免疫學診斷與防治課件

22免疫學診斷免疫學診斷與防治22免疫學診斷目的要求（一）掌握抗原抗體反應的原理；凝集反應、沉淀反應與免疫標記技術的原理和應用。（二）熟悉淋巴細胞的分離與類型鑒定的方法；T細胞功能測定的方法,B細胞功能測定（三）了解吞噬細胞功能測定。22免疫學診斷免疫學診斷

免疫學檢測技術已成為當今生命科學主要的研究手段之一，為基礎和臨床醫(yī)學的發(fā)展以及疾病的診斷、預后判斷、防治和藥物療效評價提供了重要的方法和手段。22免疫學診斷一、抗原或抗體的檢測（一）抗原抗體反應的原理

抗原與抗體反應的物質(zhì)基礎是抗原的抗原決定簇與抗體的可變區(qū)之間的相互結合。特異性22免疫學診斷

抗原與抗體反應的體系中，若兩者的濃度和比例適當，則形成的抗原抗體復合物體積大、數(shù)量多，出現(xiàn)肉眼可見的反應。AbexcessAgexcessEquivalence–Latticeformation22免疫學診斷22免疫學診斷抗原抗體反應的影響因素時間電解質(zhì)溫度酸堿度22免疫學診斷（二）抗原或抗體的檢測方法1、凝集反應（agglutinationreaction）細菌、細胞等顆粒性抗原或表面包被有抗原的顆粒狀物質(zhì)（如聚苯乙烯乳膠等）與相應的抗體在電解質(zhì)存在的條件下結合，出現(xiàn)肉眼可見的凝集團現(xiàn)象，稱為凝集反應。

22免疫學診斷

直接凝集反應直接凝集反應(directagglutination)：

顆粒性抗原直接與抗體結合，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。

參與反應的抗原稱為凝集原，相應的抗體稱為凝集素。

22免疫學診斷22免疫學診斷

間接凝集反應間接凝集反應(indirectagglutination):

將可溶性抗原或抗體吸附于顆粒性載體表面，然后與相應的抗體或抗原反應，在電解質(zhì)的作用下，出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象.22免疫學診斷載體可溶性抗原致敏致敏顆粒凝集顆粒

間接凝集試驗示意圖22免疫學診斷間接凝集抑制試驗22免疫學診斷免疫妊娠試驗（1）22免疫學診斷免疫妊娠試驗（2）22免疫學診斷2、沉淀反應（Precipitationreaction）毒素、組織浸液及血清中的蛋白等可溶性抗原與相應抗體反應后，出現(xiàn)肉眼可見的沉淀物，稱為沉淀反應。沉淀反應可在液體中進行，也可以在半固體瓊脂凝膠中進行。22免疫學診斷沉淀反應包括：

單向免疫擴散雙向免疫擴散免疫電泳免疫比濁22免疫學診斷22免疫學診斷22免疫學診斷22免疫學診斷3、免疫標記技術（immunolabelingtechniques）為了提高單純的抗原和抗體檢測的靈敏性，將已知的抗體或抗原標記上示蹤物質(zhì)，通過檢測標記物，間接測定抗原抗體復合物。常用的標記物有酶、熒光素、放射性核素、膠體金及化學發(fā)光物質(zhì)等。22免疫學診斷標記物熒光素酶放射性核素免疫熒光法酶免疫測定（EIA)放射免疫測定（RIA)化學發(fā)光物質(zhì)化學發(fā)光分析22免疫學診斷免疫酶測定法（enzymeimmunoassay,EIA）

應用最廣泛的方法是酶聯(lián)免疫吸附試驗（enzymelinkedimmunosorbentassay,ELISA）22免疫學診斷間接法：檢測抗體包被Ag加入待檢Ab加入酶標二抗加入底物顯色夾心法：檢測抗原包被Ab加入待檢Ag加入酶標二抗加入底物顯色22免疫學診斷1.Addantigen5.Addsubstrateforenzyme2.Wash,blockthewells.WashwithPBST3.AddfivesamplesWashwithPBST4.AddlabeledantibodyObservecolourdevelopmentWashwithPBSTstop22免疫學診斷免疫熒光技術熒光素標記的抗體（抗原）與組織或細胞中的相應抗原（抗體）結合，借助于熒光顯微鏡或流式細胞儀對抗原（抗體）進行鑒定或定位。直接免疫熒光法間接免疫熒光法22免疫學診斷22免疫學診斷22免疫學診斷二、免疫細胞功能的檢測（一）免疫細胞的分離根據(jù)細胞的密度、粘附性能、表面標志等，采用不同方法分離外周血單個核細胞、淋巴細胞及不同亞群。22免疫學診斷密度梯度離心法:

用淋巴細胞分層液(葡聚糖-泛影葡胺)除去紅細胞、粒細胞,所獲細胞稱外周血單個核細胞(PBMC)的方法，其中淋巴細胞>90%。

22免疫學診斷

免疫吸附分離法

磁珠分離法流式細胞術等等22免疫學診斷（二）免疫細胞功能的測定

T細胞功能測定

1、T細胞增殖試驗

T細胞表面含有有絲分裂原受體,能接受植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA）或美州商陸（PWM）等有絲分裂原的刺激，轉化成為淋巴母細胞。（1）3H-TdR摻入法（2）51Cr釋放法22免疫學診斷培養(yǎng)液3H-TdRPHA淋巴細胞全血分層液離心過濾測量放射性淋巴細胞增殖試驗（3H-TdR摻入法）示意圖22免疫學診斷靶細胞51Cr洗滌去除游離的51Cr效應細胞測量上清液中釋放的51Cr混合培養(yǎng)4-6小時細胞毒試驗（51Cr釋放法）示意圖22免疫學診斷2、E花環(huán)形成試驗（ERosetteTest）

T細胞CD2/E受體SRBC/綿羊紅細胞

可用于鑒定人外周血中的T細胞并計數(shù)。22免疫學診斷酶聯(lián)免疫斑點法

（Enzyme-LinkedImmunospot,ELISPOT)是在ELISA的基礎上建立的檢測抗體生成細胞及細胞因子產(chǎn)生細胞的方法。22免疫學診斷CK抗體包被的反應板

CK抗原包被的反應板加入淋巴細胞加入酶標記二抗加入底物檢測抗原特異性B細胞加入底物T細胞產(chǎn)生CK的檢測加入淋巴細胞加入酶標的CK抗體22免疫學診斷淋巴細胞轉化試驗（形態(tài)學示意圖）原理：人T細胞表面有PHA或ConA受體，T細胞在體外受PHA或ConA的刺激后能轉化為體積較大、代謝旺盛、且能進行分裂的淋巴細胞，以此測