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第1節(jié)重組DNA技術(shù)的基本工具題組一基因工程的概念和工具酶1.玉米的PEPC酶固定CO2的能力較水稻的強(qiáng)60倍。我國(guó)科學(xué)家正致力于將玉米的PEPC基因?qū)胨局校蕴岣咚井a(chǎn)量。下列有關(guān)該應(yīng)用技術(shù)的敘述,不正確的是()A.該技術(shù)是在DNA水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的B.該技術(shù)的操作環(huán)境是生物體內(nèi)C.該技術(shù)的原理是基因重組D.該技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)是定向產(chǎn)生人類需要的生物類型2.科學(xué)家把兔子血紅蛋白基因?qū)氪竽c桿菌細(xì)胞中,在大腸桿菌細(xì)胞中合成了兔子的血紅蛋白。下列關(guān)于這一先進(jìn)技術(shù)的理論依據(jù),不正確的是()A.所有生物共用一套遺傳密碼B.基因能控制蛋白質(zhì)的合成C.兔子血紅蛋白基因與大腸桿菌的DNA都是由四種脫氧核苷酸構(gòu)成,都遵循相同的堿基互補(bǔ)配對(duì)原則D.兔子與大腸桿菌有共同的原始祖先3.據(jù)圖所示,有關(guān)工具酶功能的敘述不正確的是()A.限制性內(nèi)切核酸酶可以切斷a處B.DNA聚合酶可以連接a處C.解旋酶可以使b處解開D.DNA連接酶可以連接c處4.限制酶和DNA連接酶是基因工程的工具酶,下列有關(guān)說(shuō)法正確的是()A.DNA連接酶能將單個(gè)核苷酸加到已有的核苷酸片段上形成磷酸二酯鍵B.限制酶只能切割雙鏈DNA片段,不能切割煙草花葉病毒的核酸C.E.coliDNA連接酶既能連接黏性末端,也能連接平末端D.限制酶主要從原核生物中分離純化而來(lái),所以也能剪切自身的DNA5.限制酶是一種核酸切割酶,可辨識(shí)并切割DNA分子上特定的脫氧核苷酸序列。如圖所示為四種限制酶BamHⅠ、EcoRⅠ、HindⅢ以及BglⅡ的識(shí)別序列,箭頭表示每一種限制酶的特定切割位點(diǎn),切割出來(lái)的DNA片段末端可以互補(bǔ)黏合的是__________(限制酶),其正確的末端互補(bǔ)序列應(yīng)該為()A.BamHⅠ和EcoRⅠ;末端互補(bǔ)序列為AATT—B.BamHⅠ和HindⅢ;末端互補(bǔ)序列為GATC—C.EcoRⅠ和HindⅢ;末端互補(bǔ)序列為AATT—D.BamHⅠ和BglⅡ;末端互補(bǔ)序列為GATC—6.(2023·江蘇南京高二期中)下列關(guān)于如圖所示黏性末端的說(shuō)法,錯(cuò)誤的是()A.DNA連接酶能催化磷酸基團(tuán)和脫氧核糖之間形成化學(xué)鍵B.甲、乙黏性末端是由不同的限制酶切割而成的C.切割甲的限制酶也能識(shí)別由甲、乙片段形成的重組DNA分子D.甲、乙黏性末端可形成重組DNA分子題組二“分子運(yùn)輸車”——載體7.質(zhì)粒是基因工程中常用的載體。下列有關(guān)質(zhì)粒的說(shuō)法,正確的是()A.質(zhì)粒上的基因表達(dá)不遵循中心法則,所以可用作外源DNA分子的載體B.具有某些標(biāo)記基因,以便為目的基因的表達(dá)提供條件C.質(zhì)粒上的抗生素合成基因可作為標(biāo)記基因D.作為外源DNA分子的載體,質(zhì)粒需具有限制酶能夠切割的位點(diǎn)8.(2023·河北秦皇島高二期末)下列有關(guān)基因工程中載體的說(shuō)法,正確的是()A.基因工程中使用的載體只有質(zhì)粒B.質(zhì)粒是細(xì)胞質(zhì)中能夠自我復(fù)制的環(huán)狀DNA分子C.噬菌體可以作為動(dòng)物基因工程的載體D.天然質(zhì)粒均可以直接作為載體將目的基因送入受體細(xì)胞9.如表列舉了幾種限制酶的識(shí)別序列及其切割位點(diǎn)(箭頭表示相關(guān)酶的切割位點(diǎn))。如圖是酶切后產(chǎn)生的幾種末端。下列有關(guān)說(shuō)法正確的是()A.BamHⅠ切割的是氫鍵,AluⅠ切割的是磷酸二酯鍵B.Sau3AⅠ和BamHⅠ切割的序列產(chǎn)生的片段能夠相連,連接后的片段還能被Sau3AⅠ切割C.DNA連接酶能連接②⑤,不能連接②④D.E.coliDNA連接酶和T4DNA連接酶都能連接①③,且連接效率低10.某線性DNA分子含有5000個(gè)堿基對(duì)(bp),先用限制酶a切割,再把得到的產(chǎn)物用限制酶b切割,得到的DNA片段大小如表。限制酶a和b的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)如圖所示。下列有關(guān)敘述不正確的是()a酶切割產(chǎn)物(bp)b酶再次切割產(chǎn)物(bp)2100;1400;1000;5001900;200;800;600;1000;500A.a酶與b酶切斷的化學(xué)鍵相同B.a(chǎn)酶與b酶切出的黏性末端能相互連接C.a(chǎn)酶與b酶切割該DNA分子位點(diǎn)分別有3個(gè)和5個(gè)D.限制酶將一個(gè)DNA分子片段切成兩個(gè)片段需消耗兩個(gè)水分子11.下列有關(guān)限制性內(nèi)切核酸酶的敘述,正確的是()A.用限制酶酶切獲得一個(gè)外源基因時(shí)得到兩個(gè)切口,有2個(gè)磷酸二酯鍵被斷開B.限制酶識(shí)別序列越短,則該序列在DNA中出現(xiàn)的概率就越大C.—CATG↓—和—G↓GATCC—序列被限制酶切出的黏性末端可用DNA連接酶連接D.只有用相同的限制酶處理含目的基因的片段和質(zhì)粒,才能形成重組質(zhì)粒12.(2023·福建泉州高二期末)如表為常用的限制性內(nèi)切核酸酶(限制酶)及其識(shí)別序列和切割位點(diǎn),由此推斷以下說(shuō)法,正確的是()限制酶名稱識(shí)別序列和切割位點(diǎn)限制酶名稱識(shí)別序列和切割位點(diǎn)BamHⅠKpnⅠEcoRⅠSau3AⅠHindⅡSmaⅠ注:Y=C或T,R=A或G。A.限制酶SmaⅠ切割后形成的末端可用E.coliDNA連接酶連接B.Sau3AⅠ限制酶的切割位點(diǎn)在識(shí)別序列的外部C.BamHⅠ和Sau3AⅠ兩種限制酶切割后形成不同的黏性末端D.一種限制酶一定只能識(shí)別一種核苷酸序列13.根據(jù)基因工程的有關(guān)知識(shí),回答下列問(wèn)題:(1)限制酶切割DNA分子后產(chǎn)生的DNA片段,其末端類型通常有________________________和__________________。(2)質(zhì)粒載體用限制酶X(識(shí)別的序列由6個(gè)核苷酸組成)切割后產(chǎn)生的片段如下:eq\b\lc\\rc\(\a\vs4\al\co1(AATTC……G,G……CTTAA))該酶識(shí)別的序列為__________________,切割的部位是________________________________。(3)為使切割后的載體與目的基因相連,含有目的基因的DNA除可用限制酶X切割外,還可用限制酶Y切割,兩種酶共同的特點(diǎn)是______________________________________________________________________________________________________________________________。(4)按其來(lái)源不同,基因工程中所使用的DNA連接酶有兩類,即________DNA連接酶和________DNA連接酶,其中后者只能連接一種末端。(5)基因工程中除質(zhì)粒外,______________和______________也可作為載體。14.(2021·全國(guó)乙,38節(jié)選)用DNA重組技術(shù)可以賦予生物以新的遺傳特性,創(chuàng)造出更符合人類需要的生物產(chǎn)品。在此過(guò)程中要使用多種工具酶,其中4種限制性內(nèi)切核酸酶的切割位點(diǎn)如圖所示。回答下列問(wèn)題:(1)常用的DNA連接酶有E.coliDNA連接酶和T4DNA連接酶,題圖中__________________酶切割后的DNA片段可以用E.coliDNA連接酶連接,題圖中________________________切割后的DNA片段可以用T4DNA連接酶連接。(2)DNA連接酶催化目的基因片段與質(zhì)粒載體片段之間形成的化學(xué)鍵是__________________。(3)DNA重組技術(shù)中所用的質(zhì)粒載體具有一些特征,如質(zhì)粒DNA分子上有復(fù)制原點(diǎn),可以保證質(zhì)粒在受體細(xì)胞中______________;質(zhì)粒DNA分子上有_____________________________,便于外源DNA的插入;質(zhì)粒DNA分子上有標(biāo)記基因(如某種抗生素抗性基因),利用抗生素可篩選出含質(zhì)粒載體的宿主細(xì)胞,方法是____________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________。
第3章基因工程第1節(jié)重組DNA技術(shù)的基本工具1.B[由題意可知,該技術(shù)為基因工程,是在生物體外進(jìn)行的操作。]2.D[題干表述的是目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞并得以表達(dá)的過(guò)程,目的基因在不同生物細(xì)胞中能夠表達(dá)出相同的蛋白質(zhì),說(shuō)明控制其合成的mRNA上的密碼子是共用的,相同的密碼子決定相同的氨基酸,A正確;基因通過(guò)轉(zhuǎn)錄獲得mRNA,進(jìn)而控制蛋白質(zhì)的合成,B正確;基因通常是有遺傳效應(yīng)的DNA片段,只要是雙鏈DNA都遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則,其組成原料都是四種脫氧核苷酸,C正確;生物之間是否有共同的原始祖先與轉(zhuǎn)基因技術(shù)之間沒(méi)有必然關(guān)系,D錯(cuò)誤。]3.D[限制酶可以切斷脫氧核苷酸之間的磷酸二酯鍵,即a處,A正確;DNA聚合酶可以連接脫氧核苷酸形成磷酸二酯鍵,即a處,B正確;解旋酶可以使氫鍵斷裂,即b處,C正確;DNA連接酶可以連接DNA片段形成磷酸二酯鍵,即a處,D錯(cuò)誤。]4.B[DNA連接酶連接的是兩個(gè)DNA片段,A錯(cuò)誤;限制酶只能切割DNA分子,煙草花葉病毒的核酸是RNA,不能切割,B正確;E.coliDNA連接酶只能連接黏性末端,不能連接平末端,C錯(cuò)誤;限制酶主要從原核生物中分離純化而來(lái),但是不會(huì)剪切自身的DNA,D錯(cuò)誤。]5.D6.C[切割甲的限制酶的識(shí)別序列是-GAATTC-,切割乙的限制酶的識(shí)別序列是-CAATTG-,所以甲、乙黏性末端是由不同的限制酶切割而成的,B正確;甲、乙片段形成的重組DNA分子的序列是-CAATTC-,而切割甲的限制酶的識(shí)別序列是-GAATTC-,所以該限制酶不能識(shí)別由甲、乙片段形成的重組DNA分子,C錯(cuò)誤。]7.D[質(zhì)粒上的基因表達(dá)遵循中心法則,A錯(cuò)誤;標(biāo)記基因是用于重組質(zhì)粒的篩選和鑒定,與目的基因的表達(dá)無(wú)關(guān),B錯(cuò)誤;質(zhì)粒上的抗生素抗性基因可作為標(biāo)記基因,用于重組質(zhì)粒的篩選和鑒定,C錯(cuò)誤。]8.B[基因工程中常用的載體是質(zhì)粒,此外還有噬菌體、動(dòng)植物病毒等,A錯(cuò)誤;噬菌體是專門寄生在細(xì)菌體內(nèi)的病毒,不可以作為動(dòng)物基因工程的載體,C錯(cuò)誤;天然質(zhì)粒往往不能直接作為載體,要根據(jù)不同的目的和需求進(jìn)行人工改造,D錯(cuò)誤。]9.B[BamHⅠ與AluⅠ切割的均是磷酸二酯鍵,A錯(cuò)誤;BamHⅠ切割,Sau3AⅠ切割,故二者切割后產(chǎn)生的黏性末端是相同的,因此二者切割后產(chǎn)生的黏性末端能夠相連,連接后能被Sau3AⅠ切割,B正確;②⑤的黏性末端相同,②④的黏性末端也相同,因此DNA連接酶能連接②⑤,也能連接②④,C錯(cuò)誤;E.coliDNA連接酶是從大腸桿菌中獲得的DNA連接酶,只能連接黏性末端,T4DNA連接酶既可以連接黏性末端也可以連接平末端,而圖中①③屬于平末端,只能用T4DNA連接酶連接,D錯(cuò)誤。]10.C[限制酶作用的化學(xué)鍵都是磷酸二酯鍵,A正確;由圖可以看出a酶和b酶切割后產(chǎn)生的黏性末端相同,它們之間能相互連接,B正確;由表格中可以看出,a酶可以把原有DNA切成4段,說(shuō)明該DNA分子上有3個(gè)切口,即a酶的切割位點(diǎn)有3個(gè);b酶把大小是2100bp的DNA切成大小分別為1900bp和200bp兩個(gè)片段,再把大小是1400bp的DNA切成大小分別為800bp和600bp兩個(gè)片段,說(shuō)明b酶在該DNA分子上有2個(gè)切口,即b酶的切割位點(diǎn)有2個(gè),C錯(cuò)誤。]11.B[用限制酶酶切獲得一個(gè)外源基因時(shí),得到兩個(gè)切口,有4個(gè)磷酸二酯鍵被斷開,A錯(cuò)誤;—CATG↓—和—G↓GATCC—序列被限制酶切出的黏性末端不同,分別為—CATG和—CTAG,因此不能用DNA連接酶連接,C錯(cuò)誤;用不同的限制酶處理含目的基因的DNA片段和質(zhì)粒,若產(chǎn)生的黏性末端相同,則也能形成重組質(zhì)粒,D錯(cuò)誤。]12.B[限制酶SmaⅠ的切割位點(diǎn)在中軸線上,切割后形成平末端,E.coliDNA連接酶只能連接黏性末端,A錯(cuò)誤;一種限制酶只能識(shí)別特定的脫氧核苷酸序列,并在特定位點(diǎn)切割DNA分子,并非只能識(shí)別一種核苷酸序列,如表格中限制酶HindⅡ識(shí)別的核苷酸序列不止一種,D錯(cuò)誤。]13.(1)黏性末端平末端(2)—GAATTC——CTTAAG—G和A之間的磷酸二酯鍵(3)兩種限制酶切割后形成的黏性末端相同(4)T4E.coli(5)噬菌體動(dòng)植物病毒解析(2)將圖中片段兩端的黏性末端對(duì)接后可以看出限制酶X識(shí)別的序列為6個(gè)核苷酸組成的—GAATTC—,互補(bǔ)鏈?zhǔn)恰狢TTAAG—,切割的位點(diǎn)為G和A之間的磷酸二酯鍵。(3)質(zhì)粒載體可以用限制酶X切割,也可以用另一種限制酶Y切割,說(shuō)明限制酶Y與限制酶X切割產(chǎn)生的黏性末端相同。(4)基因工程使用的DNA連接酶,按來(lái)源可分為E.coliDNA連接酶和T4DNA連接酶,其中只能連接黏性末端的是E.coliDNA連接酶。14.(1)EcoRⅠ、PstⅠEcoRⅠ、PstⅠ、SmaⅠ和EcoRⅤ(2)磷酸二酯鍵(3)自我復(fù)制一至多個(gè)限制酶的切割位點(diǎn)用含有該抗生素的培養(yǎng)基培養(yǎng)宿主細(xì)胞,能夠存活的即為含有質(zhì)粒載體的宿主細(xì)胞解析(1)限制酶EcoRⅠ和PstⅠ切割形成的是黏性末端,限制酶SmaⅠ和EcoRⅤ切割形成的是平末端,E.coliDNA連接酶來(lái)源于大腸桿菌,只能將雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端之間的磷酸二酯鍵連接起來(lái),
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