嗎啡、甲基安非他明、氯胺酮頭發(fā)聯(lián)合檢測試劑盒（熒光免疫層析法）（CSZ2200346）

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一、申請人名稱杭州萊和生物技術(shù)有限公司浙江省杭州市濱江區(qū)西興街道廟后王路425號1號樓1-3層、401-406室一、產(chǎn)品概述（一）產(chǎn)品主要組成成分試劑盒包含測試卡、毛發(fā)處理液，還包含ID卡、一次性滴管、干說明：不同批次試劑中ID卡、測試卡和毛發(fā)處理液不能夠互換使用，以免產(chǎn)生錯誤結(jié)果。（二）產(chǎn)品預(yù)期用途本產(chǎn)品用于體外定性檢測人體頭發(fā)樣本中最低檢出限為0.2ng/mg的嗎啡或相當量的結(jié)構(gòu)類似物、最低檢出限為0.2ng/mg的甲基安非他明、最低檢出限為0.2ng/mg的氯胺酮。用于嗎啡、甲基安非他明、氯胺酮藥物濫用的初篩檢測。用于在有資質(zhì)的醫(yī)療機構(gòu)中對6個月內(nèi)是否有嗎啡、甲基安非他明、氯胺酮藥物濫用的初篩檢測。需要進一步確認及評價的樣本應(yīng)采用靈敏度和特異性更高的檢測方法進行。（三）產(chǎn)品包裝規(guī)格卡型：20人份/盒，25人份/盒，40人份/盒，50人份/盒，100人（四）產(chǎn)品檢驗原理采用特異性的抗體抗原反應(yīng)及免疫層析分析技術(shù)，通過抗體競爭結(jié)合特異性抗原和頭發(fā)中可能含有的被檢測物的原理。試紙條含有被事先固定于膜上測試區(qū)（MOP）的特異性嗎啡合成抗原、固定于膜上測試區(qū)（MET）的特異性甲基安非他明合成抗原、固定于膜上測試區(qū)（KET）的特異性氯胺酮合成抗原，毛發(fā)處理液中含有抗特異性小鼠抗嗎啡IgG單克隆抗體熒光標記物、小鼠抗甲基安非他明IgG單克隆抗體熒光標記物、小鼠抗氯胺酮IgG單克隆抗體熒光標記物和兔IgG熒光標記物。測試時，將待測樣本用毛發(fā)處理液充分裂解后加入試劑盒加樣孔（S）內(nèi)，隨之在毛細效應(yīng)下向上層析。如樣本中的藥物濃度低于臨界值或者沒有待測藥物時，熒光標記的特異性抗體不能被樣本中的藥物全部結(jié)合，熒光標記的特異性抗體在層析過程中上的特異性抗原結(jié)合。如樣本中的藥物濃度高于臨界值時，熒光標記的特異性抗體被樣本中的藥物結(jié)合，在測試區(qū)內(nèi)（T）上的特異性抗原結(jié)合部分或沒有可以結(jié)合的特異性抗體，則測試區(qū)內(nèi)（T）出現(xiàn)微弱的熒光信號或者沒有熒光信號。無論待測樣本中是否存在待測藥物，層析過程都會將毛發(fā)處理液中的兔IgG熒光標記物帶到質(zhì)控區(qū)內(nèi)（C）與山羊抗兔IgG結(jié)合。通過干式熒光免疫分析儀讀數(shù)，可檢測樣本中是否含有待測藥物。二、臨床前研究概述（一）主要原材料1.主要原材料的選擇本產(chǎn)品的主要原材料包括包被用嗎啡抗原（MOP-BSA）、甲基安克隆抗體、熒光標記甲基安非他明單克隆抗體、熒光標記氯胺酮單克隆抗體、羊抗兔IgG、熒光標記兔IgG、硝酸纖維素膜等。主要原材料均為外購。申請人對主要原材料進行了供應(yīng)商的選擇，通過功能性試驗，篩選出合格供應(yīng)商，制定了主要原材料的質(zhì)量標準2.企業(yè)參考品的設(shè)置情況申請人設(shè)計了完整的企業(yè)參考品，包括陽性參考品、陰性參考品、重復(fù)性參考品和最低檢出限參考品。企業(yè)參考品由未吸毒人員頭發(fā)、標準品制備而成。陽性參考品P1～P5均使用陰性頭發(fā)萃取液作為基質(zhì)，添加相應(yīng)標準品制備而成；陰性參考品N1～N18涵蓋未吸毒人員頭發(fā)及使用陰性頭發(fā)萃取液作為基質(zhì)、添加相應(yīng)標準品制備成的樣本，其中包含易引起干擾的結(jié)構(gòu)類似物、常見濫用藥物等的樣本；重復(fù)性參考品R1、R2均使用陰性頭發(fā)萃取液作為基質(zhì)，添加相應(yīng)標準品制備而成；最低檢出限參考品C1～C3均使用陰性頭發(fā)萃取液作為基質(zhì)，添加相應(yīng)標準品制備而成，（二）生產(chǎn)工藝及反應(yīng)體系研究申請人對試劑盒反應(yīng)體系的研究包括加樣體積的研究、樣本量的研究、萃取時間的研究、反應(yīng)時間的研究、毛發(fā)處理液體積的研究、樣本與藥物濫用時間關(guān)系研究等。通過功能性試驗，最終確定了最佳的反應(yīng)體系。申請人根據(jù)試劑盒中試劑及組件的主要生產(chǎn)工藝的研究結(jié)果，確定了最佳的生產(chǎn)工藝。（三）分析性能評估本產(chǎn)品分析性能評估內(nèi)容主要包括：適用的樣本類型、與參考方法的比對、精密度、最低檢出限、分析特異性、高劑量鉤狀效應(yīng)研究等。申請人提交了有效運行的質(zhì)量管理體系下生產(chǎn)的三批產(chǎn)品在適用機型上的性能評估資料。在適用的樣本類型研究中，申請人對嗎啡、甲基安非他明、氯胺酮陽性頭發(fā)樣本和陰性頭發(fā)樣本進行檢測，通過與參考方法的檢測結(jié)果進行比對，表明頭發(fā)樣本適用于本產(chǎn)品的檢測。在與參考方法的比對中，申請人采用三批試劑，對臨床陰性和陽性樣本進行檢測，同時還檢測了添加易引起交叉的類似物的樣本，結(jié)果與對比方法的符合率均大于90表明申報試劑檢測結(jié)果與對比方法LC-MS/MS的一致性好。不同濃度水平臨床樣本，進行重復(fù)檢測，企業(yè)參考品每份樣品重復(fù)檢測10次，臨床樣本每份重復(fù)檢測3次，由三位操作者在不同的試驗地點用不同批次的試劑分別對上述樣品進行連續(xù)20天的檢測。結(jié)果表明：本產(chǎn)品的重復(fù)性、再現(xiàn)性滿足CV≤15％的要求。在最低檢出限研究中，申請人采用三批試劑，檢測陰性頭發(fā)樣本和不同濃度梯度的標準品，包括其他常見結(jié)構(gòu)類似物的標準品，分別重復(fù)檢測20次，將檢測結(jié)果均為陽性的最低濃度定為本產(chǎn)品的最低檢出限，并使用臨床樣本進行最低檢出限驗證。最終確定該產(chǎn)品檢測三個項目的最低檢出限分別為0.2ng/mg嗎啡或相當量的結(jié)構(gòu)類似物、最低檢出限為0.2ng/mg的甲基安非他明、最低檢出限為0.2ng/mg的氯胺在干擾試驗中，分別使用陰性和陽性頭發(fā)樣本，對市面上主流的28種洗護美發(fā)產(chǎn)品、內(nèi)源性物質(zhì)（如：頭皮屑、油脂）的干擾以及36種常見心血管治療藥物、降糖藥、抗生素、抗病毒和解熱鎮(zhèn)痛藥物的干擾進行研究。結(jié)果表明：國內(nèi)常見洗發(fā)美發(fā)用品，如潘婷、海飛絲、蜂花等洗發(fā)乳、護發(fā)素、發(fā)膠、發(fā)蠟等對產(chǎn)品檢測結(jié)果均無影響，魔香彈力素、洛黛詩彈力素、bedhead彈力素、沙宣彈力素濃度大于3mg/ml時可能會導(dǎo)致結(jié)果陽性，內(nèi)源性物質(zhì)及常見藥物對試劑盒的檢測無影響。取經(jīng)燙發(fā)、染發(fā)、漂染的陰性和陽性頭發(fā)為檢測樣本進行檢測，與LC-MS/MS檢測結(jié)果進行比較，結(jié)果一致。在交叉反應(yīng)研究中，申請人采用三批試劑，對常見成癮藥物、常見戒毒藥物和結(jié)構(gòu)類似物進行檢測。經(jīng)驗證本試劑與500ng/mg的地西泮、苯巴比妥、曲馬多、美沙酮、普魯卡因、雷尼替丁、偽麻黃堿、納洛酮無交叉。在高劑量鉤狀效應(yīng)研究中，申請人采用三批試劑，對一系列濃度的嗎啡、甲基安非他明、氯胺酮標準品進行檢測，每個濃度點檢測3次，結(jié)果表明：直至標準品濃度為1mg/mL，試劑檢測結(jié)果仍正常，未出現(xiàn)鉤狀效應(yīng)。（四）陽性判斷值研究本研究分為陽性判斷值建立和驗證兩部分。陽性判斷值的建立是根據(jù)嗎啡、甲基安非他明、氯胺酮各55例陽性頭發(fā)樣本、200例陰性頭發(fā)樣本的檢測結(jié)果，通過建立ROC曲線，來確定試劑盒的陽性判斷值。然后再使用三批成品試劑盒，檢測嗎啡、甲基安非他明、氯胺酮陽性頭發(fā)樣本和陰性頭發(fā)樣本，經(jīng)驗證，萊和試劑檢測結(jié)果與對比方法檢測結(jié)果具有高度一致性，本產(chǎn)品檢測嗎啡、甲基安非他明、氯胺酮三個項目的陽性判斷值為0.2ng/mg。（五）穩(wěn)定性研究申請人對產(chǎn)品的實時穩(wěn)定性、運輸穩(wěn)定性、開封穩(wěn)定性、及樣本穩(wěn)定性進行了研究。12、18、24、30、31個月，毛發(fā)處理液保存在2-8℃的條件下，每一時間節(jié)點使用陰、陽性對照品及陰、陽性頭發(fā)樣本，對試劑盒的性能進行檢測，結(jié)果表明產(chǎn)品測試卡和ID卡在4～30℃儲存的有效期為24個月，毛發(fā)處理液在2～8℃存放的有效期為24個月。此外，申請人對產(chǎn)品的運輸穩(wěn)定性、使用穩(wěn)定性和樣本穩(wěn)定性分別進行了研究。結(jié)果顯示，產(chǎn)品的性能均能滿足產(chǎn)品說明書的聲稱。三、臨床評價概述申請人在武漢市精神衛(wèi)生中心、桂林市人民醫(yī)院、湖南省腦科醫(yī)院（湖南省第二人民醫(yī)院）共3家機構(gòu)完成了臨床試驗。采用試驗體外診斷試劑與液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（LC-MS/MS）進行比較研究試驗，確認本產(chǎn)品的臨床性能。共納入病例709例，入組人群應(yīng)為疑似藥物濫用人群，同時納入其他藥物濫用的交叉反應(yīng)病例以及服用常見藥物的潛在干擾病例，樣本類型為頭發(fā)。其中，嗎啡陽性樣本452例，陰性樣本257例，試驗結(jié)果顯示，試驗體外診斷試劑與對比方法對于嗎啡檢測的陽性符合率為99.78%（95%CI：98.77%，99.99%陰性符98.17%，99.69%甲基安非他明陽性樣本400例，陰性樣本309例，試驗體外診斷試劑與對比方法對于甲基安非他明檢測的陽性符合率為陽性符合率99.75%（95%CI：98.61%，99.99%陰性符合率為99.35%（95%CI：97.68%，99.92%總符合率為99.58%（95%CI：98.77%，99.91%氯胺酮陽性樣本353例，陰性樣本356例。試驗結(jié)果顯示，試驗體外診斷試劑與對比方法對于氯胺酮檢測的陽性符合率為陽性符97.99%，99.93%總符合率為99.44%（95%CI：98.56%，99.85%）。以上結(jié)果顯示兩者檢測結(jié)果之間具有良好的一致性。綜上所述，申報產(chǎn)品的臨床試驗資料符合技術(shù)審評要求。四、產(chǎn)品受益風(fēng)險判定根據(jù)YY/T0316-2016《醫(yī)療器械風(fēng)險管理對醫(yī)療器械的應(yīng)用》對嗎啡、甲基安非他明、氯胺酮頭發(fā)聯(lián)合檢測試劑盒（熒光免疫層析法）進行產(chǎn)品受益風(fēng)險判定。本產(chǎn)品為臨床診療提供了一種更多的輔助診斷方法，且頭發(fā)樣本收集容易，室溫下即可保存，檢測窗較長，可以提供個體長期使用藥物的信息，其檢測結(jié)果可以輔助診斷、治療，監(jiān)測藥物療效，反映?。ǘ╋L(fēng)險評估申請人對已知危險（源）進行風(fēng)險評價，按照風(fēng)險可接受準則判斷每個危險（源）的風(fēng)險是否達到可接受水平，對合理可行降低的風(fēng)險、不經(jīng)過風(fēng)險/收益分析既判定為不可接受的風(fēng)險采取控制措施，并對具體措施進行實施驗證，同時重新對采取措施后的風(fēng)險進行估計，確認其風(fēng)險水平是否可接受。為保證產(chǎn)品使用安全，基于對主要剩余風(fēng)險的規(guī)避，需要在產(chǎn)品說明書中提示以下信息：1)不同批次試劑中各組分不能夠互換使用，以免產(chǎn)生錯誤結(jié)果。本申報項目為境內(nèi)第三類體外診斷試劑產(chǎn)品注冊。申請人的注冊申報資料符合現(xiàn)行要求，依據(jù)《醫(yī)療器械監(jiān)督管理條例》（國務(wù)院令第局令第48號）等相關(guān)醫(yī)療器械法規(guī)與配套規(guī)章，經(jīng)系統(tǒng)評價后，建議準予注冊。附件：產(chǎn)品說明書【產(chǎn)品名稱】【包裝規(guī)格】【預(yù)期用途】嗎啡：屬于阿片類生物堿，是鴉片類毒品的重要組成部分，其分子式為C17H19NO3，結(jié)構(gòu)式為。嗎啡為純粹的阿片受體激動劑，有強大的鎮(zhèn)痛作后會導(dǎo)致中樞神經(jīng)系統(tǒng)的興奮增強，產(chǎn)生異常欣快感，敏感性增高，并自覺精力充沛，心跳脅健康。氯胺酮通常的使用方式為香煙吸服、鼻吸、靜脈注射或?qū)⒎勰┤芙怙嬘?，服用后會產(chǎn)生意識與感覺的分離狀態(tài)，導(dǎo)致神經(jīng)中毒反應(yīng)、幻覺和精神分裂癥；長期使用氯胺酮可造毒品進入人體后在血脂酶的作用下代謝，進入肝臟后進一步代謝，有相當量的毒品及代謝物進入頭發(fā)中，多與黑色素等結(jié)合存在于毛發(fā)髓腔內(nèi)[1]。頭發(fā)分析已經(jīng)成為藥物濫用檢測頭發(fā)相比體液分析有更多的優(yōu)點：樣本收集容易，不受檢測時間限制，室溫下即可保存；檢【檢驗原理】萊和嗎啡、甲基安非他明、氯胺酮頭發(fā)聯(lián)合檢測試劑盒（熒光免疫層析法）采用特異性的抗體抗原反應(yīng)及免疫層析分析技術(shù)，通過抗體競爭結(jié)合特異性抗原和頭發(fā)中可能含有的被檢測物的原理。試紙條含有被事先固定于膜上測試區(qū)（MOP）的特于膜上測試區(qū)（MET）的特異性甲基安非他明合成抗原、固定于膜上測試區(qū)（KET）的特異應(yīng)下向上層析。如樣本中的藥物濃度低于臨界值或者沒有待測藥物時，熒光標記的特異性抗上的特異性抗原結(jié)合。如樣本中的藥物濃度高于臨界值時，熒光標記的特異性抗體被樣本中【主要組成成分】毛發(fā)處理液：由小鼠抗嗎啡單克隆抗體熒光標記物、小鼠抗甲基安非他明單克隆抗體熒【儲存條件及有效期】檢測前先將檢測試劑、冷藏的毛發(fā)處理液、ID卡和待測樣本恢復(fù)到室溫（15-30℃),試【適用儀器】【樣本要求】2.使用醫(yī)用剪刀或者鋸齒剪刀緊貼被提取人員頭皮表面剪取頭頂后部（如頭頂后部無法采集的頭發(fā)樣本放置于樣本袋內(nèi)封裝，樣本袋應(yīng)當置于4-【檢驗方法】使用前請仔細閱讀本使用說明書以及杭州萊和生物技術(shù)有限公司的干式熒光免疫分析儀①標準測試：試劑卡加樣后立即將插入儀器中，然后點擊“測試”按鈕，系統(tǒng)自動進行注意：本產(chǎn)品只用于初篩檢測使用，檢測結(jié)果不能作為確診依據(jù)，必須使用第二種分析【陽性判斷值】JD0107025-2018）的描述：非吸毒人群：毛發(fā)中嗎啡的濃度＜0.2ng/mg，毛發(fā)中甲基安非他明的濃度＜0.2ng/mg，毛發(fā)中氯胺酮的濃度＜0.2ng【檢驗結(jié)果的解釋】2.本試劑適用機型為杭州萊和生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的干式熒光免疫分析儀（型號：3.試劑及其組件僅適用于杭州萊和生物技術(shù)有限公司生6.檢測結(jié)果為陰性不代表被測者沒有嗎啡、甲基安非他明、氯胺酮藥物濫用，可能因為【檢驗方法的局限性】1.本試劑盒僅限于體外診斷用。僅適用于檢測人體頭發(fā)中是2.試劑只用于初篩檢測使用，檢測結(jié)果不能作為確認藥物濫用的依據(jù)。為確保結(jié)果的準5.如被測者頭發(fā)使用發(fā)膠、啫喱等產(chǎn)品