《干擾素抗病毒活性評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》編制說(shuō)明

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《干擾素抗病毒活性評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》編制

說(shuō)明

一、工作簡(jiǎn)況

（一）任務(wù)來(lái)源

根據(jù)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)制、修訂計(jì)劃的工作安排，

國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)《干擾素抗病毒活性評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》（項(xiàng)目編號(hào)為：20171209-

T-424）編制工作正在有序推進(jìn)。按照當(dāng)前標(biāo)準(zhǔn)編制工作安排，該標(biāo)準(zhǔn)

計(jì)劃定于2024年完成。

本標(biāo)準(zhǔn)由中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)化研究院提出并歸口。

（二）制定背景

干擾素(interferon，IFN)是機(jī)體細(xì)胞受病毒感分泌的一類廣譜

抗病毒糖蛋白。干擾素不直接殺傷或抑制病毒，主要是通過(guò)細(xì)胞表面

受體作用使細(xì)胞產(chǎn)生抗病毒蛋白，從而抑制病毒的復(fù)制；同時(shí)還可增

強(qiáng)自然殺傷細(xì)胞（NK細(xì)胞）、巨噬細(xì)胞和T淋巴細(xì)胞的活力，從而

起到免疫調(diào)節(jié)作用，并增強(qiáng)抗病毒能力?？共《净钚詼y(cè)定是干擾素制

品的重要質(zhì)控指標(biāo)，與干擾素制品的有效性密切相關(guān)。目前，中華人

民共和國(guó)藥典中收錄了“干擾素生物學(xué)活性測(cè)定方法”，但是缺少與

藥典協(xié)調(diào)配套使用的標(biāo)準(zhǔn)。為了保證抗病毒活性測(cè)定結(jié)果的可靠性、

準(zhǔn)確性和實(shí)驗(yàn)室間的可比性，開(kāi)展測(cè)定活動(dòng)的實(shí)驗(yàn)室應(yīng)具備完善的檢

測(cè)條件（設(shè)備/設(shè)施/試劑/耗材），進(jìn)行規(guī)范的操作，并使用溯源明確的

標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)。因此，需要建立統(tǒng)一的干擾素抗病毒活性評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)和基礎(chǔ)

規(guī)范，有助于提升干擾素抗病毒活性評(píng)價(jià)的結(jié)果準(zhǔn)確性和各實(shí)驗(yàn)室檢

測(cè)一致性。

（三）起草過(guò)程

1.成立起草組

本標(biāo)準(zhǔn)在2017年立項(xiàng)后，期間經(jīng)歷了起草團(tuán)隊(duì)的重組。新組建

的起草團(tuán)隊(duì)在接到本標(biāo)準(zhǔn)研制任務(wù)后，充分吸收干擾素研究專業(yè)領(lǐng)域

的專家、學(xué)者、企業(yè)代表等，全面負(fù)責(zé)本標(biāo)準(zhǔn)的研制工作。

2.確立標(biāo)準(zhǔn)框架

起草組根據(jù)當(dāng)前干擾素抗病毒活性評(píng)價(jià)的現(xiàn)狀和實(shí)際需要，按照

國(guó)家對(duì)食品藥品安全“四個(gè)最嚴(yán)”的要求，進(jìn)一步明確標(biāo)準(zhǔn)定位、應(yīng)

用對(duì)象和適用范圍。同時(shí)，就標(biāo)準(zhǔn)制定的相關(guān)問(wèn)題進(jìn)行了協(xié)商與研究，

吸收和借鑒了來(lái)自各方的意見(jiàn)和建議，經(jīng)過(guò)認(rèn)真分析和研討，確立了

初步的標(biāo)準(zhǔn)框架。

3.形成標(biāo)準(zhǔn)草案

針對(duì)該標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目，起草組明確了任務(wù)要求，安排了工作進(jìn)度，根

據(jù)單位參與的人員的專業(yè)、技能、人數(shù)將任務(wù)合理分配。在標(biāo)準(zhǔn)框架

確定的基礎(chǔ)上，起草組成員充分吸收已有的科研成果，經(jīng)過(guò)反復(fù)推敲，

多次召開(kāi)不同規(guī)模的標(biāo)準(zhǔn)研討會(huì)逐漸確定了本標(biāo)準(zhǔn)的主要內(nèi)容，于

2023年10月完成標(biāo)準(zhǔn)草案。

4.形成征求意見(jiàn)稿

起草組依據(jù)GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)

的結(jié)構(gòu)和編寫》對(duì)標(biāo)準(zhǔn)草案進(jìn)一步完善，并對(duì)標(biāo)準(zhǔn)草案的技術(shù)內(nèi)容進(jìn)

行了反復(fù)修改、完善和提升，于2023年12月形成了標(biāo)準(zhǔn)征求意見(jiàn)

稿。

二、國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)編制原則、主要內(nèi)容及其確定依據(jù)

（一）編制原則

堅(jiān)持高起點(diǎn)、嚴(yán)要求與適宜性、可操作性相結(jié)合的原則。高起點(diǎn)

即標(biāo)準(zhǔn)編制所涉及的原材料及產(chǎn)品技術(shù)指標(biāo)，應(yīng)不低于目前國(guó)內(nèi)相關(guān)

標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的限量指標(biāo)；嚴(yán)要求即標(biāo)準(zhǔn)的編制應(yīng)嚴(yán)格遵循GB/T1.1—

2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫》及相關(guān)法規(guī)

的要求進(jìn)行；適宜性既要充分考慮到本行業(yè)的發(fā)展現(xiàn)狀與特點(diǎn)及對(duì)測(cè)

試項(xiàng)目的設(shè)置與限量指標(biāo)的控制，又要有一個(gè)適宜的范圍與程度，從

而提高標(biāo)準(zhǔn)貫徹實(shí)施的可操作性。

（二）本標(biāo)準(zhǔn)主要技術(shù)內(nèi)容

本文件規(guī)定了干擾素抗病毒活性評(píng)價(jià)的基本要求、細(xì)胞和病毒的

選擇、評(píng)價(jià)方法設(shè)計(jì)、測(cè)定、應(yīng)考慮的因素、結(jié)果有效性和體系適用

性判定、驗(yàn)證及人員要求。本文件適用于干擾素的抗病毒活性評(píng)價(jià)。

具體技術(shù)內(nèi)容補(bǔ)充說(shuō)明如下：

1.術(shù)語(yǔ)和定義

標(biāo)準(zhǔn)文本中給出了6個(gè)術(shù)語(yǔ)和定義，分別是干擾素、活性（生物

學(xué)活性）、活性標(biāo)準(zhǔn)品（活性參考品）、量效曲線、四參數(shù)方程、自

由模型，其他常用術(shù)語(yǔ)還有：

（1）潔凈室（cleanroom）

對(duì)塵粒及微生物污染規(guī)定需進(jìn)行環(huán)境控制的房間。其建筑結(jié)構(gòu)，

裝備及其使用均具有減少對(duì)該區(qū)域內(nèi)污染源的介入、產(chǎn)生和滯留的功

能。其他相關(guān)參數(shù)諸如：溫度、濕度、壓力也有必要控制。

（2）潔凈工作臺(tái)（cleanbench）

一種箱式局部空氣凈化設(shè)備，由箱體、風(fēng)機(jī)、預(yù)過(guò)濾器、高效（或

超高效）空氣過(guò)濾器及電器控制系統(tǒng)組成。在工作狀態(tài)下能保持工作

空間內(nèi)的風(fēng)速、空氣潔凈度、噪音、振動(dòng)和照明等性能參數(shù)滿足使用

者的要求。

（3）生物安全柜（biosafetycabin）

一種特殊的潔凈工作臺(tái)，能防止實(shí)驗(yàn)操作處理過(guò)程中某些含有

危險(xiǎn)性或未知性生物微粒發(fā)生氣溶膠散逸的箱型空氣凈化負(fù)壓安全

裝置。

（4）預(yù)稀釋

采用適當(dāng)稀釋液，如檢測(cè)用培養(yǎng)基，將供試品溶液或復(fù)溶后溶液

稀釋至檢測(cè)用工作濃度的過(guò)程，這一過(guò)程可降低供試品中其他物質(zhì)對(duì)

檢測(cè)過(guò)程的干擾。

（5）系列稀釋

采用檢測(cè)用培養(yǎng)基，按一定倍比關(guān)系或比例關(guān)系，將供試品濃度

從檢測(cè)用工作濃度逐步降低的過(guò)程，這一過(guò)程是制備供試品工作濃度

梯度的過(guò)程。

2.基本要求

本標(biāo)準(zhǔn)文本中第四章給出了四條基本要求。涉及到的其他評(píng)價(jià)技

術(shù)條件說(shuō)明如下：

（1）潔凈室

一個(gè)封閉圍擋工作室，其內(nèi)部應(yīng)為受控環(huán)境，受控條件包括風(fēng)量、

風(fēng)速、壓差、溫度、相對(duì)濕度、照度、噪音、塵埃離子數(shù)和沉降菌數(shù)

等，需要定期清潔、消毒和維護(hù)。

（2）生物安全柜

保障實(shí)驗(yàn)一線操作人員與環(huán)境安全的關(guān)鍵設(shè)備。根據(jù)氣流及隔離

屏障設(shè)計(jì)結(jié)構(gòu)分為Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三個(gè)等級(jí)，本文涉及類型為Ⅱ等級(jí)以上，

使用前后需進(jìn)行清潔消毒并定期維護(hù)。

（3）潔凈工作臺(tái)

保障實(shí)驗(yàn)環(huán)境潔凈度符合要求的關(guān)鍵設(shè)備。按氣流形式分為垂直

單向流工作臺(tái)、水平單向流工作臺(tái)等，使用前后需清潔消毒并定期維

護(hù)。

（4）冰箱

用于冷凍和冷藏實(shí)驗(yàn)試劑，溫度控制范圍應(yīng)包括：2-8℃；-20℃

或-80℃等，應(yīng)定期清潔和維護(hù)。GB/T20154-2006低溫保存箱；YY/T

0086-2020醫(yī)用冷藏箱。

（5）二氧化碳培養(yǎng)箱

用于細(xì)胞培養(yǎng)和樣品檢測(cè)中細(xì)胞培養(yǎng)的條件維持，應(yīng)定期清潔和

維護(hù)。溫度控制至少包括37℃；二氧化碳濃度控制至少包括5%。

YY1621-2018醫(yī)用二氧化碳培養(yǎng)箱

（6）二氧化碳鋼瓶

儲(chǔ)存二氧化碳（CO2）氣體用，應(yīng)配有減壓閥，有管路與二氧化

碳培養(yǎng)箱連接。GBT5099.3-2017鋼質(zhì)無(wú)縫氣瓶第3部分:正火處理

的鋼瓶

（7）酶標(biāo)儀或其他等效設(shè)備

用于檢測(cè)酶標(biāo)孔中被檢測(cè)物的光吸收值或熒光值等，酶標(biāo)板規(guī)格

至少包括96孔，檢測(cè)器要求應(yīng)與檢測(cè)方法相匹配，如檢測(cè)波長(zhǎng)570nm，

參比波長(zhǎng)630nm等，應(yīng)定期校準(zhǔn)和維護(hù)。JJG861-2007酶標(biāo)分析儀

（8）相關(guān)檢測(cè)軟件或記錄設(shè)備

與酶標(biāo)儀控制匹配的電腦和打印機(jī)，需定期維護(hù)。

（9）數(shù)據(jù)分析軟件或算法

符合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的數(shù)學(xué)模型算法或輔助計(jì)算軟件，如四參數(shù)自由

模型或雙平行線模型等。

（10）移液器

定量稀釋樣品和轉(zhuǎn)移細(xì)胞等操作用，按移液器通道數(shù)量可分為

單道和多道；根據(jù)可定量轉(zhuǎn)移的最大量值分為不同規(guī)格，如10、100、

200μL等，應(yīng)校準(zhǔn)后使用并定期清潔和維護(hù)。JJG646-2006移液器；

ISO8655-2第2部分活塞式移液器

（11）細(xì)胞存儲(chǔ)液氮罐

盛放液氮用，保存分裝在凍存管中的檢測(cè)用細(xì)胞。GB/T5458-

1997液氮生物容器

（12）離心機(jī)

用于從培養(yǎng)物中分離細(xì)胞，需定期清潔和維護(hù)，至少轉(zhuǎn)速可達(dá)到

1000轉(zhuǎn)每分鐘（rpm）。GB/T30099-2013實(shí)驗(yàn)室離心機(jī)通用技術(shù)條件

（13）倒置顯微鏡

觀察培養(yǎng)瓶中細(xì)胞狀態(tài)用，需定期清潔和維護(hù)。GB/T2985-1999

生物顯微鏡標(biāo)準(zhǔn)

（14）細(xì)胞計(jì)數(shù)器/儀

檢測(cè)用細(xì)胞計(jì)數(shù)用，需要使用前后清潔。BS748:1982血細(xì)胞計(jì)

數(shù)器和微粒計(jì)數(shù)腔規(guī)范

（15）細(xì)胞培養(yǎng)板

活性檢測(cè)時(shí)細(xì)胞培養(yǎng)用，如96孔細(xì)胞培養(yǎng)板（底部和蓋板透明），

至少應(yīng)為滅菌耗材。YY/T0616-2008細(xì)胞培養(yǎng)板

（16）細(xì)胞培養(yǎng)瓶

檢測(cè)用細(xì)胞培養(yǎng)用，依據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)面面積分為多種規(guī)格，如

25cm2和75cm2，至少應(yīng)為滅菌耗材。GB/T28213-2011實(shí)驗(yàn)室玻璃

儀器培養(yǎng)皿

（17）細(xì)胞凍存管

檢測(cè)用細(xì)胞超低溫保存用，可在液氮中保持氣密性，按體積分有

多種規(guī)格，如1、2和5mL等；按旋蓋不同可分為內(nèi)旋蓋和外旋蓋，

至少應(yīng)為滅菌耗材。T/ZZB1653-2020一次性細(xì)胞凍存管（聚丙烯）

（18）移液器吸頭

轉(zhuǎn)移無(wú)菌培養(yǎng)物用，至少應(yīng)為滅菌耗材或使用前清洗高壓滅菌。

ISO835：2007實(shí)驗(yàn)室玻璃器皿.分度吸量管

（19）離心管

離心分離細(xì)胞用，應(yīng)為無(wú)菌耗材，可與離心機(jī)配合使用。DB44/T

1549-2015一次性塑料離心管標(biāo)準(zhǔn)

（20）二氧化碳

盛放于二氧化碳（CO2）鋼瓶中，通過(guò)氣路與二氧化碳培養(yǎng)箱鏈

接，為細(xì)胞培養(yǎng)提供氣體環(huán)境支持，常見(jiàn)二氧化碳濃度為5%。GB/T

23938-2021高純二氧化碳

（21）液氮

盛放于細(xì)胞存儲(chǔ)液氮罐中，為超低溫保存細(xì)胞的介質(zhì)。ISO14356-

2:2017液態(tài)氮；GB/T23801-2010液態(tài)氮

（22）消毒液

用于物體表面消毒和手消毒。GB14930.2-2012食品安全國(guó)家標(biāo)

準(zhǔn)消毒劑

（23）培養(yǎng)基

檢測(cè)用細(xì)胞培養(yǎng)用，如MEM。GB/T31962-2017細(xì)胞培養(yǎng)基

（24）血清

檢測(cè)用細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)添加物用，如新生牛血清或胎牛血清等。

（25）消化液

使貼壁細(xì)胞從細(xì)胞培養(yǎng)瓶壁上脫落的試劑，如0.25%胰酶溶液。

（26）顯色系統(tǒng)試劑

用于細(xì)胞計(jì)數(shù)或生物學(xué)活性強(qiáng)度檢測(cè)指示液，如結(jié)晶紫/熒光素

酶底物等。

（27）磷酸鹽緩沖液

檢測(cè)用細(xì)胞清洗試劑，需無(wú)菌、等滲、中性和無(wú)細(xì)胞毒性作用等。

（28）雙抗

檢測(cè)用細(xì)胞培養(yǎng)基中的添加物，用于抑制細(xì)菌生長(zhǎng)，含有兩種抗

生素，如氨芐青霉素和鏈霉素。

3.細(xì)胞和病毒的選擇

本章節(jié)對(duì)評(píng)價(jià)試驗(yàn)用的細(xì)胞和病毒的選擇原則作了了規(guī)范。

4.評(píng)價(jià)方法設(shè)計(jì)

本章節(jié)規(guī)定了兩種評(píng)價(jià)方法，分別是四參數(shù)法和平行線法。

5.測(cè)定

本章節(jié)提供的細(xì)胞病變抑制法和報(bào)告基因法分別按照按照《中華

人民共和國(guó)藥典》“干擾素生物學(xué)活性測(cè)定法”的第一法和第二法進(jìn)

行測(cè)定，其他測(cè)定方法也作了相應(yīng)要求。

6.其他技術(shù)內(nèi)容

本標(biāo)準(zhǔn)文本中還對(duì)評(píng)價(jià)時(shí)應(yīng)考慮的因素、結(jié)果有效性和體系適用

性判定、驗(yàn)證、人員要求等進(jìn)行了規(guī)范。

（三）本標(biāo)準(zhǔn)制定參考的主要依據(jù)

本標(biāo)準(zhǔn)制定過(guò)程中參考了GB19489實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求、

GB41918生物安全柜以及中華人民共和國(guó)藥典“干擾素生物學(xué)活性

測(cè)定法”等文件。

三、試驗(yàn)驗(yàn)證的分析、綜述報(bào)告，技術(shù)經(jīng)濟(jì)論證，預(yù)期的經(jīng)濟(jì)效益、

社會(huì)效益和生態(tài)效益；

本標(biāo)準(zhǔn)完善了干擾素質(zhì)量安全標(biāo)準(zhǔn)體系，尤其為干擾素抗病毒活

性評(píng)價(jià)提供了一個(gè)切實(shí)可行的參考依據(jù)和評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)，可配合中華人民

共和國(guó)藥典使用。本標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)內(nèi)容既符合相關(guān)法規(guī)的要求，又能結(jié)合

國(guó)情，符合行業(yè)現(xiàn)狀與發(fā)展需要，使標(biāo)準(zhǔn)的貫徹實(shí)施更能切