預防和治療措施。BSL-4對個體和群體具有高度危害性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明，或未知的、高度危險的致病因子。沒有預防和治療措施。一、實驗室生物安全防護水平分級

危害等級生物安全水平實驗室類型實驗室操作安全設備Ⅰ級BSL-1（基礎實驗室）基礎的教學、研究GMT不需要；開放實驗臺Ⅱ級BSL-2（基礎實驗室）初級衛(wèi)生服務；診斷、研究GMT加防護服、生物危害標志開放實驗臺，此外需BSC用于防護可能生成的氣溶膠Ⅲ級BSL-3（屏障實驗室）特殊的診斷、研究在二級生物安全防護水平上增加特殊防護服、準入制度、定向氣流BSC和／或其他所有實驗室工作所需要的基本設備Ⅳ級BSL-4（高度屏障實驗室）危險生物因子研究在三級生物安全防護水平上增加氣鎖入口、出口淋浴、污染物品的特殊處理Ⅲ級BSC或Ⅱ級BSC加正壓服、雙開門高壓滅菌器（穿過墻體）、經(jīng)過濾的空氣與病原微生物危害等級相對應的生物安全水平、實驗室類型、實驗室操作以及主要安全設備的要求。

1.清潔區(qū)：為未被病原微生物污染的區(qū)域，包括辦公室、休息室、培養(yǎng)基配制室與試劑儲藏室等，此區(qū)域禁止帶入細菌檢驗標本。

2.半污染區(qū)：為可能被病原微生物污染的區(qū)域如緩沖間、工作服放置室、走廊等。

3.污染區(qū)（操作區(qū)）：為已被病原微生物污染的區(qū)域，用于接收臨床標本，進一步接種、分離培養(yǎng)、鑒定和藥敏試驗及結果報告等工作。

（一）臨床微生物實驗室布局二、臨床微生物實驗室布局與基本要求

1．BSL-1和BSL-2實驗室設計的安全原則

在設計實驗室時應考慮可能造成實驗室安全問題的情況，主要包括：氣溶膠形成處理高濃度微生物節(jié)肢動物和嚙齒動物的侵擾

儀器設備過多和過度擁擠無關人員未經(jīng)允許進入實驗室一些特殊樣品和試劑使用的工作流程（二）實