寄生蟲學(xué)檢驗(yàn)技術(shù) 課件 第十一章寄生蟲病的實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)

第十一章寄生蟲病實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)第一節(jié)寄生蟲病原學(xué)檢查目錄第十一章寄生蟲病實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)第二節(jié)寄生蟲免疫學(xué)與分子生物學(xué)檢測第三節(jié)寄生蟲其他檢驗(yàn)技術(shù)1.掌握糞便直接涂片法、飽和鹽水浮聚法、自然沉淀法、血膜檢查法的適用范圍及技術(shù)操作；寄生蟲免疫學(xué)檢測技術(shù)的常見方法及適用范圍；顯微鏡測微尺的使用方法，寄生蟲標(biāo)本采集、固定及保存方法2.熟悉肛周檢查，血液及骨髓檢查、痰液及其他分泌物檢查等常規(guī)操作技術(shù)；免疫層析技術(shù)的方法及適用范圍；常見PCR技術(shù)和芯片技術(shù)的適用范圍。3.了解活組織檢查、原蟲的人工培養(yǎng)和動物接種檢查寄生蟲的常用方法；了解寄生蟲分子生物學(xué)檢測技術(shù)常用方法及適用范圍。4.能夠?qū)ΤＲ娂纳x病做出正確的診斷；熟悉臨床實(shí)驗(yàn)室的生物安全要求。5.具有安全防護(hù)、環(huán)境保護(hù)、遵紀(jì)守法的意識；具有團(tuán)隊(duì)協(xié)作精神和創(chuàng)新能力。學(xué)習(xí)目標(biāo)第十一章寄生蟲病實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)第十一章寄生蟲病實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)寄生蟲病原學(xué)檢查第一節(jié)第一節(jié)寄生蟲病原學(xué)檢查寄生蟲病原學(xué)檢查一、糞便檢查二、肛周檢查三、血液檢查四、痰液及分泌物檢查五、活組織檢查六、寄生蟲體外培養(yǎng)七、動物接種臨床標(biāo)本檢查包括第一節(jié)寄生蟲病原學(xué)檢查一、糞便檢查（一）直接涂片法（二）定量透明厚涂片法（改良加藤法）（三）濃集法（四）尼龍絹篩集卵法（五）幼蟲孵化法（六）淘蟲檢查法（七）帶絳蟲孕節(jié)檢查法糞便檢查方法第一節(jié)寄生蟲病原學(xué)檢查一、糞便檢查

1.蠕蟲卵檢查2.原蟲檢查

（1）滋養(yǎng)體檢查

（2）包囊碘液染色法

（3）鐵蘇木素染色法

（4）隱孢子蟲卵囊檢查（一）直接涂片法第一節(jié)寄生蟲病原學(xué)檢查一、糞便檢查

（二）定量透明厚涂片法浮聚法定量透明厚涂片法（改良加藤法）適用于各種蠕蟲卵的定性和定量分析第一節(jié)寄生蟲病原學(xué)檢查一、糞便檢查

（三）濃集法浮聚法浮聚法：1.飽和鹽水浮聚法2.硫酸鋅浮聚法3.蔗糖溶液離心浮聚法第一節(jié)寄生蟲病原學(xué)檢查一、糞便檢查

（三）濃集法浮聚法沉淀法：1.自然沉淀法2.離心沉淀法3.醛醚沉淀法4.汞碘醛沉淀法第一節(jié)寄生蟲病原學(xué)檢查一、糞便檢查沉淀法（四）尼龍絹篩集卵法尼龍絹篩集卵法主要用于濃集血吸蟲卵1.鉤蚴培養(yǎng)法2.毛蚴孵化法（五）幼蟲孵化法第一節(jié)寄生蟲病原學(xué)檢查一、糞便檢查從糞便中淘取驅(qū)除的蟲體，進(jìn)行鑒定與計數(shù)（六）淘蟲檢查法觀察并計數(shù)子宮分支情況，確定蟲種（七）帶絳蟲孕節(jié)檢查法第一節(jié)寄生蟲病原學(xué)檢查二、肛周檢查1.透明膠紙法2.棉簽拭子法肛門拭子法可從肛周檢查蟯蟲和牛帶絳蟲的孕節(jié)。肛周蟲體的檢查第一節(jié)寄生蟲病原學(xué)檢查三、血液檢查1.血液檢查瘧原蟲2.血液查微絲蚴血液檢查第一節(jié)寄生蟲病原學(xué)檢查三、血液檢查厚、薄血膜檢查法血液查瘧原蟲1.新鮮血片法2.厚血膜法3.離心濃集法4.乙胺嗪（白天誘出法）血查微絲蚴第一節(jié)寄生蟲病原學(xué)檢查四、痰液及分泌物的檢查1.痰液檢查2.尿液及鞘膜積液的檢查3.陰道分泌物的檢查4.十二指腸液及膽汁引流檢查5..腦脊液檢查痰液及分泌物檢查第一節(jié)寄生蟲病原學(xué)檢查四、痰液及分泌物的檢查1.痰液直接涂片法2.痰液消化沉淀法痰液檢查第一節(jié)寄生蟲病原學(xué)檢查四、痰液及分泌物的檢查1.尿液檢查2.鞘膜積液的檢查尿液及鞘膜積液檢查第一節(jié)寄生蟲病原學(xué)檢查四、痰液及分泌物的檢查1.直接涂片法2.涂片染色法3.懸滴法陰道分泌物的檢查第一節(jié)寄生蟲病原學(xué)檢查四、痰液及分泌物的檢查1.十二指腸液及膽汁引流法2.腸檢膠囊法十二指腸液及膽汁檢查第一節(jié)寄生蟲病原學(xué)檢查五、活組織檢查1.骨髓穿刺檢查2.淋巴結(jié)檢查3.皮膚、皮下組織及肌組織檢查4.結(jié)腸、直腸黏膜檢查活組織檢查第一節(jié)寄生蟲病原學(xué)檢查六、寄生蟲體外培養(yǎng)1.溶組織內(nèi)阿米巴2.陰道毛滴蟲3.杜氏利什曼原蟲寄生蟲體外培養(yǎng)第一節(jié)寄生蟲病原學(xué)檢查七、動物接種1.旋毛形線蟲2.弓形蟲3.杜氏利什曼原蟲動物接種第十一章寄生蟲病實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)寄生蟲免疫學(xué)與分子生物學(xué)檢驗(yàn)第二節(jié)一、免疫學(xué)檢驗(yàn)第二節(jié)寄生蟲免疫學(xué)與分子生物學(xué)檢驗(yàn)二、分子生物學(xué)檢驗(yàn)第二節(jié)寄生蟲免疫學(xué)與分子生物學(xué)檢驗(yàn)一、免疫學(xué)檢驗(yàn)（一）皮內(nèi)試驗(yàn)（二）環(huán)卵沉淀試驗(yàn)（三）染色試驗(yàn)（四）環(huán)蚴沉淀試驗(yàn)（五）凝集試驗(yàn)（六）免疫熒光抗體試驗(yàn)（七）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)免疫學(xué)檢驗(yàn)第二節(jié)寄生蟲免疫學(xué)與分子生物學(xué)檢驗(yàn)二、分子生物學(xué)檢驗(yàn)分子生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)（一）核酸分子探針（二）聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)

（三）生物芯片技術(shù)

（四）組學(xué)技術(shù)第二節(jié)寄生蟲免疫學(xué)與分子生物學(xué)檢驗(yàn)二、分子生物學(xué)檢驗(yàn)核酸探針技術(shù)核酸探針是用放射性同位素、生物素、酶或其他半抗原標(biāo)記的特定DNA或RNA片段，可分為基因組DNA探針、cDNA探針、RNA探針和人工合成的寡核苷酸探針等核酸探針技術(shù)已用于瘧原蟲、隱孢子蟲、賈第蟲、錐蟲、巴貝蟲、弓形蟲、絲蟲、血吸蟲、棘球蚴、豬帶絳蟲、肝片吸蟲和豬囊蟲等蟲種的鑒定和相應(yīng)疾病的診斷。第二節(jié)寄生蟲免疫學(xué)與分子生物學(xué)檢驗(yàn)二、分子生物學(xué)檢驗(yàn)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR是在人工合成的引物介導(dǎo)下特異性擴(kuò)增DNA的一種技術(shù)，可以選擇性在體外快速擴(kuò)增目的基因片段。第二節(jié)寄生蟲免疫學(xué)與分子生物學(xué)檢驗(yàn)二、分子生物學(xué)檢驗(yàn)生物芯片技術(shù)1.DNA芯片2.蛋白質(zhì)芯片第二節(jié)寄生蟲免疫學(xué)與分子生物學(xué)檢驗(yàn)二、分子生物學(xué)檢驗(yàn)組學(xué)技術(shù)1.基因組學(xué)2.蛋白質(zhì)組學(xué)3.轉(zhuǎn)錄組學(xué)4.代謝組學(xué)第十一章寄生蟲病實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)寄生蟲其他檢驗(yàn)技術(shù)第三節(jié)一、顯微鏡測微尺使用方法第三節(jié)寄生蟲其他檢驗(yàn)技術(shù)二、寄生蟲標(biāo)本的采集和保存三、寄生蟲檢驗(yàn)的質(zhì)量控制第三節(jié)寄生蟲其他檢驗(yàn)技術(shù)一、顯微鏡測微尺使用方法原理

采用刻有一定刻度的測微尺來測量，先用絕對長度的物鏡測微尺來校正不表示絕對長度的目鏡測微尺，計算后者每格所代表的實(shí)際長度，然后放上待測的標(biāo)本，用目鏡測微尺測定標(biāo)本上的結(jié)構(gòu)占目鏡測微尺的格數(shù)，就可計算該細(xì)胞的大小第三節(jié)寄生蟲其他檢驗(yàn)技術(shù)一、顯微鏡測微尺使用方法目鏡測微尺物鏡測微尺是一塊圓形玻片，通常是將5mm劃分為50格，實(shí)際每格等于100μm。用前必須用物鏡測微尺來標(biāo)定一塊特制的載玻片，其中央有一小圓圈。圓圈內(nèi)刻有分度，將長1mm的直線等分為100小格，每小格等于10μm第三節(jié)寄生蟲其他檢驗(yàn)技術(shù)一、顯微鏡測微尺使用方法第三節(jié)寄生蟲其他檢驗(yàn)技術(shù)一、顯微鏡測微尺使用方法目鏡測微尺校正

1.取下接目鏡，旋下目鏡上的目透鏡，將目鏡測微尺放人接目鏡的中隔板上，使有刻度一面朝下，再旋上目透鏡，并裝入鏡筒內(nèi)。2.將物鏡測微尺置于顯微鏡的載物臺上，使有刻度的一面朝上，同觀察標(biāo)本一樣，使具有刻度的小圓圈位于視野中央。3.先用低倍鏡觀察，對準(zhǔn)焦距，待看清物鏡測微尺的刻度后，轉(zhuǎn)動目鏡，使目鏡測微尺的刻度與物鏡測微尺的刻度相平行，并使兩尺的左邊第一條線相重合，再向右尋找兩尺的另外一條重合線。第三節(jié)寄生蟲其他檢驗(yàn)技術(shù)一、顯微鏡測微尺使用方法目鏡測微尺校正第三節(jié)寄生蟲其他檢驗(yàn)技術(shù)一、顯微鏡測微尺使用方法目鏡測微尺校正

4.記錄二條重合線間的目鏡測微尺的格數(shù)和物鏡測微尺的格數(shù)。如：在10×物鏡下，目鏡測微尺的10格等長于臺式測微尺的10格，即目鏡測微尺每小格的長度為10

m。一般情況下，當(dāng)目鏡為10×?xí)r，若物鏡為4×，目鏡測微尺每小格的長度為24

m；若物鏡為l0×，目鏡測微尺每小格的長度為10

m；若物鏡為40×，目鏡測微尺每小格的長度為2.5

m；若物鏡為100×，目鏡測微尺每小格的長度為1

m第三節(jié)寄生蟲其他檢驗(yàn)技術(shù)二、寄生蟲標(biāo)本的采集和保存樣本指用于標(biāo)本制作、保種、冷藏的寄生蟲不同生活史階段的蟲體材料、遺傳材料及相關(guān)的生物材料，是寄生蟲種質(zhì)資源的實(shí)物資源第三節(jié)寄生蟲其他檢驗(yàn)技術(shù)二、寄生蟲標(biāo)本的采集和保存樣本采集1.寄生蟲的形態(tài)、生活史和生態(tài)2.寄生蟲地域分布特點(diǎn)3.樣本來源4.采集時注意事項(xiàng)第三節(jié)寄生蟲其他檢驗(yàn)技術(shù)二、寄生蟲標(biāo)本的采集和保存樣本來源1.腸道、腔道內(nèi)的蠕蟲卵、原蟲滋養(yǎng)體或包囊排泄物、分泌物2.腸道內(nèi)的蠕蟲成蟲藥物驅(qū)出3.血液、骨髓內(nèi)的寄生蟲抽取血液和骨髓穿刺4.肝、肺、肌肉等組織內(nèi)的寄生蟲穿刺、活檢組織作切片5.有些難以采到的寄生蟲動物接種及人工培養(yǎng)增殖第三節(jié)寄生蟲其他檢驗(yàn)技術(shù)二、寄生蟲標(biāo)本的采集和保存采集注意事項(xiàng)

1.詳細(xì)的樣本記錄

2.保持樣本的完整

3.防止自身感染第三節(jié)寄生蟲其他檢驗(yàn)技術(shù)二、寄生蟲標(biāo)本的采集和保存常見寄生蟲標(biāo)本采集和保存1.蠕蟲樣本蠕蟲成蟲、蠕蟲蟲卵

2.原蟲樣本

滋養(yǎng)體、包囊第三節(jié)寄生蟲其他檢驗(yàn)技術(shù)二、寄生蟲標(biāo)本的采集和保存常用固定液1.甲醛具有較強(qiáng)的殺菌效果，能保存標(biāo)本免于腐爛。由于其滲透力較強(qiáng)，有硬化標(biāo)本的性能，故準(zhǔn)備切片的活檢組織多用此固定液保存2.乙醇為無色液體,具有固定、保存和硬化標(biāo)本的性能，滲透力強(qiáng)，其主要缺點(diǎn)在于吸收水分，能使標(biāo)本收縮。3.鮑恩氏(Bouin)固定液4.勞氏(Looss)固定液5.肖氏(Schaudinn)固定液第三節(jié)寄生蟲其他檢驗(yàn)技術(shù)二、寄生蟲標(biāo)本的采集和保存標(biāo)本的保存1.樣本經(jīng)固定后，視樣本的種類、大小以及固定液的種類不同，后處理的方法也不盡相同2.用任何保存液(如5%甲醛液或70%乙醇)固定后的蟲體，須在1周內(nèi)重新更換于新的保存液內(nèi)保存，換液的目的是防止藥液被稀釋而影響保存蟲體的效果3.一般固定的標(biāo)本應(yīng)保存于緊塞的瓶中，并注明標(biāo)本的來源、名稱、保存液、日期和采集人姓名，存放于陰暗處備用第三節(jié)寄生蟲其他檢驗(yàn)技術(shù)三、寄生蟲檢驗(yàn)的質(zhì)量控制質(zhì)量控制1.室間質(zhì)量評價2.室內(nèi)質(zhì)量控制第三節(jié)寄生蟲其他檢驗(yàn)技術(shù)三、寄生蟲檢驗(yàn)的質(zhì)量控制室間質(zhì)量評價室間質(zhì)量評價：是利用實(shí)驗(yàn)室間比對，按照預(yù)