DB51T 1849-2014 家畜布魯氏菌病防治技術規(guī)范　　

2014-09-19發(fā)布2014-10-01實施四川省質量技術監(jiān)督局發(fā)布I II 1 13術語和定義 1 1 2 27疫情報告 38疫情處理 39免疫 410監(jiān)測 511人員防護 5附錄A(規(guī)范性附錄)酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA) 6本標準于2006年首次發(fā)布，2014年5月第一次修訂。自本標準實施之日起，原DB51/T575-2006同時廢止。本標準附錄A為規(guī)范性附錄。本標準由四川省農(nóng)業(yè)廳提出并歸口。本標準由四川省質量技術監(jiān)督局批準。本標準由四川省動物疫病預防控制中心負責起草。本標準主要起草人：余勇、毛光瓊、張東、陳斌、陽愛國、鄧永強、郭莉、侯巍、陳冬、文豪、吳宣、邢坤、張代芬、羅毅。1家畜布魯氏菌病防治技術規(guī)范本標準規(guī)定了家畜布魯氏菌病的樣品采集、實驗室診斷、疫情報告、疫情處理、免疫、監(jiān)測和人員本標準適用于家畜布魯氏菌病的防治。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB16548病害動物和病害動物產(chǎn)品生物安全處理規(guī)程GB/T18635動物防疫基本術語GB/T18646動物布魯氏菌病診斷技術GB/T16569畜禽產(chǎn)品消毒規(guī)范NY/T541動物疫病實驗室檢驗采樣方法NY/T907動物布氏桿菌病控制技術規(guī)范NY/T1467奶牛布魯氏菌病PCR診斷技術3術語和定義下列術語和定義適用于本標準。布魯氏菌病(brucellosis)由布魯氏菌屬細菌引起的以感染家畜為主的人獸共患的傳染病，我國將其列為二類動物疫病。4流行病學特點4.1流行特點潛伏期一般為14d~180d。多種動物對布魯氏菌易感。家畜中羊、牛、豬的易感性最強。母畜比公畜、成年畜比幼年畜發(fā)病多。在母畜中，第一次妊娠母畜發(fā)病較多。帶菌動物，尤其是患畜、流產(chǎn)胎兒、胎衣是主要傳染源。消化道、呼吸道、生殖道是主要的感染途徑，也可通過損傷的皮膚、粘膜等感染。常呈地方性流行。4.2臨床癥狀最顯著癥狀是懷孕母畜發(fā)生流產(chǎn)，流產(chǎn)后可能發(fā)生胎衣滯留和子宮內膜炎，從陰道流出污穢不潔、2惡臭的分泌物。公畜往往發(fā)生睪丸炎、附睪炎或關節(jié)炎。4.3病理變化主要病變?yōu)樯称鞴俚难仔詨乃?，淋巴結、肝、腎、脾等器官形成特征性肉芽腫(布病結節(jié))。有的可見關節(jié)炎。胎兒主要呈敗血癥病變，漿膜和粘膜有出血點和出血斑，皮下結締組織發(fā)生漿液性、出血性炎癥。5樣品采集、保存和運輸包裝要求采集、保存和運輸包裝須符合下列要求。5.1樣品的采集和保存5.1.1組織樣品組織樣品采集流產(chǎn)胎衣、絨毛膜和流產(chǎn)胎兒的肺、脾、胃內容物等。5.1.2血清樣品采集動物血液，每頭不少于5ml。分離血清裝入滅菌離心管中，加蓋密封后冷藏保存。5.1.3采集樣品時，應采集雙份作備份，填寫樣品采集登記表。樣品容器須加貼防水標簽，并寫明樣品編號、采集地點、采樣人、動物種類、時間等。5.2樣品運輸包裝5.2.1內包裝要求：不滲水的主容器；不滲水的輔助包裝；必須在主容器和輔助包裝之間填充吸附材料。吸附材料必須充足，能夠吸收主容器內所有的液體。多個主容器裝入一個輔助包裝時，必須將它們分別包裹。5.2.2外包裝要求：包裝材料要不易破碎，要注意防水和滲漏。必要時填充防震材料和適當冷凍劑。6實驗室診斷6.1病原學診斷6.1.1顯微鏡檢查采集流產(chǎn)胎衣、絨毛膜和流產(chǎn)胎兒的肺、脾、胃內容物等組織，制成抹片，用柯茲羅夫斯基染色法染色，鏡檢，如果發(fā)現(xiàn)有紅色球桿狀小桿菌時，而其它菌為藍色，即可初步診斷。6.1.2分離培養(yǎng)病料可用胰蛋白胨瓊脂斜面或血液瓊脂斜面、肝湯瓊脂斜面、3%甘油0.5%葡萄糖肝湯瓊脂斜面等培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)時，一份在普通條件下，另一份放于含有5～10%二氧化碳的環(huán)境中，37℃培養(yǎng)7d~10d。然后進行菌落特征檢查和單價特異性抗血清凝集試驗可確診布魯氏菌病。奶牛新鮮原乳、流產(chǎn)母牛乳汁、流產(chǎn)母牛陰道分泌物、血液、流產(chǎn)胎兒胃液、種公牛精液，可采用PCR診斷，見NY/T1467。36.2血清學診斷6.2.1虎紅平板凝集試驗(RBPT)(按GB/T18646操作)。6.2.2酶聯(lián)免疫吸附試驗(見附錄)。6.2.4試管凝集試驗(SAT)(按GB/T6.3結果判定縣級以上動物預防控制機構負責布魯氏菌病診斷結果的判定。6.3.1疑似疫情判定符合4.1、4.2和4.3時，判定為疑似疫情。6.3.2疑似患病動物判定6.2.1或6.2.2或6.2.3為陽性時，判定為疑似患病動物。6.3.3確診患病動物6.3.3.1符合6.1.1,且6.1.2或6.1.3陽性時，判定為患病動物。6.3.3.2未免疫動物，6.2.4或6.2.5陽性時，判定為患病動物。7疫情報告7.1任何單位和個人發(fā)現(xiàn)疑似疫情，應及時向縣級以上動物疫病預防控制機構報告。7.2疫情報告內容包括：疫情發(fā)生的時間、地點，染疫和疑似染疫動物種類和數(shù)量、同群動物數(shù)量、免疫情況死亡情況、臨床癥狀、病理變化、診斷情況、流行病學和疫源追蹤情況，已采取的控制措施，疫情報告單位、負責人及聯(lián)系方式。7.3動物疫病預防控制機構接到疫情報告并確認后，按規(guī)定及時上報。8疫情處理8.1發(fā)現(xiàn)疑似疫情，畜主應限制動物移動；對疑似患病動物應立即隔離。8.2確診后，按下列要求處理。對患病動物全部撲殺。8.2.2.1對受威脅的畜群(病畜的同群畜)實施隔離，可采用圈養(yǎng)和固定草場放牧兩種方式隔離。8.2.2.2隔離飼養(yǎng)用草場，遠離交通要道，居民點或人畜密集區(qū)。場地周圍最好有自然屏障或人工柵48.2.3無害化處理患病動物及其流產(chǎn)胎兒、胎衣、排泄物、乳、乳制品等按照GB16548《病害動物和病害動物產(chǎn)品生物安全處理規(guī)程》進行無害化處理。8.2.4流行病學調查開展流行病學調查和疫源追蹤；對同群動物進行監(jiān)測。8.2.5.1對患病動物污染的場所、用具、物品嚴格進行消毒。8.2.5.2飼養(yǎng)場的金屬設施、設備可采取火焰、熏蒸等方式消毒；養(yǎng)畜場的圈舍、場地、車輛等，可選用2%燒堿等有效消毒藥消毒；飼養(yǎng)場的飼料、墊料等，可采取深埋發(fā)酵處理或焚燒處理；糞便消毒采取堆積密封發(fā)酵方式。皮毛消毒用環(huán)氧乙烷、福爾馬林熏蒸等。9.1免疫接種9.1.1免疫接種的對象：牛、羊等。種用、乳用動物禁止免疫。9.1.2免疫接種的范圍：甘孜州、阿壩州部分疫區(qū)縣。9.1.3免疫接種時間：根據(jù)所選擇疫苗的使用說明書要求的時間和程序進行免疫。9.1.4免疫接種方式：根據(jù)不同疫苗、不同畜種選用適合的免疫接種方式。9.1.5疫苗的運輸、貯藏和使用應符合《獸藥管理條例》的相關規(guī)定。9.2疫苗接種要求9.2.1疫苗使用前須檢查包裝，是否破損。9.2.2對家畜的要求：接種的家畜臨床未見異常，處于安靜狀態(tài)，畜體清潔。病畜、體質瘦弱畜暫不接種，待患病畜康復后再按規(guī)定接種。9.2.3器械要求9.2.3.1根據(jù)接種途徑、畜種及其日齡等因素，選擇適合的針頭或灌喂器具。9.2.3.2注射器和針頭應潔凈，并用濕熱方法高壓滅菌或用潔凈水加熱煮沸消毒至少15分鐘。不可使用化學方法消毒。9.2.3.3滅菌后的注射器與針頭放置7d以上的，使用前應重新滅菌消毒。9.2.4接種操作9.2.4.1疫苗在使用間歇中應冷藏，避免日光直射。9.2.4.2疫苗稀釋后，應放在冷藏容器內，嚴禁凍結。氣溫在15℃以下，須在6h內用完；氣溫在159.2.4.3吸出的疫苗不可回注于瓶內；針筒排氣溢出的疫苗應吸積于酒精棉球上，用過的酒精棉球、碘酊棉等應集中無害化處理。9.2.4.4注射部位必須消毒，疫苗的稀釋液及注射劑量按疫苗使用說明書進行。9.2.4.5嚴禁與其它疫苗混合注射，接種時每頭畜須更換針頭。9.2.4.6緊急接種時，免疫接種順序應從安全區(qū)到受威脅區(qū)，最后到疫區(qū)。59.3免疫檔案免疫接種后應建立免疫檔案。免疫檔案須填寫畜主姓名、畜種、疫苗名稱、疫苗生產(chǎn)廠家、疫苗來源、批號、免疫劑量、免疫時間、免疫耳標編號、防疫員簽名、畜主簽名等內容。10.1監(jiān)測方法常規(guī)監(jiān)測以血清學方法為主，按6.2中的監(jiān)測方法進行。10.2監(jiān)測范圍、數(shù)量10.2.1所有的奶牛、奶山羊和種畜每年必須進行1次以上血清學監(jiān)測。10.2.2免疫地區(qū)：對新生畜、未免疫畜、免疫一年半或口服免疫一年以后的牲畜進行監(jiān)測(豬可在口服免疫半年后進行)。監(jiān)測至少每年進行一次，每個縣抽檢300頭(只)以上。10.2.3非免疫地區(qū)：監(jiān)測至少每年進行一次。每個縣抽檢200頭(只)以上對成年動物監(jiān)測時，牛在8月齡以上，羊、豬在5月齡以上，懷孕動物則在初產(chǎn)后半個月至1個月間進行；免疫接種過的動物，在接種后18個月(豬接種后6個月)進行。10.4監(jiān)測結果處理及時對監(jiān)測結果分析、匯總和報告，確診為陽性動物時，應立即進行無害化處理。11人員防護11.1飼養(yǎng)場工作人員：每年要定期進行健康檢查。發(fā)現(xiàn)有患布魯氏菌病的應及時調離崗位，隔離治療。工作人員的工作服、用具要保持清潔，不得帶出場。11.2疫情處置人員：進入感染或可能感染場和無害化處理地點，需要穿防護服，戴可消毒的橡膠手套，戴標準手術用口罩和護目鏡，穿膠靴。處理工作完畢后，對場地及其設施進行徹底消毒。在場內或處理地的出口處脫掉防護裝備，將脫掉的防護裝備置于容器內進行消毒處理。對換衣區(qū)域進行消毒，人員用消毒水洗手，工作完畢要洗浴。6(規(guī)范性附錄)酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)A.1材料準備A.1.1具備國家批文的布魯氏菌ELISA檢測試劑盒A.1.2蒸餾水或超純水A.1.3lA.1.4一次性滴頭A.1.5酶標儀A.2檢測步驟A.2.1所有試劑(除酶標結合物外)使用前必須恢復至室溫。推薦試劑在37℃預熱20-30min。A.2.2加樣：除對照孔外，每孔中加入90ul稀釋液，在稀釋液中加入10ul的1/10預稀釋的樣品，最后加入100ul對照孔。室溫(20-25℃)孵育1h。A.2.3