微生物的培養(yǎng)2

微生物的培養(yǎng)1、培養(yǎng)基可以分為哪兩類？2、培養(yǎng)基一般都含有哪些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，此外還要滿足哪些要求？3、獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是什么？4、避免雜菌污染的方法主要包括哪四個(gè)方面5、什么是消毒、滅菌，常用方法有哪些？6、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的方法步驟7、如何倒平板？㈠.微生物的類群微生物原核類:真核類非細(xì)胞類：細(xì)菌、支原體、放線菌、藍(lán)藻個(gè)體微小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單酵母菌、霉菌、食用菌真菌：原生生物：顯微藻類、原生生物（如：草履蟲(chóng)、變形蟲(chóng)等）病毒、類病毒、朊病毒◆微生物的共同特點(diǎn)：一.微生物基礎(chǔ)知識(shí)1.細(xì)菌的形態(tài)細(xì)菌主要是以二分裂的方式進(jìn)行增殖（如右圖）2.細(xì)菌的繁殖3.細(xì)菌的菌落⑴.定義：?jiǎn)蝹€(gè)或者少數(shù)細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上大量繁殖時(shí)，會(huì)形成一個(gè)肉眼可見(jiàn)的、具有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體，叫做菌落。⑵.特征：大小、形狀、光澤度、顏色、硬度、透明度等。⑶.功能：每種細(xì)菌在一定條件下所形成的菌落，可以作為菌種鑒定的重要依據(jù)。幾種菌落及其形態(tài)幾種菌落及其形態(tài)4.病毒的結(jié)構(gòu):由核酸和蛋白質(zhì)構(gòu)成。病毒的結(jié)構(gòu)吸附注入合成釋放組裝5.病毒的繁殖病毒的增殖一般可分五個(gè)階段，即：吸附→注入核酸→合成核酸和蛋白質(zhì)→組裝→釋放6.病毒的營(yíng)養(yǎng)方式：寄生微生物需要的五大類營(yíng)養(yǎng)要素物質(zhì)是：㈡.微生物需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及功能1.碳源2.氮源3.生長(zhǎng)因子4.無(wú)機(jī)鹽5.水：凡是能為微生物提供所需碳元素的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。①無(wú)機(jī)碳源：CO2；NaHCO3等②有機(jī)碳源：糖類、脂肪酸、花生粉餅、石油等①構(gòu)成細(xì)胞物質(zhì)和一些代謝產(chǎn)物②異養(yǎng)微生物的能源⑴.概念⑵.來(lái)源：⑶.作用：1.微生物的碳源2d后觀察平板，無(wú)雜菌污染才可用來(lái)接種。化能有機(jī)營(yíng)養(yǎng)(化能異養(yǎng)型)以化學(xué)試劑或物理方法消滅所有微生物，包括所有細(xì)菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而達(dá)到完全無(wú)菌之過(guò)程。①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。分離酵母菌、霉菌等真菌細(xì)菌主要是以二分裂的方式進(jìn)行增殖（如右圖）6、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的方法步驟是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致的觀察與記錄6、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的方法步驟為了防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣通過(guò)，而空氣中的其他微生物不能通過(guò)。消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別常用的消毒與滅菌的方法微生物的接種的常用接種方法有：光能無(wú)機(jī)營(yíng)養(yǎng)(光能自養(yǎng)型)凡是能夠?yàn)槲⑸锾峁㎞元素的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。①無(wú)機(jī)氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等。②有機(jī)氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等凡是能夠?yàn)槲⑸锾峁㎞元素的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。主要用于合成蛋白質(zhì)、核酸及含N的代謝產(chǎn)物。2.微生物的氮源⑴.概念：⑵.來(lái)源：⑶.作用：3.生長(zhǎng)因子⑶.常見(jiàn)的生長(zhǎng)因子：⑴.概念：⑵.作用：微生物生長(zhǎng)不可缺少的微量有機(jī)物。酶和核酸的組成成分。維生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。㈢.培養(yǎng)基培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）是由人工方法配制而成的，專供微生物生長(zhǎng)繁殖使用的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。1.培養(yǎng)基的類型和用途2.不同的微生物往往需要采用不同的培養(yǎng)基配方(參考教材附錄內(nèi)容)3.不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),例如:生長(zhǎng)因子(即細(xì)菌生長(zhǎng)必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。劃分標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)基種類特點(diǎn)用途物理性質(zhì)化學(xué)成分天然培養(yǎng)基合成培養(yǎng)基用途鑒別培養(yǎng)基培養(yǎng)基的種類不加凝固劑加凝固劑，如瓊脂工業(yè)生產(chǎn)觀察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類鑒定微生物分離、鑒定、活菌計(jì)數(shù)、保藏菌種含化學(xué)成分不明確的天然物質(zhì)工業(yè)生產(chǎn)培養(yǎng)基成分明確分類、鑒定在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì),以抑制不需要的微生物的生長(zhǎng),促進(jìn)所需要的微生物的生長(zhǎng)培養(yǎng)、分離出特定微生物在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品,用以鑒別不同種類的微生物鑒別不同種類微生物選擇培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基：表面生長(zhǎng)均勻混濁生長(zhǎng)沉淀生長(zhǎng)back半固體培養(yǎng)基：(是否運(yùn)動(dòng))

無(wú)動(dòng)力有動(dòng)力(彌散)固體培養(yǎng)基：菌落一旦劃破，會(huì)造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；1、培養(yǎng)基可以分為哪兩類？5、什么是消毒、滅菌，常用方法有哪些？微生物的接種的常用接種方法有：如果培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說(shuō)明接種操作是符合要求的；不管哪種培養(yǎng)基，一般都含有水、碳源、氮源、無(wú)機(jī)鹽、等營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，另外還需要滿足微生物生長(zhǎng)對(duì)pH、特殊營(yíng)養(yǎng)物質(zhì),例如:生長(zhǎng)因子(即細(xì)菌生長(zhǎng)必需，而自身不能合成的化合物,如維生素、某些氨基酸、嘌呤、嘧啶)以及氧氣、二氧化碳、滲透壓等的要求。微生物需要的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)及功能6、制備牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基的方法步驟4、避免雜菌污染的方法主要包括哪四個(gè)方面微生物需要的五大類營(yíng)養(yǎng)要素物質(zhì)是：：凡是能為微生物提供所需碳元素的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。③高壓蒸氣滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.平板劃線法和稀釋涂布平板法。以化學(xué)試劑或物理方法消滅所有微生物，包括所有細(xì)菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而達(dá)到完全無(wú)菌之過(guò)程。凡是能夠?yàn)槲⑸锾峁㎞元素的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。分離導(dǎo)入了目的基因的受體細(xì)胞幾種選擇培養(yǎng)基加入青霉素的培養(yǎng)基分離酵母菌、霉菌等真菌不加氮源的無(wú)氮培養(yǎng)基分離固氮菌不加含碳有機(jī)物的無(wú)碳培養(yǎng)基分離自養(yǎng)型微生物加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基back血清中含有：①多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋白、鐵蛋白等）②多種金屬離子；③激素；④促貼附物質(zhì)，如纖粘蛋白、冷析球蛋白、膠原等。⑤各種生長(zhǎng)因子⑥轉(zhuǎn)移蛋白⑦不明成分人工合成培養(yǎng)基只能維持細(xì)胞生存，要想使細(xì)胞生長(zhǎng)和繁殖，還需補(bǔ)充一定量的天然培養(yǎng)基（如血清）。㈣.無(wú)菌技術(shù)1.無(wú)菌技術(shù)的概念無(wú)菌操作泛指在培養(yǎng)微生物的操作中，所有防止雜菌污染的方法。⑴消毒定義：利用化學(xué)或物理方法，殺死部份微生物的過(guò)程。2.消毒與滅菌的概念及兩者的區(qū)別⑵滅菌的定義：以化學(xué)試劑或物理方法消滅所有微生物，包括所有細(xì)菌的繁殖體、芽孢、霉菌及病毒，而達(dá)到完全無(wú)菌之過(guò)程。滅菌與消毒技術(shù)是微生物有關(guān)工作中最普通也是最重要的技術(shù)。①煮沸消毒法：100℃煮沸5-6min。②巴氏消毒法：70-75℃下煮30min或80℃下煮15min。③化學(xué)藥劑消毒法：用75%酒精、新潔爾滅等進(jìn)行皮膚消毒；氯氣消毒水源。④紫外線消毒。⑴.消毒的方法：3.常用的消毒與滅菌的方法常用的消毒與滅菌的方法接種操作是否符合無(wú)菌要求①多種蛋白質(zhì)（白蛋白、球蛋白、鐵蛋白等）為了防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣通過(guò)，而空氣中的其他微生物不能通過(guò)。顯微藻類、原生生物（如：草履蟲(chóng)、變形蟲(chóng)等）一旦劃破，會(huì)造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；微生物生長(zhǎng)不可缺少的微量有機(jī)物。平板劃線法和稀釋涂布平板法。利用化學(xué)或物理方法，殺死部份微生物的過(guò)程。微生物生長(zhǎng)不可缺少的微量有機(jī)物。2、培養(yǎng)基一般都含有哪些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，此外:由核酸和蛋白質(zhì)構(gòu)成。利用化學(xué)或物理方法，殺死部份微生物的過(guò)程。微生物需要的五大類營(yíng)養(yǎng)要素物質(zhì)是：凡是能夠?yàn)槲⑸锾峁㎞元素的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。①灼燒滅菌②干熱滅菌：160-170℃下加熱1-2h。③高壓蒸氣滅菌：100kPa、121℃下維持15-30min.⑵.滅菌的方法：最常用的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌，它可以殺滅所有的生物，包括最耐熱的某些微生物的休眠體，同時(shí)可以基本保持培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分不被破壞。有些玻璃器皿也可采用高溫干熱滅菌。為了防止雜菌，特別是空氣中的雜菌污染，試管及玻璃燒瓶都需采用適宜的塞子塞口，通常采用棉花塞，也可采用各種金屬、塑料及硅膠帽，它們只可讓空氣通過(guò)，而空氣中的其他微生物不能通過(guò)。而平皿是由正反兩平面板互扣而成，這種器具是專為防止空氣中微生物的污染而設(shè)計(jì)的。二.實(shí)驗(yàn)操作(以培養(yǎng)大腸桿菌為例)㈠.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基1.計(jì)算2.稱量3.溶化4.滅菌:將錐形瓶放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121℃，滅菌15～30min。5.倒平板:待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時(shí)，在酒精燈附近倒平板。2d后觀察平板，無(wú)雜菌污染才可用來(lái)接種。倒平板操作㈡.純化大腸桿菌平板劃線法和稀釋涂布平板法。微生物的接種的常用接種方法有：1.平板劃線的操作方法平板劃線的操作一旦劃破，會(huì)造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；二是存留在劃破處的單個(gè)細(xì)胞無(wú)法形成規(guī)則的菌落，菌落會(huì)沿著劃破處生長(zhǎng)，會(huì)形成一個(gè)條狀的菌落。2.稀釋涂布平板的操作方法4.菌種的保存接種到固體斜面培養(yǎng)基，菌落長(zhǎng)成后置于4℃冰箱保存。3.微生物的恒溫培養(yǎng)⑵.長(zhǎng)期保存：甘油冷凍管藏法⑴.臨時(shí)保藏：三.結(jié)果分析與評(píng)價(jià)㈠.培養(yǎng)基的制作是否合格如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2d后無(wú)菌落生長(zhǎng)，說(shuō)明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。㈡.接種操作是否符合無(wú)菌要求如果培養(yǎng)基上生長(zhǎng)的菌落的顏色、形狀、大小基本一致，并符合大腸桿菌菌落的特點(diǎn)，則說(shuō)明接種操作是符合要求的；如果培養(yǎng)基上出現(xiàn)了其他菌落，則說(shuō)明接種過(guò)程中，無(wú)菌操作還未達(dá)到要求，需要分析原因，再次練習(xí)。㈢.是否進(jìn)行了及時(shí)細(xì)致的觀察與記錄培養(yǎng)12h與24h后的大腸桿菌菌落的大小會(huì)有明顯不同，及時(shí)觀