大白菜根腫病抗性種質(zhì)資源篩選技術(shù)規(guī)程

1大白菜根腫病抗性種質(zhì)資源篩選技術(shù)規(guī)程本文件規(guī)定了大白菜根腫病抗性種質(zhì)資源篩選技術(shù)，包括生理小種的鑒定、根腫菌接種體的制備、病情調(diào)查、抗性評價標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)要求。本文件適用于大白菜抗根腫病種質(zhì)資源的篩選。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T1.1-2020第一部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則GB/T3101有關(guān)量、單位和符號的一般原則GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1蕓薹根腫菌蕓薹根腫菌屬于原生動物界（Protozoa根腫菌綱（Plasmodiophoromycetes根腫菌目（Plasmodiophorales），根腫菌科（Plasmodiophoraceae），根腫菌屬（Plasmodiophora）的一種專性寄生菌。3.2根腫病根腫病是由蕓薹根腫菌（PlasmodiophorabrassicaeWorn.）引致的十字花科（Cruciferae）作物病害，發(fā)病后癥狀表現(xiàn)為根部形態(tài)異常，形成形狀和大小不同的腫瘤。4生理小種的鑒定生理小種的鑒定參照SCD鑒定系統(tǒng)進(jìn)行鑒定，各生理小種鑒定見附錄A中表A.1。25根腫菌接種體的制備稱取新鮮或解凍的根瘤20克，用滅菌手術(shù)刀將根瘤切成1厘米方塊，放入250毫升燒杯中，向燒杯中加入100毫升滅菌蒸餾水，勻漿機(jī)設(shè)定5000轉(zhuǎn)粉碎根瘤2-3分鐘。將懸浮液經(jīng)8層紗布過濾至燒杯中，濾液搖勻后用移液器取1毫升至15毫升離心管中，用滅菌蒸餾水稀釋10倍，取稀釋后菌液再次用滅菌蒸餾水稀釋10倍，用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)算濃度。用滅菌蒸餾水稀釋至菌液濃度為1×107個孢子/毫升，備用。6人工接種6.1接種時間大白菜定植后7-10天進(jìn)行接種。6.2接種方法用注射器吸取菌液緩慢注入到幼苗基部。6.3接種量上述配制固定濃度的菌液每株注射1毫升。7病情調(diào)查7.1調(diào)查時間接種后25-35天分別調(diào)查各個品種（品系）的發(fā)病情況。7.2調(diào)查方法從育苗穴盤取出完整植株及根系，用清水洗凈植株根部，最大可能性的保留根系的完整，調(diào)查發(fā)病率并計(jì)算病情指數(shù)。每個品種（品系）調(diào)查3個重復(fù)，每個重復(fù)不小于20株。7.3病情分級病情調(diào)查分級標(biāo)準(zhǔn)及對應(yīng)的癥狀描述見附錄A中表A.2，計(jì)算病情指數(shù)DI。病情指數(shù)按公式計(jì)算：DI=×100（1）DI：病情指數(shù)Xi：病害分級標(biāo)準(zhǔn)各級極值ai：各級調(diào)查的植株數(shù)∑Xi：調(diào)查總株數(shù)amax：最高極值8抗性評價8.1接種鑒定有效性當(dāng)鑒定圃中對照品種的病情指數(shù)DI＞33.33，則認(rèn)為此次接種結(jié)果有效。8.2抗性評價依據(jù)參試品種的平均病情指數(shù)DI確定其對根腫菌的抗性，劃分標(biāo)準(zhǔn)見附錄A中表A.3。9重復(fù)鑒定為確保鑒定結(jié)果可靠性，需對免疫、抗病、耐病品種（品系）進(jìn)行重復(fù)鑒定。根據(jù)重復(fù)性結(jié)果進(jìn)行抗性評價，抗性評價以最高病情指數(shù)DI計(jì)算。10數(shù)據(jù)采集報告單標(biāo)準(zhǔn)數(shù)據(jù)采集報告單詳見附錄B中表B.1。4大白菜根腫病生理小種鑒定表表A.1大白菜根腫病生理小種鑒定（SCD鑒定系統(tǒng)）---------+--------------+++--+++------+++++---+------+-++++-+-++---+++-+--+--+++---+------++-+-+--+---------+----+--------------++++++++++++++++表A.2大白菜根腫病分級標(biāo)準(zhǔn)及癥狀描述0123表A.3大白菜品種（品系）抗性評價0大白菜根腫病抗性鑒定結(jié)果記錄表表B.1