病理檢驗技術(shù)（第3版）課件全套 劉紅 第1-16章 病理檢驗技術(shù)概論 -病理檔案管理

第一章

病理檢驗技術(shù)概論學(xué)習(xí)目標(biāo)1.了解病理檢驗技術(shù)的主要任務(wù)。2.掌握病理檢驗技術(shù)的概念。3.熟悉病理檢驗技術(shù)的常規(guī)工作。第一節(jié)病理檢驗與病理檢驗技術(shù)一、病理檢驗的主要任務(wù)在臨床醫(yī)療實踐中，通過對患者病變組織或細(xì)胞進(jìn)行檢查，以協(xié)助臨床診斷疾病的方法，稱為病理檢驗或病理學(xué)檢驗。1.確定疾病的診斷2.為臨床選擇治療方案提供依據(jù)3.為判斷預(yù)后提供參考4.了解疾病的發(fā)展及分析療效5.為科學(xué)研究積累資料6.為提高臨床診療水平服務(wù)二、病理檢驗分類（一）細(xì)胞學(xué)檢驗

（二）組織學(xué)檢驗1.活體組織檢驗2.手術(shù)標(biāo)本檢驗3.手術(shù)中病理檢驗

（三）尸體剖檢

三、病理檢驗技術(shù)的概念在病理學(xué)臨床及科學(xué)研究工作中使用的各種技術(shù)方法統(tǒng)稱為病理學(xué)技術(shù)。其中為臨床病理學(xué)檢查提供技術(shù)即為病理檢驗技術(shù)。病理檢驗技術(shù)的任務(wù)是應(yīng)用科學(xué)的方法、手段和工具，將患者病變組織或細(xì)胞制成切片或涂片，以便于病理醫(yī)生觀察、分析和做出診斷。

四、病理檢驗技術(shù)分類1.基本技術(shù)甲醛固定、石蠟切片和蘇木精-依紅染色（HE染色）技術(shù)，也稱為常規(guī)病理檢驗技術(shù)。2.特殊技術(shù)在HE染色的石蠟切片基礎(chǔ)上，為確立病理診斷和進(jìn)行科研而補(bǔ)充使用的技術(shù)方法。3.新技術(shù)方法分子病理學(xué)技術(shù)、圖像分析技術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)、激光掃描共聚焦顯微技術(shù)等。一、收發(fā)工作（一）申請單和標(biāo)本的收驗1.收驗申請單時應(yīng)注意以下事項（1）仔細(xì)查閱申請單的各個項目是否填寫完整、清楚。（2）對照申請，逐一認(rèn)真核對送檢標(biāo)本及其標(biāo)記是否一致。（3）不得對申請單上由臨床醫(yī)師填寫的各項內(nèi)容進(jìn)行改動。第二節(jié)病理檢驗技術(shù)常規(guī)工作2.收驗標(biāo)本時應(yīng)注意以下事項

（1）同時接收同一患者的申請單和標(biāo)本。（2）認(rèn)真檢查標(biāo)本是否按規(guī)定固定或使相關(guān)要求進(jìn)行預(yù)處理。（3）申請進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢查的標(biāo)本必須是新鮮的，因此要注意檢查，以確保標(biāo)本新鮮。3.有以下情況的申請單或標(biāo)本不予接收（1）申請單與送檢標(biāo)本未同時送達(dá)。（2）申請單所填寫的內(nèi)容與送檢標(biāo)本不符。（3）標(biāo)本上無患者姓名、送檢單位或科室等標(biāo)記。（4）申請單內(nèi)容填寫字跡潦草不清，難以辨認(rèn)。（5）申請單上重要項目漏填、誤填。（6）標(biāo)本嚴(yán)重自溶、腐敗、干涸等（7）標(biāo)本過小，不能或難以制作切片。（8）其他可能影響病理檢查可行性和診斷準(zhǔn)確性的情況。對于不能接收的申請單和標(biāo)本，一律當(dāng)即一并退回，不予存放。

（二）申請單和標(biāo)本的編號、登記

（1）活體組織檢查標(biāo)本：以“外”或“S”為首字進(jìn)行編號。（2）體液檢查標(biāo)本：以“液”或“F”為首字進(jìn)行編號。（3）實驗動物標(biāo)本：以“動”或“E”為首字進(jìn)行編號。（4）尸體剖檢標(biāo)本：以“尸”或“A”為首字進(jìn)行編號。（三）標(biāo)本的預(yù)處理和固定1.要酌情更換適宜的容器。2.及時補(bǔ)充足量的固定液。3.固定液一般為標(biāo)本體積的10倍。

（四）登記和發(fā)送病理學(xué)診斷報告書1.收到送檢申請單和標(biāo)本后3～5個工作日，應(yīng)簽發(fā)病理學(xué)診斷報告書。2.不能如期簽發(fā)病理學(xué)診斷報告書時，要以口頭或書面形式告知有關(guān)臨床醫(yī)師或患方，說明遲發(fā)病理學(xué)診斷報告書的原因。3.將病理診斷結(jié)果在登記簿上進(jìn)行登記或錄入計算機(jī)中存檔備查。4.將病理學(xué)診斷報告書發(fā)送至有關(guān)臨床科室。5.門診患者和院外患者，病理學(xué)診斷報告書的發(fā)送方法，根據(jù)具體情況按各醫(yī)院規(guī)定發(fā)送。6.在發(fā)送病理學(xué)診斷報告書時，必須嚴(yán)格履行經(jīng)手人員簽字制度。二、協(xié)助取材和尸體剖檢工作1.協(xié)助和配合病理醫(yī)師進(jìn)行相關(guān)資料和文件的核實。2.提前做好各項準(zhǔn)備工作，如配齊、配全常用器械、固定液及必需物品等。3.操作過程中，做好核對、記錄等協(xié)助工作；4.參與尸體剖檢的開顱、縫合，以及剖檢后尸體的處理和標(biāo)本的處置；5.取材和尸體剖檢結(jié)束后，將所有器械進(jìn)行整理、清洗、消毒，分類存放保管，以備再用。三、制作病理組織切片及細(xì)胞學(xué)涂片1.按照有關(guān)要求，認(rèn)真做好檢材、申請單、記錄單、取材工作單和組織切片或細(xì)胞學(xué)涂片等移交工作。2.制片過程中，應(yīng)注意核對蠟塊和切片的數(shù)量，以及形狀是否相符，嚴(yán)禁錯號發(fā)生。3.如果臨床要求做手術(shù)中快速診斷，應(yīng)提前做好充分準(zhǔn)備，以保證及時完成制片。4.切片需做特殊染色和免疫組織化學(xué)染色檢查時，應(yīng)設(shè)有對照檢查組，并同時進(jìn)行。5.進(jìn)行細(xì)胞學(xué)檢查的標(biāo)本，經(jīng)核對無誤后，應(yīng)及時依序進(jìn)行涂片（印片、壓片）、固定和染色等。四、病理資料管理及檢索1.建立相應(yīng)的制度。2.送檢單、診斷報告書附頁、蠟塊、組織學(xué)切片和查見腫瘤細(xì)胞或可疑腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞學(xué)涂片等，應(yīng)長期妥善保存。3.未查見惡性腫瘤細(xì)胞的玻片，于診斷報告書發(fā)出后保存2周。4.患者查詢病理檢查資料的期限：門診患者為送檢后15年，住院患者為送檢后30年。5.有保留價值的典型病變標(biāo)本，應(yīng)妥善保存，以備制成陳列標(biāo)本。6.對無保留價值的大體標(biāo)本，一般在發(fā)出病理學(xué)診斷報告書1月后方可處理，處理時應(yīng)按有關(guān)規(guī)定進(jìn)行。7.普通尸檢標(biāo)本，自簽發(fā)病理學(xué)診斷報告書之日起保存3個月。8.涉及醫(yī)療糾紛或刑事案件的尸檢標(biāo)本，按照尸檢前有關(guān)各方簽訂的協(xié)議辦理。

五、藥品、物資的管理及儀器維護(hù)1.所用藥品、物資、器材等均應(yīng)登記造冊，做到賬目清楚、賬物相符。2.易吸潮的化學(xué)藥品，用過后應(yīng)封存嚴(yán)密，以免潮解失效。3.怕光的藥品，應(yīng)放在避光處保存。4.配制的試劑，應(yīng)貼上標(biāo)簽，注明試劑名稱和配制時間。5.一般儀器的使用應(yīng)嚴(yán)格按照操作說明書的要求進(jìn)行。6.貴重儀器用過后應(yīng)填寫使用登記卡，進(jìn)行必要的保養(yǎng)維護(hù)，以保證器材的性能處于良好狀態(tài)。7.器械用過后應(yīng)擦干、清點，并涂上凡士林防銹。

六、大體標(biāo)本的收集和制作

1.對于有保存價值的大體標(biāo)本，應(yīng)編號、登記保存。2.制作瓶裝大體標(biāo)本時，應(yīng)先沖洗，然后修整出便于觀察的切面。3.瓶裝后用甲醛液、飽和鹽水或者保色保存液封存。4.有條件者，可自制有機(jī)玻璃標(biāo)本缸，用于封裝陳列標(biāo)本。第三節(jié)病理檢驗技術(shù)人員業(yè)務(wù)素質(zhì)要求

一、精益求精的工作作風(fēng)

1.樹立精益求精的工作作風(fēng)。2.熟練掌握病理檢驗技術(shù)。3.嚴(yán)謹(jǐn)認(rèn)真地對待每一項操作流程。二、一絲不茍的工作態(tài)度1.高度的責(zé)任心。2.嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ鲬B(tài)度。3.牢固的法律法規(guī)觀念。三、勇于探索的創(chuàng)新精神1.勇于實踐，積極探索，善于積累和總結(jié)，不斷提高技術(shù)水平。2.具有不斷跟蹤、學(xué)習(xí)、掌握新技術(shù)、新方法的能力。3.具有創(chuàng)新精神，有進(jìn)行創(chuàng)造性勞動的能力。謝謝觀看！第二章 病理檢驗室的設(shè)置與設(shè)備學(xué)習(xí)目標(biāo)1.掌握病理檢驗室的設(shè)置。2.熟悉病理檢驗室的基本儀器設(shè)備及應(yīng)用。3.了解病理檢驗室特殊設(shè)備及應(yīng)用。22第一節(jié)病理檢驗室的設(shè)置設(shè)置應(yīng)滿足以下基本要求：第一，要能夠滿足完成病理科工作任務(wù)的需要；第二，切實保護(hù)病理學(xué)檢驗人員，避免有毒有害物質(zhì)對工作人員的污染和傷害；第三，保護(hù)環(huán)境，避免對環(huán)境的污染和破壞。縣級醫(yī)院病理科室用房面積應(yīng)不少于120ｍ２

23第一節(jié)病理檢驗室的設(shè)置

（一）診斷室顯微鏡和工作臺，電腦病理圖文分析系統(tǒng)等。（二）技術(shù)室采光、通風(fēng)良好，配置有切片操作臺、染色臺、藥品柜、排毒排氣設(shè)備等。（三）巨檢室設(shè)置有巨檢臺，配置自來水清洗、排氣通風(fēng)及消毒等設(shè)施和設(shè)備。（四）資料室配備有申請單、蠟塊、切片存放櫥。（五）標(biāo)本陳列室設(shè)置有標(biāo)本陳列櫥。（六）尸體解剖室設(shè)置有尸檢臺，自來水槽，通風(fēng)、排水系統(tǒng)等。24第一節(jié)病理檢驗室的設(shè)置

人員設(shè)置

不同等級醫(yī)院病理科室人員數(shù)量、職級的配備雖有不同，常規(guī)工作一般需要配備以下人員:（一）病理醫(yī)師主要負(fù)責(zé)病理標(biāo)本的取材、病理診斷和報告等。一般醫(yī)院病理科至少需有一位主持工作的病理醫(yī)師，有條件的醫(yī)院最好配備二至三名病理醫(yī)生，以便共同探討，提高工作和診斷質(zhì)量。（二）病理技術(shù)員主要負(fù)責(zé)病理標(biāo)本和病理診斷報告的收發(fā)、病理組織切片的制作、實驗室的管理及其他病理技術(shù)工作等。25一、基本儀器設(shè)備

第二節(jié)病理檢驗室的常用儀器設(shè)備26一、基本儀器設(shè)備

各式切片刀及一次性刀片;

粗細(xì)油磨石 用于手工磨刀;

被刀皮革;

電動磨刀機(jī);

自動脫水機(jī);

脫水盒。第二節(jié)病理檢驗室的常用儀器設(shè)備27第二節(jié)病理檢驗室的常用儀器設(shè)備28第二節(jié)病理檢驗室的常用儀器設(shè)備29一、基本儀器設(shè)備

包埋框恒溫箱電冰箱離心機(jī)天平及藥勺酸度計和PH試紙攤片烤片機(jī)

染色機(jī)及染色架 定時鐘記號筆或鉆石筆 包埋鑷電爐及石棉網(wǎng)顯微鏡

電熱煮沸消毒器第二節(jié)病理檢驗室的常用儀器設(shè)備30二、玻璃器具

1.染色缸

2.標(biāo)本瓶瓶體的大小要以能放置染色架為宜。

3.載玻片用于組織切片和涂片的制作。

4.蓋玻片用于組織切片的封存。

5.酒精燈用于染液配制或包埋時的加熱。

6.廣口瓶、滴瓶、滴管、試劑瓶

7.培養(yǎng)皿

8.乙醇比重計用于測定乙醇的濃度。

9.燒杯、量筒、量杯、漏斗等第二節(jié)病理檢驗室的常用儀器設(shè)備31三、免疫組織化學(xué)常用設(shè)備

1.微波爐用于抗原的修復(fù)和固定。

2.微量加樣器用于試劑的稀釋和滴加。

3.微型振蕩器用于試劑滴加后切片的振蕩。

4.恒溫水浴箱或濕盒用于滴加試劑后的孵育。第二節(jié)病理檢驗室的常用儀器設(shè)備32四、常用器械和工具

1.標(biāo)本巨檢器械主要有解剖刀、手術(shù)刀等。

2.尸體剖檢器械尸體解剖器械包或手術(shù)器械包。

3.五金工具

五、其他

1.常用染料如蘇木素、伊紅等。

2.化學(xué)試劑如乙醇、甲醛、二甲苯、石蠟等。第二節(jié)病理檢驗室的常用儀器設(shè)備33第三節(jié)病理檢驗室的特殊設(shè)備1.超薄切片機(jī)用于制作電鏡觀察用的超薄切片。2.計算圖文分析系統(tǒng)可用于錄細(xì)的都色像打向理以發(fā)可標(biāo)圖像3.顯微攝影裝置用于組織標(biāo)本的顯微鏡下結(jié)構(gòu)圖像的攝影。4.電子顯微鏡用于細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的觀察。5.其他多聚酶鏈反應(yīng)(FCR)儀、可調(diào)石蠟包埋機(jī)、相差顯微鏡及攝影裝置、計算機(jī)資料處理系統(tǒng)等等。34第三章

顯微鏡與顯微攝影技術(shù)第一節(jié)普通光學(xué)顯微鏡一、普通光學(xué)顯微鏡的基本構(gòu)造二、普通光學(xué)顯微鏡的成像原理三、普通光學(xué)顯微鏡的使用方法1.低倍鏡的觀察:對光---觀察2.高倍鏡的觀察3.油鏡的觀察四、使用顯微鏡的注意事項（1）取放時動作要輕，否則會造成光軸傾斜而影響觀察。（2）觀察標(biāo)本一定要按照操作程序進(jìn)行，先從低倍鏡開始，找到標(biāo)本目標(biāo)部位后，再根據(jù)需要轉(zhuǎn)用高倍鏡、油鏡。（3）使用油鏡時一定要在蓋玻片上滴油后才能使用。油鏡用完后，應(yīng)立即將鏡頭、蓋玻片上的油擦凈，不然干后不易去掉，從而損傷鏡頭和標(biāo)本。（4）使用時不要用手摸光學(xué)玻璃部分。（5）使用的蓋玻片和載玻片不能過厚或過薄五、普通光學(xué)顯微鏡的保養(yǎng)顯微鏡要經(jīng)常清潔，避免臟污及試劑沾污顯微鏡的光學(xué)系統(tǒng)和機(jī)械部分。普通光學(xué)顯微鏡的保管工作主要包括防塵、防熱、防腐蝕、防潮四個方面。第二節(jié)特殊光學(xué)顯微鏡簡介暗視野顯微鏡相差顯微鏡微分干涉相差顯微鏡偏光顯微鏡熒光顯微鏡紫外光顯微鏡第三節(jié)顯微攝影技術(shù)一、顯微攝影的裝置顯微鏡、照相機(jī)、連接鋪助裝置二、顯微攝影裝置的調(diào)試聚光器的調(diào)中----光源的調(diào)中----調(diào)節(jié)照明光源的前后位置----聚光器孔徑的調(diào)節(jié)----顯微攝影連接輔助裝置的調(diào)節(jié)第三節(jié)顯微攝影技術(shù)三、感光膠片的選擇四、顯微攝影曝光時間的確定五、顯微攝影放大倍數(shù)的測定放大倍數(shù)=物鏡倍數(shù)×目鏡倍數(shù)×六、濾色鏡的選擇七、對被攝樣品的要求第四節(jié)數(shù)碼顯微攝影系統(tǒng)一、數(shù)碼顯微攝影的優(yōu)點二、數(shù)碼顯微攝影系統(tǒng)的組成部分高性能的顯微鏡提供顯微原像是先決條件，功能完備的軟件系統(tǒng)是關(guān)鍵，高分辨率的數(shù)碼照相機(jī)是整個系統(tǒng)的核心。三、數(shù)碼照相機(jī)謝謝觀看尸體剖檢技術(shù)第四章學(xué)習(xí)目標(biāo)1.掌握尸體剖檢的概念和意義。2.熟練尸體剖檢的方法和記錄。3.了解尸體剖檢室的布局和設(shè)施。思維導(dǎo)圖第一節(jié)尸體剖檢的概念和意義概念簡稱尸檢。通過對尸體的病理解剖，系統(tǒng)觀察和發(fā)現(xiàn)死者各器官的病理形態(tài)變化，找出其病變，分析疾病的發(fā)生、發(fā)展，判斷其直接死亡原因的一種重要方法。意義

驗證臨床診斷的正確性，總結(jié)經(jīng)驗，提高醫(yī)療水平，改進(jìn)治療方法

及時發(fā)現(xiàn)或確診某些傳染病、流行病、或其他新的疾病，為防病提供依據(jù)

是查明死因最有力的依據(jù)第二節(jié)尸體剖檢的布局和基本設(shè)施一尸體剖檢室的布局1.與太平間相鄰2.注意采光（無影燈）3.注意清洗問題4.保持空氣流通5.承擔(dān)教學(xué)任務(wù)的尸檢室應(yīng)設(shè)置示教臺6.設(shè)計取材臺和腳控開光的自來水沖洗槽7.尸體剖檢的入口兩側(cè)應(yīng)設(shè)計有更衣室、消毒室、浴室

第二節(jié)尸體剖檢的布局和基本設(shè)施

二尸體剖檢室的基本設(shè)施尸體剖檢臺臺面光滑，采用不銹鋼或水磨石大小除容納尸體外，留出放置解剖器械和臟器檢查的地方；高低要適宜操作；

常用器械刀類、剪類鑷和鉗踞、鐵錘、骨鑿探針、金屬藥膏刀其它

骨鑿布鉗肋骨剪拆線剪手術(shù)刀第二節(jié)尸體剖檢的布局和基本設(shè)施

三尸體剖檢室的清潔和消毒解剖器械的清洗和消毒尸檢完畢后，各種器械、尸檢臺、手套、隔離衣、地面、墻壁等，應(yīng)及時清洗消毒。紫外燈照射法、臭氧空氣消毒法、過氧醋酸噴霧法、甲醛-高錳酸鉀熏蒸法。

個人防護(hù)尸檢時剖檢者應(yīng)戴手套、口罩，著隔離衣及橡皮圍裙等。鋸骨時應(yīng)增戴紗手套。尸檢過程中應(yīng)注意個人保護(hù)，手套被刺破應(yīng)及時更換，皮膚被刺破應(yīng)即時行創(chuàng)口清洗消毒處理。操作時應(yīng)注意保持清潔，手套、刀剪、器械及尸體表面有血染時，應(yīng)隨退即洗凈，切勿將污水濺起或灑于地上。

第三節(jié)尸體剖檢過程中配合主檢醫(yī)生

助手技師第三節(jié)尸體剖檢的注意事項1.一般尸體解剖的病例由醫(yī)生填寫正規(guī)的尸體解剖申請單，并由家屬簽名同意解剖。

2.醫(yī)教部加蓋同意解剖公章。

3.醫(yī)療糾紛病例，必須有醫(yī)療單位和家屬要求的尸體解剖委托書，委托書需簽名或加蓋公章。

4.尸檢時要嚴(yán)肅認(rèn)真，尊重尸體，確保安全性和保密性。

5.必須提供詳細(xì)的病歷材料。必要時可照片存檔。

第二節(jié)尸體剖檢的方法和記錄

一尸體剖檢的方法第二節(jié)尸體剖檢的方法和記錄

二尸檢記錄尸檢申請書及家屬同意的簽字臨床病理摘要病理解剖記錄病理診斷及死亡原因總結(jié)和討論思考題1.什么叫尸體剖檢？有何意義？2.尸體解剖的注意事項有哪些？

謝謝！第五章

病理大體標(biāo)本制作技術(shù)學(xué)習(xí)目標(biāo)1.了解病理大體標(biāo)本制作的意義。2.熟悉有機(jī)玻璃標(biāo)本缸的制作。3.掌握大體標(biāo)本的制作方法。第一節(jié)病理大體標(biāo)本的制作一、大體標(biāo)本的收集1.大體標(biāo)本主要來源于尸體剖檢、外科手術(shù)標(biāo)本及動物實驗標(biāo)本。2.收集典型的、有存放價值的標(biāo)本。3.注意保持標(biāo)本病變特點和器官完整性。二、大體標(biāo)本固定前的處理

1.實質(zhì)性器官：肝、脾。2.空腔器官：胃、腸、膀胱、膽囊。3.腦

4.心臟

5.肺

6.腎

7.骨組織三、大體標(biāo)本的固定與保存1.大體標(biāo)本的固定應(yīng)選擇適當(dāng)?shù)娜萜?，固定液一般為?biāo)本體積的10倍。

2.最常用的固定液：10%福爾馬林（含4%甲醛）

3.常用原色標(biāo)本的固定與保存方法：凱氏法、普爾弗塔夫特法、柯氏法、一氧化碳法。四、大體標(biāo)本的裝缸和封存（一）標(biāo)本的修整：修掉多余組織，充分暴露病變。（二）標(biāo)本支架的制作

1.玻璃支架的制作。

2.有機(jī)玻璃支架的制作

3.塑料管支架的制作。

（三）標(biāo)本的裝缸:保存液加至標(biāo)本缸口0.5-1.5cm，加蓋封存。（四）封口1.松香蜂蠟法

2.白油漆氧化鋅粉法

第二節(jié)有機(jī)玻璃標(biāo)本缸的制作及標(biāo)本裝與陳列一、有機(jī)玻璃標(biāo)本缸的制作1.材料的選擇

2.裁鋸和磨邊

3.加熱成型

4.蓋和底板的粘合

5.拋光二、標(biāo)本的裝存把標(biāo)本裝入有機(jī)玻璃缸，注入保存液至缸口下2cm左右。三、標(biāo)本的儲存與陳列保持陳列室通風(fēng)、干燥，避免陽光直射標(biāo)本?？梢园聪到y(tǒng)為標(biāo)本編號。謝謝觀看組織制片技術(shù)第六章學(xué)習(xí)目標(biāo)1.掌握常用固定液的配制和應(yīng)用。2.熟練進(jìn)行洗滌、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、封片等操作。3.熟悉組織切片制作的基本程序。4.了解常用組織切片的種類。思維導(dǎo)圖我們將切片制作所采用的一系列技術(shù)，稱為組織病理學(xué)技術(shù)或病理組織制片技術(shù)。病理組織制片技術(shù)一般包括以下基本技術(shù)流程：取材、固定、洗滌、脫水、透明、浸蠟（透蠟）、包埋、切片、展片、貼片、烤片、染色、封片等。第一節(jié)組織塊的處理一

取材

按照病理檢驗的目的和要求，切取適當(dāng)大小和數(shù)量的組織塊，用于制作組織切片的過程稱為取材。

（一）取材的配合

病理檢驗技術(shù)員取材時的職責(zé)是：配合病理醫(yī)師對病變組織進(jìn)行肉眼檢查，準(zhǔn)確記錄病理醫(yī)生檢查時描述的病理改變，按照病理檢驗的需要，選擇和確定取材的部位和塊數(shù)。

病理檢驗技術(shù)人員要及時對切取的組織進(jìn)行編號或標(biāo)記，并在病理送檢單上做好記錄，以便病理醫(yī)生鏡檢時核對。取材后的標(biāo)本應(yīng)加足固定液，按編號存放，以備復(fù)查之用。

（二）注意事項

1.避免組織結(jié)構(gòu)變形2.組織塊大小適當(dāng)3.及時取材

4.標(biāo)明包埋方向5.染色、包裹小標(biāo)本6.充分暴露病灶7.確定取材部位

8.清除多余組織

9.重復(fù)取材（補(bǔ)?。?/p>

10.認(rèn)真核對

組織取材第一節(jié)組織塊的處理二固定和固定液將組織浸入某些化學(xué)試劑，使組織細(xì)胞內(nèi)所含物質(zhì)盡量保持在生活狀態(tài)時的形態(tài)結(jié)構(gòu)和位置的過程，稱為固定。所使用的化學(xué)試劑稱為固定液。（一）固定目的

1.防止自溶和腐敗2.凝固或沉淀細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)

3.硬化組織

4.增加組織的折光率

常用固定方法有以下幾種。

1.浸泡固定法

將標(biāo)本直接放入固定液中進(jìn)行固定的方法，稱為浸泡固定法。2.注射、灌注固定法

將固定液注射或灌注到血管或腔道內(nèi)，使組織、器官被充分固定的方法稱為注射、灌注固定法。注射固定法常用于體積過大組織的固定，而灌注固定法則用于整個臟器或尸體的固定。

3.微波固定法

將組織塊浸入固定液，置于醫(yī)用微波儀內(nèi)，在微波的作用下加速組織固定的方法，稱為微波固定法。

4.蒸汽固定法

用固定液加熱后產(chǎn)生的蒸汽對組織進(jìn)行固定的方法，稱為蒸汽固定法。主要用于可溶性物質(zhì)、小而薄的標(biāo)本、膜性組織及血液或細(xì)胞涂片的固定。常用的固定液有甲醛、三聚甲醛和鋨酸等。（三）常用固定液一種好的固定液，應(yīng)具有以下特性：①滲透力強(qiáng)，能迅速滲入組織內(nèi)部；②不會使組織

過度收縮或膨脹；③能硬化、固化組織，使細(xì)胞成分的形態(tài)和位置與生活狀態(tài)時相似；④使組織對染料產(chǎn)生較強(qiáng)的親和力，并產(chǎn)生較佳的折光率。固定液可分為單純固定液和混合固定液兩類。單純固定液

是指由一種化學(xué)物質(zhì)組成的固定液。此類固定液包括：甲醛、乙醇、乙酸、重鉻酸鉀、苦味酸、丙酮、氯化汞、鉻酸、鋨酸等，2.混合固定液

是指由多種化學(xué)物質(zhì)混合組成的固定液。（1）中性甲醛液：免疫組化最常用的固定液。固定時間一般為6～24小時。此液中甲醛的濃度為6%-8%。配方：40%甲醛150～200ml

磷酸二氫鈉4g

磷酸氫二鈉13g

蒸餾水

800～850ml（2）乙醇-醋酸-甲醛液（AAF液）：AAF液兼有固定和脫水的作用，經(jīng)過AAF液固定后的組織塊可直接移入95%乙醇進(jìn)行脫水。配方：95%或無水乙醇85ml

醋酸

5ml40%甲醛10ml（3）乙醇-甲醛液（AF液）：由乙醇和甲醛混合而成，兼有固定及脫水作用，適用于皮下組織中肥大細(xì)胞的固定。固定后的組織塊不必經(jīng)低濃度逐級乙醇脫水，可直接移入95%乙醇脫水，也不用水洗，縮短了脫水時間。配方：95%或無水乙醇

90ml、

40%甲醛

10ml（4）

Bouin液：是一種常規(guī)用于活檢標(biāo)本固定的良好固定液，適用于大多數(shù)組織的固定，尤其適用于結(jié)締組織染色。配方：飽和苦味酸水溶液

75ml40%甲醛水溶液25ml

醋酸

5ml即三者的比例依次為15：5：1。（5）

Zenker液：適用于一般組織固定，胞核和胞質(zhì)染色均清晰，對免疫球蛋白染色最好，也可用于病毒包涵體、某些腫瘤標(biāo)本的固定。配方：重鉻酸鉀2.5g

氯化汞

5g

加蒸餾水至100ml

醋酸

5ml（用時加入）（四）固定的注意事質(zhì)1.及時固定

2.固定容器宜大

3.固定液應(yīng)足量

4.防止組織變形

5.確定恰當(dāng)?shù)墓潭〞r間

組織固定第一節(jié)組織塊的處理三洗滌、脫水和透明（一）洗滌組織經(jīng)過固定處理后，用水或乙醇等將未與組織結(jié)合的固定液及沉淀物清洗掉的過程，稱為洗滌。1.洗滌的目的

洗滌的目的是為了去掉未與組織結(jié)合的固定液及沉淀物。組織脫水前需用流水沖洗固定后的組織塊（使用特殊固定液除外），對陳舊性標(biāo)本一定要用流水徹底沖洗，盡可能降低組織的酸性程度，并減少甲醛色素。對使用混合固定液固定的組織更應(yīng)及時沖洗，不可擱置太久，以有利于后續(xù)各程序的進(jìn)行。2.洗滌的方法（1）含水固定液的洗滌方法：常用的含水固定液是甲醛溶液，用自來水沖洗即可。尸檢組織、大塊組織水洗時間約為4小時，小塊組織沖洗時間為2～4小時。固定時間短的新鮮標(biāo)本，可縮短水洗時間。固定時間較長的組織，則需要長時間流水沖洗。對穿刺組織、腦等細(xì)小易碎的組織，為不損壞組織，以浸泡方式洗滌為宜，浸泡時應(yīng)反復(fù)多次換水，浸泡時間應(yīng)根據(jù)具體情況而定。（2）含乙醇固定液的洗滌方法：用乙醇或乙醇混合液固定的組織，一般不需要洗滌。如果需要洗滌，應(yīng)使用與固定液中的乙醇濃度相近或略低的乙醇洗滌，不可用濃度相差太大的乙醇沖洗，也不能直接用水沖洗。（3）特殊固定液的洗滌方法：使用的固定液不同，洗滌的方法也不一樣。鉻酸、鋨酸固定液，用流水沖洗12～24小時，應(yīng)注意洗滌干凈，否則會影響染色。重鉻酸鉀固定液，用流水沖洗12～24小時，或用亞硫酸鈉溶液沖洗，也可用1%氨水溶液洗滌?？辔端峁潭ㄒ?，無論是乙醇溶液或水溶液，都應(yīng)用流水徹底沖洗，并用50%或70%乙醇浸洗，以洗掉組織內(nèi)苦味酸所留的黃色。浸洗時可將少量碳酸鋰飽和水溶液滴入乙醇中，直至乙醇不變色為止。氯化汞固定液，含氯化汞固定液固定的組織，常常形成菱形結(jié)品（氯化亞汞）或不規(guī)則的物質(zhì)（金屬汞），使組織變脆，影響制片和染色質(zhì)量，因此，必須進(jìn)行脫汞處理，以除去含汞的沉淀物。（二）脫水將組織內(nèi)的水分用某些化學(xué)試劑置換出來的過程稱為脫水。所使用的化學(xué)試劑稱為脫水劑。1.脫水的目的

組織塊經(jīng)固定和水洗后，含有大量水分，而水與苯、二甲苯等透明劑不混溶，故組織在透明前必須用能與透明劑相混溶的脫水劑（如乙醇等），把組織內(nèi)的水分置換出來，為下一步的透明做準(zhǔn)備。2.常用的脫水劑

脫水劑能同時以任何比例與水和透明劑混合。常用的脫水劑有乙醇、正丁醇、丙酮等，其中以乙醇最為常用。3.脫水方法

一般把脫水劑配成各種濃度，自低到高濃度依次進(jìn)行，使組織中所含水分逐漸減少，直至被脫水劑取代。4.自動脫水機(jī)

（三）透明用某些化學(xué)試劑（如二甲苯等）將組織中的脫水劑置換出來，以利于浸蠟和包埋，因組織塊浸入這些試劑后常呈半透明狀，故稱透明（或媒浸）。所使用的化學(xué)試劑稱為透明劑。1.透明的目的

透明是制片過程中很重要的環(huán)節(jié)。大多數(shù)脫水劑不能和包埋劑（如石蠟）混溶，而透明劑既可與脫水劑混溶，又能和包埋劑（如石蠟）混溶，能起到橋梁作用。脫水后的組織必須通過透明劑置換出脫水劑后才能使石蠟浸入組織塊，以達(dá)到包埋組織的目的。當(dāng)組織被透明劑充分浸漬時，光線可透過，組織呈現(xiàn)不同程度的透明狀態(tài)。如果組織經(jīng)過透明處理后不透明，可能與組織脫水不徹底有關(guān)，需重新脫水。需要特別指出的是，用火棉膠包埋的組織，常用乙醚處理，組織不呈半透明狀。2.常用的透明劑

可使用的透明劑較多，有苯、甲苯、二甲苯、三氯甲烷、汽油、香柏油等，多數(shù)透明劑對人體有害，使用時應(yīng)注意防護(hù)。

3.常用透明方法

將脫水后的組織塊先用乙醇-二甲苯混合液處理或直接浸入透明劑中

置換透明劑2～3次即能達(dá)到透明目的。透明時間的長短取決于標(biāo)本的種類和組織塊的厚薄，一般活檢標(biāo)本透明15～20分鐘即可。若組織不呈透明狀，主要原因是組織脫水不徹底，可能與組織太厚、透明時間不夠及組織本身性質(zhì)有關(guān)。全自動脫水機(jī)第一節(jié)組織塊的處理四浸蠟經(jīng)過透明的組織塊在熔化的石蠟中浸漬，使組織中的透明劑被完全置換出來的過程，稱為浸蠟（透蠟），用于浸蠟的石蠟被稱為浸透劑。用其他浸透劑（如明膠、火棉膠、碳蠟等）滲入組織內(nèi)部置換透明劑的過程稱為浸透或透入。臨床病理檢驗中使用最普遍的浸透劑為石蠟，故有“浸蠟”之稱。全自動脫水機(jī)（一）浸蠟的目的浸蠟的目的是用石蠟等支持物去置換，替代組織中的透明劑，使組織具有一定的硬度，有利于切片。（二）浸透劑的種類常用的浸透劑有石蠟、明膠、火棉膠、樹脂、碳蠟等，它們既是浸透劑，又是包埋劑。（三）浸蠟的方法石蠟是最常使用的浸蠟劑。石蠟有高熔點和低熔點之分，一般使用的是熔點為56℃以上的石蠟。要顯示酶和保存抗原活性時，則需使用熔點為54℃以下的石蠟。常規(guī)制片普遍用熔點為56℃～58℃的石蠟。組織塊的厚度不同，使用的化學(xué)藥品不同，脫水、透明、浸蠟時間也不盡相同處理步驟操作步驟時間/h<2mm2～4mm4～6mm脫水70%乙醇13380%乙醇13390%乙醇

13395%乙醇Ⅰ11.5295%乙醇Ⅱ123無水乙醇Ⅰ11.52無水乙醇Ⅱ123透明二甲苯Ⅰ0.512二甲苯Ⅱ0.51.52浸蠟石蠟Ⅰ0.51.52石蠟Ⅱ123石蠟Ⅲ123表

不同厚度組織塊的脫水、透明、浸蠟操作步驟及時間處理步驟操作步驟時間/min脫水丙酮Ⅰ5丙酮Ⅱ30丙酮Ⅲ30透明三氯甲烷Ⅰ30三氯甲烷Ⅱ30浸蠟石蠟Ⅰ15石蠟Ⅱ20石蠟Ⅲ20表

活檢組織脫水、透明、浸蠟時間處理步驟操作步驟時間/h尸檢組織活檢組織脫水70%乙醇4～101～280%乙醇4～101～290%乙醇

4～101～295%乙醇Ⅰ4～101～295%乙醇Ⅱ4～101～2無水乙醇Ⅰ2～40.5～1無水乙醇Ⅱ2～40.5～1透明二甲苯Ⅰ1～215～30分鐘二甲苯Ⅱ0.5～115分鐘浸蠟石蠟Ⅰ0.5～10.5～1石蠟Ⅱ1～21～2石蠟Ⅲ1～21～2表

尸檢、活檢組織脫水、透明及浸蠟時聞第一節(jié)組織塊的處理五包埋用石蠟或其他包埋劑將組織包成一定形狀，使其具有一定的硬度和韌度，便于切成薄片的過程稱為包埋。用于包埋的物質(zhì)分水溶性（如碳蠟、明膠等）和非水溶性（如石蠟、火棉膠等）兩類。（一）包埋的目的用包埋劑將經(jīng)過浸透劑浸透的組織塊包起，可使組織具有一定的硬度和韌性，有利于切成薄片，也有利于組織塊的妥善保存。包埋機(jī)（二）包埋方法不同的包埋劑，其包埋方法也不相同，常用的包埋方法有以下幾種。1.石蠟包埋法

石蠟包埋法為切片技術(shù)中最常用的包埋法。用石蠟包埋的組織塊常稱為蠟塊，蠟塊經(jīng)編號處理后易于收藏保存。石蠟包埋法又可分為下列幾種。（1）常規(guī)石蠟包埋：（2）胃鏡標(biāo)本的包埋（3）體液標(biāo)本的包埋（4）快速石蠟包埋法2.火棉膠包埋法

3.碳蠟包埋法4.明膠包埋法5.石蠟半薄切片包埋法包埋蠟塊固體石蠟與熔蠟箱包埋框與包埋模具（三）注意事頂不同的包埋劑，有不同的包埋方法和要求，注意事項也不盡相同，以下是一些帶共性的問題值得注意。（1）確定包埋面：①實質(zhì)性臟器的組織及腫瘤組織，一般以組織塊最大面作為包埋面②囊、管狀結(jié)構(gòu)的組織：如血管和各種囊腫壁等，以橫斷而為包埋面。③有被覆上皮的組織，如皮膚和消化道、呼吸道、泌尿道等自然管道，其包埋面應(yīng)垂直于上皮面，橫斷面朝下包埋。若在同一蠟塊中包埋數(shù)塊管壁組織，組織塊應(yīng)平行豎埋，且黏膜面（或內(nèi)膜）的方向應(yīng)一致。④有特殊要求的組織按預(yù)先標(biāo)記的包埋面包埋。（2）同一蠟塊內(nèi)包埋多個組織塊時，組織的性質(zhì)應(yīng)相同（如同屬軟組織），組織塊的大小、厚薄要相近，且包埋方向要一致，組織塊間的距離不能太大。（3）難切的組織（如皮膚、骨等）及需切連片的組織均應(yīng)單獨包埋。（4）神經(jīng)，脊髓及需要定向包埋的組織應(yīng)注意組織塊的相互關(guān)系。（5）操作應(yīng)迅速（尤在室溫較低的情況下），以防組織塊變冷、蠟液凝結(jié)或產(chǎn)生氣泡。若組織塊與蠟液不能很好地凝固在一起，將使組織與蠟分離而影響切片。（6）若將管腔或空洞標(biāo)本與小標(biāo)本包埋在一個蠟塊內(nèi)時，不能將小標(biāo)本放入管腔或空洞標(biāo)本內(nèi)。第二節(jié)切片機(jī)具與切片一

切片機(jī)切片機(jī)是切制病理切片的專用機(jī)器，能將各種組織切成數(shù)微米厚的薄片，用于顯微鏡察。（一）切片機(jī)的種類及使用1.按結(jié)構(gòu)分類

根據(jù)結(jié)構(gòu)的不同，切片機(jī)可分為（1）旋轉(zhuǎn)式切片機(jī)（2）滑動式切片機(jī)（3）冰凍切片機(jī)（4）振動式切片機(jī)2.按用途分類

根據(jù)用途的不同，切片機(jī)可分為石蠟切片機(jī)、火棉膠切片機(jī)及冰凍切片機(jī)等。輪轉(zhuǎn)式切片機(jī)冰凍切片機(jī)（二）切片機(jī)的維護(hù)切片機(jī)是一種精密儀器，必須嚴(yán)格遵守操作規(guī)程。每次使用后，都應(yīng)充分擦拭，確保清潔，并涂以優(yōu)質(zhì)機(jī)油加以保護(hù)，防止生銹。不用時套上機(jī)罩，避免切片機(jī)各部件受灰塵和有機(jī)溶劑污染，不要隨意拆卸零件，有故障及時送修，以免影響切片的準(zhǔn)確度。很少使用的切片機(jī)也應(yīng)注意經(jīng)常維護(hù)和保養(yǎng)，防止生銹、長霉。第二節(jié)切片機(jī)具與切片二

切片刀切片刀是切片機(jī)的重要部件，是切制良好切片的重要設(shè)施。若切片刀不鋒利、刀刃有缺口或彎曲，以及保養(yǎng)不良等常造成切片困難，切出的切片質(zhì)量難以保證。（一）切片刀的種類切片刀的長短不一，一般有4cm、8cm、14cm、18cm、20～24cm等多種規(guī)格。根據(jù)結(jié)構(gòu)式樣又可將切片刀分為四種。1.平凹型（a型）

又稱單面凹型2.平楔型（c型）

也稱雙平型3.雙凹型（d型）4.薄型

（二）刀背套與刀柄刀片固定裝置第二節(jié)切片機(jī)具與切片三

磨刀與被刀磨刀有手工磨刀和磨刀機(jī)磨刀兩種方法。1.手工磨刀（2）注意事項：①磨石表面要平滑，刀刃平貼石面。②兩手用力要均勻，大小一致。③推動刀的速度不宜快，刀在磨石上要平穩(wěn)前進(jìn)。④刀刃要全部均勻磨到，保持刀刃平直。⑤應(yīng)把磨石全部磨到，以免磨石表面變成馬鞍形狀。

2.被刀

磨好的切片刀有時需用被刀帶做進(jìn)一步處理，使刀鋒更加鋒利并耐用。按磨刀的方式用專門的皮帶對磨好的切片刀進(jìn)行處理的方法，稱為被刀（或蓖刀）。用于被刀的專用皮帶稱為被刀帶。自動磨刀機(jī)3.磨刀機(jī)磨刀

用磨刀機(jī)磨刀可克服手工磨刀費(fèi)時費(fèi)力的缺點。第二節(jié)切片機(jī)具與切片四

切片（一）石蠟切片用切片機(jī)將蠟塊切成適宜厚度的薄片的過程稱為石蠟切片。切片厚度一般為4～6μm，也可切到1～2μm，需觀察病變的連續(xù)性時可切連片。蠟塊若保管得當(dāng)，可長期保存。石蠟切片是病理檢驗中最常用的一種制片方法。1.切片前的準(zhǔn)備（1）蠟塊準(zhǔn)備（2）切片用品準(zhǔn)備：切片刀、載玻片、展片烤片儀、配制蛋白甘油、其他用品：準(zhǔn)備好大、中號優(yōu)質(zhì)狼毫毛筆、眼科彎鑷、記號筆（鉆石筆或鉛筆）、冰塊等。攤片烤片機(jī)2.切片制作過程

石蠟切片多使用旋轉(zhuǎn)式切片機(jī)，操作步驟如下：（1）將切片刀安裝于刀架上，調(diào)整好刀的角度，一般為20°～30°。（2）將蠟塊固定在切片機(jī)組織塊夾具上。（3）調(diào)整組織塊夾具的調(diào)節(jié)螺旋，使蠟塊切面與刀口平行。向前推動刀架使切片刀靠近蠟塊，調(diào)整至合適位置，一般刀刃與蠟塊切面的夾角呈5°～10°，并旋緊固定螺旋。（4）先用較大進(jìn)刀量（約20μm）粗切蠟塊，待組織最大切面暴露，再將厚度調(diào)至要求厚度（一般為4～6μm）。（5）左手持毛筆，右手旋轉(zhuǎn)切片機(jī)旋轉(zhuǎn)輪。連續(xù)轉(zhuǎn)動旋轉(zhuǎn)輪，切下的蠟片相連成帶狀，需要將其展平整才能裱貼在載玻片上，此過程稱為展片。展片時，左手用毛筆輕輕托起蠟帶下端，右手用眼科彎鑷將蠟帶夾起，正面向上輕放于供展片的溫水中，并用鑷子幫助展平。展片困難時，可先將蠟帶放入30%乙醇中初展，再用載玻片撈起蠟帶放入溫水中。待蠟帶中的組織完全展平后，即可將其撈出，稱為撈片。（6）直接用載玻片撈片，選擇的蠟帶應(yīng)完整、無劃痕、厚薄均勻，蠟帶與玻片之間不能有氣泡。貼片時要注意切片的整齊美觀，一般載玻片右側(cè)留著寫編號，切片貼附于載玻片左側(cè)1/3與2/3交界處。（7）貼片后，立即寫上編號，在空氣中略微晾干即可烤片。（8）將載玻片在烤片儀上烘烤片刻或直接放入60℃烤箱烘烤30分鐘。3.注意事項（1）切片機(jī)應(yīng)安放平穩(wěn)，各個零件和螺絲應(yīng)旋緊。切片刀、蠟塊應(yīng)固定牢固。若有振動會使切片出現(xiàn)皺褶、橫紋或厚薄不均。（2）切片刀不鋒利或有缺口，會使切片卷起或皺起，不能連成蠟帶。刀口不清潔，附有蠟屑時，易造成切片斷裂、破碎、不完整。（3）切片刀與蠟塊切面的傾斜角以5°～10°為宜，過大則切片上卷，不易連成蠟帶；過小則切片易皺起。（4）由于切片機(jī)切組織時是由下往上切，易使組織出現(xiàn)刀紋裂縫。為得到完整的切片，放置蠟塊時應(yīng)將組織硬脆難切的部分（如皮膚組織的表皮、胃腸組織的漿膜面）放在上端。（5）對小標(biāo)本的蠟塊進(jìn)行粗切時，設(shè)置的厚度不能過大，速度宜慢，不要修切得太多，以免將主要病變部位甚至整個組織塊修切掉。（6）搖動旋轉(zhuǎn)輪的轉(zhuǎn)動速度不可過快，用力應(yīng)均勻、平穩(wěn)，以40～60r/min為宜。若遇硬化過度的組織及肝、腦脾等，動作尤應(yīng)輕柔，避免產(chǎn)生振動而使切片出現(xiàn)碎裂現(xiàn)象。（7）在切片過程中，由于切片刀與蠟塊相互摩擦?xí)a(chǎn)生熱量，導(dǎo)致蠟塊溫度升高（在夏季尤甚），往往造成切片困難?？捎帽鶋K涂抹切片刀和蠟塊切而，使石蠟保持合適的硬度以利于切片。（8）展片溫度一般為42℃～48℃，烤片溫度一般60℃～70℃。并應(yīng)及時清除水中的蠟屑等雜物，止污染切片。（9）血凝塊、血栓等易脫片的組織，應(yīng)使用預(yù)先涂有蛋白甘油的載玻片撈片或在展片儀水盒內(nèi)加入適量的蛋白甘油，防止脫片。蛋白甘油應(yīng)薄而均勻地涂滿載玻片的大部分（約2/3）。（10）對血凝塊和皮膚組織應(yīng)及時烤片，烤片溫度應(yīng)稍低；腦組織切片撈出后應(yīng)直立晾干，再行烤片，否則會產(chǎn)生氣泡。4.常規(guī)石蠟切片的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

中華醫(yī)學(xué)會《臨床技術(shù)操作規(guī)范病理學(xué)分冊》對常規(guī)石蠟包埋—HE染色切片質(zhì)量提出了基本要求，制定了評判切片質(zhì)量的基本標(biāo)準(zhǔn)（切片質(zhì)量分級標(biāo)準(zhǔn)：①甲級片：≥90分（優(yōu)）；②乙級片：75～89分（良）；③丙級片：60～74分（基本合格）；④≤59分（不合格）。（二）快速石蠟切片在不具備制作冷凍切片或組織太小、太碎而不能制作冷凍切片的情況下，可采用快速石蠟切片法進(jìn)行術(shù)中快速病理診斷，一般10～15分鐘即可出片。1.切片制作方法（1）取材：組織取材應(yīng)薄，厚度一般不超過2mm。為保證充分脫水，組織塊固定后還要進(jìn)行修切，使其厚度為1.5mm左右。（2）包埋：采用固體蠟包埋法，即用加熱的無齒鑷在預(yù)制的蠟塊上熔出相應(yīng)的小孔，將組織塊放入其內(nèi)，燙平蠟塊表面，冷卻硬化后即可切片。（3）切片：按常規(guī)石蠟切片的方法進(jìn)行切片、撈片、貼片。（4）脫蠟：貼片后用酒精燈對切片略加烘烤，使切片上的石蠟熔化，水分烤干后，移入二甲苯脫蠟，經(jīng)95%乙醇浸洗后移入水中，進(jìn)行水化處理。（5）染色：切片水化后即可進(jìn)行快速HE染色。應(yīng)先在切片上滴加蘇木素液將組織覆蓋，然后用酒精燈加熱約30秒，水洗，之后按常規(guī)染色進(jìn)行。2.注意事項（1）切取的組織塊宜小而薄。（2）做快速石蠟切片后剩余的組織一定要留做普通石蠟切片，以便進(jìn)一步確定診斷。（3）對含有較多脂肪的組織，應(yīng)經(jīng)丙酮多次處理。（4）微波爐進(jìn)行固定和脫水處理，但二甲苯和石蠟不宜用微波爐處理，超聲波處理儀可縮短固定、脫水和浸蠟的時間，提高處理效果。（5）從固定到浸蠟的全過程均應(yīng)加溫。（三）冷凍切片冷凍切片又稱冰凍切片，是將組織冷凍后直接進(jìn)行切片，不經(jīng)過固定、脫水、透明、浸蠟、包埋等過程，極大地縮短了制片的時間，是一種簡便快速的制片方法，對臨床手術(shù)患者的術(shù)中快速病理診斷具有重要意義。由于冷凍切片制作時不用乙醇和二甲苯，對脂肪、類脂質(zhì)和酶的保存較好，因此，冷凍切片也常用于脂肪染色神經(jīng)髓鞘的染色，以及組織化學(xué)和免疫組織化學(xué)染色。新鮮組織、已固定的組織和低溫冰箱冷藏的組織塊等均可用于冷凍切片，但已固定的組織塊需經(jīng)流水沖洗后方可進(jìn)行冷凍切片。1.制作過程

冷凍切片的制作一般經(jīng)過取材→固定（或不固定）→組織速凍→冷凍切片貼片（或不貼片）→染色等過程。2.注意事項（1）用于冷凍切片的組織，在切片前不能用乙醇固定，否則無法冷凍。（2）送檢組織應(yīng)盡可能新鮮。（3）取材時組織塊的大小要適當(dāng)，過厚妨礙速凍，過薄可能導(dǎo)致制片失敗。（4）為減少冰晶形成對組織結(jié)構(gòu)的擠壓和破壞，組織的冷卻速度要快，使組織的溫度迅速降到—4℃以下。（5）組織周圍的包埋劑應(yīng)適量，過少起不到包埋作用，過多影響冷凍效果。（6）冷凍時間太久的組織不能馬上切片，以免損傷切片刀。（7）調(diào)節(jié)好冷凍切片機(jī)的溫度，使組織塊的硬度處于最佳切片狀態(tài)（8）組織塊復(fù)溫時，應(yīng)在37℃加溫速融，避免自然復(fù)溫對組織結(jié)構(gòu)的破壞。（9）太小、太碎的組織不宜做冰凍切片，應(yīng)改用快速石蠟切片。（10）通常骨組織和鈣化組織不能做冷凍切片。思考題1.名詞解釋；取材、固定、水洗、脫水、透明、浸蠟、包埋、切片、展片、撈片、貼片、烤片、固定液、脫水劑、浸透劑、蠟塊、石蠟切片。2.靠用的病理組織制片方法有哪些?病理組織切片要經(jīng)過哪些基本程序?3.如何進(jìn)行石蠟切片?切片前需做哪些準(zhǔn)備?應(yīng)注意哪些事項?常出現(xiàn)哪些問題?如何解決?謝謝！第七章

組織切片染色技術(shù)學(xué)習(xí)目標(biāo)1.掌握染色的概念及目的。2.了解染色劑的概念及分類。3.熟悉常用的染色術(shù)語4.簡述染色的分類。5.掌握染色前后組織切片的處理。6.掌握切片的封固方法。第一節(jié)概述一、染色的概念

用染液對組織切片進(jìn)行處理，使組織中的不同成分被染上相應(yīng)的顏色，產(chǎn)生不同的折射率，以利于顯微鏡觀察和分析的方法，稱為染色。二、染色的目的

病理組織標(biāo)本制成切片后，如果不經(jīng)過染色，用光學(xué)顯微鏡觀察，僅能見到細(xì)胞及相關(guān)組織成分的簡單輪廓，無法辨認(rèn)其細(xì)節(jié)，不能滿足觀察及診斷的需要。即使是使用有足夠高分辨率和合適放大倍數(shù)的顯微鏡，也只能是在標(biāo)本各部分結(jié)構(gòu)對光的折射率有顯著差別的情況下，才能辨認(rèn)。二、染色的目的

組織經(jīng)過染色后，由于不同組織成分對染色劑的作用呈現(xiàn)出不同的顏色，產(chǎn)生不同的折射率，使組織和細(xì)胞中各種成分在光學(xué)顯微鏡下的分辨率得以提高，有利于在光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察。染色是病理檢驗技術(shù)中一項十分重要的基本技術(shù)。三、染色的原理

染色過程是染色劑和組織細(xì)胞相結(jié)合的一個十分復(fù)雜的反應(yīng)過程。目前認(rèn)為，在這一反應(yīng)過程中既有化學(xué)作用，又有物理作用，因此，組織的染色是二者綜合作用的結(jié)果。三、染色的原理

用染液對組織切片進(jìn)行處理，使組織中的不同成分被染上相應(yīng)的顏色，產(chǎn)生不同的折射率，以利于顯微鏡觀察和分析的方法，稱為染色。三、染色的原理（一）物理作用1.毛細(xì)管滲透作用2.吸收或溶解作用3.吸附作用（二）化學(xué)作用四、染色劑（一）染色劑的一般性質(zhì)1.發(fā)色團(tuán)2.助色團(tuán)四、染色劑（二）染色劑的分類1.按染色劑的來源分類（1）天然染料（2）人工合成染料（3）無機(jī)化合物四、染色劑2.按染色劑的化學(xué)反應(yīng)分類（1）堿性染料（2）酸性染料（3）中性染料（復(fù)合染料）四、染色劑3.按染料的主要用途分類（1）細(xì)胞染料1）細(xì)胞核染料2）細(xì)胞質(zhì)染料3）細(xì)胞化學(xué)成分染料：A.脂肪染料B.

糖類染料C.核酸染料D.蛋白質(zhì)和氨基酸染料四、染色劑（2）組織染料：1）結(jié)締組織和肌纖維染料A.膠原纖維染料B.網(wǎng)狀纖維染料C.彈力纖維染料D.肌纖維染料2）神經(jīng)組織的染料A.尼氏體染料B.神經(jīng)軸突染料C.神經(jīng)髓鞘染料D.神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞染料五、常用染色術(shù)語（一）常規(guī)染色（二）單一染色（三）復(fù)染色（四）多種染色（五）進(jìn)行性染色與退行性染色1.進(jìn)行性染色2.退行性染色五、常用染色術(shù)語（六）直接染色與間接染色1.直接染色2.間接染色（七）媒染劑（八）促染劑（九）分化與分化劑

1.酸性分化劑2.氧化分化

3.

媒染分化劑

（十）異染性染色

（十一）藍(lán)化六、染色方法的分類與命名（一）染色方法的分類

目前常用的分類方法有以下幾種。

1.按染色的手段分類

2.按染色對象的成分

3.按染色對象的種類六、染色方法的分類與命名

常見命名方法有以下幾種。

1.按發(fā)明者姓名命名

2.按所用染色劑名稱命名

3.

按所染組織名稱命名

4.

按試劑+人名或按人名+試劑混合命名

5.按反應(yīng)方法命名第二節(jié)特殊染色一、特殊染色的概念

為了顯示特定的組織結(jié)構(gòu)或組織細(xì)胞特殊成分，用特定的染料和方法對組織切片進(jìn)行染色，稱為特殊染色，通常是指除HE染色外的所有染色方法。特殊染色也可理解為“選擇性染色”，它能選擇性地顯示組織、細(xì)胞中的特殊成分，包括正常成分、異常物質(zhì)、病變和病原體等，在病理診斷中具有十分重要的輔助作用。二、特殊染色的意義

特殊染色是普通染色的必要補(bǔ)充，是染色技術(shù)中不可缺少的部分。選用恰當(dāng)?shù)奶厥馊旧椒?，顯示或進(jìn)一步確定病變性質(zhì)、異常物質(zhì)及病原體，對于疾病的診斷和鑒別診斷具有十分重要的作用。在實際工作中，一般是先做HE染色，通過對切片認(rèn)真細(xì)致地觀察，仍不能做出正確的診斷或鑒別診斷有困難時，再進(jìn)行特殊染色。三、特殊染色的分類

特殊染色方法的種類很多，一般根據(jù)所染對象的不同，分為結(jié)締組織染色、肌組織染色、神經(jīng)組織染色、脂質(zhì)染色、糖類染色、色素類染色、病理內(nèi)源性沉者物染色、病原微生物染色、內(nèi)分泌細(xì)胞染色等。四、特殊染色的命名

關(guān)于特殊染色的命名，至今沒有統(tǒng)一的規(guī)定，通常采用以下幾種方式命名。1.按發(fā)明者姓名命名

2.按所用染色劑命名3.

按染色對象命名

4.采用混合命名

第三節(jié)染色前后的處理一、染色前處理（一）脫蠟至水（二）脫汞鹽結(jié)晶（三）脫甲醛色素二、染色后處理染色后處理要經(jīng)過以下幾個步驟。1.分化2.藍(lán)化作用

3.染色后的脫水4.

染色后的透明5.

溶液的更換

三、封固（一）封固劑常用的封固劑可分為兩類。1.含水封固劑

甘油明膠2.無水封固劑

中性樹膠三、封固（二）封固方法

由于使用的封固劑不同，封固方法也不完全一樣。1.無水封固劑2.含水封固劑第四節(jié)染色容易出現(xiàn)的問題和注意事項一、染色的一般注意事項1.制片室布局合理

2.嚴(yán)格遵循操作規(guī)程

3.靈活應(yīng)用染色技術(shù)

二、染色中容易出現(xiàn)的問題及處理（一）固定液和切片類型的選擇1.選擇恰當(dāng)固定液2.選擇恰當(dāng)?shù)那衅愋停ǘ┤疽旱呐渲?.根據(jù)用量和有效期確定染液的配制量

2.注意染液濃度和pH3.注意配制的方法和條件二、染色中容易出現(xiàn)的問題及處理（三）染液的存放與更換1.避光、低溫存放染液2.及時清洗染色用具3.定期過濾染液4.及時更新染液（四）染色時間的確定

具體染色時間應(yīng)根據(jù)染液的濃度、使用時間的長短和染色對象的前期處理，以及染色時的環(huán)境溫度等情況靈活掌握，不能一概而論。小結(jié)（1）石蠟切片染色前的脫蠟至水處理必須徹底，二甲苯和乙醇必須保持適當(dāng)?shù)臐舛龋荒芎腥魏坞s質(zhì)成分。（2）用含有升汞的固定液（如Zenker液）固定的組織，染色前必須進(jìn)行脫汞鹽結(jié)晶處理。若使用劣質(zhì)甲醛固定或在高溫下用甲醛固定較久組織，染色前必須脫去甲醛色素。小結(jié)（3）蘇木素染色之后的分化應(yīng)適度，分化不良或過度均會影響染色效果。（4）染色后用乙醇進(jìn)行脫水處理時，應(yīng)由低濃度向高濃度（80%、90%、95%、100%）逐漸過渡，以徹底脫去組織中的水分，為二甲苯進(jìn)入細(xì)胞創(chuàng)造條件。小結(jié)（5）染色后一般選用二甲苯作透明劑。但如果封固劑中含有苯成分，透明時只能選用二甲苯，而不能選用其他的透明劑。（6）更換溶液時，無需全部更新，一般是將脫水透明開始使用的最低濃度乙醇及二甲苯廢棄，將無水乙醇II及二甲苯II更換成新液，其余各級乙醇及二甲苯依次降級替補(bǔ)使用。（7）常規(guī)染色一般用無水封固劑進(jìn)行封固，但組織切片必須徹底脫水、透明，否則，切片會出現(xiàn)云霧狀渾濁，妨礙鏡檢。謝謝觀看第八章

組織切片常規(guī)染色技術(shù)學(xué)習(xí)目標(biāo)1.了解蘇木精—伊紅染色。2.熟悉蘇木精—伊紅染色的基本原理。3.掌握蘇木精—伊紅染色液的配制。4.掌握蘇木精—伊紅染色的過程、結(jié)果及注意事項。第一節(jié)常規(guī)染色的概念指蘇木精—伊紅染色（簡稱H—E染色）1.蘇木精染色的基本原理2.伊紅染色的基本原理第二節(jié)蘇木精—伊紅染液的配制和染色方法

一、染液的配制(一)蘇木精染液的配制

1.哈瑞蘇木精液的配制(最常用)

2.Ehrlich蘇木精液的配制

3.Gilln改良蘇木精液的配制

4.Mayer改良蘇木精液的配制

（二）伊紅液的配制

1.水溶性伊紅液的配制

2.乙醇性伊紅液的配制（三）鹽酸乙醇分化液的配制（四）1%氫氧化銨藍(lán)化液配制

二、染色方法（一）人工操作蘇木精—伊紅染色方法1.脫蠟2.蘇木精染液染色3.分化返藍(lán)4.乙醇伊紅染液染色

5.脫水、透明

6.封固（二）冷凍切片蘇木精—伊紅染色方法1.固定2.染色3.脫水、透明、封固（三）快速石蠟切片染色

1.脫蠟2.染色3.脫水、透明、封固三、染色結(jié)果第二節(jié)染色中常見問題及注意事項一、固定不當(dāng)二、脫蠟不凈三、染色與分化不當(dāng)四、脫水不徹底或過度五、封固及封固劑使用不當(dāng)

1.封固劑溢出

2.封固劑不足

3.切片有空泡

4.蓋玻片要大于組織塊切片六、切片脫落

1.烘烤不足

2.烘烤過度

3.載物片處理不當(dāng)謝謝觀看第九章組織切片特殊染色技術(shù)襄陽市中心醫(yī)院賈新濤學(xué)習(xí)目標(biāo)1.掌握各種特殊染色的應(yīng)用。2.掌握常用特殊染色的結(jié)果判斷。3.熟悉特殊染色中的注意事項。4.學(xué)會特殊染色的實驗方法與步驟。5.了解特殊染色常用染色液的配制。

特殊染色為常規(guī)染色（即蘇木素、伊紅）的必要補(bǔ)充，又稱選擇性染色，只有相對的特異性，如PAS陰性反應(yīng)它有糖元。

一、特殊染色的概念及意義

意義：

（1）特染能顯示在常規(guī)染色切片中不明顯的部分，如革蘭氏染色、細(xì)菌染色。

（2）區(qū)別HE染色中不能鑒別的組織病變，如VG染色區(qū)別膠元纖維和平滑肌。

（3）顯示某些常規(guī)染色中不能著色的物質(zhì)，如網(wǎng)染才能顯示網(wǎng)狀纖維，常規(guī)HE染色是染不出來的。

因此，特殊染色也是制片染色中不可缺少的組成部分，它在病理診斷常著輔助作用，也為科研提供依據(jù)。

二、學(xué)習(xí)特染技術(shù)應(yīng)掌握的重點

（1）染色方法的成敗，應(yīng)該在溫度、濃度、時間和PH值等方面找原因。

（2）注意特染的應(yīng)用范圍，如某種病變應(yīng)用什么方法染色才能達(dá)到目的，一般先在HE切片所見的要求去選擇適當(dāng)?shù)奶厝痉椒?，一種或多種。

（3）必須掌握各種特殊染色的結(jié)果，避免導(dǎo)致錯誤的結(jié)論或嚴(yán)重的誤診，如在網(wǎng)染時把膠元纖維誤以為網(wǎng)狀纖維。

（4）盡量要陽性切片作對照，便于選擇特染方法，并與HE切片作對照。

（5）特染的組織，在其固定、脫水根據(jù)要求選擇。所用的器皿都必須化學(xué)清洗。

第一節(jié)結(jié)締組織染色一、膠元纖維染色（VG染色）

㈠膠元纖維的分部組成成分

膠原纖維是結(jié)締組織中的三種纖維之一，分布最為廣泛，含量最多。主要分布于真皮、腱、韌帶、骨、透明軟骨、動脈、腸壁、子宮和基底膜等。膠原纖維具有韌性大，抗拉力強(qiáng)的特點。膠原纖維單位主要由纖維母細(xì)胞合成。

苦味酸—酸性品紅法

1．VG染液試劑配制

1%酸性品紅10ml

苦味酸飽和液90ml

此液常分別配制臨用時加以混合，不能久用?！救旧襟E】

（1）組織固定于10%早醛液中，常規(guī)脫水包埋

（2）組織切片脫臘至水。

（3）V-G染液2-5’（酸性品紅1：苦味酸飽和液9）

（4）傾去染液，無水酒精急速脫水，用濾紙吸干

（5）二甲苯透明，中性樹膠封片。

【結(jié)果】

膠元纖維呈紅色，肌纖維、胞質(zhì)及紅細(xì)胞黃色。㈡膠元纖維染色應(yīng)用

膠原纖維染色在病理診斷上主要用于鑒定梭形、纖維形細(xì)胞腫瘤的組織來源；

常常要在纖維、平滑肌和神經(jīng)三者之中作出選擇。

觀察動脈硬化的心臟，在HＥ切片中，心肌內(nèi)散在的小疤痕灶和心肌均被染作紅色，而作膠原纖維染色可將膠原組織和肌肉上明顯地區(qū)分開來。

早期肝硬化用膠原纖維染色，也可使小葉之間少量增生的膠原纖維突出地顯示出來。二、

網(wǎng)狀纖維染色

㈠網(wǎng)狀纖維染色的形態(tài)特點和染色原理

網(wǎng)狀纖維是網(wǎng)狀結(jié)締組織內(nèi)的一種纖維。它由網(wǎng)狀細(xì)胞產(chǎn)生，網(wǎng)狀纖維細(xì)而有分支，穿行于細(xì)胞體和突之間，共同構(gòu)成網(wǎng)狀支架。這種纖維用HE染色一般不易辨認(rèn)。若用銀氨溶液浸染能使纖維變成黑色，故又稱嗜銀纖維。（二）網(wǎng)狀纖維染色的原理

網(wǎng)狀纖維的染色方法很多，但是染色原理基本相同，有以下方面。

（1）氧化使網(wǎng)狀纖維具有選擇性，不經(jīng)氧化的切片，常用的氧化劑是高錳酸鉀。

（2）漂白一般采用2%草酸，漂白后無色（3）媒染多用2%硫酸鐵氨（俗稱鐵明礬）。這些試劑可增加網(wǎng)狀纖維對銀氨液的選擇性。

（4）浸銀也稱鍍銀，使銀氨配位化合物與網(wǎng)狀纖維結(jié)合，帶正電荷的二氨合銀Ag（NH3）+2被具有嗜銀性物質(zhì)的網(wǎng)狀纖維吸附。

（5）還原甲醛液是還原劑，能把與網(wǎng)狀纖維結(jié)合的銀氨配位化合物還原成棕黑色的金屬銀。

（三）網(wǎng)狀纖維纖維染色應(yīng)用

判定病變組織支架的破壞情況，組織、臟器網(wǎng)狀支架的存在與塌陷、完整與破壞、網(wǎng)狀纖維的分布及走行，有多少、粗細(xì)、疏密或有無斷裂形態(tài)變化。

⑴用于顯示和鑒別腫瘤的性質(zhì)和來源

顯示和區(qū)分癌與肉瘤來源于上皮組織的惡性腫瘤（癌）僅癌巢周圍有網(wǎng)狀纖維包繞，巢內(nèi)癌細(xì)胞之間則沒有網(wǎng)狀纖維分部。來源于間葉組織的惡性腫瘤（肉瘤），瘤細(xì)胞之間往往可見較多的網(wǎng)狀纖存在。

⑵用于某些腫瘤的診斷

根據(jù)染色所顯示的網(wǎng)狀纖維多少、分布及行走特點，可用于診斷下列腫瘤。1）平滑肌肉細(xì)胞之間見有大量平行分布的網(wǎng)狀纖維。

2）纖維肉瘤可見大量網(wǎng)狀纖維存在，并且密集包繞細(xì)胞。

3）滑膜肉瘤其梭形細(xì)胞也產(chǎn)生網(wǎng)狀纖維，但不如纖維肉瘤多。⑶用于觀察和研究癌組織的發(fā)生、發(fā)展及其惡性程度

癌組織發(fā)生，發(fā)展過程以及癌組織生長速度，可通過網(wǎng)染進(jìn)行觀察和研究，如癌巢周圍的網(wǎng)狀纖維包囊完整，說明癌組織生長較慢，惡性程度低；再如子宮頸鱗狀細(xì)胞癌巢周圍網(wǎng)狀纖維分解，說明癌組織正在擴(kuò)散，其惡性程度較高。(4)用于顯示和研究肝組織病變

用網(wǎng)狀纖維的染色法，觀察肝臟病變處的網(wǎng)狀支架形態(tài)、分布特點及其破壞情況，可以判定和研究其病變性質(zhì)、程度及其發(fā)展與轉(zhuǎn)規(guī)。

（四）網(wǎng)狀纖維染色的注意事項

（1）用新蒸餾水配制最好用雙蒸水配制。

（2）所用玻璃器材及載玻片均要達(dá)到化學(xué)潔凈程度.

（3）對已配制好的硝酸銀液和氨銀溶液，要貯存冰箱中保存待用。

（4）在染色過程中，用染氨銀染液或硝酸銀液的前后應(yīng)用蒸餾水洗浸。

（5）氯化金調(diào)色和硫代硫酸鈉固定的時間不應(yīng)太長，否則會引起網(wǎng)狀纖維染色變淡。

（6）切片脫水后及時封片，不宜在空氣中停留時間過長，以免產(chǎn)生色素顆粒。

【氨銀液的配制】

1.取10%硝酸銀水溶液5ml于三角燒瓶內(nèi)，一滴一滴地滴加氨水（氫氧化銨），并同時搖動容器

2.硝酸銀遇到氨水立即產(chǎn)生沉淀，當(dāng)其沉淀物被溶解時（不能完全溶解也可）

3.再加入3%氫氧化鈉水溶液5ml。溶液重新產(chǎn)生沉淀

4.此時再滴加氨水。至其沉淀被溶解后，（為避免氨水加入過量最好能有少許沉淀物為妥，以免脫片）最后加蒸餾水稀釋至50ml。

5.濾過，貯存于棕色瓶中存放入冰箱備用。臨用前取出恢復(fù)室溫再用?！救旧襟E】

（1）切片脫蠟至水洗。

（2）0.25%高錳酸鉀液氧化5’。

（3）自來水洗2次。

（4）2.5%草酸液漂白1-2’，水洗2’。

（5）2%硫酸鐵銨媒染（鐵明礬）10’。

（6）水洗，蒸餾水洗2次。

（7）滴染氨銀液1’左右。（8）蒸餾水洗2次。

（9）10%中性早醛還原3′。

（10）蒸餾水洗1—2次。

（11）0.2%

的氯化金調(diào)色5′水洗。

（12）5%硫代硫酸鈉固定5′。

（13）自來水沖洗，蒸餾水洗。

（14）復(fù)染（對比染色）伊紅、中性紅、ＶＧ。

（15）脫水、透明、封片。

【染色結(jié)果】

網(wǎng)狀纖維染灰黑色，膠元纖維紅色，基質(zhì)黃色。

三、彈力纖維染色法

彈力纖維較細(xì)，直徑0.2-1微米，且堅固，彈性大，容易伸展，纖維分枝連接成網(wǎng)，HE染色與膠原纖維著色相似，若用彈力纖維染色法，則可分辨的很清楚。Weigert氏彈力纖維染色法：標(biāo)本用Zenker氏液，酒精或10%甲醛固定均可。石蠟或冰凍切片。脫蠟至水。水洗后，加入Weigert氏染色液2-6小時或更長的時間，一般依染色液的新舊而定。取出后，直接浸入1%鹽酸酒精或酒精中進(jìn)行分化。如需復(fù)染細(xì)胞核，可染于明礬蘇木素溶液中10分鐘。沖洗后，可再以VG氏染液作對比染色1-2分鐘。95%酒精分化、脫水、透明、封固。試劑配制：鹽基性復(fù)紅（堿性品紅）2g間苯二酚（雷鎖辛）4g蒸餾水200ml30%三氯化鐵水溶液25ml95%酒精200ml濃鹽酸4ml先將鹽基性復(fù)紅（堿性品紅）溶于200ml的蒸餾水中，加入4-5g間苯二酚，加溫煮沸（不停攪拌）。然后加入25ml的30%三氯化鐵水溶液，繼續(xù)攪拌煮沸2-5分鐘，冷卻后過濾傾去濾液，將濾紙及沉淀物置于溫箱中烘干。而后將濾紙和干燥的沉淀物一并投入燒杯，加200ml95%酒精，小心隔水加熱，徐徐攪拌使沉淀溶解，然后棄去濾紙冷卻后，補(bǔ)足因加熱蒸發(fā)的酒精。最后加入4ml的鹽酸即可應(yīng)用。（對苯二酚可代替間苯二酚）?！咀⒁馐马棥縒eigert氏彈力纖維染色的配制已有許多改變，鹽基性復(fù)紅（堿性品紅）可由其它鹽基性染料取代，配制時如將結(jié)晶紫1克加鹽基性復(fù)紅1克，則彈力纖維染成蘭綠色；全用甲紫或結(jié)晶紫，彈力纖維則呈暗綠色?！救旧Y(jié)果】

彈力纖維藍(lán)黑色，膠原纖維染成紅色，肌纖維染成黃色。小動脈光鏡圖(彈性染色)應(yīng)用：1.顯示皮膚組織中彈力纖維的變化2.顯示鑒別心血管疾病3.顯示呼吸系統(tǒng)和腎臟疾病時彈力纖維的變化4.對彈力纖維瘤的診斷有決定作用四、Masson三色染色法

Masson三色染色法是由Mallory氏苯胺藍(lán)菊黃G發(fā)展改良而來，但對于固定液有一定的選擇性，雖然任何固定液固定后的組織可進(jìn)行染色，但最好是用Zenker氏固定液或Bouin氏固定液固定組織。福爾馬林固定的標(biāo)本切片在染色前以3%升汞作第二次固定一小時以上，則可增強(qiáng)著色效果。操作方法：(1)切片常規(guī)脫蠟至水，蒸餾水洗；(2)Weigent氏蘇木素液染核5分鐘；(3)自來水洗；(4)1%鹽酸分化(5)自來水洗；(6)麗春紅--酸性品紅溶液染5-8分鐘；(7)1%醋酸水溶液洗；(8)1%磷鉬酸分化（1-3分鐘）直到各種成分被染清晰（膠原纖維呈淡紅色，肌纖維、纖維素呈鮮紅色）(9)2%亮綠液染2-5分鐘（或用2%苯胺藍(lán)水溶液替代）(10)水洗（快速）(11)常規(guī)脫水、透明、封片?！救旧Y(jié)果】

膠原纖維綠色(亮綠)（或苯胺藍(lán),藍(lán)色）肌肉、纖維素紅色，紅細(xì)胞橘黃色，核藍(lán)黑色。試劑配制：1．麗春紅-品紅溶液麗春紅0.7g酸性品紅0.3—0.5g冰醋酸1ml蒸餾水99ml2．1%冰醋酸水溶液冰醋酸1ml蒸餾水99ml3．亮綠亮綠