發(fā)酵法生產(chǎn)白細胞介素資料

發(fā)酵法生產(chǎn)白細胞介素-2

白細胞介素-2白介素－2是一個分子量為14500的糖蛋白，它刺激已被特異性抗原或致絲裂因數(shù)啟動的T細胞增殖【所屬】免疫增強劑/其他抗腫瘤藥及輔助治療藥【別名】白間素,欣吉爾,T細胞生長因子,白細胞介素-2等【適應癥】主要用于腎癌、黑色素瘤和非何杰金淋巴瘤有效（Rossenberg）。LAK細胞代表1個有單核巨噬細胞，B和T淋巴細胞特征的異原的細胞體。這些LAK細胞似乎對癌細胞有特異作用。此外，LAK細胞（不象T細胞）介導殺傷不受MHC的約束。應用【藥理作用】本品可促進T淋巴細胞增殖與分化，誘導具有細胞毒樣活力的殺傷細胞，誘導及增強殺傷性T細胞、單核細胞、巨噬細胞的活力等。【臨床應用】適用于慢性活動性乙型肝炎病毒感染等；用于腎細胞癌、黑色素瘤的治療，用于癌性胸腹水的控制及其他晚期腫瘤；用于先天或后天免疫缺陷癥的治療，如艾滋病，可提高病人細胞免疫功能和抗感染能力；各種自身免疫病的治療，如類風濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、干燥綜合征等；對某些疾病性、桿菌性疾病、胞內(nèi)寄生菌感染性疾病，如乙型肝炎、麻風病、肺結(jié)核、白色念珠菌感染等具有一定的治療作用。2生產(chǎn)過程及工藝過程(1)發(fā)酵工程菌為大腸桿菌，溫度敏感型。種子用LB培養(yǎng)基；發(fā)酵用M9CA培養(yǎng)基，30度10小時，后提高溫度至42度，誘導3h。

傳統(tǒng)工藝雞瘟病毒，PHA,培養(yǎng)液[啟動誘生]37℃人白細胞粉誘生白細胞培養(yǎng)液[滅活病毒，分離],HCl,NaOHpH=2~2.5,pH=7.2~7.4,離心上清液35%硫酸銨4℃，24h，離心上清液85%硫酸銨4℃，24h，離心沉淀10mmol/LPBS透析pH=6.5，24h透析內(nèi)液[親和層析]上Sepharose柱pH=6.5親和載體I[洗滌]0.4mol/LNaCl，PBSpH=6.5親和載體Ⅱ[吸收]1.0mol/LNaCl,PBS透析pH=6.5IL-2組分[凝膠層析]上Utrogel柱pH=6.5凝膠載體0.2mol/Ltris-HCl含0.1%PEG2%正丁醇，0.2mol/L甘氨酸pH=7.6IL-2酶法生產(chǎn)1工藝流程圖IL-2工程菌斜面搖瓶發(fā)酵制備包涵體洗滌與裂解凝膠過濾與復性檢定與包裝(2)分離純化包涵體制備離心收集，菌體懸于EDTA溶液中，用超聲波破碎細胞，后8000r/min離心，收集沉淀(包涵體和細胞碎片)。包涵體洗滌及裂解：

用Tris-HCl洗滌3次，離心收集沉淀，用鹽酸胍變性，離心收集上清液。凝膠過濾及復性：