分析方法驗(yàn)證醫(yī)學(xué)課件

分析方法驗(yàn)證醫(yī)學(xué)課件分析方法驗(yàn)證醫(yī)學(xué)課件分析方法驗(yàn)證醫(yī)學(xué)課件藥品的生產(chǎn)過(guò)程中，原料、中間品、成品均需進(jìn)行檢驗(yàn)，檢驗(yàn)結(jié)果既是過(guò)程受控的依據(jù)，也是評(píng)價(jià)產(chǎn)品質(zhì)量的重要依據(jù)，檢驗(yàn)結(jié)果應(yīng)具有準(zhǔn)確可靠。而分析方法的驗(yàn)證為檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確及可靠提供了有力保障。分析方法驗(yàn)證系指確保某項(xiàng)分析方法得出的結(jié)果可以持續(xù)地準(zhǔn)確反映所測(cè)產(chǎn)品特性的書(shū)面證明。通常分析方法的驗(yàn)證可分為藥典或注冊(cè)分析方法的確認(rèn)和非藥典或注冊(cè)分析方法的驗(yàn)證。2主要內(nèi)容法規(guī)要求驗(yàn)證要求驗(yàn)證內(nèi)容方法確認(rèn)方法再驗(yàn)證參考資料3法規(guī)要求中國(guó)GMP(2010)、中國(guó)藥典非常關(guān)注驗(yàn)證的過(guò)程,分析方法驗(yàn)證不完善是常見(jiàn)的問(wèn)題。–藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中分析方法必須驗(yàn)證–藥物生產(chǎn)工藝變更、制劑的組分變更、原分析方法進(jìn)行修訂時(shí)，則質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)分析方法必須進(jìn)行驗(yàn)證。4法規(guī)要求?EUGMPVolume4–Analyticalmethodshallbevalidated,alltestingoperationsdescribedinthemarketingauthorisationshouldbecarriedoutaccordingtotheapprovedmethod.5法規(guī)要求?FDAcGMP[21CFR211.]–Testmethod,whichareusedforassessingcomplianceofpharmaceuticalarticleswithestablishedspecifications,mustmeetproperstandardsofaccuracyandreliability.6法規(guī)要求第十二條質(zhì)量控制的基本要求：（四）檢驗(yàn)方法應(yīng)當(dāng)經(jīng)過(guò)驗(yàn)證或確認(rèn)；7法規(guī)要求第二百二十三條物料和不同生產(chǎn)階段產(chǎn)品的檢驗(yàn)應(yīng)當(dāng)至少符合以下要求：（二）符合下列情形之一的，應(yīng)當(dāng)對(duì)檢驗(yàn)方法進(jìn)行驗(yàn)證：1.采用新的檢驗(yàn)方法；2.檢驗(yàn)方法需變更的；3.采用《中華人民共和國(guó)藥典》及其他法定標(biāo)準(zhǔn)未收載的檢驗(yàn)方法；4.法規(guī)規(guī)定的其他需要驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法。8法規(guī)要求（三）對(duì)不需要進(jìn)行驗(yàn)證的檢驗(yàn)方法，企業(yè)應(yīng)當(dāng)對(duì)檢驗(yàn)方法進(jìn)行確認(rèn)，以確保檢驗(yàn)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、可靠；9法規(guī)要求2010版藥典中分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則(附錄XIXA)只規(guī)定了項(xiàng)目和基本方法而沒(méi)有合格標(biāo)準(zhǔn),ICH和USP類似10法規(guī)要求ICHQ2(R1)：ValidationofanalyticalProcedures:TextandMethodology--2005/11ICHQ2A：TextonValidationofAnalyticalProcedure(ParentGuideline)--1994/10ICHQ2B:ValidationofAnalyticalProcedures:Methodology(DevelopedtocomplementtheParentguideline)--1996/1111法規(guī)要求USP<1225>ValidationofCompendialProcedures?EuropeanDirectoratefortheQualityofMedicines&HealthCare[PA/PH/OMCL(05)47DEF]ValidationofAnalyticalProcedures–2005/0612法規(guī)要求藥典或官方標(biāo)準(zhǔn)收載的方法－不需完整驗(yàn)證－需驗(yàn)證方法的適用性（確認(rèn)）自研方法或?qū)俜綐?biāo)準(zhǔn)進(jìn)行了大幅調(diào)整－需完整驗(yàn)證13問(wèn)題一新版GMP中規(guī)定哪些情況下必須做方法驗(yàn)證？14驗(yàn)證要求目的：證明采用的方法適合于相應(yīng)的檢測(cè)要求。15驗(yàn)證要求前提條件：①儀器：儀器已經(jīng)過(guò)驗(yàn)證和校正且在有效期內(nèi)；②人員：人員應(yīng)經(jīng)過(guò)充分培訓(xùn)，熟悉方法及所使用的儀器；③物料：所用的物料，包括標(biāo)準(zhǔn)品、試劑、實(shí)驗(yàn)用容器等，均應(yīng)符合試驗(yàn)要求，不能帶入污染、誤差。如進(jìn)行高效液相色譜分析時(shí)，所用試劑應(yīng)為色譜級(jí)16驗(yàn)證要求前提條件：④方法：該分析方法的開(kāi)發(fā)和優(yōu)化已經(jīng)成功完成；⑤環(huán)境：試驗(yàn)環(huán)境符合該分析方法的要求，例如：有些分析方法可能對(duì)溫濕度敏感。17驗(yàn)證要求原則：原則上每個(gè)檢測(cè)項(xiàng)目采用的分析方法，均需要進(jìn)行方法驗(yàn)證。方法驗(yàn)證的內(nèi)容應(yīng)根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目的要求，結(jié)合所采用分析方法的特點(diǎn)確定。。18驗(yàn)證要求原則：同一分析方法用于不同的檢測(cè)項(xiàng)目會(huì)有不同的驗(yàn)證要求。例如，采用高效液相色譜法用于制劑的鑒別和雜質(zhì)定量試驗(yàn)應(yīng)進(jìn)行不同要求的方法驗(yàn)證，前者重點(diǎn)要求驗(yàn)證專屬性，而后者重點(diǎn)要求驗(yàn)證專屬性、準(zhǔn)確度、定量限等驗(yàn)證項(xiàng)目。19驗(yàn)證要求主要方面：（一）需要驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目檢測(cè)項(xiàng)目是為控制藥品質(zhì)量，保證安全有效而設(shè)定的測(cè)試項(xiàng)目。根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目的設(shè)定目的和驗(yàn)證內(nèi)容的不同要求，通常將需驗(yàn)證的檢測(cè)項(xiàng)目分為鑒別、雜質(zhì)檢查（限度試驗(yàn)、定量試驗(yàn)）、定量測(cè)定（含量測(cè)定、溶出度、釋放度等）、其他特定檢測(cè)項(xiàng)目等四類。20驗(yàn)證要求主要方面：（二）分析方法分析方法是為完成上述各檢測(cè)項(xiàng)目而設(shè)定和建立的測(cè)試方法，一般包括分析方法原理、儀器及儀器參數(shù)、試劑、系統(tǒng)適用性試驗(yàn)、供試品溶液制備、對(duì)照品溶液制備、測(cè)定、計(jì)算及測(cè)試結(jié)果的報(bào)告等。21驗(yàn)證要求主要方面：（三）驗(yàn)證內(nèi)容驗(yàn)證內(nèi)容通常包括方法的專屬性、線性、范圍、準(zhǔn)確度、精密度、檢測(cè)限、定量限和耐用性。22問(wèn)題2通常需要驗(yàn)證的項(xiàng)目有哪些？23驗(yàn)證內(nèi)容注：—表示通常不需論證的項(xiàng)目；+表示通常需論證的項(xiàng)目；

①假如已論證重現(xiàn)性，可不需再論證中間精密度；②缺乏專屬性的分析方法，應(yīng)由其他分析方法來(lái)作補(bǔ)充；③有些情況不需要。

2425驗(yàn)證內(nèi)容-系統(tǒng)適用性系統(tǒng)適用性試驗(yàn)是許多分析方法的組成部分，這些試驗(yàn)的基本概念是要把由分析設(shè)備、電子儀器、實(shí)驗(yàn)操作和被分析樣品所組成的完整系統(tǒng)進(jìn)行整體評(píng)估。對(duì)于特定方法的系統(tǒng)適用性參數(shù)的建立依賴于被驗(yàn)證方法的類型。?

常見(jiàn)的考察參數(shù)有：理論塔板數(shù)、分離度、容量因子、拖尾因子、峰純度等。?

除藥典另有規(guī)定外，液相色譜的內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)為：N≥2000，R≥1.5，T≤1.5；氣相色譜的內(nèi)部標(biāo)準(zhǔn)為：N≥5000，R≥1.5。26驗(yàn)證內(nèi)容-系統(tǒng)適用性27驗(yàn)證內(nèi)容-專屬性指有其他成分（雜質(zhì)、降解物、輔料等）可能存在情況下采用的方法能準(zhǔn)確測(cè)定出被測(cè)物的特性，能反映該方法在有共存物時(shí)對(duì)供試物準(zhǔn)確而專屬的測(cè)定能力，是指該法用于復(fù)雜樣品分析時(shí)是否受到相互干擾程度的度量。通常，鑒別、雜質(zhì)檢查、含量測(cè)定方法中均應(yīng)考察其專屬性。如采用的方法不夠?qū)伲瑧?yīng)采用多個(gè)方法予以補(bǔ)充。28驗(yàn)證內(nèi)容-專屬性1、鑒別反應(yīng)鑒別試驗(yàn)應(yīng)確證被分析物符合其特征。專屬性試驗(yàn)要求證明能與可能共存的物質(zhì)或結(jié)構(gòu)相似化合物區(qū)分，需確證含被分析物的供試品呈正反應(yīng)，而不含被測(cè)成分的陰性對(duì)照呈負(fù)反應(yīng)，結(jié)構(gòu)相似或組分中的有關(guān)化合物也應(yīng)呈負(fù)反應(yīng)。29驗(yàn)證內(nèi)容-專屬性2、雜質(zhì)檢查作為純度檢查，所采用的分析方法應(yīng)確?？蓹z出被分析物中雜質(zhì)的含量，如有關(guān)物質(zhì)、重金屬、有機(jī)溶劑等。因此雜質(zhì)檢查要求分析方法有一定的專屬性。在雜質(zhì)可獲得的情況下，可向供試品中加入一定量的雜質(zhì)，證明雜質(zhì)與共存物質(zhì)能得到分離和檢出，并具適當(dāng)?shù)臏?zhǔn)確度與精密度。驗(yàn)證內(nèi)容-專屬性2、雜質(zhì)檢查在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，專屬性可通過(guò)與另一種已證明合理但分離或檢測(cè)原理不同、或具較強(qiáng)分辨能力的方法進(jìn)行結(jié)果比較來(lái)確定?；?qū)⒐┰嚻酚脧?qiáng)光照射，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化的方法進(jìn)行破壞（制劑應(yīng)考慮輔料的影響），比較破壞前后檢出的雜質(zhì)個(gè)數(shù)和量。必要時(shí)可采用二極管陣列檢測(cè)和質(zhì)譜檢測(cè)，進(jìn)行色譜峰純度檢查。30驗(yàn)證內(nèi)容-專屬性3、含量測(cè)定含量測(cè)定目的是得到供試品中被分析物的含量或效價(jià)的準(zhǔn)確結(jié)果。在雜質(zhì)可獲得的情況下，對(duì)于主成分含量測(cè)定可在供試品中加入雜質(zhì)或輔料，考察測(cè)定結(jié)果是否受干擾，并與未加雜質(zhì)和輔料的供試品比較測(cè)定結(jié)果。在雜質(zhì)或降解產(chǎn)物不能獲得的情況下，可采用另一個(gè)經(jīng)驗(yàn)證了的或藥典方法進(jìn)行比較，對(duì)比兩種方法測(cè)定的結(jié)果。也可采用破壞性試驗(yàn)（強(qiáng)光照射，高溫，高濕，酸、堿水解及氧化），得到含有雜質(zhì)或降解產(chǎn)物的試樣，用兩種方法進(jìn)行含量測(cè)定，比較測(cè)定結(jié)果。必要時(shí)進(jìn)行色譜峰純度檢查，證明含量測(cè)定成份的色譜峰中不包含其他成份。3132驗(yàn)證內(nèi)容-專屬性可接受標(biāo)準(zhǔn)1.應(yīng)當(dāng)證明潛在的干擾成分不會(huì)對(duì)方法的性能產(chǎn)生負(fù)作用。對(duì)于層析分離方法，要求證實(shí)雜質(zhì)之間﹑雜質(zhì)與主峰之間的選擇性；分辨率≥1.5，如果證明確實(shí)可行，某些情況下分辨率低于1.2也可以接受。2.空白對(duì)照應(yīng)無(wú)干擾。33驗(yàn)證內(nèi)容-專屬性34驗(yàn)證內(nèi)容-準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度系指用該方法測(cè)定的結(jié)果與真實(shí)值或參考值接近的程度，一般以回收率%表示。準(zhǔn)確度為定量測(cè)定的必要條件，因此涉及到定量測(cè)定的檢測(cè)項(xiàng)目均需要驗(yàn)證其準(zhǔn)確度，如雜質(zhì)定量檢查、含量和溶出方法，分析方法的準(zhǔn)確度能夠確保：①樣品中的待測(cè)物全部溶解；②待測(cè)物全部從檢測(cè)器中檢出。

35驗(yàn)證內(nèi)容-準(zhǔn)確度準(zhǔn)確度的測(cè)定至少選取包括標(biāo)準(zhǔn)濃度在內(nèi)的至少3個(gè)濃度級(jí)別（通常選取80％、100％和120％），每個(gè)濃度級(jí)別至少測(cè)定3次，計(jì)算測(cè)定結(jié)果的回收率。

36驗(yàn)證內(nèi)容-準(zhǔn)確度原料藥1.可用已知純度的對(duì)照品或符合要求的原料藥進(jìn)行測(cè)定；2.用本法所得結(jié)果與已建立準(zhǔn)確度的另一方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較。37驗(yàn)證內(nèi)容-準(zhǔn)確度制劑1.用含已知量被測(cè)物的各組分混合物進(jìn)行測(cè)定；2.如不能得到制劑的全部組分，可向制劑中加入已知量的被測(cè)物進(jìn)行測(cè)定（加樣回收試驗(yàn)法）；3.用本法所得結(jié)果與已建立準(zhǔn)確度的另一方法測(cè)定的結(jié)果進(jìn)行比較。38驗(yàn)證內(nèi)容-準(zhǔn)確度雜質(zhì)1.往樣品中加入已知量的雜質(zhì)進(jìn)行測(cè)定；2.若不可能得到某種雜質(zhì)或降解產(chǎn)物，可把此方法的分析結(jié)果與另一已驗(yàn)證的或藥典的分析方法獲得的結(jié)果進(jìn)行比較。39驗(yàn)證內(nèi)容-準(zhǔn)確度通常采用回收率測(cè)定的試驗(yàn)可分為：空白回收（制劑空白）加樣回收（適用于：中藥材，復(fù)方制劑等）空白回收的計(jì)算方法：40驗(yàn)證內(nèi)容-準(zhǔn)確度加樣回收的計(jì)算方法：其中：M為測(cè)定值；P為背景值；A為已知值（真實(shí)值）。41驗(yàn)證內(nèi)容-準(zhǔn)確度加樣回收的試驗(yàn)方法：同一樣品，制備三個(gè)濃度的供試品，每個(gè)濃度分別制備三份供試液，例如：取相同量樣品9份（一般為樣品取樣量的一半），設(shè)計(jì)三個(gè)濃度，按不同比例加入對(duì)照品。中間濃度一般按1:1比例加入；低濃度和高濃度可分別選0.5:1和1.5:1的比例，加入對(duì)照品的量要適當(dāng)，保證供試品溶液的濃度（或量）在考察的線性范圍內(nèi)。42驗(yàn)證內(nèi)容-準(zhǔn)確度接受標(biāo)準(zhǔn)含量和溶出：HPLC方法的接受標(biāo)準(zhǔn)各濃度下的平均回收率應(yīng)在98.0%-102.0%之間，9個(gè)回收率數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）應(yīng)不大于2.0%。中藥一般應(yīng)滿足以下規(guī)定：回收率計(jì)算值在95%-105%范圍，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD%）薄層掃描法<5%。43驗(yàn)證內(nèi)容-準(zhǔn)確度接受標(biāo)準(zhǔn)含量和溶出：UV方法的接受標(biāo)準(zhǔn)各濃度下的平均回收率應(yīng)在98.0%-102.0%之間，9個(gè)回收率數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）應(yīng)不大于1.0%。容量分析方法的接受標(biāo)準(zhǔn)各濃度下的平均回收率應(yīng)在99.7%-100.3%之間，9個(gè)回收率數(shù)據(jù)的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差（RSD）應(yīng)不大于0.2%。44驗(yàn)證內(nèi)容-準(zhǔn)確度接受標(biāo)準(zhǔn)雜質(zhì)：45驗(yàn)證內(nèi)容-準(zhǔn)確度注意問(wèn)題1.活性物質(zhì)；2.容器或過(guò)濾器可能會(huì)吸附活性物質(zhì)；3.處方中的輔料、色料和制造過(guò)程可能會(huì)影響準(zhǔn)確度。4.待分析物質(zhì)是否完全溶解以及溶液的澄清度。46驗(yàn)證內(nèi)容-準(zhǔn)確度47問(wèn)題三什么是準(zhǔn)確度？準(zhǔn)確度用什么來(lái)表示？48驗(yàn)證內(nèi)容-精密度精密度系指在規(guī)定的條件下，從同一個(gè)均勻樣品中，經(jīng)多次取樣測(cè)定所得結(jié)果之間的接近程度。一般用偏差（d）、標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）、相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）（變異系數(shù)CV）表示。偏差（d）d=xi-x測(cè)量值與平均值之差；標(biāo)準(zhǔn)偏差（SD）相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）驗(yàn)證內(nèi)容-精密度4950驗(yàn)證內(nèi)容-精密度雜質(zhì)定量檢查、含量和溶出方法均應(yīng)驗(yàn)證其精密度，精密度可以用重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性表示。1、重復(fù)性重復(fù)性系指在同樣的操作條件下，在較短時(shí)間間隔內(nèi)，由同一分析人員測(cè)定所得結(jié)果的接近程度。51驗(yàn)證內(nèi)容-精密度重復(fù)性的評(píng)價(jià)：(1)在方法規(guī)定的線性范圍內(nèi)至少測(cè)定9次(如3個(gè)濃度級(jí)別80％，100％和120％，每個(gè)濃度級(jí)別測(cè)定3次)，或(2)在100％的試驗(yàn)濃度，至少測(cè)定6次。注意：每種測(cè)定應(yīng)從樣品稱量或者高濃度溶液的稀釋開(kāi)始。52驗(yàn)證內(nèi)容-精密度2.中間精密度：系指同一實(shí)驗(yàn)室不同日期、不同儀器、不同分析人員對(duì)同一樣品、采用同一方法處理樣品所得結(jié)果之間的接近程度。驗(yàn)證方法：同一批樣品每位分析員準(zhǔn)備六份進(jìn)行測(cè)量，計(jì)算兩人之間平均值的差異。3.重現(xiàn)性：一般實(shí)驗(yàn)室不進(jìn)行此項(xiàng)考察，只有當(dāng)分析方法將被法定標(biāo)準(zhǔn)采用時(shí)，才進(jìn)行重現(xiàn)性試驗(yàn)。建立藥典分析方法時(shí)常需通過(guò)協(xié)同檢查得出重現(xiàn)性的結(jié)果。53驗(yàn)證內(nèi)容-精密度接受標(biāo)準(zhǔn)1.重復(fù)性原料藥方法驗(yàn)證時(shí)，API的RSD≤1.0%；制劑方法驗(yàn)證時(shí)，活性成份的RSD≤2.0%；雜質(zhì)方法驗(yàn)證時(shí)，每個(gè)雜質(zhì)的RSD≤20%。2.中間精密度原料藥方法驗(yàn)證時(shí)，平行六份樣品的RSD≤1.0%，兩人之間的平均值之差≤1.0%。54驗(yàn)證內(nèi)容-精密度接受標(biāo)準(zhǔn)制劑方法驗(yàn)證時(shí)，平行六份樣品的RSD≤2.0%，兩人之間的平均值之差≤3.0%。雜質(zhì)方法驗(yàn)證時(shí)，平行六份樣品的RSD≤20.0%，兩人之間的平均值之差如下：55驗(yàn)證內(nèi)容-精密度注意問(wèn)題以下因素可能會(huì)影響到分析方法的精密度：1.儀器的設(shè)計(jì)和設(shè)置；2.樣品的均一性；3.化驗(yàn)員的分析技術(shù)、所采用的試劑和環(huán)境；4.色譜峰的形狀和分離度；5.分析方法的耐受性、回收率、波長(zhǎng)的選擇。56驗(yàn)證內(nèi)容-精密度57驗(yàn)證內(nèi)容-精密度58驗(yàn)證內(nèi)容-精密度問(wèn)題四精密度試驗(yàn)包括哪些？59驗(yàn)證內(nèi)容-檢測(cè)限與定量限檢測(cè)限系指在確定的試驗(yàn)條件下，試樣中被測(cè)物能被檢測(cè)出的最小量；定量限系指在確定的試驗(yàn)條件下，試樣中被測(cè)物能被準(zhǔn)確測(cè)定的最小量，其測(cè)定結(jié)果應(yīng)具有一定準(zhǔn)確度和精密度。雜質(zhì)限度檢查時(shí)應(yīng)驗(yàn)證其方法的檢測(cè)限，雜質(zhì)定量檢查時(shí)應(yīng)驗(yàn)證其方法的定量限。6061驗(yàn)證內(nèi)容-檢測(cè)限與定量限確定某一分析方法檢測(cè)限和定量限的方法：1.目視法（直觀評(píng)價(jià)，非儀器分析）可用于非儀器的分析方法，也可用于儀器的分析方法，用已知濃度的被測(cè)物，試驗(yàn)出能被可靠的檢測(cè)出的最低濃度或量；對(duì)于定量限需要有一定的準(zhǔn)確度和精密度。62驗(yàn)證內(nèi)容-檢測(cè)限與定量限2.信噪比該方法適用于出現(xiàn)基線噪音的分析方法。信噪比的測(cè)定是通過(guò)比較含已知低濃度被分析物的樣品與空白樣品的測(cè)試信號(hào)，確定被分析物可被確切地檢測(cè)的最小濃度，典型的信噪比為3:1；對(duì)于定量限典型的信噪比為10:1。63驗(yàn)證內(nèi)容-檢測(cè)限與定量限64驗(yàn)證內(nèi)容-檢測(cè)限與定量限65問(wèn)題五檢測(cè)線和定量限的確定方法有哪些？66驗(yàn)證內(nèi)容-線性線性系指在設(shè)計(jì)的測(cè)定范圍內(nèi)，檢測(cè)結(jié)果與供試品中被分析物的濃度（量）直接呈線性關(guān)系的程度。線性是定量測(cè)定的基礎(chǔ)，涉及定量測(cè)定的項(xiàng)目，如雜質(zhì)定量檢查、含量和溶出方法均需要驗(yàn)證其線性。可用一貯備液經(jīng)精密稀釋或分別精密稱樣，制備一系列的供試品進(jìn)行測(cè)定，至少制備5個(gè)濃度（通常選取50％,80%,100%,120%和150％）。67驗(yàn)證內(nèi)容-線性并且80%,100%和120%的數(shù)據(jù)也可以用來(lái)確定方法重現(xiàn)性。以測(cè)得的響應(yīng)信號(hào)作為被測(cè)物濃度的函數(shù)作圖，觀察是否呈線性，用最小二乘法進(jìn)行線性回歸。必要時(shí)，響應(yīng)信號(hào)可經(jīng)數(shù)學(xué)轉(zhuǎn)換，再進(jìn)行線性回歸計(jì)算。68驗(yàn)證內(nèi)容-線性接受標(biāo)準(zhǔn)69驗(yàn)證內(nèi)容-線性注意問(wèn)題1.監(jiān)測(cè)器的設(shè)計(jì)和型號(hào)；2.流動(dòng)相和被分析物的紫外特性；3.色譜峰的完整性。70驗(yàn)證內(nèi)容-線性71驗(yàn)證內(nèi)容-線性72驗(yàn)證內(nèi)容-范圍范圍系指能達(dá)到一定精密度、準(zhǔn)確度和線性，測(cè)試方法適用的高低限濃度或量的區(qū)間。雜質(zhì)定量檢查、含量和溶出方法均應(yīng)驗(yàn)證其范圍，分析方法的范圍應(yīng)根據(jù)具體分析方法以及對(duì)線性、準(zhǔn)確度、精密度的結(jié)果和要求確定。范圍通常用與分析方法測(cè)試結(jié)果相同的單位（如百分濃度）表達(dá)。涉及到定量測(cè)定的檢測(cè)項(xiàng)目均需要對(duì)范圍進(jìn)行驗(yàn)證，如含量測(cè)定、含量均勻度、溶出度或釋放度、雜質(zhì)定量試驗(yàn)等。73驗(yàn)證內(nèi)容-范圍接受標(biāo)準(zhǔn)①對(duì)于半成品或者成品含量測(cè)試，范圍通常為測(cè)試濃度的80%-120%；②對(duì)于雜質(zhì)測(cè)試，范圍為測(cè)試濃度的50%-120%；③對(duì)于含量均勻度測(cè)試，除了基于劑型本身特點(diǎn)（例如：計(jì)量劑型氣霧劑、噴霧劑）而確定的更寬的范圍外，范圍應(yīng)為測(cè)試濃度的70％～130％；74驗(yàn)證內(nèi)容-范圍驗(yàn)證內(nèi)容-耐用性耐用性系指測(cè)定條件發(fā)生小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受影響的承受程度。耐用性主要考察方法本身對(duì)于可變?cè)囼?yàn)因素的抗干擾能力。開(kāi)始研究分析方法時(shí)，就應(yīng)考慮其耐用性。如果測(cè)試條件要求苛刻，則建議在方法中予以寫(xiě)明。7576驗(yàn)證內(nèi)容-耐用性典型的液相色譜法中變動(dòng)因素包括：?流動(dòng)相PH（±0.5)?流動(dòng)相組成(有機(jī)相±5%）?色譜柱（同一廠家的三個(gè)批號(hào)，或兩個(gè)不同廠家（同固定相和填充物，尺寸）?溫度（20-25C)和流速(±10%）?檢測(cè)波長(zhǎng)(±5nm)77驗(yàn)證內(nèi)容-耐用性典型的氣相色譜法中變動(dòng)因素包括：?色譜柱（同一廠家的三個(gè)批號(hào)，或兩個(gè)不同廠家（同固定相和填充物，尺寸）?流速柱溫進(jìn)樣口和檢測(cè)器溫度等。驗(yàn)證內(nèi)容-耐用性在評(píng)估參數(shù)時(shí)需要獲得改變條件后與標(biāo)準(zhǔn)條件下的測(cè)量結(jié)果，通過(guò)對(duì)改變條件后與標(biāo)準(zhǔn)條件下結(jié)果的比較來(lái)評(píng)估方法的耐用性。改變條件后與標(biāo)準(zhǔn)條件下結(jié)果的差異計(jì)算公式如下:%Difference=100-100×Rm/Rs其中：Rm改變條件后的含量結(jié)果；Rs標(biāo)準(zhǔn)條件獲得的含量結(jié)果。78驗(yàn)證內(nèi)容-耐用性接受標(biāo)準(zhǔn)1.原料藥和制劑：主要成分的含量差異不得大于1.5%。2.雜質(zhì)：79驗(yàn)證內(nèi)容-耐用性80驗(yàn)證內(nèi)容-問(wèn)題六方法驗(yàn)證的內(nèi)容包括哪些？81方法確認(rèn)適用于藥典方法和其他已驗(yàn)證的法定標(biāo)準(zhǔn)。因?yàn)樗幍浞椒ê推渌ǘ?biāo)準(zhǔn)被認(rèn)為是驗(yàn)證過(guò)的分析方法，不需要驗(yàn)證，但需要通過(guò)方法確認(rèn)來(lái)證明方法在該實(shí)驗(yàn)室條件下的適應(yīng)性。82方法確認(rèn)對(duì)于方法確認(rèn)，通常采用兩種方式：一、由兩名檢驗(yàn)人員分別獨(dú)立對(duì)同一批產(chǎn)品進(jìn)行檢驗(yàn)（如可能使用不同的儀器）比較兩人的檢測(cè)結(jié)果來(lái)證明方法在本實(shí)驗(yàn)室（人員，分析儀器，試劑）的適用性；二、根據(jù)驗(yàn)證目的和評(píng)估結(jié)果選擇相關(guān)項(xiàng)目進(jìn)行確認(rèn)：（具體見(jiàn)下表）83方法確認(rèn)84方法再驗(yàn)證在某些情況下，如原料藥合成工藝改變、制劑處方改變、分析方法發(fā)生部分改變等，均有必要對(duì)分析方法再次進(jìn)行部分或完整的再驗(yàn)證，以保證分析方法可靠。

85方法再驗(yàn)證當(dāng)原料藥合成工藝發(fā)生改變時(shí)，可能引入新的雜質(zhì)，雜質(zhì)檢查方法和含量測(cè)定方法的專屬性就需要再進(jìn)行驗(yàn)證，以證明有關(guān)物質(zhì)檢查方法能夠檢測(cè)新引入的雜質(zhì)，且新引入的雜質(zhì)對(duì)主成份的含量測(cè)定應(yīng)無(wú)干擾。86方法再驗(yàn)證當(dāng)制劑的處方組成改變、輔料變更時(shí)，可能會(huì)影響鑒別的專屬性、溶出度和含量測(cè)定的準(zhǔn)確度，因此需要對(duì)鑒別、含量測(cè)定方法再驗(yàn)證。當(dāng)原料藥產(chǎn)地來(lái)源發(fā)生變更時(shí)，可能會(huì)影響雜質(zhì)檢查和含量測(cè)定的專屬性和準(zhǔn)確度，因此需要對(duì)雜質(zhì)檢查方法和含量測(cè)定方法進(jìn)行再驗(yàn)證。87方法再驗(yàn)證再驗(yàn)證原則：根據(jù)改變的程度進(jìn)行相應(yīng)的再驗(yàn)證。當(dāng)這種改變到達(dá)一定程度時(shí)，則需要完整的驗(yàn)證。如分析方法完全改變時(shí)，則應(yīng)視為新方法并需要完整的驗(yàn)證。譬如：質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中某一項(xiàng)目分析方法發(fā)生部分改變時(shí)，如采用高效液相色譜法測(cè)定含量時(shí)，檢測(cè)波長(zhǎng)發(fā)生改變，則需要重新進(jìn)行檢測(cè)限、專屬性、準(zhǔn)確度、精密度、線性等內(nèi)容的驗(yàn)證，證明修訂后分析方法的合理性、可行性。88方法再驗(yàn)證方法再驗(yàn)證是對(duì)分析方法的完善過(guò)程，應(yīng)根據(jù)實(shí)際改變情況進(jìn)行再驗(yàn)證，從而保證所采用的分析方法能夠控制藥品的內(nèi)在質(zhì)量。89參考資料2010版GMP法規(guī)；2010版GMP實(shí)施指南；ICHQ2FDAcGMP（21CFR211）USP1225；90參考資料網(wǎng)址：ICH

?Q2A:TextonValidationofAnalyticalProcedures?Q2B:ValidationofAnalyticalprocedures:Methodology91參考資料網(wǎng)址：EU:?CPMP/ICH/381/95(ICHQ2A:adoptedNov94