《化妝品毒理學(xué)試驗(yàn)方法樣品前處理通則》及相應(yīng)檢驗(yàn)方法等19項(xiàng)

國(guó)家藥監(jiān)局關(guān)于將化妝品毒理學(xué)試驗(yàn)方法樣品前處理通則等19

項(xiàng)制修訂項(xiàng)目納入化妝品安全技術(shù)規(guī)范（2015年版）的通告

（2024年第12號(hào)）

國(guó)家藥品監(jiān)督管理局組織起草了《化妝品毒理學(xué)試驗(yàn)方法樣品前處理通則》等19

項(xiàng)制修訂項(xiàng)目并形成相應(yīng)檢驗(yàn)方法，經(jīng)化妝品標(biāo)準(zhǔn)專家委員會(huì)全體會(huì)議審議通過(guò)，現(xiàn)予

以發(fā)布。

其中，《化妝品毒理學(xué)試驗(yàn)方法樣品前處理通則誓12項(xiàng)制定項(xiàng)目（詳見附件2-12）

為新增檢驗(yàn)方法,納入《化妝品安全技術(shù)規(guī)范（2015年版）》（詳見附件1）,自2024

年12月1日起實(shí)施。

《化妝品中二嗯烷的檢驗(yàn)方法》《化妝品中二甲硝咪嚶等120種原料的檢臉?lè)椒ā?/p>

《化妝品中二硫化硒的檢驗(yàn)方法》（詳見附件13?15）為修訂的檢驗(yàn)方法，替換《化妝

品安全技術(shù)規(guī)范（2015年版）》中原有檢驗(yàn)方法（詳見附件1）。自2024年12月1

日起，化妝品注冊(cè)、備案及抽樣檢驗(yàn)相關(guān)檢驗(yàn)應(yīng)當(dāng)采用本通告發(fā)布的檢驗(yàn)方法C

比馬前列素、拉坦前列素、他氟前列素、他氟乙酰胺、曲伏前列素為新增禁用物質(zhì)，

納入《化妝品安全技術(shù)規(guī)范（2015年版）》（詳見附件1）,自發(fā)布之日起實(shí)施。

附件：1.《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》19項(xiàng)制修訂項(xiàng)目情況匯總表

2.化妝品毒理學(xué)試驗(yàn)方法樣品前處理通則

3.急性吸入毒性試驗(yàn)方法

4.急性吸入毒性試驗(yàn)急性毒性分類法

5.光反應(yīng)性活性氧（ROS）測(cè)定試驗(yàn)方法

6.體外皮膚變態(tài)反應(yīng)U937細(xì)胞激活試驗(yàn)方法

7.皮膚吸收體內(nèi)試驗(yàn)方法

8.28天重復(fù)劑量經(jīng)口毒性試驗(yàn)方法

9.28天重復(fù)劑量吸入毒性試驗(yàn)方法

10.90天重復(fù)劑量吸入毒性試驗(yàn)方法

11.擴(kuò)展一代生殖發(fā)育毒性試驗(yàn)方法

12.兩代生殖發(fā)育毒性試驗(yàn)方法

13.化妝品中二嗯烷的檢驗(yàn)方法

14化妝品中二甲硝咪嚶等120種原料的檢驗(yàn)方法

15.化妝品中二硫化硒的檢驗(yàn)方法

國(guó)家藥監(jiān)局

2024年3月18日

理后］家藥品監(jiān)督管理局2024年第12號(hào)通告附件lxd.doc

叫家藥品監(jiān)督管理局2024年第12號(hào)通告附件2.docx

叫家藥品監(jiān)督管理局2024年第12號(hào)通告附件3.docx

理I國(guó)家藥品監(jiān)督管理局2024年第12號(hào)通告附件4.doc

里1國(guó)家藥品監(jiān)督管理局2024年第12號(hào)通告附件5.docx

獨(dú)國(guó)家藥品監(jiān)督管理局2024年第12號(hào)通告附件6.docx

回國(guó)家藥品監(jiān)督管理局2024年第12號(hào)通告附件Zdoc

叫家藥品監(jiān)督管理局2024年第12號(hào)通告附件8.doc

叫1家藥品監(jiān)督管理局2024年第12號(hào)通告附件9.doc

理I國(guó)家藥品監(jiān)督管理局2024年第12號(hào)通告附件10.doc

幽意1家藥品監(jiān)督管理局2024年第12號(hào)通告附件ll.docx

田家藥品監(jiān)督管理局2024年第12號(hào)通告附件12.docx

邕國(guó)家藥品監(jiān)督管理局2024年第12號(hào)通告附件13.doc

理扇家藥品監(jiān)督管理局2024年第12號(hào)通告附件14.docx

幽后1家藥品監(jiān)督管理局2024年第12號(hào)通告附件15.docx

附件1

《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》19項(xiàng)制修訂項(xiàng)目情況匯總表

同時(shí)廢止的《化妝品安全

序號(hào)項(xiàng)目名稱類型建議納入《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》的章節(jié)

技術(shù)規(guī)范》中原章節(jié)內(nèi)容

化妝品毒理學(xué)試驗(yàn)方法樣品前處理第六章毒理學(xué)試驗(yàn)方法33化妝品毒理學(xué)試驗(yàn)

1

通則方法樣品前處理通則

第六章毒理學(xué)試驗(yàn)方法34急性吸入毒性試驗(yàn)

2急性吸入毒性試驗(yàn)方法

方法

第六章毒理學(xué)試驗(yàn)方法35急性吸入毒性試驗(yàn)

3急性吸入毒性試驗(yàn)急性毒性分類法

急性毒性分類法

光反應(yīng)性活性儀(ROS)測(cè)定試驗(yàn)方第六章毒理學(xué)試驗(yàn)方法36光反應(yīng)性活性輒

4

法(ROS)測(cè)定試驗(yàn)方法

增

新

體外皮膚變態(tài)反應(yīng)U937細(xì)胞激活第六章毒理學(xué)試驗(yàn)方法37體外皮膚變態(tài)反應(yīng)

聆

5檢

法

試驗(yàn)方法方U937細(xì)胞激活試驗(yàn)方法

笫六章毒理學(xué)試驗(yàn)方法38皮膚吸收體內(nèi)試驗(yàn)

6皮膚吸收體內(nèi)試驗(yàn)方法

方法

第六章毒理學(xué)試驗(yàn)方法3928天重亞劑殳經(jīng)口

728人重更劑量經(jīng)口毒性試驗(yàn)方法

毒性試驗(yàn)方法

第六章毒理學(xué)試臉?lè)椒?028天重復(fù)劑量吸入

828天重復(fù)劑量吸入毒性試驗(yàn)方法

毒性試驗(yàn)方法

第六章毒理學(xué)試驗(yàn)方法4190天垂笈劑量吸入

990天重曳劑量吸入毒性試驗(yàn)方法

毒性試驗(yàn)方法

同時(shí)廢止的《化妝品安全

序號(hào)項(xiàng)目名稱類型建議納入《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》的章節(jié)

技術(shù)規(guī)范》中原章節(jié)內(nèi)容

第六章毒理學(xué)試驗(yàn)方法42擴(kuò)展一代生殖發(fā)育

1()獷展一代生殖發(fā)育毒性試驗(yàn)方法

毒性試驗(yàn)方法

第六章毒理學(xué)試驗(yàn)方法43兩代生殖發(fā)育毒性

11兩代生殖發(fā)育毒性試臉?lè)椒?/p>

試臉?lè)椒?/p>

12比馬前列素第二章化妝品禁限用組分表】序號(hào)1286

A

13拉坦前列素笫二章化妝品禁限用組分表1序號(hào)1287

禁用

14他氨前列素目錄第二章化妝品禁限用組分表1序號(hào)1288

新增

15他氟乙酰胺第二章化妝品禁限用組分表1序號(hào)1289

16曲伏前列素笫二章化妝品禁限用組分表1序號(hào)129()

第四章理化檢驗(yàn)方法2

第四章理化檢驗(yàn)方法2禁用組分檢驗(yàn)方法

17化妝品中二嘮烷的檢驗(yàn)方法禁用組分檢驗(yàn)方法2.19

2.19化妝品中二嗯烷的瑜驗(yàn)方法

二嗯烷

修

訂第四章理化檢驗(yàn)方法2

后

替禁用組分檢驗(yàn)方法2.1M

換

原康晚等9種組分、2.2鹽酸

驗(yàn)

檢第四章理化檢驗(yàn)方法2禁用組分檢險(xiǎn)方法美滿霉素等7種組分、2.3

化妝品中二甲硝咪哩等種原料法

120方

182.35化妝品中二甲硝咪?坐等120種原料的檢驗(yàn)方依諾沙星等10種組分、2.35

的檢驗(yàn)方法

法化妝品中抗感染類藥物的

檢測(cè)方法(字號(hào)出自國(guó)家藥

品監(jiān)督管理局2019年第

66號(hào)通告：

同時(shí)廢止的《化妝品安全

序號(hào)項(xiàng)目名稱類型建議納入《化妝品安全技術(shù)規(guī)范》的章節(jié)

技術(shù)規(guī)范》中原章節(jié)內(nèi)容

第四章：理化檢驗(yàn)方法3

第四章理化檢驗(yàn)方法3限用組分檢驗(yàn)方法3.2

19化妝品中二硫化硒的檢驗(yàn)方法限用組分檢驗(yàn)方法3.2-

化妝品中二硫化硒的檢險(xiǎn)方法

硫化硒

附件2

化妝品毒理學(xué)試驗(yàn)方法樣品前處理通則

GeneralRuleforPretreatmentofCosmeticinToxicologicalExperiments

1范圍

本規(guī)范規(guī)定了化妝品毒理學(xué)試驗(yàn)樣品前處理的基本原則、要求和方法。

本規(guī)范適用于化妝品原料和產(chǎn)品的毒理學(xué)試驗(yàn)檢測(cè)。

2試驗(yàn)?zāi)康?/p>

在毒理學(xué)試驗(yàn)開始之前，首先應(yīng)對(duì)樣品進(jìn)行前處理操作，通過(guò)樣品前處理可以增加受試物與試

驗(yàn)體系（包括實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、細(xì)胞、細(xì)菌等）的接觸，增加樣品吸收率，使樣品性狀更利于試驗(yàn)操作，

保證毒理學(xué)試驗(yàn)的科學(xué)性和嚴(yán)謹(jǐn)性。

3定義

3.1前處理

指在毒理學(xué)試驗(yàn)開始前，對(duì)受試樣品進(jìn)行溶解、研磨、混勻、賦形、劑量分組、合理保存等一

系列的準(zhǔn)備性操作。

4前處理的基本原則

化妝品原料和產(chǎn)品的前處理方式需要綜合考慮樣品的理化性質(zhì)和毒理學(xué)試驗(yàn)方案。對(duì)于化妝品

原料而言，應(yīng)根據(jù)受試物的理化特性和染毒方式確定前處理方法。對(duì)于化妝品產(chǎn)品而言，則主要考

慮化妝品產(chǎn)品的物理性狀和實(shí)際應(yīng)用中的使用方法?；瘖y品原料和產(chǎn)品的樣品前處理均需遵守現(xiàn)用

現(xiàn)配原則。

5前處理方法

根據(jù)毒理學(xué)試驗(yàn)的要求，需要對(duì)樣品進(jìn)行前處理的準(zhǔn)備T.作。受試物的處理不能改變其原有的

毒理學(xué)性質(zhì)。受試物進(jìn)行不同試驗(yàn)時(shí)，應(yīng)結(jié)合毒理學(xué)試驗(yàn)項(xiàng)目的染毒方式和受試物的理化性質(zhì)進(jìn)行

相應(yīng)的前處理工作。

5.1溶劑的選擇

化妝品前處理應(yīng)不改變樣品的毒理學(xué)性質(zhì)。當(dāng)樣品需要溶解時(shí).，應(yīng)注意溶劑的選擇，以保證樣

品充分溶解或混懸。樣品的前處理稀釋倍數(shù)應(yīng)保證最終供試品濃度不低于實(shí)際使用濃度。

溶劑的選擇應(yīng)充分了解其毒理特性。溶劑應(yīng)無(wú)特殊刺激性或氣味，本身應(yīng)不產(chǎn)生毒性作用，與

受試物各成分之間不發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，且保持其穩(wěn)定性，如使用其他溶劑應(yīng)說(shuō)明理由。

體外遺傳毒性試驗(yàn)中，所選溶劑必須是非致突變物，且不能影響細(xì)胞或細(xì)菌存活以及S9的活性。

細(xì)菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)常用溶劑首選無(wú)菌蒸儲(chǔ)水，其次DMSO、四氫啖喃、內(nèi)酮等。細(xì)胞試驗(yàn)常用溶劑

首選培養(yǎng)液（不含血清）或無(wú)菌蒸儲(chǔ)水，其次DMSO.丙酮、甘油等；使用有機(jī)溶劑時(shí)，終濃度應(yīng)

符合具體試驗(yàn)項(xiàng)目的要求，一般而言，DMSO使用終濃度不應(yīng)大于0.5%,丙酮和甘油使用終濃度不

應(yīng)大于1%。

5.2化妝品原料

化妝品原料的前處理方法主要取決于樣品的物理形態(tài)和染毒方式，具體如下：

5.2.1液態(tài)

（1）準(zhǔn)備器材：一次性注射器（2mL-5mL）,無(wú)菌離心管（15mL/50mL）,移液槍（0.1pL-5mL）,

量筒（10mL）,燒杯，旋渦混勻儀，水相/有機(jī)相濾器（0.22nmQ45um）,溶劑等。

（2）取樣：根據(jù)毒理學(xué):式驗(yàn)項(xiàng)目、染毒方式以及樣品原液性質(zhì)計(jì)算各劑量組稀釋倍數(shù)，然后

用一次性注射器或移液槍量取相應(yīng)體積的樣品原液，加入適宜溶劑中，并充分混勻。也可應(yīng)用等比

例稀釋法。若樣品原液為多介質(zhì)分層液體，應(yīng)上下?lián)u晃，使其充分混勻后，再做稀釋分組,若毒理

學(xué)試驗(yàn)項(xiàng)目未明確要求劑量分組時(shí)，可使用一次性注射器或移液槍直接量取樣品原液。

（3）儲(chǔ)存：將配置好的供試液密封，防止雜質(zhì)污染，根據(jù)樣品原液的儲(chǔ)存方式選擇室溫或冷

藏暫放或避光。樣品配制應(yīng)適量，遵守現(xiàn)用現(xiàn)配的原則，防止樣品在儲(chǔ)存過(guò)程中發(fā)生變質(zhì)或變性。

5.2.2固態(tài)

（1）準(zhǔn)備器材：研缽，電子天平，稱量紙，稱量勺，量筒（10mL）,燒杯，無(wú)菌離心管（15mL方0

mL）,旋渦混勻儀，水相/有機(jī)相濾器（0.22pnK.45Hm）,移液槍（0.1pL-5mL）,溶劑等。

<2）取樣：首先根據(jù)樣品物理性狀，考慮是否需要研磨，若樣品原樣為細(xì)粉狀，則無(wú)需研磨；

否則，應(yīng)先使用研缽，將塊狀、背狀等固體性狀，充分研磨成細(xì)粉狀或糊狀。然后根據(jù)毒理學(xué)試驗(yàn)

項(xiàng)目、染毒方式以及樣品原樣性質(zhì)計(jì)算各劑量組濃度，用電子天平稱量相應(yīng)重量的樣品，加入適宜

溶劑中，并充分混勻。若毒理學(xué)試驗(yàn)項(xiàng)目未明確要求分劑量組時(shí)，可直接用電子天平稱量相應(yīng)重量

的樣品：如果試驗(yàn)項(xiàng)目為經(jīng)皮染毒時(shí)，可考慮用最小體積的溶劑將樣品濕化成無(wú)散落粉末且無(wú)多余

溶劑的狀態(tài)，或在止式試驗(yàn)時(shí)，先濕化皮膚。

（3）儲(chǔ)存：將配置好的供試液密封，防止雜質(zhì)污染，根據(jù)樣品原樣的儲(chǔ)存方式選擇干燥通風(fēng)

的環(huán)境，室溫或冷藏暫放或避光。樣品配制應(yīng)適量，遵守現(xiàn)用現(xiàn)配的原則，防止樣品在儲(chǔ)存過(guò)程中

發(fā)生潮化或變質(zhì)。

5.2.3難溶樣品

難以溶解于無(wú)機(jī)溶劑或有機(jī)溶劑的難溶樣品，常見處理方法有（1）使用樣品浸提液。根據(jù)樣

品理化性質(zhì)選擇適宜浸提介質(zhì)、浸提比例、浸提溫度、浸提時(shí)間和浸提方法，并提供相應(yīng)說(shuō)明。樣

品浸提液應(yīng)對(duì)皮膚無(wú)毒副作用。（2）加入懸浮劑或賦形劑，使樣品懸浮其中，形成分布均勻的懸浮

混合物。懸浮劑或賦形劑應(yīng)對(duì)皮膚無(wú)毒副作用、無(wú)色無(wú)味，且粒定性高。常見的懸浮劑及賦形劑有：

玉米油、淀粉、明膠等。

5.3化妝品產(chǎn)品

化妝品產(chǎn)品進(jìn)行毒理學(xué)試驗(yàn)的前處理工作時(shí)，主要根據(jù)化妝品產(chǎn)品劑型分類處理，此外，還需

要考慮化妝品的實(shí)際使用方法等因素。

5.3.1液體劑型化妝品產(chǎn)品

化妝品中的液體劑型（露、液、水、油、油水分離等），除可、霜、蜜、脂以外的育雷乳劑型

（乳、乳液、奶、奶液等）、凝膠劑型（咕崛、股等）等流動(dòng)性的化妝品產(chǎn)品均可參照5.21處理。

乳化類的液體產(chǎn)品稀釋時(shí)，需根據(jù)產(chǎn)品特征選擇脂溶性或水溶性溶劑。

53.2固體劑型化妝品產(chǎn)品

化妝品中膏霜乳類中的膏體、霜類、蜜、脂，以及粉劑劑型（散粉、顆粒等），塊狀劑型（塊

狀粉、大塊固體等），泥狀劑型（泥狀固體等），蠟基劑型（以蠟為主要基料的產(chǎn)品）等固體化妝品

產(chǎn)品的前處理方式可參照5.2.2處理。

53.3敷貼類化妝品產(chǎn)品

化妝品中貼、膜、含基材劑型（貼、膜、含配合化妝品使用的基材類）的化妝品產(chǎn)品前處理方

法如下：

（1）準(zhǔn)備器材：取剪刀，一次性注射器（2ml-5mL）,移液槍（0.1nL-5mL）,量筒（10mL）,

溶劑等。

（2）取樣：根據(jù)毒理學(xué):式驗(yàn)項(xiàng)目和產(chǎn)品的使用方式，如若經(jīng)皮接觸，先用剪刀將樣品裁剪成

適宜的形狀（如2.5X2.5cm的方塊），比如含基質(zhì)材料的面膜類；當(dāng)原產(chǎn)品形狀不足尺寸時(shí)，可疊

加多個(gè)直到滿足形狀要求，比如痘痘貼類；如若經(jīng)眼睛接觸，可將樣品液從產(chǎn)品袋中擠出，然后按

照5.2.1處理。

（3）儲(chǔ)存：將配置好的共試液密封，防止雜質(zhì)污染，根據(jù)樣品的儲(chǔ)存方式選擇室溫或冷臧暫

放或避光。

5.3,4按配比使用的化妝品產(chǎn)品

染發(fā)劑等按比例配制使用的化妝品，其前處理工作應(yīng)與產(chǎn)品實(shí)際使用方法保持一致，具體如下:

<1）準(zhǔn)備器材：一次性注射器（2mL-5mL）,移液槍（0.1RL-5mL）,量筒（10mL）,電子天平,

旋渦混勻儀等。

（2）取樣：根據(jù)化妝品產(chǎn)品的使用說(shuō)明，用電子天平或一次性注射器或移液槍定量取相應(yīng)質(zhì)

量的各組分樣品，然后充分均勻。

<3）儲(chǔ)存：將配置好的供試液密封，防止雜質(zhì)污染，根據(jù)樣品的儲(chǔ)存方式選擇室溫或冷藏暫

放或避光。此類化妝品產(chǎn)品應(yīng)嚴(yán)格遵守現(xiàn)用現(xiàn)配原則。

5.3.5氣霧劑劑型及噴霧劑劑型化妝品產(chǎn)品

化妝品中氣霧劑劑型（含推進(jìn)劑）及噴霧劑劑型的化妝品前處理如下：

（1）準(zhǔn)備器材：燒杯，一次性注射器（2mL-5mL）,移液槍（0.1nL-5mL）等。

（2）取樣：一般情況下，首先將樣品噴至燒杯容器中，收集其液體，再按照521處理。若樣

品因?yàn)檎舭l(fā)而無(wú)法收集時(shí)，可模擬產(chǎn)品的實(shí)際使用方法，直接將產(chǎn)品在受試動(dòng)物正前方10cm處噴

射，此距離可根據(jù)噴霧壓力及內(nèi)容物做出適度調(diào)整。

（3）儲(chǔ)存：將配置好的關(guān)試液密封，防止雜質(zhì)污染或冬發(fā)，根據(jù)樣品原液的儲(chǔ)存方式選擇室

溫或冷藏暫放或避光。

5.3.6具有特殊使用方法的化妝品產(chǎn)品

若產(chǎn)品備注有特殊使用方法，如需要加熱、溶解等操作，如凍干粉、浴鹽等，應(yīng)在前處理時(shí)，

按照樣品的實(shí)際使用方法，盡可能保持受試物在實(shí)際使用中的形態(tài)。此類化妝品產(chǎn)品的配制應(yīng)注意

現(xiàn)用現(xiàn)配的原則。

5.4其他

化妝品原料和產(chǎn)品為其他特殊性狀時(shí)，應(yīng)綜合考慮受試物理化特性和人群接觸特征，選擇不影

響受試物毒理學(xué)特性的前處理方式。

6注意事項(xiàng)

經(jīng)皮染毒時(shí)，溶劑應(yīng)另外注意不影響受試物穿透皮膚，保證受試物與皮膚有良好接觸，常用的

介質(zhì)有蒸編水、羊毛脂、凡士林。

經(jīng)口染毒時(shí)，受試物均應(yīng)溶解手適宜的溶劑中，在選擇溶劑時(shí)應(yīng)不高于經(jīng)口染毒液體的最大容

量，嚙齒類動(dòng)物所給液體容量--般為lmL/100g,水溶液可至2mL/100g。通過(guò)調(diào)整受試物溶液濃度

使各劑量組經(jīng)口染毒的容量一致。

吸入染毒時(shí),受試物須在空氣中保持一定濃度，必要時(shí)可加入適當(dāng)?shù)馁x形劑。賦形劑本身應(yīng)無(wú)

毒性，不與受試物反應(yīng)且不影響受試物的吸收。

在體外試驗(yàn)中，需要注意無(wú)菌條件，化妝品原料和產(chǎn)品的酸堿度不能影響細(xì)胞或細(xì)菌的正常生

長(zhǎng)，若化妝品原料和產(chǎn)品為強(qiáng)酸強(qiáng)堿（pHW2或pHNll.5）,可不再做皮膚刺激性/腐蝕性試掩和急性

眼刺激性/腐蝕性試驗(yàn)。

附件3

急性吸入毒性試驗(yàn)方法

AcuteInhalationToxicityStudy

I范圍

本規(guī)范規(guī)定了動(dòng)物急性吸入毒性試驗(yàn)的基本原則、要求和方法。

本規(guī)范適用于化妝品單?成分的原料安全性毒理學(xué)檢測(cè)。

2試驗(yàn)?zāi)康?/p>

急性吸入毒性試驗(yàn)可評(píng)價(jià)化妝品原料能否被直接吸入或者通過(guò)其他途徑進(jìn)入呼吸道所產(chǎn)生的

毒性反應(yīng)，可對(duì)受試物進(jìn)行毒性分級(jí)，為亞急性毒性和其他毒理學(xué)研究中染毒濃度選擇提供依據(jù)。

3定義

3.1急性吸入毒性acuteinhalationtoxicity

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物短時(shí)間(24h內(nèi))持續(xù)吸入一種可吸入性受試物后，在短期內(nèi)出現(xiàn)的健康損害效應(yīng)。

3.2半數(shù)致死濃度(LC50)medianlethalconcentration

在一定時(shí)間內(nèi)經(jīng)呼吸道吸入受試物后，引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物總體中半數(shù)死亡的毒物的統(tǒng)計(jì)學(xué)劑量，以

單位體積空氣中受試物的質(zhì)量(mg/m3)來(lái)表示。

3.3空氣動(dòng)力學(xué)直徑aerodyr.amicequivalentdiameter(AD)

氣溶膠顆粒與不同直徑標(biāo)準(zhǔn)單位密度(LOg/cn?)球形顆粒中某一顆粒的終端沉降速度相同時(shí),

該標(biāo)準(zhǔn)球形顆粒的直徑即為空氣動(dòng)力學(xué)直徑。其計(jì)量單位為同?

3.4質(zhì)量中值空氣動(dòng)力學(xué)直徑massmedianaerodynamicdiamctcr(MMAD)

氣溶膠中小于和等于某一空氣動(dòng)力學(xué)直徑的顆?？傎|(zhì)量，占全部顆粒物質(zhì)量50%時(shí)，該直徑即

為空氣動(dòng)力學(xué)質(zhì)量中位數(shù)直徑。

3.5幾何標(biāo)準(zhǔn)差geometricstandarddeviation(GSD)

用以描述氣溶膠顆粒大小的分布狀態(tài)。以撞擊器各級(jí)累積百分比為Y軸、粒徑為X軸擬合對(duì)數(shù)

概率曲線，以累積百分比84.1%對(duì)應(yīng)的粒徑除以累積百分比50%的粒徑，即為幾何標(biāo)準(zhǔn)差。

4試驗(yàn)的基本原則

受試物通過(guò)吸入暴露裝置制備成不同濃度的樣品，各試驗(yàn)組動(dòng)物在一定時(shí)間內(nèi)吸入不司濃度的

受試物，暴露濃度的選擇可通過(guò)預(yù)試驗(yàn)確定，吸入暴露后觀察動(dòng)物的毒性反應(yīng)和死亡情況，試驗(yàn)期

間死亡的動(dòng)物要進(jìn)行尸檢，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)存活的動(dòng)物要處死進(jìn)行大體解剖。

5試驗(yàn)方法

5.1受試物

試驗(yàn)前受試物的有用信息包括：受試物的特性（如純度），化學(xué)結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)：任何體外或

者體內(nèi)性試驗(yàn)結(jié)果：預(yù)期用途和人體暴露的可能性；得到的結(jié)構(gòu)類似物的構(gòu)效關(guān)系數(shù)據(jù)和毒理數(shù)據(jù),

在研究中，盡可能使用一組受試物，而且其樣本應(yīng)該在能保持其純度、穩(wěn)定性的條件下保存。

受試物的準(zhǔn)備：可對(duì)受試物進(jìn)行適當(dāng)處理，使其達(dá)到適當(dāng)濃度和粒徑。如果是顆粒材料可經(jīng)過(guò)

機(jī)械加工，以達(dá)到所需的粒度分布，但不要分解或者改變供試品，如果在機(jī)械過(guò)程中已經(jīng)被認(rèn)為改

變了物品組分時(shí)，應(yīng)對(duì)受試物成分進(jìn)行驗(yàn)證，驗(yàn)證如果不產(chǎn)生可吸入顆粒，則不需要進(jìn)行吸入毒性

試驗(yàn)，否則應(yīng)進(jìn)行吸入毒性試驗(yàn)。

5.2實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和飼養(yǎng)環(huán)境

常規(guī)選擇嚙齒類動(dòng)物，首選大鼠，一般選用8-12周齡的大鼠，使用雌性動(dòng)物應(yīng)是未孕和未曾

產(chǎn)仔的。如需使用其他品系需說(shuō)明理由。試驗(yàn)開始時(shí)動(dòng)物體重的差異應(yīng)不超過(guò)平均體重的土20%。試

驗(yàn)前動(dòng)物要在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房環(huán)境中至少適應(yīng)3~5d時(shí)間。染毒前，動(dòng)物應(yīng)提前適應(yīng)口鼻暴露時(shí)所用的

固定器，以減少進(jìn)入新環(huán)境引起的不適。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房應(yīng)符合國(guó)家相應(yīng)規(guī)定。選用標(biāo)準(zhǔn)配合飼料，飲水不限制。

5.3染毒濃度

在試驗(yàn)開始前，通常要進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，為主試驗(yàn)的濃度選擇提供幫助，受試物已知或預(yù)期有毒則

進(jìn)行限度試驗(yàn)。用全球化學(xué)品統(tǒng)一分類和標(biāo)簽系統(tǒng)（GHS）的分類系統(tǒng)，氣體、蒸氣、溶膠的限定

濃度分別為20000ppm、20mg/L和5mg/L。

傳統(tǒng)LGso試驗(yàn)至少設(shè)置3個(gè)不同濃度的染毒組，每組動(dòng)物一股為10只，雌雄各半。各劑量組

間距大小以兼顧產(chǎn)生毒性大小和死亡為宜，通常以較大組距和較少量動(dòng)物進(jìn)行預(yù)試，以便能在各濃

度組的試驗(yàn)動(dòng)物中發(fā)生一定程度毒效應(yīng)和死亡。所得資料應(yīng)足以繪制出濃度一死亡曲線，并在可能

情況下求出LGo值。

5.4暴露方式

根據(jù)受試物的性質(zhì)和試驗(yàn)?zāi)康膩?lái)選擇吸入染毒方式，首選的暴露方式為口鼻式暴露，特別是在

研究液體或固體氣溶膠或者可凝結(jié)成為氣溶膠的蒸氣時(shí)。對(duì)于特殊的研究FI的，也可采用全身暴露

染毒裝置以更好地滿足研究需求，但應(yīng)在試驗(yàn)報(bào)告中予以闡釋說(shuō)明。采用全身暴露染毒時(shí)應(yīng)保證染

毒柜中氣流的穩(wěn)定性，試驗(yàn)動(dòng)物的總體積不能超過(guò)染毒柜容積的5%o

5.5暴露條件

II鼻式暴露時(shí)間推薦為4h,暴露期間應(yīng)禁食，在全身暴露時(shí)可以提供水。如果需更長(zhǎng)時(shí)間的

研究，應(yīng)提供理由。

5.6方法

5.6.1傳統(tǒng)的LCso法

在傳統(tǒng)法中，暴露時(shí)間為4ho動(dòng)物暴露在一個(gè)限定濃度（限度試驗(yàn)），或在至少3個(gè)不同的

濃度下（主試驗(yàn)）。除已知受試物信息外，在開展主試驗(yàn)前，需要進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)。

預(yù)試驗(yàn)：預(yù)試驗(yàn)可用來(lái)估計(jì)受試物的毒性效應(yīng)，確定易感性的性別差異，并為限度試驗(yàn)或主試

驗(yàn)的濃度選擇提供幫助。在選擇預(yù)試驗(yàn)的濃度水平時(shí)，應(yīng)該充分使用所有可得的信息，比如現(xiàn)有的

定量一構(gòu)效關(guān)系（Q）SAR數(shù)據(jù)和類似化學(xué)品的數(shù)據(jù)。試驗(yàn)中，每個(gè)濃度水平的每種性別的試驗(yàn)動(dòng)

物不超過(guò)3只，通常只有一個(gè)濃度水平。已經(jīng)進(jìn)行過(guò)的急性吸入毒性試驗(yàn)一急性毒性分類法研究可

以用來(lái)替代預(yù)試驗(yàn)。

限度試驗(yàn)：當(dāng)受試物已知或預(yù)期基本無(wú)毒時(shí)，可采用限度試驗(yàn)。受試物的毒性作用信息，可以

來(lái)源于已測(cè)試過(guò)的類似化合物或混合物或產(chǎn)品的特性和具有毒理意義的組成成分。在限度試驗(yàn)中，

雌雄各3只動(dòng)物暴露在限定濃度中。如果在限定濃度發(fā)現(xiàn)動(dòng)物死亡或?yàn)l死，則限度試驗(yàn)的結(jié)果可作

為其他濃度試驗(yàn)（如主試驗(yàn)）的預(yù)試驗(yàn)。如果受試物的理化性質(zhì)決定其不可能達(dá)到限定濃度，則需

測(cè)試其最大可及濃度。如果最大可及濃度的死亡率小于50%,則不需進(jìn)行進(jìn)一步試驗(yàn)。

主試驗(yàn)：進(jìn)行主試驗(yàn)時(shí)，一般每個(gè)濃度組有10只動(dòng)物，雌雄各半（或5只易感性別的動(dòng)物），

且至少有3個(gè)濃度水平。必須有足夠多的濃度水平足以繪制出濃度死亡曲線，并在可能情況下求出

LCso各暴露組之間的時(shí)間間隔取決于中毒體征的出現(xiàn)、持續(xù)時(shí)間與嚴(yán)重程度。是否需要對(duì)卜濃度水

平進(jìn)行試驗(yàn)，取決于先前的試驗(yàn)動(dòng)物是否能夠成活。

5.6.2濃度一時(shí)間法

濃度一時(shí)間法是傳統(tǒng)LC50法的另一種替代方法。這種方法使試驗(yàn)動(dòng)物暴露在不同濃度的受試物

水平，而且暴露時(shí)間也不同。所有的試驗(yàn)都采用口鼻部吸入的方法。與傳統(tǒng)法相比，濃度一時(shí)間法

得到的LC01與LG（x）的值更加稔定。當(dāng)在4個(gè)濃度水平和5種暴露持續(xù)時(shí)間的主試驗(yàn)采用濃度一時(shí)

間法時(shí)，每個(gè)濃度一時(shí)間間隔只需使用2只動(dòng)物（雌雄各半或易受影響的單一性別）。在某些情況

下，在每濃度一時(shí)間間隔，可以選擇兩種性別的動(dòng)物各2只，這能減少參數(shù)估計(jì)的誤差和變異性，

增加成功率，提高置信區(qū)間的覆蓋范圍。當(dāng)用來(lái)參數(shù)估計(jì)的數(shù)據(jù)擬合不好時(shí)，可能需要第5個(gè)濃度

水平。

預(yù)試驗(yàn)：預(yù)試驗(yàn)一般用各性別、各濃度3只動(dòng)物，它可以為主試驗(yàn)選擇1個(gè)合適的初始濃度和

最大化減少動(dòng)物使用。暴露時(shí)間為4h。如果能從急性吸入毒性試驗(yàn)一急性毒性分類法中得到死亡

數(shù)據(jù)，那么可以不進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)。在選擇研究中的初始目標(biāo)濃度時(shí)，應(yīng)該考慮在急性吸入毒性試驗(yàn)一

急性毒性分類法中觀察到的各性別和各個(gè)濃度的死亡率。

主試驗(yàn)：初始濃度（第一步暴露）可能是限定濃度，也可根據(jù)預(yù)試驗(yàn)選擇濃度。每組雌雄各1

只動(dòng)物暴露于此濃度下，持續(xù)時(shí)間不同（如15、30、60、120、240min）,總共用到1（）只動(dòng)物。

限定濃度可根據(jù)監(jiān)管要求選擇，氣體、蒸氣、氣溶膠的限定濃度分別為20（X）（）ppm、2（）mg/L.5mg/L

（或?yàn)樽畲罂杉皾舛龋?，如果在第一步暴露中發(fā)現(xiàn)死亡，則引起死亡的最小暴露濃度將為下一步試

驗(yàn)的濃度建立提供指導(dǎo)，每一個(gè)后續(xù)的試驗(yàn)都將取決于先前的試驗(yàn)結(jié)果。當(dāng)供試品物理或化學(xué)性質(zhì)

無(wú)法達(dá)到極限濃度時(shí)，應(yīng)測(cè)試可達(dá)到的最大濃度。如果在可達(dá)到的最大濃度下，致死率低于50%,

則不需要進(jìn)行卜一步的測(cè)試，如果不能達(dá)到極限濃度，研究報(bào)告應(yīng)提供說(shuō)明和數(shù)據(jù)支持，如果可達(dá)

到的最大蒸汽濃度不會(huì)引起毒性，則可能需要將供試品作為液體氣溶膠產(chǎn)生。

對(duì)于很多受試物，如果暴露時(shí)間間隔適當(dāng)，在初始濃度得到的結(jié)果與在其他3個(gè)濃度組得到的

結(jié)果，就能足以繪制濃度一時(shí)間一死亡曲線。

5.7暴露條件的監(jiān)測(cè)

5.7.1濃度監(jiān)測(cè)

試驗(yàn)期間為保證實(shí)際濃度的穩(wěn)定性，可以使用實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)設(shè)備（如氣溶膠光度計(jì)），或定期通過(guò)

特異性的方法（如采用撞擊器吸附或化學(xué)反應(yīng)的原理直接采樣，然后進(jìn)行化學(xué)分析），或非特異性

的方法如濾膜采樣法來(lái)測(cè)定呼吸區(qū)或染毒柜內(nèi)氣溶膠濃度，以保證暴露條件的穩(wěn)定性。對(duì)于氣體和

蒸汽，單個(gè)腔室濃度樣品的平均濃度不得超過(guò)±10%,對(duì)于液體或固體氣溶膠，平均濃度不應(yīng)超過(guò)

±20%,應(yīng)計(jì)算和記錄腔室的平衡時(shí)間（t處）。

5.7.2粒徑監(jiān)測(cè)

在發(fā)生系統(tǒng)中，應(yīng)進(jìn)行粒度分析，以確保氣溶膠濃度的穩(wěn)定性。推薦可吸入質(zhì)量中值空氣動(dòng)力

學(xué)直徑（MMAD）應(yīng)該在1~4囚口，幾何標(biāo)準(zhǔn)差（o）在1.5~3.（）。在染毒期間，需經(jīng)常進(jìn)行粒度分析,

以測(cè)定粒度分布的一致性。如達(dá)不到要求，應(yīng)說(shuō)明理由。

氣溶膠粒徑的測(cè)定需在染毒4小時(shí)內(nèi)至少采樣2次，可采用級(jí)聯(lián)撞擊采樣器或其他設(shè)備如氣體

動(dòng)力學(xué)粒徑儀等，粒徑分析所得質(zhì)量濃度應(yīng)處于由濾膜分析法所得質(zhì)量濃度的合理的限度范圍內(nèi)。

5.7.3暴露系統(tǒng)內(nèi)環(huán)境監(jiān)測(cè)

染毒裝置內(nèi)氣流：染毒裝置應(yīng)配備動(dòng)態(tài)氣流，口鼻吸入染者過(guò)程中應(yīng)使裝置內(nèi)保持輕度負(fù)壓，

全身暴露裝置染毒柜內(nèi)應(yīng)密團(tuán)，以防止受試物泄露到外部環(huán)境中。暴露期間盡可能連續(xù)監(jiān)測(cè)并每小

時(shí)記錄I次，在暴露系統(tǒng)中，氧氣濃度應(yīng)至少為19%,二氧化碳濃度不得超過(guò)1%,如果達(dá)不到要

求，應(yīng)定期監(jiān)測(cè)氧氣和二氧化碳濃度。

染毒裝置內(nèi)溫度保持在22±3℃,II鼻暴露和全身暴露都需監(jiān)測(cè)記錄動(dòng)物呼吸區(qū)的相對(duì)濕度，試

驗(yàn)期間應(yīng)至少監(jiān)測(cè)和記錄三次，較短時(shí)間內(nèi)每半小時(shí)測(cè)一次。理想的相對(duì)濕度一般在30%?70%,

但在某些情況下，可能無(wú)法達(dá)到（例如在測(cè)試水溶液型受試物時(shí)），應(yīng)在試驗(yàn)報(bào)告中予以闡釋說(shuō)明。

5.8臨床觀察

在暴露剛開始當(dāng)天至少進(jìn)行兩次臨床觀察，或者根據(jù)動(dòng)物反應(yīng)，進(jìn)行更頻繁觀察。觀察期限最

少為14d,以后每天至少進(jìn)行一次觀察。中毒體征出現(xiàn)和消失的時(shí)間都十分重要，特別是在有中毒

體征延遲趨勢(shì)時(shí)。動(dòng)物瀕死、疼痛劇烈與嚴(yán)重且持久的痛苦皆應(yīng)予以安樂(lè)死。當(dāng)動(dòng)物被安樂(lè)死，或

者發(fā)現(xiàn)死亡時(shí)，應(yīng)該盡可能準(zhǔn)確記錄死亡時(shí)間。所有的觀察應(yīng)該被系統(tǒng)地記錄，每個(gè)動(dòng)物直該保持

單獨(dú)記錄。

觀察內(nèi)容應(yīng)該包括皮毛，眼睛和黏膜，呼吸，循環(huán)，自主和中樞神經(jīng)系統(tǒng)，肢體活動(dòng)和行為的

改變。應(yīng)該記錄可能的局部和全身反應(yīng)的差別。要注意有無(wú)震顫、驚厥、流涎、腹瀉、昏睡、睡眠

和昏迷癥狀。測(cè)試直腸溫度可為出現(xiàn)反射性呼吸遲緩、C-纖維刺激反射或與給藥方式或封閉相關(guān)的

低溫/高熱情況提供佐證。

每只動(dòng)物體重應(yīng)該在暴露前一天到暴露（dayO）,并且至少在第1天、第3天和第7天（以及

此后每周），以及在第1天后的死亡或安樂(lè)死時(shí)進(jìn)行記錄。若動(dòng)物體重出現(xiàn)N20%的持續(xù)遞減，應(yīng)該

進(jìn)行密切監(jiān)測(cè)。在暴露結(jié)束后，應(yīng)測(cè)量存活動(dòng)物的體重，并實(shí)施安樂(lè)死。

5.9病理檢查

所有實(shí)驗(yàn)的動(dòng)物，包括在實(shí)驗(yàn)中死亡的，或者出于動(dòng)物福利原因被安樂(lè)死以及從試驗(yàn)中撤離的,

應(yīng)該進(jìn)行大體解剖。如果動(dòng)物被發(fā)現(xiàn)死亡后，應(yīng)盡可能快地進(jìn)行尸體解剖，通常在1~2d內(nèi)，如不

能被立即進(jìn)行尸體解剖，動(dòng)物應(yīng)該被冷藏，以盡量減少自溶。記錄每個(gè)動(dòng)物的大體病理變化，并特

別注意呼吸道改變。其他附加檢查可為研究提供更為深入的解釋價(jià)值.，例如測(cè)量存活大鼠肪的重量,

和/或提供呼吸道刺激性的顯微鏡檢查證據(jù)，對(duì)死亡和存活24h及24h以上的動(dòng)物中存在大體病理

改變的器官進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。如受試物對(duì)水有反應(yīng)（如酸和吸濕性受試物），可開展整個(gè)呼吸

道的顯微鏡檢查。

5.10LCso的計(jì)算

一般可采用多種方法測(cè)定LCso,建議采用一次最大限度試驗(yàn)法、霍恩氏法、概率單位一對(duì)數(shù)圖

解法和寇氏法等。

5.11試驗(yàn)結(jié)果評(píng)價(jià)

5.11.1結(jié)果處理

應(yīng)該提供每只動(dòng)物的體重和尸檢發(fā)現(xiàn)的數(shù)據(jù)。臨床觀察數(shù)據(jù)應(yīng)該以表格的形式呈現(xiàn)，統(tǒng)計(jì)出各

實(shí)驗(yàn)組使用的動(dòng)物的數(shù)量，出現(xiàn)特殊中毒特征的動(dòng)物數(shù)量，實(shí)驗(yàn)中死亡或者人道處死的動(dòng)物數(shù)量，

動(dòng)物個(gè)體的死亡時(shí)間，毒副作用的描述和時(shí)間進(jìn)程，可逆體征以及尸檢發(fā)現(xiàn)。

5.11.2結(jié)果評(píng)價(jià)

評(píng)價(jià)試驗(yàn)結(jié)果時(shí)，應(yīng)將LCso與觀察到的毒性效應(yīng)和尸檢結(jié)果相結(jié)合考慮，LCso值是受試物急性

毒性分級(jí)及判定受試物經(jīng)呼吸道吸入后引起動(dòng)物死亡可能性大小的依據(jù)，引用LCso值時(shí)一定要注明

所用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的種屬、性別、暴露方式及時(shí)間長(zhǎng)短、觀察期限等。評(píng)價(jià)應(yīng)包括受試物吸入暴露劑量

與動(dòng)物異常表現(xiàn)（包括行為和臨床改變、大體損傷、體重變化、致死效應(yīng)及其他毒性作用）的發(fā)生

率和嚴(yán)重程度之間的關(guān)系。

毒性分級(jí)見表lo

表I吸入毒性分級(jí)

分級(jí)氣體(ppm)蒸氣(mg/L,4h)粉塵和霧（mg/L,4h）

第1類LCsoW10()LCsoWO.5LCsoWO.05

第2類100ULCsoW500O.5<LC5O<2.OO,O5<LC5O<O.5

第3類5(XXLC5O^25002.O<LC5O^1OO.5VLC50WI.O

第4類2500<LC5O<20300IO<LC5O<2Ol.O<LC5o<5

第5類>20000>20>5

注：分類標(biāo)準(zhǔn)引用《全球化學(xué)品統(tǒng)一分類和標(biāo)簽制度》（GHS）。第5類的標(biāo)準(zhǔn)旨在識(shí)別急毒性危險(xiǎn)

相對(duì)較低，但在某些環(huán)境下可能對(duì)易受害人群造成危險(xiǎn)的物質(zhì)，這些物質(zhì)的LCso范圍預(yù)計(jì)值分別為:

氣體大于20000ppm,蒸氣大于20mg/L,粉塵和霧大于5mg/L,如果現(xiàn)有的可靠證據(jù)表明LCso在

第5類的數(shù)值范圍內(nèi)，或者其他動(dòng)物研究或人類毒性效應(yīng)表明對(duì)人類健康有急性影響，那么物質(zhì)劃

入此類別。為保護(hù)動(dòng)物，不應(yīng)在第5類范圍內(nèi)對(duì)動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)，只有在這樣的試驗(yàn)結(jié)果與保護(hù)人類

健康直接相關(guān)的可能性非常大時(shí)，才應(yīng)考慮進(jìn)行這樣的試驗(yàn)。

6試驗(yàn)結(jié)果的解釋

急性吸入毒性試驗(yàn)研究和LCso的測(cè)定，可評(píng)價(jià)受試物的急性吸入毒性及其毒性等級(jí)，其結(jié)果外

推到人類的有效性很有限。

附件4

急性吸入毒性試驗(yàn)急性毒性分類法

AcuteInhalationToxicity-AcuteToxicClassMethod

1范圍

本試驗(yàn)方法規(guī)定了急性吸入毒性試驗(yàn)急性毒性分類法的試驗(yàn)原則、試驗(yàn)方法、數(shù)據(jù)和報(bào)告。

本試驗(yàn)方法適用于化妝品原料急性吸入毒性的急性毒性分類。

本試驗(yàn)方法適用于單一成分的化妝品原料，非單一成分的原料若使用本方法進(jìn)行評(píng)價(jià)，需要提

供更多的科學(xué)依據(jù)說(shuō)明其可行性。本試驗(yàn)方法不適用于測(cè)試某些特殊的材料，如難溶的等軸狀

(isometric)或纖維狀(fibrous)材料、或人造納米材料(manufacturednanomaterials)<.

2試驗(yàn)?zāi)康?/p>

本試驗(yàn)方法的目的是通過(guò)測(cè)試獲得受試物的健康危害信息等資料，從而可參考聯(lián)合國(guó)全球化學(xué)

品分類和標(biāo)簽管理協(xié)調(diào)制度(theUnitedNations(UN)GloballyHarmonizedSystem(GHS)of

ClassificationandLabellingofChemicals)的化學(xué)品急性毒性分類標(biāo)準(zhǔn)對(duì)其急性毒性進(jìn)行分類。

3定義

3.1急性吸入毒性分類法

按照一定的連續(xù)試驗(yàn)步驟和相應(yīng)的濃度進(jìn)行測(cè)試，從而獲得受試物的毒性分類和半數(shù)致死濃度

(LC5O,LethalConcentration50%)估測(cè)范圍的試驗(yàn)方法。

3.2計(jì)算濃度nominalconcentration

使用受試物的最除以通過(guò)染毒系統(tǒng)空氣的總體積所得到的濃度。

3.3實(shí)際濃度actualconcentration

在吸入式染毒柜中動(dòng)物呼吸道中的受試物濃度，可通過(guò)特異性(如直接采樣、吸附或化學(xué)反應(yīng)

等方法進(jìn)行采樣、分析)或#特異性(如濾膜增重法)等方法進(jìn)行測(cè)試分析。

4試驗(yàn)原則

本試驗(yàn)采用分步試驗(yàn)的方法，觀察試驗(yàn)動(dòng)物暴露4h的反應(yīng)，從而得到滿足對(duì)受試物急性吸入

毒性等級(jí)進(jìn)行分類的信息。為了特殊的監(jiān)管目的也可采用其他暴露時(shí)限(不是4h)的試驗(yàn)。每步

試驗(yàn)使用每種性別3只動(dòng)物，在確定的濃度下進(jìn)行吸入暴露試驗(yàn)。根據(jù)動(dòng)物死亡和/或?yàn)l死狀態(tài)，有

時(shí)只進(jìn)行2步試驗(yàn)操作就可以對(duì)受試物的急性吸入毒性類別做出判斷。如果有證據(jù)表明某種性別的

動(dòng)物比另外一種動(dòng)物的敏感性要高時(shí)，可以只使用敏感性別動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)。前面一步操作的試驗(yàn)結(jié)

果決定著下一步試驗(yàn)操作：

a）無(wú)需進(jìn)行下一步試驗(yàn)；

b）每性別3只動(dòng)物；或

c）只使用6只敏感性別的動(dòng)物。方法是每個(gè)試驗(yàn)濃度組使用6只敏感性別的動(dòng)物，性別不限，

以估測(cè)的毒性類別界限范圍數(shù)值中較低的濃度來(lái)進(jìn)行試驗(yàn)。

對(duì)瀕臨死亡的、處于難以忍受疼痛的或嚴(yán)重持久痛苦的動(dòng)物，應(yīng)人道地處死。人道處死的試驗(yàn)

動(dòng)物，在結(jié)果統(tǒng)計(jì)時(shí)應(yīng)與試驗(yàn)中死亡的動(dòng)物一并對(duì)待。

5試驗(yàn)方法

5.1方法描述

5.1.1動(dòng)物種屬的選擇

應(yīng)使用健康年輕、實(shí)驗(yàn)室中常用的種屬動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)。首選大鼠，如使用其他動(dòng)物應(yīng)進(jìn)行論證,

說(shuō)明理由和依據(jù)。

5.1.2動(dòng)物的準(zhǔn)備

雌性動(dòng)物應(yīng)是未經(jīng)產(chǎn)的、未妊娠。要保證每步試驗(yàn)暴露時(shí)的鼠齡在8W~12W；試驗(yàn)開始時(shí)動(dòng)

物體重的差異應(yīng)不超過(guò)平均體重的±20%。采用隨機(jī)選擇原貝!，并對(duì)每只動(dòng)物做出標(biāo)記。在進(jìn)行試驗(yàn)

之前至少要在籠內(nèi)飼養(yǎng)5d以適應(yīng)實(shí)驗(yàn)室飼養(yǎng)條件。試驗(yàn)前還需在試驗(yàn)設(shè)備中進(jìn)行短期的適應(yīng)訓(xùn)練,

以減少因?yàn)檫M(jìn)入新的設(shè)備環(huán)境造成的應(yīng)激反應(yīng)。

5.1.3飼養(yǎng)條件

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房應(yīng)符合國(guó)家相應(yīng)規(guī)定。選用標(biāo)準(zhǔn)配合飼料，飲水不限制。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物暴露前后按性抗、濃度分籠飼養(yǎng)，但是每籠動(dòng)物的數(shù)量不能妨礙對(duì)每只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的觀

察，并應(yīng)減少由于同種相殘和相互撕咬而造成實(shí)驗(yàn)動(dòng)物信息的丟失。以口鼻式裝置暴露時(shí)，需將動(dòng)

物放入固定管內(nèi)使其適應(yīng)固定管的環(huán)境。固定管不能過(guò)度的增加動(dòng)物體力、熱量和活動(dòng)的負(fù)荷。動(dòng)

物的限制固定可能影響動(dòng)物的體溫（過(guò)熱）和/或每分鐘動(dòng)物呼吸量。如果有資料表明這些改變沒(méi)有

達(dá)到可感覺(jué)到的程度，就不一定需要預(yù)先在固定管內(nèi)進(jìn)行適應(yīng)操作。全身暴露氣溶膠的動(dòng)物在暴露

期間需各自相隔互不接觸，防止柜體內(nèi)動(dòng)物的相互趴臥造成被毛對(duì)氣溶膠的過(guò)濾作用。除暴露期間

外（暴露期間禁食），給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物常規(guī)檢驗(yàn)合格的飼料，自由飲水。采用人工照明，每12h明暗

交替。

5.1.4吸入染毒裝置

要根據(jù)受試物的性質(zhì)和試驗(yàn)?zāi)康膩?lái)選擇吸入染毒方式。首選的染毒方式是口鼻式（nose-only）

暴露（其中包括僅頭部暴露、鼻部暴露或口鼻部暴露三種染毒模式）。當(dāng)受試物是液體、固態(tài)氣溶

膠和能產(chǎn)生氣溶膠的蒸氣時(shí)，首選口鼻式暴露方式。對(duì)于特殊的研究目的，也可采用全身暴露

（whole-body）的染毒方式以更好地滿足研究需求，但應(yīng)在試驗(yàn)報(bào)告中予以闡釋說(shuō)明。為了保證全

身染毒時(shí)柜體內(nèi)空氣中受試物的穩(wěn)定性，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的總體積不應(yīng)超過(guò)染毒柜總?cè)莘e的

5%o

5.2暴露條件

5.2.1染毒濃度

5.2.1.1推薦暴露吸入時(shí)間為4h,但需除去達(dá)到濃度穩(wěn)定平衡所需時(shí)間。根據(jù)特殊試驗(yàn)需要也

可采用其他的暴露時(shí)限，但是需在試驗(yàn)報(bào)告中給予說(shuō)明。全身暴露時(shí)動(dòng)物應(yīng)各自隔離互不接觸，防

止染毒柜內(nèi)其他動(dòng)物的理毛行為造成經(jīng)口攝入受試物。吸入暴露期間需要禁食。全身暴露時(shí)可提供

飲水。

5.2.1.2動(dòng)物吸入暴露的受試物是氣體、蒸氣、氣溶膠或是它們的混合物。試驗(yàn)時(shí)將受試物制

備成何種物態(tài)，取決于受試物的理化性質(zhì)、設(shè)定的濃度，和/或在實(shí)際加工應(yīng)用中最有可能使用的物

理狀態(tài)等。具有吸濕性的和會(huì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)的受試物在試驗(yàn)中需保證吸入的空氣是干燥的，需注意

避免使用發(fā)生爆炸的濃度進(jìn)行試驗(yàn)。

5.2.2顆粒粒徑的分布

對(duì)所有的氣溶膠和可能形成氣溶膠的蒸氣都需測(cè)定顆粒粒徑的大小。為了使整個(gè)呼吸道都能暴

露受試物，推薦的氣溶膠顆粒的質(zhì)量中值空氣動(dòng)力學(xué)直徑（MassMedianAerodynamicDiameter,

MMAD）為lnm~4Hm,其幾何標(biāo)準(zhǔn)差為1.5~3.0。需盡可能達(dá)到此標(biāo)準(zhǔn)，如技術(shù)上無(wú)法滿足要求時(shí)

需由專家做出評(píng)判。例如，金屬煙塵比本標(biāo)準(zhǔn)的粒徑要小，但是帶電的粒子、纖維和吸濕性受試物

（在呼吸道潮濕環(huán)境下其粒徑增加）可超過(guò)這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)。

5.2.3溶媒選擇與受試物的配制

為了制備具有合適濃度取粒徑大小的受試物，需要使用載體溶媒，作為一條規(guī)定，水是首選的

載體溶媒。顆粒物需要機(jī)械加工達(dá)到要求的粒徑大小，但要注意加工中是否引起受試物的分解和變

性。如機(jī)械加工改變了受試物的組成成分（如由于過(guò)度研磨、摩擦產(chǎn)生高溫），受試物的沮成要經(jīng)

過(guò)檢測(cè)分析進(jìn)行確認(rèn)。需注意不要污染受試物。對(duì)不能形成可吸入性的、不易成為粉末的顆粒材料

不需要進(jìn)行試驗(yàn)。磨損試驗(yàn)是用來(lái)證明加工這些材料時(shí)會(huì)不會(huì)產(chǎn)生呼吸性顆粒物。如果經(jīng)磨損試驗(yàn)

證實(shí)可產(chǎn)生呼吸性顆粒物，貝！該材料應(yīng)當(dāng)進(jìn)行吸入毒性試驗(yàn)。

5.2.4對(duì)照組

不需要設(shè)立平行陰性（空氣）對(duì)照。即使制備試驗(yàn)氣體的載體溶媒不是水，也只有在沒(méi)有載體

溶媒歷史數(shù)據(jù)的情況下才設(shè)立溶媒對(duì)照組。如果所用溶媒制備的受試物沒(méi)有引起毒性，至少說(shuō)明在

該受試物濃度的條件下，溶媒是沒(méi)有毒性的，所以不需要設(shè)U溶媒對(duì)照組。

5.3暴露條件的監(jiān)測(cè)

5.3.1染毒裝置內(nèi)氣流

通過(guò)染毒柜（裝置）的氣流速率需嚴(yán)格控制，可連續(xù)在線監(jiān)測(cè)記錄或每次暴露期間至少每小時(shí)

監(jiān)測(cè)記錄一次。試驗(yàn)所用空氣中受試物濃度（或其穩(wěn)定性）的監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)是對(duì)染毒系統(tǒng)中各個(gè)動(dòng)力學(xué)

參數(shù)作用的綜合結(jié)果，因此這些數(shù)據(jù)可提供控制制備動(dòng)態(tài)空氣設(shè)備相關(guān)參數(shù)的間接方法。在口鼻式

染毒時(shí)通過(guò)染毒系統(tǒng)的試驗(yàn)氣體的氣流動(dòng)力不足時(shí)，需注意動(dòng)物的在染毒裝置內(nèi)發(fā)生重復(fù)吸入。已

有確定在所選定的操作條件下不會(huì)發(fā)生重復(fù)吸入的方法。氧氣的濃度至少為19%；二氧化玻的濃度

不超過(guò)1%。如果證實(shí)確實(shí)不能達(dá)到這個(gè)標(biāo)準(zhǔn)，需要測(cè)定并記錄試驗(yàn)空氣中氧氣和二氧化碳的濃度。

5.3.2染毒裝置柜內(nèi)溫度和相對(duì)濕度

染毒柜內(nèi)溫度維持在22℃±3℃O口鼻式暴露和全身暴露都需監(jiān)測(cè)記錄動(dòng)物呼吸帶的相對(duì)濕度，

在吸入染毒的4h之內(nèi)至少3次；吸入染毒暴露期限較短的試驗(yàn)可以每小時(shí)監(jiān)測(cè)記錄1次，理想的

相對(duì)濕度需維持在30%~70%：但是有時(shí)很難達(dá)到（如受試物以水配制），或者受試物與測(cè)定方法發(fā)

生干擾而難以測(cè)定。

5.3.3受試物

5.3.3.1計(jì)算濃度

無(wú)論何時(shí)都應(yīng)盡最記錄并計(jì)算染毒柜空氣中受試物的計(jì)算濃度。計(jì)算濃度是指制備產(chǎn)生的受試

物的量除以通過(guò)染毒系統(tǒng)的空氣總體積得到的參數(shù)。雖然計(jì)算濃度不是用來(lái)描述動(dòng)物暴露特征，但

是可通過(guò)計(jì)算濃度與實(shí)際濃度進(jìn)行比較可以得到試驗(yàn)系統(tǒng)制備效率的指征，從而可發(fā)現(xiàn)制備染毒空

氣過(guò)程中存在的問(wèn)題。

533.2實(shí)際濃度

53321實(shí)際濃度是吸入染毒柜內(nèi)動(dòng)物呼吸道中的受試物的濃度，可以通過(guò)特異性的方法（如

采用吸附或化學(xué)反應(yīng)的原理直接采樣，然后進(jìn)行分析）：或是通過(guò)非特異性的方法（如濾膜增重法）

來(lái)獲得。單一成分的粉末、低揮發(fā)性液體的氣溶膠才能使用增重法，同時(shí)還需要專門預(yù)試給數(shù)據(jù)的

支持。對(duì)多成分的粉末氣溶膠也可以用增重分析法測(cè)量，但是這需要證實(shí)所制備的空氣與最初受試

物的組成成分相似。如果沒(méi)有此類數(shù)據(jù)資料，則需在試驗(yàn)期間按照規(guī)定的時(shí)間間隔對(duì)制備在生的空

氣進(jìn)行再分析（理想的是染毒柜中的空氣）。對(duì)可揮發(fā)的或易升華的氣溶膠，需證實(shí)所用方法能收

集到所有物相的受試物。需在試驗(yàn)報(bào)告中報(bào)告靶濃度（目標(biāo)濃度）、計(jì)算濃度和實(shí)際濃度，但只有

實(shí)際濃度可用來(lái)計(jì)算致死濃度值。

5.332.2應(yīng)使用同一批試驗(yàn)受試物。技術(shù)可行時(shí)盡可能將試驗(yàn)樣品保存在能維持純度、均勻

性和穩(wěn)定性的條件下。開始試驗(yàn)前對(duì)受試物的特征有充分的了解和描述，如純度、鑒別特征和鑒定

出來(lái)的污染物和雜質(zhì)。這可用以下參數(shù)來(lái)證實(shí)，如保留時(shí)間、相對(duì)峰面積和通過(guò)質(zhì)譜、氣相色譜或

其他的檢測(cè)方法得到的分子量，包括且不限于以上內(nèi)容。雖然受試物樣品的特征鑒別不是實(shí)驗(yàn)室的

責(zé)任，實(shí)驗(yàn)室還是需要對(duì)委托方提供的受試物進(jìn)行必要的簡(jiǎn)單有限的描述（如顏色、物理狀態(tài)等）。

53323需盡可能的保持染毒空氣成分穩(wěn)定，可采用適當(dāng)?shù)姆治龇椒ㄟB續(xù)或間隔采樣監(jiān)測(cè)。

間隔采樣時(shí)，吸入染毒4h的試驗(yàn)至少采樣2次。如果由于系統(tǒng)內(nèi)染毒空氣流量過(guò)低所限，或染毒

濃度太低需采集較多的空氣樣本時(shí)而不能完全滿足連續(xù)或間隔采樣量的要求，可在整個(gè)暴露期內(nèi)只

采集一個(gè)樣本。如果樣本與樣本之間出現(xiàn)明顯波動(dòng)，進(jìn)行下一個(gè)濃度試驗(yàn)時(shí)需在暴露期間采集4個(gè)

樣本進(jìn)行分析。染毒空氣各個(gè)樣本之間的濃度波動(dòng)范圍應(yīng)符合規(guī)定，氣體和揮發(fā)性受試物濃度范圍

不得超過(guò)平均濃度±10%,液體或固體氣溶膠濃度范圍不得超過(guò)平均值±20%。并需要計(jì)算柜內(nèi)空氣

受試物達(dá)到平衡時(shí)的時(shí)間（T95）。一個(gè)暴露周期內(nèi)需要考慮到制備受試物空氣的時(shí)間和達(dá)到T95

的時(shí)間。對(duì)組成非常復(fù)雜混合物的蒸氣/氣體、氣溶膠（如推動(dòng)終端裝置設(shè)備產(chǎn)生的燃燒空氣和試驗(yàn)

物形成的）在染毒柜內(nèi)空氣中每一相成分物相各不相同，至少要選擇一個(gè)標(biāo)志性物質(zhì)來(lái)進(jìn)行分析?，

通常是受試制備物中處在某一物相（蒸氣/氣體或氣溶膠）的主要的活性物質(zhì)。如果試驗(yàn)物質(zhì)是制劑

（商品形式的產(chǎn)品）分析報(bào)告的濃度應(yīng)是制劑的總濃度，不是活性成分的或某成分的濃度，

5.33.3顆粒物粒徑的分布

氣溶膠的粒徑大小需在染毒的4h期間至少測(cè)定2次，方法是使用級(jí)聯(lián)撞擊采樣器或其他替代

的設(shè)備如空氣動(dòng)力學(xué)粒徑儀等。如果級(jí)聯(lián)撞擊時(shí)采樣器與替代的測(cè)定方法所得到的結(jié)果相司，在整

個(gè)試驗(yàn)期間的就可以使用替代的方法進(jìn)行監(jiān)測(cè)。如采用濾膜增重或塵埃測(cè)定器/氣體發(fā)泡收集管等第

二種設(shè)備檢測(cè)，則需要與基磯檢測(cè)設(shè)備進(jìn)行平行試驗(yàn)，以驗(yàn)證基礎(chǔ)檢測(cè)設(shè)備的收集效率。粒徑大小

分析得到的質(zhì)最濃度應(yīng)與采用濾膜分析法得到的質(zhì)量濃度在一個(gè)合理的限度之內(nèi)。如果在試驗(yàn)開始

階段就證明兩種試驗(yàn)方法的質(zhì)量濃度相同，就可以免去驗(yàn)證性試驗(yàn)。從動(dòng)物福利方面考慮，需采取

措施減少無(wú)確定結(jié)果的數(shù)據(jù)資料，因?yàn)檫@會(huì)要求重復(fù)進(jìn)行暴露試驗(yàn)。如果空氣中的蒸氣受試物能發(fā)

生凝結(jié)而形成氣溶膠，或者染毒蒸氣空氣中測(cè)定到顆粒物也就是暴露空氣存在潛在的混合相，則需

對(duì)這種受試物進(jìn)行粒徑的測(cè)定。

5.4操作步驟

5.4.1正式試3僉（mainlesi）

5.4.1.1每一步使用雌雄各3只動(dòng)物，或6只敏感性別的動(dòng)物。如果采用口鼻式暴露方式時(shí)使

用的嚙齒類動(dòng)物不是大鼠，貝!需要調(diào)整最長(zhǎng)的暴露時(shí)間以減少動(dòng)物種屬之間的負(fù)荷的差異，可從4

個(gè)固定的起始濃度水平染毒，這個(gè)濃度應(yīng)能引起染毒動(dòng)物中的某代動(dòng)物出現(xiàn)毒性作用。氣體、蒸氣

和氣溶膠的試驗(yàn)步驟圖（見7試驗(yàn)步驟流程圖）的濃度水平是GHS笫1類~4類的分類標(biāo)淮的界限

值：氣體為（100ppm/4h、500ppm/4h.2500ppm/4h.20000ppm/4h）（見圖1）；蒸氣為（0.5

mg/L/4h、2mg/L/4h、10mg/L/4h、20mg/L/4h）（見圖2）；氣溶膠為（0.05mg/L/4h、05mg/L/4

h、lmg/L/4h、5mg/L/4h）（見圖3）。高于各相應(yīng)物態(tài)類別的上限濃度就歸為第5類。按照各自

的試驗(yàn)圖表來(lái)確定起始濃度。根據(jù)人道處死和動(dòng)物試驗(yàn)死亡的數(shù)星，按照?qǐng)D中的指示的箭頭來(lái)決定

下一步的試驗(yàn)，直到能對(duì)受試物作出毒性分類時(shí)結(jié)