1.2純凈的目標(biāo)微生物可通過(guò)分離和純化獲得第1課時(shí)課件高二下學(xué)期生物浙科版選擇性必修3

第一章

發(fā)酵工程第二節(jié)

純凈的目標(biāo)微生物可通過(guò)分離和純化獲得素養(yǎng)目標(biāo)

理解微生物的選擇培養(yǎng)和計(jì)數(shù)的原理。生命觀念

開(kāi)展稀釋涂布平板法的操作和土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)?？茖W(xué)探究教學(xué)重難點(diǎn)舉例說(shuō)明通過(guò)調(diào)整培養(yǎng)基的配方可有目的地培養(yǎng)某種微生物。概述平板劃線法和稀釋涂布平板法是實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行微生物分離和純化的常用方法。概述稀釋涂布平板法和顯微鏡計(jì)數(shù)法是測(cè)定微生物數(shù)量的常用方法。課程導(dǎo)入單菌落是如何純化分離出來(lái)的？其中有哪些需要我們注意的事項(xiàng)？由不同微生物個(gè)體繁殖后代組成的大片菌落單菌落：由一個(gè)細(xì)胞分裂形成的、肉眼可見(jiàn)的、有一定形態(tài)構(gòu)造的子細(xì)胞集團(tuán)?

采用劃線或涂布的接種方法能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)目標(biāo)微生物的分離和純化在固體培養(yǎng)基上采用劃線或稀釋涂布的方法接種，可獲得單菌落

采用劃線或涂布的接種方法能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)目標(biāo)微生物的分離和純化平板劃線法原理：?jiǎn)蝹€(gè)細(xì)胞微生物群?jiǎn)蝹€(gè)菌落連續(xù)劃線分散生長(zhǎng)繁殖三種灼燒的目的1.蘸取菌液前灼燒2.每次劃線前灼燒3.劃線操作結(jié)束后灼燒避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染菌種。殺死上一次劃線結(jié)束后接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)接種環(huán)上的菌種直接來(lái)源于上一次劃線的末端。及時(shí)殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免菌種污染環(huán)境和感染操作者。

采用劃線或涂布的接種方法能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)目標(biāo)微生物的分離和純化平板劃線法實(shí)驗(yàn)操作1、將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅。2、在火焰旁冷卻接種環(huán)，并拔出裝有酵母菌的棉塞3、將試管口通過(guò)火焰4、將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中，蘸取一環(huán)菌液5、將試管通過(guò)火焰，并塞上棉塞6、左手將皿蓋打開(kāi)一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要?jiǎng)澠婆囵B(yǎng)基7、灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開(kāi)始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連8、將平板倒置放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

采用劃線或涂布的接種方法能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)目標(biāo)微生物的分離和純化注意事項(xiàng)第1區(qū)劃線接種環(huán)滅菌第2區(qū)劃線接種環(huán)滅菌第3區(qū)劃線接種環(huán)滅菌接種環(huán)滅菌接種環(huán)只蘸一次菌液,但要在培養(yǎng)基不同位置連續(xù)劃線多次劃線首尾不能相接每次劃線前接種環(huán)進(jìn)行滅菌劃線后,培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)12345平板劃線法注意事項(xiàng)

采用劃線或涂布的接種方法能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)目標(biāo)微生物的分離和純化稀釋涂布平板法先將菌液進(jìn)行梯度稀釋不同稀釋度的菌液各取0.1ml，加在固體培養(yǎng)基表面用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面上進(jìn)行培養(yǎng)稀釋度適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基表面能得到單菌落注意：分離得到單菌落一般以培養(yǎng)皿中有20個(gè)以?xún)?nèi)菌落為宜。計(jì)算微生物數(shù)量一般以培養(yǎng)皿中有30~300個(gè)菌落為宜。1ⅹ1071ⅹ1051ⅹ1061ⅹ1031ⅹ1021ⅹ1041mL1mL1mL1mL1mL

采用劃線或涂布的接種方法能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)目標(biāo)微生物的分離和純化稀釋涂布平板法步驟①鏟取土樣，將樣品裝入紙袋中②將10g土樣加入盛有90mL無(wú)菌水的錐形瓶中，充分搖勻，制成菌液。1mL1ⅹ1090mL無(wú)菌水1ⅹ1071ⅹ1051ⅹ1061ⅹ1031ⅹ1021ⅹ1041mL1mL1mL1mL9mL無(wú)菌水1mL③取1mL上清液加入盛有9mL無(wú)菌水的試管中，依次等比稀釋。取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌

采用劃線或涂布的接種方法能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)目標(biāo)微生物的分離和純化稀釋涂布平板法步驟④取0.1mL菌液，滴加到培養(yǎng)基表面。⑤將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。⑥將涂布器放在火焰上灼燒，待酒精燃盡、涂布器冷卻后，再進(jìn)行涂布。⑦用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培養(yǎng)皿，使涂布均勻。待涂布的菌液被培養(yǎng)基吸收后，將平板倒置，培養(yǎng)

采用劃線或涂布的接種方法能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)目標(biāo)微生物的分離和純化比較平板劃線法稀釋涂布平板法主要步驟接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線系列梯度稀釋操作和涂布平板操作接種工具接種環(huán)涂布器能否用于計(jì)數(shù)不能計(jì)數(shù)可以計(jì)數(shù)，但是操作復(fù)雜，需涂布多個(gè)平板共同點(diǎn)都能將微生物分散到固體培養(yǎng)基表面，以獲得單菌落，達(dá)到分離純化微生物的目的，也可用于觀察菌落特征

采用劃線或涂布的接種方法能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)目標(biāo)微生物的分離和純化活動(dòng)：接種、培養(yǎng)并分離酵母菌目的要求用平板劃線法或稀釋涂布平板法接種酵母菌。用液體培養(yǎng)基大量擴(kuò)增酵母菌。方法步驟制作平板：對(duì)兩個(gè)直徑為90mm的培養(yǎng)皿進(jìn)行標(biāo)記，分別向其中倒入未凝固的固體培養(yǎng)基，使培養(yǎng)基鋪滿培養(yǎng)皿底部，厚度約2mm。標(biāo)記：班級(jí)、姓名、日期、接種稀釋度、LB或尿素。（底部或者側(cè)邊）

采用劃線或涂布的接種方法能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)目標(biāo)微生物的分離和純化活動(dòng)：接種、培養(yǎng)并分離酵母菌平板劃線法步驟：場(chǎng)所：超凈工作臺(tái)上，在酒精燈旁。在酒精燈火焰上從接種環(huán)的圓環(huán)處依次向上灼燒滅菌。為避免滅菌后接種環(huán)的高溫燙死菌種，應(yīng)在挑取菌種前將接種環(huán)貼在培養(yǎng)器內(nèi)壁上降溫。用接種環(huán)蘸取菌液進(jìn)行接種:連續(xù)平行劃線，或扇形劃線，或多次連續(xù)平行劃線接種環(huán)灼燒滅菌平板倒置，置于25℃，培養(yǎng)24h。注意：初次劃線時(shí)可參照培養(yǎng)皿底部的標(biāo)記點(diǎn)進(jìn)行劃線，以保證有最好的劃線分離效果。

采用劃線或涂布的接種方法能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)目標(biāo)微生物的分離和純化討論1.判斷液體培養(yǎng)基成功接種酵母菌的依據(jù)是什么？2.如何判斷是否分離出酵母菌的單菌落？判斷依據(jù)是什么？3.在固體培養(yǎng)基表面涂布的菌種是否出現(xiàn)形態(tài)、顏色不同的單菌落？你認(rèn)為出現(xiàn)該現(xiàn)象的原因是什么？4.僅從菌落特征是否能夠認(rèn)定你分離出了酵母菌？怎樣進(jìn)行進(jìn)一步的鑒定？與未接種的培養(yǎng)基相比，接種的培養(yǎng)基由于酵母菌的增殖而變渾濁。與用酵母菌純種在固體培養(yǎng)基表面接種的結(jié)果相比，用樣品稀釋液接種的固體培養(yǎng)基表面出現(xiàn)特征相同的、最小菌落即認(rèn)為可能是分離出了酵母菌單菌落。若出現(xiàn)，可能是在接種過(guò)程中有雜菌污染。否。①挑取單菌落接入糖水中,培養(yǎng)一段時(shí)間檢查是否能產(chǎn)生酒味②接入面團(tuán)中觀察能否發(fā)面;③挑取菌落樣品，制作臨時(shí)裝片，在顯微鏡下觀察、識(shí)別。

稀釋涂布平板法和顯微計(jì)數(shù)法可測(cè)定微生物的數(shù)量稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)原則選擇30-300個(gè)菌落的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)；每個(gè)稀釋度至少取3個(gè)平板取其平均值；統(tǒng)計(jì)的菌落往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低；統(tǒng)計(jì)的結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)；恰當(dāng)?shù)南♂尪?、涂布是否均勻是成功統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵。分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，要考慮重復(fù)組結(jié)果是否接近，如果相差太大，意味著操作有誤，需重新實(shí)驗(yàn)。

稀釋涂布平板法和顯微計(jì)數(shù)法可測(cè)定微生物的數(shù)量稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)原則選擇30-300個(gè)菌落的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)；每個(gè)稀釋度至少取3個(gè)平板取其平均值；統(tǒng)計(jì)的菌落往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低；統(tǒng)計(jì)的結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)；恰當(dāng)?shù)南♂尪?、涂布是否均勻是成功統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目的關(guān)鍵。分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果時(shí)，要考慮重復(fù)組結(jié)果是否接近，如果相差太大，意味著操作有誤，需重新實(shí)驗(yàn)。每克樣品中的菌落數(shù)＝(C÷V)×MM代表稀釋倍數(shù)；C代表某一稀釋度下3個(gè)平板上生長(zhǎng)的平均菌落數(shù)；V代表涂布平板時(shí)所用的稀釋液的體積(mL)

稀釋涂布平板法和顯微計(jì)數(shù)法可測(cè)定微生物的數(shù)量顯微計(jì)數(shù)法血細(xì)胞計(jì)數(shù)板專(zhuān)用蓋玻片

稀釋涂布平板法和顯微計(jì)數(shù)法可測(cè)定微生物的數(shù)量顯微計(jì)數(shù)法利用特定血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下觀察計(jì)數(shù)一定體積的樣品中微生物的數(shù)量。

稀釋涂布平板法和顯微計(jì)數(shù)法可測(cè)定微生物的數(shù)量顯微計(jì)數(shù)法注意事項(xiàng)：1.先蓋蓋玻片再滴加菌液，讓菌液自行滲入，多余的菌液用濾紙吸去。2.滴加菌液時(shí)避免菌液滴到蓋玻片上，還要防止產(chǎn)生氣泡。3.計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)不時(shí)調(diào)節(jié)焦距，才能觀察到不同深度的菌體。4.對(duì)壓線細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右。5.為減小誤差，應(yīng)對(duì)同一紅細(xì)胞計(jì)數(shù)區(qū)中的細(xì)胞進(jìn)行3次計(jì)數(shù)后取平均值。6.血球計(jì)數(shù)板使用完后，用自來(lái)水沖洗，洗后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干。7.血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)時(shí)不能區(qū)分死菌和活菌。課堂練習(xí)1.下列有關(guān)倒平板操作的敘述，錯(cuò)誤的是(

)A.將滅過(guò)菌的培養(yǎng)皿放在灑精燈火焰旁的桌面上備用B.待錐形瓶中的培養(yǎng)基冷卻至50℃左右才可倒平板C.待平板冷卻凝固后,需要倒過(guò)來(lái)放置備用D.倒完平板后,錐形瓶中剩余的培養(yǎng)基需經(jīng)過(guò)高壓蒸汽滅菌后才能清理掉D解析：倒平板全過(guò)程要嚴(yán)格防止外來(lái)雜菌的入侵,酒精燈火焰旁屬于無(wú)菌環(huán)境,因此,滅過(guò)菌的培養(yǎng)皿要放在酒精燈火焰旁的桌面上備用,A正確;配制好的培養(yǎng)基用高壓蒸汽滅菌法滅菌后,待培養(yǎng)基冷卻至50℃左右倒平板,若溫度偏低則培養(yǎng)基易凝固,若溫度太高則燙手,B正確;等待培養(yǎng)皿冷卻凝固后需要倒過(guò)來(lái)放置,防止冷凝水滴入培養(yǎng)皿造成污染,C正確;倒完平板后,錐形瓶中剩余的培養(yǎng)基是已經(jīng)滅過(guò)菌的,不需要再滅菌,D錯(cuò)誤。課堂練習(xí)2.自然界中的微生物幾乎都是混雜在一起生活的，平板劃線法和稀釋涂布平板法是分離并純化微生物的常用方法。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是()A.分離微生物前一般需要將菌液進(jìn)行梯度稀釋B.在酒精燈火焰旁進(jìn)行接種，可防止雜菌污染C.利用同一濃度的菌液都可以分離出來(lái)單菌落D.使用平板劃線法或稀釋涂布平板法接種的平板在培養(yǎng)時(shí)都應(yīng)倒置C解析：分離微生物的時(shí)候由于菌液濃度較高，往往需要將菌液進(jìn)行梯度稀釋?zhuān)珹正確；酒精燈火焰旁有一個(gè)無(wú)菌區(qū)域，在酒精燈火焰旁進(jìn)行接種，可防止雜菌污染，B正確；如果利用同一種高濃度的菌液，平板劃線法可通過(guò)連續(xù)劃線進(jìn)行稀釋?zhuān)罱K得到單菌落，但稀釋涂布平板法可能會(huì)因?yàn)榫簼舛冗^(guò)高無(wú)法分離出單菌落，C錯(cuò)誤；使用平板劃線法或稀釋涂布平板法接種的平板在培養(yǎng)時(shí)都應(yīng)倒置，以防止冷凝水滴到培養(yǎng)基上，D正確。課堂練習(xí)3.在進(jìn)行微生物計(jì)數(shù)時(shí)，下列情況會(huì)造成統(tǒng)計(jì)結(jié)果偏大的是()A.利用顯微鏡計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)時(shí)，滴加菌液時(shí)產(chǎn)生了氣泡B.利用顯微鏡計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)時(shí)，滴加菌液后再蓋蓋玻片C.使用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時(shí)，涂布器經(jīng)火焰灼燒后直接進(jìn)行涂布D.使用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時(shí)，平板上有不少菌落是兩個(gè)細(xì)胞連在一起形成的B解析：利用顯微鏡計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)時(shí)，滴加菌液時(shí)產(chǎn)生了氣泡，會(huì)導(dǎo)致實(shí)際所測(cè)的菌液體積減少，造成統(tǒng)計(jì)結(jié)果偏小，A錯(cuò)誤；利用顯微鏡計(jì)數(shù)法計(jì)數(shù)時(shí)，若先滴加菌液，再蓋蓋玻片，則蓋玻片可能由于菌液表面的張力作用而不能?chē)?yán)密地蓋到計(jì)數(shù)板上，從而導(dǎo)致計(jì)數(shù)室內(nèi)的菌液體積增多，造成統(tǒng)計(jì)結(jié)果偏大，B正確；使用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時(shí)，涂布器經(jīng)火焰灼燒后直接進(jìn)行涂布會(huì)殺滅部分微生物，導(dǎo)致統(tǒng)計(jì)結(jié)果偏小，C錯(cuò)誤；使用稀釋涂布平板法計(jì)數(shù)時(shí)，平板上有不少菌落是兩個(gè)細(xì)胞連在一起形成的，統(tǒng)計(jì)時(shí)會(huì)按一個(gè)菌落計(jì)數(shù)，造成統(tǒng)計(jì)結(jié)果偏小，D錯(cuò)誤。課堂練習(xí)4.剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物，但并不與纖維素水解后形成的纖維二糖和葡萄糖等發(fā)生這種反應(yīng)，纖維素被纖維素分解菌分解后，培養(yǎng)基中會(huì)出現(xiàn)以這些菌為中心的透明圈。某同學(xué)利用剛果紅配制培養(yǎng)基，分離土壤中能分解纖維素的微生物并觀察菌落數(shù)。下列敘述正確的是()A.用平板劃線法接種后統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，統(tǒng)計(jì)值比活菌實(shí)際數(shù)低B.透明圈出現(xiàn)的原因是菌落周?chē)睦w維素被微生物產(chǎn)生的纖維素酶分解C.應(yīng)選擇菌落直徑與周?chē)该魅χ睆奖戎荡蟮木溥M(jìn)行純化D.以纖維素為唯一碳源且加入剛果紅的培養(yǎng)基從功能上分屬于選擇培養(yǎng)基B解析：平板劃線法不能用于菌落的計(jì)數(shù)，A錯(cuò)誤；剛果紅染料能與纖維素形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被纖維素分解菌產(chǎn)生的纖維素酶分解后，紅色復(fù)合物消失，在菌落周