DB37T 4639.1-2023 豬疫病診斷技術(shù) 第1部分：圓環(huán)病毒

37DiagnosistechnologyofswineepidemicdiI本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定b)更改了提出與組織實(shí)施單位（見(jiàn)前言，2011年版的前言）；c)刪除了主要起草人和起草單位（見(jiàn)2e)增加了“規(guī)范性引用文件”和“術(shù)語(yǔ)和定義”（）；f)更改了“試劑或材料”和“儀器設(shè)備”相關(guān)內(nèi)容（見(jiàn)第4章和第5章，2011年g)增加了“臨床診斷”和“病理診斷”（見(jiàn)h)更改了“實(shí)驗(yàn)室診斷”（見(jiàn)6.3，2011年版的第3章是由豬圓環(huán)病毒（PCV）引起的一種多系統(tǒng)性疾病，包括斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征（PMWS）、豬皮炎和腎病綜合征（PDNS）、增生性壞死性肺炎（PNP）和繁殖障礙性疾病等，主要表現(xiàn)為呼吸、泌尿、腸合感染是國(guó)際公認(rèn)的嚴(yán)重危害養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的疾病之一，對(duì)生豬生產(chǎn)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。全，最大限度減少豬圓環(huán)病毒病造成的經(jīng)濟(jì)損失，本文件結(jié)合先進(jìn)經(jīng)驗(yàn)和行業(yè)的實(shí)際，嚴(yán)格按照GB/T1.1《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫(xiě)》的要求編寫(xiě)，以“科學(xué)性、先進(jìn)性、系統(tǒng)性、1豬疫病診斷技術(shù)第1部分：圓環(huán)病毒；）GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運(yùn)輸技術(shù)規(guī)范4試劑或材料4.2磷酸鹽緩沖溶液（PBS）：取磷酸二氫鉀（KH2PO4）0.27g、磷酸氫二鈉（Na2HPO4）1.42g、氯化4.3核酸提取試劑：市售病毒DNA/RNA提取試劑盒5.2震蕩研磨儀。5.5生物安全柜。5.7渦旋振蕩器。2豬是PCV的天然宿主，各種年齡、不同性別的豬都可以感染，但以哺乳期和育成期的豬最易感。病6.1.2.1斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(P耳等部位擴(kuò)展。剖檢，在大部分死亡豬中，可見(jiàn)雙腎腫大、蒼白、皮質(zhì)有出血出生后3周齡仔豬，因痙攣而出現(xiàn)步態(tài)異常姿勢(shì)，從雙耳，被毛和與保育豬和育肥豬發(fā)生的呼吸道病有關(guān)。PNP的確診主要依據(jù)組織病理學(xué)變化，表現(xiàn)為增生性和壞大，可見(jiàn)均勻的白色，所有病例幾乎都能看到和肝細(xì)胞的單細(xì)胞壞死為特征的肝炎。慢性死3按照NY/T541規(guī)定采集病死豬的淋巴結(jié)、脾臟、腎臟和肺臟等樣品2℃~8℃貯藏。樣品保存在2℃~8℃條件下不超過(guò)24h，-20℃以不超過(guò)3個(gè)月，-70℃以下不超過(guò)5年。必須低溫保存運(yùn)輸樣品，且在規(guī)定溫度下的保存6.3.3.1淋巴結(jié)、脾臟、腎臟和肺臟等組10%的組織勻漿液，5000r/min離心5min，上將細(xì)胞培養(yǎng)樣品反復(fù)凍融3次，3000r/min離心5min，棄去細(xì)胞碎片，上清備用。12×SYBR?GreenProTaqHSP2344567712345—6—在陽(yáng)性和陰性成立前提下，樣品檢測(cè)結(jié)果判定a)熔解曲線(xiàn)峰值溫度為84℃,則樣品中含有PCV1；b)熔解曲線(xiàn)峰值溫度為85℃,則樣品中含有PCV2；c)熔解曲線(xiàn)峰值溫度為82℃,則樣品中含有PCV3；g)熔解曲線(xiàn)峰值溫度為84℃、85℃、82℃,則樣品中含有PCV1、PCV2和PCV3。55’-TKGATGATYTTTTATGGSTGG-3’5’-GTCAGCAGTTGAGGACTACCATT-3’5’-AGTAATCCGCCGATAAAGAGC-3’5’-CTCCTAAACAAGGCCTCCAACT-3’注：簡(jiǎn)并堿基K：G/T；Y