藥物的含量測定方法與驗(yàn)證

第四章藥物的含量測定方法與驗(yàn)證右江民族醫(yī)學(xué)院藥物化學(xué)與藥物分析教研室1醫(yī)學(xué)ppt概述藥物定量分析是指準(zhǔn)確測定藥品有效成分或指示性成分的含量，是評價(jià)藥品質(zhì)量、判斷藥物優(yōu)劣的重要手段化學(xué)分析法：重量分析，滴定分析儀器分析法：專屬性高（分離能力強(qiáng)）驗(yàn)證內(nèi)容：八個(gè)方面2醫(yī)學(xué)ppt重量分析法以質(zhì)量為測量值的分析方法。稱取一定重量的供試品，用適當(dāng)?shù)姆椒▽⒈粶y組分與試樣中其它組分分離，根據(jù)被測組分和供試品的重量以計(jì)算組分的含量的百分?jǐn)?shù)的定量方法。

3醫(yī)學(xué)ppt重量分析法分類：揮發(fā)法、萃取法、沉淀法優(yōu)點(diǎn)：準(zhǔn)確度高0.1%～0.2%（稱量誤差?。┤秉c(diǎn)：繁、長、低含量的測定誤差較大。若有其它方法可以應(yīng)用，避免用重量法。藥典應(yīng)用：藥品的水分測定；藥品中水中不溶物；熾灼殘?jiān)?；灰分測定。4醫(yī)學(xué)ppt第一節(jié)定量分析方法的分類與特點(diǎn)一、容量分析法（滴定分析法）將已知濃度的滴定液由滴定管滴加到被測藥物的溶液中，至滴定液與被測藥物反應(yīng)完全（通過適當(dāng)方法指示），然后根據(jù)滴定液的濃度和被消耗的體積，按化學(xué)計(jì)量關(guān)系計(jì)算出被測藥物的含量簡便，準(zhǔn)確，快速，耐用性高專屬性差（適用于主成分含量較高的試樣分析。如化學(xué)原料藥的含量測定）5醫(yī)學(xué)ppt一、容量分析法（滴定分析法）按藥典規(guī)定，精密標(biāo)定的滴定液（如鹽酸及其濃度）正確表示為A.鹽酸滴定液（0.152mol/L）B.鹽酸滴定液（0.1524mol/L）C.鹽酸滴定液（0.152M/L）D.0.1524M/L鹽酸滴定液E.0.152mol/L鹽酸滴定液答案：B6醫(yī)學(xué)ppt一、容量分析法（滴定分析法）幾個(gè)基本術(shù)語1.化學(xué)計(jì)量點(diǎn)（等當(dāng)點(diǎn)）：當(dāng)?shù)稳氲臉?biāo)準(zhǔn)溶液的物質(zhì)量與待測定組分的物質(zhì)量恰好符合化學(xué)反應(yīng)的計(jì)量關(guān)系時(shí)，稱化學(xué)計(jì)量點(diǎn)（等當(dāng)點(diǎn)）。2.滴定終點(diǎn)：在滴定過程中，指示劑正好發(fā)生顏色變化（或電子設(shè)備的信號發(fā)生變化）的轉(zhuǎn)變點(diǎn)，稱滴定終點(diǎn)。7醫(yī)學(xué)ppt一、容量分析法（滴定分析法）3.滴定誤差：由于指示劑的變色點(diǎn)不恰好在化學(xué)計(jì)量點(diǎn)而引起的誤差為滴定誤差。4.滴定分析：通過“滴定”來實(shí)現(xiàn)的，根據(jù)所用標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度和體積計(jì)算出待測物質(zhì)含量的，這種分析方法稱為滴定分析法，這一過程稱為滴定分析。8醫(yī)學(xué)ppt一、容量分析法（滴定分析法）例題：滴定分析中，一般利用指示劑的突變來判斷化學(xué)計(jì)量點(diǎn)的到達(dá)，在指示劑變色時(shí)停止滴定，這一點(diǎn)為：A.化學(xué)計(jì)量點(diǎn)B.滴定分析C.滴定等當(dāng)點(diǎn)D.滴定終點(diǎn)E.滴定誤差答案：D9醫(yī)學(xué)ppt一、容量分析法（滴定分析法）酸堿滴定氧化還原滴定滴定分析法配位滴定沉淀滴定

非水滴定碘量法溴量法鈰量法亞硝酸鈉法10醫(yī)學(xué)ppt一、容量分析法（滴定分析法）滴定度：每1ml規(guī)定濃度的滴定液所相當(dāng)?shù)谋粶y藥物的質(zhì)量。通常用毫克（mg）表示。aA+bB→cC+dDm：滴定液摩爾濃度a：被測藥物摩爾數(shù)b：滴定劑的摩爾數(shù)M：被測藥物的毫摩爾質(zhì)量11醫(yī)學(xué)ppt一、容量分析法（滴定分析法）含量的計(jì)算：1.濃度校正因數(shù)2.百分含量的計(jì)算（1）原料藥百分含量計(jì)算V-V0或V0-V12醫(yī)學(xué)ppt例題：非那西丁含量測定：精密稱取本品0.3630g加稀鹽酸回流1小時(shí)后，放冷，用亞硝酸鈉液（0.1010mol/L）滴定，用去20.00m1。每1ml亞硝酸鈉液（0.1mol/L）相當(dāng)于17.92mg的C10H13O2N。計(jì)算非那西丁的含量為？13醫(yī)學(xué)ppt例：精密稱取青霉素鉀供試品0.4021g，按藥典規(guī)定用剩余堿量法測定含量。先加入氫氧化鈉液(0.1mol/L)25.00ml，回滴時(shí)消耗0.1015mol/l的鹽酸液14.20ml，空白試驗(yàn)消耗0.1015mol/l的鹽酸液24.68ml。求供試品的含量，每1ml氫氧化鈉液(0.1mol/L)相當(dāng)于37.25mg的青霉素鉀。14醫(yī)學(xué)ppt一、容量分析法（滴定分析法）含量的計(jì)算：（2）制劑標(biāo)示量百分含量的計(jì)算15醫(yī)學(xué)ppt例：取司可巴比妥鈉膠囊（標(biāo)示量為0.1g）20粒，除去膠囊后測得內(nèi)容物總重為3.0780g，稱取0.1536g，按藥典規(guī)定用溴量法測定。加入溴液（0.1mol/L）25ml，剩余的溴液用硫代硫酸鈉液（0.1025mol/L）滴定到終點(diǎn)時(shí)，用去17.94ml?？瞻自囼?yàn)用去硫代硫酸鈉液25.00ml。按每1ml溴液（0.1mol/L）相當(dāng)13.01mg的司可巴比妥鈉，計(jì)算該膠囊中按標(biāo)示量表示的百分含量。

16醫(yī)學(xué)ppt17醫(yī)學(xué)ppt二、光譜分析法（一）紫外-可見分光度法根據(jù)物質(zhì)分子對波長為200～760nm這一范圍的電磁波的吸收特性所建立起來的一種定性、定量和結(jié)構(gòu)分析方法?；驹砝什?比爾定律：A=-lgT=ECL注意：（1）摩爾吸收系數(shù)：ε

（2）百分吸收系數(shù)，C為1g/100ml18醫(yī)學(xué)ppt例題：某藥物的摩爾吸收系數(shù)（ε）很大，則表示：A.光通過該物質(zhì)溶液的光程長B.該物質(zhì)溶液的濃度很大C.該物質(zhì)對某波長的光吸收能力很強(qiáng)D.該物質(zhì)對某波長的光透光率很高E.測定該物質(zhì)的靈敏度低答案：C二、光譜分析法19醫(yī)學(xué)ppt二、光譜分析法（一）紫外-可見分光度法儀器校正和檢定（148頁）測定法（1）在規(guī)定波長附近測試幾點(diǎn)的A值（±2nm）（2）以A值最大波長為測定波長注：A值以0.3-0.7為宜20醫(yī)學(xué)ppt二、光譜分析法應(yīng)用1.對照品比較法：C樣＝C對A樣/A對同種物質(zhì)，同臺(tái)儀器，同一波長測，故E、L相等21醫(yī)學(xué)ppt二、光譜分析法2.吸收系數(shù)法：（絕對法）C=A/EL常用百分吸收系數(shù)。須對儀器進(jìn)行嚴(yán)格的校正和檢定。3.計(jì)算分光光度法適當(dāng)數(shù)字處理，消除干擾成分的影響22醫(yī)學(xué)ppt例題：紫外分光光度法中，用對照品比較法測定藥物含量時(shí)，A.需已知藥物的吸收系數(shù)。B.供試品溶液和對照品溶液的濃度應(yīng)接近。C.供試品溶液和對照品溶液應(yīng)在相同的條件下測定。D.可以在任何波長處測定。E.是中國藥典規(guī)定的方法之一。答案：BCE23醫(yī)學(xué)ppt二、光譜分析法含量的計(jì)算（1）原料藥百分含量計(jì)算對照法吸收系數(shù)法24醫(yī)學(xué)ppt例題：對乙酰氨基酚的含量測定方法為：取本品約40mg，精密稱定，置250ml量瓶中，加0.4%氫氧化鈉溶液50ml溶解后，加水至刻度，搖勻，精密量取5ml，置100ml量瓶中，加0.4%氫氧化鈉溶液10m1，加水至刻度，搖勻，照分光光度法，在257nm的波長處測定吸收度，按C8H9NO2的吸收系數(shù)()為715計(jì)算，即得。若樣品稱樣量為m(g)，測得的吸收度為A，則含量百分率的計(jì)算式為：25醫(yī)學(xué)pptA.B.C.

D.

E.26醫(yī)學(xué)ppt二、光譜分析法含量的計(jì)算（2）制劑標(biāo)示量百分含量計(jì)算（自學(xué)）例題：《中國藥典》規(guī)定：維生素B12注射液（規(guī)格0.1mg／m1）含量測定如下：精密量取本品7.5m1，置25ml量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，混勻，置lcm石英池中，以蒸餾水為空白，在361±1nm波長處吸收度為0.593，按百分吸收系數(shù)為207計(jì)算，維生素B12標(biāo)示量%為多少？27醫(yī)學(xué)ppt二、光譜分析法（二）熒光分析法某些物質(zhì)受到光照射時(shí)，除吸收某種波長的光之外還會(huì)發(fā)射出比原來所吸收的光的波長更長的光；當(dāng)激發(fā)光停止照射后，這種光線也隨之消失，這種光稱為熒光。從樣品池出來的熒光是各方向發(fā)射的，在與激發(fā)光光源排成直角的方向測熒光強(qiáng)度可以避免透射的激發(fā)光的干擾。28醫(yī)學(xué)ppt三、色譜分析法色譜法：是一種物理或物理化學(xué)分離分析方法。優(yōu)點(diǎn)：高靈敏度、高選擇性、高效能、分析速度快、應(yīng)用范圍廣。應(yīng)用：各國藥典中廣泛用作定性鑒別、純度檢查、含量測定。分類：流動(dòng)相：氣體→氣相色譜法液體→液相色譜法固定相：固體或液體氣－固色譜法；氣－液色譜法；液－固色譜法；液－液色譜法操作形式：柱色譜法、平板色譜法、電泳法分離機(jī)制：分配、吸附、離子交換、分子排阻及親合色譜法29醫(yī)學(xué)ppt三、色譜分析法（一）高效液相色譜法（HPLC）1.概述HPLC：液體作流動(dòng)相，高壓輸液，高效固定相，高靈敏度檢測器。特點(diǎn)：HPLC有機(jī)物80%（GC，有機(jī)物20%）分類：LLC分配，離子交換色譜LSC吸附，離子對色譜化學(xué)鍵合固定相：極性（正相鍵合色譜）；非極性（反相鍵合色譜）ODS（十八烷基硅烷鍵合相）30醫(yī)學(xué)ppt三、色譜分析法（一）高效液相色譜法（HPLC）2.基本原理塔板理論；VanDeemter速率理論色譜峰：峰高、峰面積→定量峰位（保留值）→定性區(qū)域?qū)挾龋ǚ鍖挘饬恐?1醫(yī)學(xué)ppt三、色譜分析法（一）高效液相色譜法（HPLC）例題：在氣相色譜法中，與含量成正比的是色譜峰的：A.保留體積B.保留時(shí)間C.相對保留值D.峰高E.峰面積答案：DE32醫(yī)學(xué)ppt三、色譜分析法（一）高效液相色譜法（HPLC）3.高效液相色譜儀1）貯液瓶2）高壓輸液泵3）色譜柱（分離系統(tǒng)）4）檢測器（紫外檢測器最為常用）5）數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)33醫(yī)學(xué)ppt三、色譜分析法（一）高效液相色譜法（HPLC）4.一般要求固定相：硅膠；化學(xué)鍵合硅膠；ODSC18、C8、氨基、氰基；流動(dòng)相：甲醇；水；乙腈…（不同配比）進(jìn)樣量：數(shù)ml；室溫：柱溫；檢測器：紫外；色譜圖：20min；系統(tǒng)適用性試驗(yàn)；34醫(yī)學(xué)ppt三、色譜分析法（一）高效液相色譜法（HPLC）5.系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)四個(gè)指標(biāo)理論板數(shù)n分離度R重復(fù)性（精密度）RSD2.0%拖尾因子：T應(yīng)在0.95-1.0535醫(yī)學(xué)ppt三、色譜分析法（一）高效液相色譜法（HPLC）柱效（最小理論塔板數(shù)）

n＝5.54（tR/Wh/2）2

tR（保留時(shí)間，min），Wh/2（半峰寬，cm）一般大于100036醫(yī)學(xué)ppt三、色譜分析法（一）高效液相色譜法（HPLC）分離度R＝2（tR2－tR1）/（W1＋W2）R≥1.537醫(yī)學(xué)ppt三、色譜分析法（一）高效液相色譜法（HPLC）例題：測得兩色譜峰的保留時(shí)間tR1＝6.5min，tR2＝8.3min，峰寬W1＝1.0min，W2＝1.4min，則兩峰分離度R為：A.0.22B.1.2C.2.5D.0.75E.1.5答案：E38醫(yī)學(xué)ppt三、色譜分析法例題：HPLC法與GC法用于藥物復(fù)方制劑的分析時(shí)，其系統(tǒng)適用性試驗(yàn)系指A.測定拖尾因子B.測定回收率C.測定保留體積D.測定分離度E.測定柱的理論板數(shù)答案：ADE39醫(yī)學(xué)ppt第五節(jié)分析方法的驗(yàn)證一、分析方法驗(yàn)證的內(nèi)容（一）準(zhǔn)確度該分析方法所得測定結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近程度。一般用回收率表示?；厥章?（測定量）/加入量×100%40醫(yī)學(xué)ppt第五節(jié)分析方法的驗(yàn)證（二）精密度在規(guī)定的測試條件下，同一個(gè)均勻樣品，經(jīng)多次測定結(jié)果之間的接近程度。表示方法1.偏差(d)d=測得值-平均值=Xi-X2.標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）SD=[(∑Xi–X)2/(n-1)]1/23.相對標(biāo)準(zhǔn)差(RSD)也稱變異系數(shù)(CV)RSD=SD/X×100%41醫(yī)學(xué)ppt第五節(jié)分析方法的驗(yàn)證重復(fù)性、中間精密度及重現(xiàn)性1.重復(fù)性：在相同條件下，由一個(gè)分析人員測定所得結(jié)果的精密度。2.中間精密度：在同一個(gè)實(shí)驗(yàn)室，不同時(shí)間由不同分析人員用不同設(shè)備測定結(jié)果的精密度。3.重現(xiàn)性：在不同實(shí)驗(yàn)室由不同分析人員測定結(jié)果的精密度。42醫(yī)學(xué)ppt第五節(jié)分析方法的驗(yàn)證（三）專屬性是指在其他成分(如雜質(zhì)、降解產(chǎn)物、輔料等)可能存在下，采用的方法能準(zhǔn)確測定出被測物的特性。鑒別反應(yīng)、雜質(zhì)檢查、含量測定方法，均應(yīng)考察其專屬性。43醫(yī)學(xué)ppt第五節(jié)分析方法的驗(yàn)證（四）檢測限在規(guī)定的實(shí)驗(yàn)條件下能檢出被測組分的最低濃度或最低量。當(dāng)被測組分的量高于檢測限時(shí)，即可被檢出，但一般不能準(zhǔn)確測定。44醫(yī)學(xué)ppt第五節(jié)分析方法的驗(yàn)證（五）定量限分析方法可定量測定樣品中被測組分的最低濃度或最低量。應(yīng)滿足一定的精密度和準(zhǔn)確度的要求。45醫(yī)學(xué)ppt第五節(jié)分析方法的驗(yàn)證（六）線性是指在設(shè)定的范圍內(nèi)，檢測結(jié)果與試樣中被測物濃度（或量）直接呈正比關(guān)系的程度。線性回歸分析（r接近于1）46醫(yī)學(xué)ppt第五節(jié)分析方法的驗(yàn)證（七）范圍是指達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性的前提下，分析方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。原料藥和制劑含量測定：應(yīng)為測試濃度的80%～120%。制劑含量均勻度檢查：應(yīng)為測試濃度的70%～130%。溶出度或釋放度中的溶出量測定：應(yīng)為限度的±20%。47醫(yī)學(xué)ppt第五節(jié)分析方法的驗(yàn)證（八）耐用性是指在測定條件下有小的變動(dòng)時(shí)，測定結(jié)果不受影響的承受程度。48醫(yī)學(xué)ppt第五節(jié)分析方法的驗(yàn)證二、實(shí)例（自學(xué)）教材內(nèi)容91-93頁49醫(yī)學(xué)ppt第六節(jié)定量分析有關(guān)計(jì)算原料藥的百分含量計(jì)算含量%=實(shí)測值/供試品量×100%制劑標(biāo)示量的百分含量計(jì)算標(biāo)示量%=每片（每支）實(shí)測量/標(biāo)示量×100%50醫(yī)學(xué)ppt第六節(jié)定量分析有關(guān)計(jì)算一、原料藥百分含量的計(jì)算（一）滴定分析法1.直接滴定法含量%=（V-V0）×T×F×10-3/m×100%T