紫外可見分光光度計操作規(guī)程模板

紫外可見分光光度計操作規(guī)程紫外-可見分光光度計操作規(guī)程(TU1810)1．目的：制訂本標(biāo)準的目的是為規(guī)范檢驗人員在質(zhì)量檢驗過程中的操作，保證檢驗結(jié)果的正確性。2．適用范圍：本標(biāo)準適用于二廠檢驗員對產(chǎn)品質(zhì)量的檢驗。3．職責(zé)：QC檢驗員對本標(biāo)準的實施負責(zé)。4．程序：4.1簡述紫外-可見分光光度法是利用物質(zhì)分子對紫外可見光譜區(qū)的輻射的吸收來進行分析的一種儀器分析方法。這種分子吸收光譜產(chǎn)生于價電子和分子軌道上的電子在電子能級間的躍遷，它廣泛用于無機和有機物質(zhì)的定性和定量分析。朗伯一比耳定律(Lambert—Beer)是光吸收的基本定律，俗稱光吸收定律，是分光光度法定量分析的依據(jù)和基礎(chǔ)。當(dāng)入射光波長一定時，溶液的吸光度是吸光物質(zhì)的濃度及吸收介質(zhì)厚度(吸收光程)的函數(shù)。其常見表示式為，式中為系數(shù)：式中A為吸光度；￡為吸收系數(shù)；C為溶液濃度；I為光路長度。如溶液的濃度（C）為1%（g/ml），光路長度（L為1cm，相應(yīng)的吸光度即為吸收系數(shù)以E1%表示。如溶液的濃度（C）的摩爾濃度E1cm（mol/L），光路長度為1cm時，則相應(yīng)有吸收系數(shù)為摩爾吸收系數(shù)，以￡表示。4.2儀器紫外可見分光光度計是基于紫外可見分光光度法的原理工作的常規(guī)分析儀器。根據(jù)光路設(shè)計的不同，紫外可見分光光度計能夠分為單光束分光光度計、雙光束分光光度計和雙波長分光光度計。4.2.1儀器測量條件選擇測量波長的選擇一般都是選擇最強吸收帶的最大吸收波長入 max作為測量波長，稱為最大吸收原則，以獲得最高的分析靈敏度。而且在入 max附近，吸光度隨波長的變化一般較小，波長的稍許偏移引起吸光度的測量偏差較小，可得到較好的測定精密度。但在測量高濃度組分時，寧可選用靈敏度低一些的吸收峰波長（￡較?。┳鳛闇y量波長，以保證校正曲線有足夠的線性范圍。如果入max所處吸收峰太尖銳，則在滿足分析靈敏度前提下，可選用靈敏度低一些的波長進行測量，以減少比耳定律的偏差。適宜吸光度范圍的選擇任何光度計都有一定的測量誤差，這是由于測量過程中光源的不穩(wěn)定、讀數(shù)的不準確或?qū)嶒灄l件的偶然變動等因素造成的。由于吸收定律中透射比T與濃度C是負對數(shù)的關(guān)系，從負對數(shù)的關(guān)系曲線能夠看出，相同的透射比讀數(shù)誤差在不同的濃度范圍中，所引起的濃度相對誤差不同，當(dāng)濃度較大或濃度較小時，相對誤差都比較大。因此，要選擇適宜的吸光度范圍進行測量，以降低測定結(jié)果的相對誤差。在實際工作中，可經(jīng)過調(diào)節(jié)待測溶液的濃度或選用適當(dāng)厚度的吸收池的方法，使測得的吸光度落在所要求的范圍內(nèi)。儀器狹縫寬度的選擇狹縫的寬度會直接影響到測定的靈敏度和校準曲線的線性范圍。狹縫寬度過大時，入射光的單色光降低，校準曲線偏離比耳定律，靈敏度降低；狹縫寬度過窄時，光強變?nèi)?，勢必要提高儀器的增益，隨之而來的是儀器噪聲增大，于測量不利。選擇狹縫寬度的方法是：測量吸光度隨狹縫寬度的變化。狹縫的寬度在一個范圍內(nèi)，吸光度是不變的，當(dāng)狹縫寬度大到某一程度時，吸光度開始減小。因此，在不減小吸光度時的最大狹縫寬度，即是所欲選取的合適的狹縫寬度。4.3紫外-可見分光光度計的檢定4.3.1波長示值誤差與重復(fù)性儀器波長示值誤差指標(biāo)為士0.3nm，波長重復(fù)性指標(biāo)為0.2nm，您能夠用儀器氘燈的兩條特征譜線檢驗，具體檢驗方法如下：確認儀器光譜寬帶為“2.0nm”。開機初始化完成后，按數(shù)字5鍵進入系統(tǒng)應(yīng)用界面，在系統(tǒng)應(yīng)用界面中按數(shù)字鍵2強狹縫設(shè)定為“2.0nm”。在系統(tǒng)應(yīng)用界面按RETURN鍵返回儀器主界面，按2鍵選擇光譜測量功能。按F1鍵選擇參數(shù)設(shè)定功能，按相應(yīng)數(shù)字鍵設(shè)定采樣間隔為0.2nm、掃描速度為 中速、波長范圍為660nm~48Onm、縱坐標(biāo)范圍0-100、測光方式Es、光源選擇氘燈按RETURN?返回光譜掃描界面。按START/ST0鍵并輸入增益值為6,按ENTERS確認，開始掃描。掃描結(jié)束后，按F2鍵并輸入閾值（1~100）后，按ENTERS進行峰值檢出（如果檢出峰波長為0.000nm，則需要按鍵返回，然后重新按F2鍵輸入比前次輸入小的數(shù)值作為閾值，重新進行峰值檢出）⑦按F4鍵打印輸出重復(fù)掃描三次，并做峰值檢出，氘燈的兩個峰標(biāo)準值為 656.1nm和486.0nm。4.3.2基線平直度樣品池中不放任何遮擋物,以空氣為空白進行測量,用波長掃描功能測量全波段的吸光度值,其具體測量方法如下首先確認儀器光譜寬帶為2.0nm在儀器主界面俺2鍵選擇光譜測量模式按F1鍵進入?yún)?shù)設(shè)置界面，按相應(yīng)的數(shù)字鍵設(shè)置測光方式Abs、采樣間隔為1nm、掃描速度為中速、波長范圍為1100~190nm、縱坐標(biāo)范圍為-0.01Abs~.0.01Abs④按RETURN鍵，返回光譜測量主界面，按AUTOZER（鍵進行基線校正。⑤按START/ST0鍵進行掃描⑥按F4鍵打印輸出讀取曲線的吸光度值，在1090nm~200nm波長，測量掃描圖譜中起始點與最大偏移之差即為儀器的基線平直度。分光光度法允差范圍波長（nm）吸收強度1%吸收系數(shù)（E1cm）允差范圍235最小124.5123.0~126.0257最大144.0142.8~146.2 「313最小48.6247.0~50.3350最大106.6105.5~108.5可按下表所列的試劑和濃度，配制成水溶液，置 1cm石英池中，在規(guī)定的波長處測定透光率，應(yīng)符合下表中規(guī)定。試劑濃度（%，g/ml）測定用波長（nm）透光率（%）碘化鈉1.00220<0.8亞硝酸鈉5.00340<0.8合規(guī)定4.4.1計算分光光度法按《中國藥典》規(guī)定，計算分光光度法一般不宜用于含量測定，對于少數(shù)采用計算分光光度法的品種，應(yīng)嚴格按各品種項下規(guī)定的方法進行。用本法時應(yīng)注意：有一些吸光度是在待測成分吸收曲線的上升或下降陡坡處測定，影響精度的因素較多，故應(yīng)仔細操作，盡量使供試品和對照品的測定條件一致。若該品種不用對照品，如維生素 A測定，則應(yīng)在測定前對儀器作仔細的校正和檢定。4.4.2比色法供試品本身在紫外-可見光區(qū)沒有強吸收，或在紫外光區(qū)雖有吸收但為了避免干擾或提高靈敏度，加入適當(dāng)?shù)娘@色劑，使反應(yīng)產(chǎn)物的最大吸收移至可見光區(qū)。用比色法測定時，由于顯色是影響顯色深淺的因素較多，應(yīng)取供試品與對照品或標(biāo)準品同時操作。除另有規(guī)定外，比色法所用的空白系指用同體積的溶劑代替對照品或供試品溶液，然后依次加入等量的相應(yīng)試劑，并用同樣方法處理。當(dāng)吸光度和濃度關(guān)系不呈良好線性時，應(yīng)取數(shù)份梯度量對照品溶液，用溶劑補充至同一體積，顯色后測定各份溶液的吸光度，然后以吸光度與相應(yīng)的濃度繪制標(biāo)準曲線，再根據(jù)供試品的吸光度在標(biāo)準曲線上查得其相應(yīng)的濃度，并求出其含量。4.5注意事項4.5.1試驗中所用的量瓶和移液管均應(yīng)經(jīng)檢定校正、洗凈后使用。4.5.2使用的石英吸收池必須潔凈。當(dāng)吸收池中裝入同一溶劑，在規(guī)定波長測定各吸收池的透光率，如透光率相差在0.3%以下者可配對使用，否則必須加以校正。4.5.3取吸收池時，手指拿毛玻璃面的兩側(cè)。裝樣品溶液的體積以池體積的4/5為度，使用揮發(fā)性溶液時應(yīng)加蓋，透光面要用擦鏡紙由上而下擦拭干凈，檢視應(yīng)無殘留溶劑，為防止溶劑揮發(fā)后溶質(zhì)殘留在池子的透光面，可先用醮有空白溶劑的擦鏡紙擦拭，然后再用干擦鏡紙拭凈。吸收池放人樣品室時應(yīng)注意每次放入方向相同。使用后用溶劑及水沖洗干凈，晾干，防塵保存，吸收池如污染不易洗凈時可用硫酸發(fā)文檔僅供參考煙硝酸（3:1v/v）混合液稍加浸泡后，洗凈備用。如用鉻酸鉀清潔液清洗時，吸收池不宜在清潔液中長時間浸泡，否則清潔液中的鉻酸鉀結(jié)晶會損壞吸收池的光學(xué)表面，并應(yīng)充分用水沖洗，以防鉻酸鉀吸附于吸收池表面。4.5.4含有雜原子的有機溶劑，一般均具有很強的末瑞吸收。因此，當(dāng)作溶劑使用時，它們的范圍均不能小于截止使用波長。例如甲醇、乙醇的截止使用波長為205nm。另外，當(dāng)溶劑不純時，也可能增加干擾吸收。因此，在檢查所用的溶劑在供試品所用的波長附近是否符合要求，即將溶劑置1cm石英吸收池中，以空氣為空白（即空白光路中不置任何物質(zhì)）測定吸光度，溶劑和吸收池的吸光度應(yīng)符合下表規(guī)定。以空氣為空白測定溶劑在不同波長處的吸光度的規(guī)定波長范圍（nm）220~240241~250251~300300以上吸光度<0.40<0.20<0.10<0.05每次測定時應(yīng)采用同一廠牌批號，混合均勻的同批溶劑。4.5.5稱量應(yīng)按藥典規(guī)定要求。配制測定溶液時稀釋轉(zhuǎn)移次數(shù)應(yīng)盡可能少，轉(zhuǎn)移稀釋時所取容積一般應(yīng)不少于 5ml。含量測定時供試品應(yīng)稱取2