T-GDSF 0003-2024 花鱸苗種質(zhì)量檢驗(yàn)技術(shù)規(guī)范

GDSFSpecificationforexaminationofqualityinspectionforseedingsofspotted本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件主要起草人：王鵬飛、邱麗華、趙超，1花鱸苗種質(zhì)量檢驗(yàn)技術(shù)規(guī)范GB/T18654.3養(yǎng)殖魚(yú)類(lèi)種質(zhì)檢驗(yàn)第3部分：性狀測(cè)定4.3可數(shù)指標(biāo)4,4疫病按照GB/T18654.3規(guī)定的方法5.3.1全長(zhǎng)、體重合格率檢驗(yàn)25.3.2畸形、傷殘率檢驗(yàn)5.4疫病檢驗(yàn)錄A和附錄B。采用PCR方法檢測(cè)花鱸苗種是否攜帶真鯛虹彩病毒，詳見(jiàn)附錄6.2抽樣方法3行腦組織RNA提取。采用商品化cDNA合成試劑盒將提取的腦組織RNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，用于PCR擴(kuò)增。無(wú)癥狀的魚(yú)最多15尾為1個(gè)樣品，有癥狀的魚(yú)每1尾A.3.1設(shè)置對(duì)照中提取的RNA所逆轉(zhuǎn)錄的cDNA、或純化的NNVRNA所逆轉(zhuǎn)錄的cDNA；陰性對(duì)照為從未感染NNV的健康魚(yú)組）；）；），將轉(zhuǎn)錄好的NNVcDNA進(jìn)行第一輪PCR擴(kuò)A.4結(jié)果判定陽(yáng)性對(duì)照滿足第一輪PCR擴(kuò)增在1017bp附近有特異性目的條帶或第二輪PC樣品的第一輪PCR擴(kuò)增在1017bp附近有特異性目的條帶，或第二輪PCR擴(kuò)增在777bp附近有特異性），樣品的第一輪PCR擴(kuò)增在1017bp附近無(wú)特異性目的條帶，且第二輪PCR擴(kuò)增在777bp附近無(wú)特異性41ATGGTACGCAAAGGTGAGAAGAAATTGGCAAAACCCGCG61CAACCCCGCCGACGTGCTAACAATCGTCGGCGTAGTAACCGCACTGACGCA121AAGGCCTCGACTGTGACCGGATTTGGACGTGGGACCAAT181TCGAGAATCTCCCAGGCCGTCCTCCCAGCCGGGACAGGA241GACGCAACCATCGTCCCCGACCTCCTGCCACGACTGGGACACGCTGCTAG301CGATACGCTGTTGAAACACTGGAGTTTGAAATTCAGCCAATGTGCCCCGC361GGTGGTTACGTTGCTGGCTTCCTGCCTGATCCAACTGACAACGACCACAC421CTTCAAGCAACTCGTGGTGCAGTCGTTGCCAAATGGTGGGAAAGCAGAACAGTC481CAGTACACCCGCACGCTCCTCTGGACCTCGTCGGGAAAGGAGCAGCGTCTCATG541GGTCGGCTGATACTCCTGTGTGTCGGCAACAACACTGATGTGGTCAACGT601TGTCGCTGGAGTGTTCGACTGAGCGTTCCATCTCTTGAGACACCTGAGGAG661CCCATCATGACACAAGGTTCCCTGTACAACGATTCCCTTTCCACAAATGAC721ATCCTCCTAGGATCCACACCACTGGACATTGCCCCTGATGGAGCAGTCT781CGTCCGCTGTCCATTGACTACAGCCTTGGAACTGGAGATGTTGATCGAG841CACCTCAAGAAGTTTGCTGGAAATGCTGGCACACCTGCAGGCTGGTTTCGCT901TGGGACAACTTCAACAAGACGTTCACAGATGGCGTTGCCTACTACTCTGATG961CGTCAAATCCTGCTGCCTGTTGGCACTGTCTGCACCAGGGTTGACTCG1AGCCGGGACAGGAACAGACGGATACGTTGTTGTTGACGC61GCCACGACTGGGACACGCTGCTAGAATCTTCCAGCGATACGCTGTTGAAAC121TGAAATTCAGCCAATGTGCCCCGCAAACACGGGCGGTGG181TGATCCAACTGACAACGACCACACCTTCGACGCGCTTCA241TGCCAAATGGTGGGAAAGCAGAACAGTCCGACCCCAGTACACCCGCACGC301CTCGTCGGGAAAGGAGCAGCGTCTCATGTCACCTGGTCGGCTGATACTC361CAACAACACTGATGTGGTCAACGTGTCAGTACTGTGTCGCTGGAGTGTTC421TCCATCTCTTGAGACACCTGAGGAGACAACCGCTCCCATCATGACACAAGGTTC481CAACGATTCCCTTTCCACAAATGACTTCAAGTCCATCCTCCTAGGATCCACACC541CATTGCCCCTGATGGAGCAGTCTTCCAGCTGGACCGTCCGCTGTCCATTG601TGGAACTGGAGATGTTGATCGAGCTGTCTATTGGCACCTCAAGAAGTTTGC661TGGCACACCTGCAGGCTGGTTTCGCTGGGGCATCTGGGACAACTTCAACAA721AGATGGCGTTGCCTACTACTCTGATGAGCAGCCCCGTCAAATCCT5引物IV-F1和IV-R1是第一輪PCR引物，目的產(chǎn)物大小為570bp；引物IV-F2在PCR擴(kuò)增過(guò)程中，應(yīng)設(shè)立陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照和空白對(duì)照。陽(yáng)性對(duì)照為從確定感染RSIV的病魚(yú)組）；），將提取好的組織DNA同時(shí)用引物對(duì)IV-F1/R1和IV-F2/R2進(jìn)行PCR擴(kuò)增，程序?yàn)椋?5℃陽(yáng)性對(duì)照PCR擴(kuò)增在570bp附近有特異性目的條帶，同時(shí)陰性對(duì)照和空白擴(kuò)增在567bp附近有特異性目的條帶，判定檢測(cè)結(jié)果為樣品攜帶R擴(kuò)增在567bp附近無(wú)特異性目的條帶，判定檢測(cè)結(jié)果樣品攜帶傳染性脾腎壞死病毒（ISKNV），而帶RSIV。IV-F1/R1及IV-F2/R2擴(kuò)增的序列61CTCAAACACTCTGGCTCATCTATGTCATCGTAGTCGTCC61AGCAGTGTAGGCGGTGGAGTAACATTATCGGLGTCTGTTGGCAGCTCACAT121ACACAAGGCTGACTGTCAGATGAGATGCGGCLGGCGTGG181TGAGGTTTCAGCTTGATGACAGACAAGATGGTACCGTCA241AGGACTTCACTGCTGTTGCGGCCTACATGGACCACCTCGCCATGTACAAC301AAGAGGCTGTTGCTGTCGCTTGACCAAACAATCTTCACATCCGTCTCTCG361CAGCTGAGGGTGGTCGTCTGGTTGTCGATTTCCAGGTTATAGAAGGTGGT421CACGCCACAGTCAGCAACAGAAGAAGTAGCAGGGTCGCCATTGCTCATGTAGCT481CACAGTAGTCACCTATGACATGAGGATATTCAAAATTTTTATACAAGTAAAAGA541CTGTGCTTGAGATAGGAGAT1CGGGGGCAATGACGACTACATACTGCGGCCGCAAGCTGA61TCAAGACGGTGGTGGGCGCTACCATTGTGTACGGCGACACCGACTCATGCT121TGGGCCACGACCGCGCATCACTCGATGAACTGTGGCAGA181CTGTGTCGGCCTTCTTTGAGCGCCCGGTGCGCCTCGAGT241AGTTCATCATCTTCACCAAGAAACGTTATGTGTACAGGGCATTCACACGC301AGCGAACAGGCAGCAAGGGTGTCATGTTGTCCAGACGTGACAGCGCCATG361ACACGTATGCAGC