微生物學(xué)檢驗技術(shù) 課件 30項目三十：擴(kuò)散法藥敏試驗

項目三十?dāng)U散法藥敏試驗學(xué)習(xí)目標(biāo)1．掌握常規(guī)藥敏試驗的藥物選擇原則；擴(kuò)散法藥敏試驗的方法及結(jié)果判斷與分析。2．熟悉臨床常用抗菌藥物種類。3．了解臨床常用抗菌藥物的作用機(jī)制。4．能選擇合適的抗菌藥物進(jìn)行擴(kuò)散法藥敏試驗并判斷結(jié)果。5．具有正確選擇抗菌藥物對試驗菌株進(jìn)行擴(kuò)散法藥敏試驗，并正確判讀結(jié)果的能力。項目三十?dāng)U散法藥敏試驗思維導(dǎo)圖項目三十?dāng)U散法藥敏試驗一、藥物敏感試驗概述項目三十?dāng)U散法藥敏試驗一、藥物敏感試驗概述概述抗菌藥物是指具有殺菌或抑菌活性的抗生素或化學(xué)合成藥物，這類藥物對感染性疾病的治療發(fā)揮了重要作用。一種抗菌藥物如果以很小劑量便可抑制、殺滅細(xì)菌，則稱該細(xì)菌對該抗菌藥物具有敏感性。細(xì)菌耐藥性指細(xì)菌對于抗菌藥物不敏感，具有耐受性。不同細(xì)菌對抗菌藥物的敏感性與耐藥性不同，同種細(xì)菌不同菌株對同一藥物的敏感性與耐藥性也有差異。通過在體外檢測細(xì)菌對抗菌藥物的敏感性，可指導(dǎo)臨床合理選用抗菌藥物。1.β-內(nèi)酰胺類β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物的化學(xué)結(jié)構(gòu)中均含有四個基團(tuán)構(gòu)成的β-內(nèi)酰胺環(huán)，基主要的作用模式是抑制細(xì)胞壁的合成。根據(jù)β-內(nèi)酰胺環(huán)的附加環(huán)結(jié)構(gòu)或取代基團(tuán)的特點，臨床常用的β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物可進(jìn)一步分為青霉素類、頭孢菌素類，以及非典型β-內(nèi)酰胺類，如碳青霉烯類、拉氧頭孢類、單環(huán)β-內(nèi)酰胺類及β-內(nèi)酰胺酶抑制劑的復(fù)合制劑等。（一）臨床常用抗菌藥物一、藥物敏感試驗概述1.β-內(nèi)酰胺類各種β-內(nèi)酰胺類抗生素的作用機(jī)制均相似，都能抑制胞壁粘肽合成酶，即青霉素結(jié)合蛋白（penicillinbindingproteins,PBP），從而阻礙細(xì)胞壁粘肽合成，使細(xì)菌胞壁缺損，菌體膨脹裂解。各菌種都有青霉素結(jié)合蛋白，按分子量大小，分別稱PBP1、PBP2、PBP3等，PBP1為分子量最大。青霉素結(jié)合蛋白又被稱為下列酶：轉(zhuǎn)糖基酶、轉(zhuǎn)肽酶、D-羧肽酶、內(nèi)肽酶。β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物通過與青霉素結(jié)合蛋白結(jié)合，抑制上述酶的活性從而抑制細(xì)菌細(xì)胞壁合成。一、藥物敏感試驗概述（一）臨床常用抗菌藥物1.β-內(nèi)酰胺類（1）青霉素類：青霉素類（penicillins）抗生素包括天然青霉素、耐青霉素酶青霉素、廣譜青霉素、青霉素+β-內(nèi)酰胺酶抑制劑。青霉素類抗菌藥物的作用是通過與青霉素結(jié)合蛋白（PBP）結(jié)合干擾細(xì)菌細(xì)胞壁的合成，而哺乳類動物的細(xì)胞沒有細(xì)胞壁，所以青霉素對人體的毒性很低，達(dá)到有效殺菌濃度的青霉素對人體細(xì)胞幾無影響。一、藥物敏感試驗概述（一）臨床常用抗菌藥物1.β-內(nèi)酰胺類（2）頭孢菌素類：頭孢菌素類（cephalosporins）抗生素與青霉素比較，其對β-內(nèi)酰胺酶的穩(wěn)定性高于青霉素，抗菌譜較青霉素廣、抗菌作用強(qiáng)、變態(tài)反應(yīng)少、毒性小。作用機(jī)制在于其能與青霉素結(jié)合蛋白結(jié)合，發(fā)揮抑菌和殺菌作用。根據(jù)其抗菌譜、抗菌活性、對β-內(nèi)酰胺酶的穩(wěn)定性以及腎毒性的不同分為五代。一、藥物敏感試驗概述（一）臨床常用抗菌藥物1.β-內(nèi)酰胺類（3）碳青霉烯類：碳青霉烯類（carbapenems）與青霉素類結(jié)構(gòu)稍有不同，此類抗菌藥物對β-內(nèi)酰胺酶的水解有更強(qiáng)的抵抗力，對許多革蘭陰性和革蘭陽性菌具有廣譜的抗菌活性，因其有對β-內(nèi)酰胺酶穩(wěn)定以及毒性低等特點，已經(jīng)成為治療嚴(yán)重細(xì)菌感染最主要的抗菌藥物之一。常用的有亞胺培南、美羅培南、帕尼培南、厄他培南、比阿培南、多尼培南。一、藥物敏感試驗概述（一）臨床常用抗菌藥物1.β-內(nèi)酰胺類（4）拉氧頭孢類：又分成頭霉烯類（cephamycins）和氧頭孢烯類（oxacephems）。頭霉烯類有有頭孢西、頭孢替坦、頭孢美唑等，對革蘭陽性菌有較好的抗菌活性，對厭氧菌有高度抗菌活性，但對非發(fā)酵菌無效。氧頭孢烯類代表藥物為拉氧頭孢和氟氧頭孢，具有第三代頭孢菌素的特點，抗菌譜廣，對革蘭陰性菌作用強(qiáng)，對產(chǎn)酶的金黃色葡萄球菌也具有一定的抗菌活性。一、藥物敏感試驗概述（一）臨床常用抗菌藥物1.β-內(nèi)酰胺類（5）單環(huán)β-內(nèi)酰胺類：單環(huán)β-內(nèi)酰胺類（monobactams）代表藥物有氨曲南和卡蘆莫南，屬于抗需氧革蘭陰性桿菌窄譜抗生素，對腦膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血桿菌、銅綠假單胞菌作用強(qiáng)，對革蘭陽性菌和厭氧菌無作用。一、藥物敏感試驗概述（一）臨床常用抗菌藥物1.β-內(nèi)酰胺類（6）β-內(nèi)酰胺酶抑制劑及復(fù)合制劑：β-內(nèi)酰胺酶抑制劑有克拉維酸、舒巴坦、他唑巴坦。其對β-內(nèi)酰胺酶有很強(qiáng)的抑制作用，與相應(yīng)抗生素聯(lián)合用藥能有效對抗臨床耐藥性的產(chǎn)生。目前臨床應(yīng)用的β-內(nèi)酰胺酶抑制劑復(fù)方制劑有阿莫西林-克拉維酸、替卡西林-克拉維酸、氨芐西林-舒巴坦、頭孢哌酮-舒巴坦和哌拉西林-他唑巴坦。一、藥物敏感試驗概述（一）臨床常用抗菌藥物2.氨基糖苷類氨基糖苷類（aminoglycosides）是由氨基糖與氨基環(huán)醇通過氧橋連接而成的苷類抗菌藥物，作用機(jī)制為：①依靠離子吸附在菌體表面，造成膜的損傷；②與細(xì)菌核糖體30S小亞基發(fā)生不可逆結(jié)合，抑制mRNA的轉(zhuǎn)錄和蛋白質(zhì)的合成，產(chǎn)生無意義的蛋白質(zhì)。種類有來自鏈霉菌的鏈霉素、卡那霉素、妥布霉素、新霉素等，來自小單胞菌的慶大霉素等天然氨基糖苷類，還有阿米卡星，奈替米星等半合成氨基糖苷類。氨基糖苷類抗生素可起到殺菌作用，屬靜止期殺菌藥。一、藥物敏感試驗概述（一）臨床常用抗菌藥物2.氨基糖苷類氨基糖苷類抗生素對銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌等常見革蘭陰性桿菌的抗生素后效應(yīng)較長，可用于治療需氧革蘭陰性桿菌所致的嚴(yán)重感染，也可與作用于細(xì)胞壁的抗菌藥物（如青霉素、氨芐西林或萬古霉素）協(xié)同聯(lián)合應(yīng)用來治療某些耐藥的革蘭陽性菌。但由于其有比較嚴(yán)重的耳毒性和腎毒性，應(yīng)用受到一些限制。一、藥物敏感試驗概述（一）臨床常用抗菌藥物3.喹諾酮類氨基糖苷類抗生素對銅綠假單胞菌、肺炎克雷伯菌、大腸埃希菌等常見革蘭陰性桿菌的抗生素后效應(yīng)較長，可用于治療需氧革蘭陰性桿菌所致的嚴(yán)重感染，也可與作用于細(xì)胞壁的抗菌藥物（如青霉素、氨芐西林或萬古霉素）協(xié)同聯(lián)合應(yīng)用來治療某些耐藥的革蘭陽性菌。但由于其有比較嚴(yán)重的耳毒性和腎毒性，應(yīng)用受到一些限制。一、藥物敏感試驗概述（一）臨床常用抗菌藥物3.喹諾酮類（1）第一代喹諾酮類：有萘啶酸和吡咯酸等，只對大腸埃希菌、志賀菌屬、克雷伯菌屬、少部分變形桿菌屬有抗菌作用，因療效不佳現(xiàn)已少用。（2）第二代喹諾酮類：在抗菌譜方面有所擴(kuò)大，對腸桿菌屬、枸櫞酸桿菌、綠膿桿菌、沙雷桿菌也有一定抗菌作用。吡哌酸是國內(nèi)主要應(yīng)用品種。一、藥物敏感試驗概述（一）臨床常用抗菌藥物3.喹諾酮類（3）第三代喹諾酮類：抗菌譜進(jìn)一步擴(kuò)大，對葡萄球菌等革蘭陽性菌也有抗菌作用，對一些革蘭陰性菌的抗菌作用則進(jìn)一步加強(qiáng)。有諾氟沙星、氧氟沙星、培氟沙星、依諾沙星、環(huán)丙沙星等。本代藥物的分子中均有氟原子，因此稱為氟喹諾酮。一、藥物敏感試驗概述（一）臨床常用抗菌藥物3.喹諾酮類（4）第四代喹諾酮類：與前三代藥物相比在結(jié)構(gòu)上修飾，結(jié)構(gòu)中引入8-甲氧基，有助于加強(qiáng)抗厭氧菌活性，而C-7位上的氮雙氧環(huán)結(jié)構(gòu)則加強(qiáng)抗革蘭陽性菌活性并保持原有的抗革蘭陰性菌的活性，不良反應(yīng)更小，但價格較貴。對革蘭陽性菌抗菌活性增強(qiáng)，對厭氧菌包括脆弱擬桿菌的作用增強(qiáng)，對典型病原體如肺炎支原體、肺炎衣原體、軍團(tuán)菌以及結(jié)核分枝桿菌的作用增強(qiáng)。常用的有加替沙星與莫西沙星。一、藥物敏感試驗概述（一）臨床常用抗菌藥物4.大環(huán)內(nèi)脂類大環(huán)內(nèi)酯類（macrolides）作用特點和機(jī)制為：①不可逆結(jié)合細(xì)菌核糖體50S大亞基的23S單位，抑制細(xì)菌蛋白質(zhì)合成和肽鏈延伸；②新一代大環(huán)內(nèi)酯類具有免疫調(diào)節(jié)功能，能增強(qiáng)單核-吞噬細(xì)胞吞噬功能。常用藥物有紅霉素、螺旋霉素、阿奇霉素、克拉霉素、羅紅霉素等。大環(huán)內(nèi)酯類抗生素抗菌譜廣，對大多數(shù)革蘭陽性菌、部分革蘭陰性菌及一些非典型致病菌（支原體、衣原體等）均有效。紅霉素對軍團(tuán)菌有良好的抗菌作用。阿奇霉素、克拉霉素尚可用于流感嗜血桿菌、卡他莫拉菌所致的社區(qū)獲得性呼吸道感染。一、藥物敏感試驗概述（一）臨床常用抗菌藥物5.糖肽類糖肽類（glycopeptides）具有復(fù)雜的化學(xué)結(jié)構(gòu)，作用機(jī)制是與細(xì)菌細(xì)胞壁肽聚糖合成的前體D-丙氨酰-D-丙氨酸末端結(jié)合，阻斷肽聚糖合成，從而阻止細(xì)胞壁合成，其作用部位與β-內(nèi)酰胺類抗生素不同，不與青霉素類競爭結(jié)合部位，此類抗生素的化學(xué)結(jié)構(gòu)和作用機(jī)制獨特，故與其他抗菌藥物無交叉耐藥現(xiàn)象。常用的有萬古霉素、去甲萬古霉素和替考拉寧?？咕V主要包含革蘭陽性菌（革蘭陽性球菌、桿菌和革蘭陽性厭氧菌），對革蘭陰性菌無效。僅用于嚴(yán)重革蘭陽性菌和耐藥菌株（如MRSA）感染。臨床療效確切，但腎毒性明顯。一、藥物敏感試驗概述（一）臨床常用抗菌藥物6.磺胺類磺胺類（sulfanilamides）為人工合成的抗菌藥物，作用機(jī)制是競爭性地與二氫葉酸合成酶結(jié)合，阻止氨基苯甲酸與二氫葉酸合成酶結(jié)合，使細(xì)菌體內(nèi)核酸合成的重要物質(zhì)輔酶F鈍化而導(dǎo)致細(xì)菌生長受到抑制。常用有三類：一、藥物敏感試驗概述（一）臨床常用抗菌藥物6.磺胺類（1）腸道易吸收磺胺：本類藥物口服后均可吸收，根據(jù)血藥濃度持續(xù)時間不同可分為短效磺胺、中效磺胺和長效磺胺三類。主要用于全身感染，如敗血癥、尿路感染、傷寒、骨髓炎等。（2）腸道難吸收磺胺：能在腸道保持較高的藥物濃度。主要用于腸道感染如菌痢、腸炎等，如酞磺胺噻唑。（3）外用磺胺：主要用于灼傷感染、化膿性創(chuàng)面感雜、眼科疾病等，如磺胺醋酰、磺胺嘧啶銀鹽、甲磺滅膿。一、藥物敏感試驗概述（一）臨床常用抗菌藥物7.四環(huán)素類四環(huán)素類（tetracyclines）能特異性地與細(xì)菌核糖體30S亞基的A位置結(jié)合，阻止氨基酰-tRNA在該位上的聯(lián)結(jié)，從而抑制肽鏈的增長和影響細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成。臨床上常作為衣原體、立克次體感染的首選藥物。四環(huán)素類分為短效、中效和長效，短效四環(huán)素有土霉素、四環(huán)素；中效四環(huán)素有地美環(huán)素、美他環(huán)素；長效四環(huán)素有多西環(huán)素、米諾環(huán)素。四環(huán)素為廣譜抗菌藥物，包括對革蘭陽性菌和陰性菌，如部分葡萄球菌、鏈球菌、肺炎鏈球菌、大腸埃希菌等有一定的抗菌作用，對立克次體、支原體、螺旋體、阿米巴等敏感。一、藥物敏感試驗概述（一）臨床常用抗菌藥物8.氯霉素類氯霉素類（chloramphenicol）抗菌藥物包括有氯霉素、甲砜霉素及無味氯霉素等。通過可逆地與50S亞基結(jié)合,阻斷轉(zhuǎn)肽酰酶的作用，干擾帶有氨基酸的胺基酰-tRNA終端與50S亞基結(jié)合，從而使新肽鏈的形成受阻，抑制蛋白質(zhì)合成。該類抗菌藥物脂溶性強(qiáng)，易進(jìn)入腦脊液和腦組織。由于氯霉素還可與人體線粒體的70S結(jié)合,因而也可抑制人體線粒體的蛋白合成，對人體產(chǎn)生毒性，可引起與劑量相關(guān)的骨髓抑制和灰嬰綜合征。一、藥物敏感試驗概述（一）臨床常用抗菌藥物9.林可酰胺類林可酰胺類包括鹽酸林可霉素和克林霉素。其作用機(jī)制是與細(xì)菌50S核糖體亞基結(jié)合，抑制蛋白質(zhì)合成，并可干擾肽?；霓D(zhuǎn)移，阻止肽鏈的延長。用于敏感厭氧菌及需氧菌所致的感染，主要用于青霉素過敏患者。適用于厭氧菌、肺炎鏈球菌、其他鏈球菌屬（糞腸球菌除外）及金黃色葡萄球菌所致的下呼吸道感，克林霉素是治療肺部厭氧菌感染、衣原體性傳播性疾病的首選藥物。一、藥物敏感試驗概述（一）臨床常用抗菌藥物10.其他抗菌藥物（1）硝基呋喃類：硝基呋喃類（nitrofurantoin）藥物常見的有呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃妥因和呋喃西林。作用于微生物酶系統(tǒng)，抑制乙酰輔酶A，干擾微生物糖類的代謝，從而起抑菌作用，是一種廣譜抗生素，對大多數(shù)革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌、真菌和原蟲等病原體均有殺滅作用。但由于本類藥品口服吸收后在體內(nèi)很快被代謝滅活，不適于治療全身感染而僅用于腸道、尿路感染和外用消毒。一、藥物敏感試驗概述（一）臨床常用抗菌藥物10.其他抗菌藥物（2）硝基咪唑類：硝基咪唑類（nitromidazole）作用機(jī)制是硝基環(huán)被厭氧菌還原而阻斷細(xì)菌DNA合成，阻止DNA的轉(zhuǎn)錄、復(fù)制，導(dǎo)致細(xì)菌死亡。臨床常使用的有甲硝唑和替硝唑。硝基咪唑類藥物對革蘭陽性、陰性厭氧菌，包括脆弱類桿菌有較好的抗菌作用，對需氧菌無效。一、藥物敏感試驗概述（一）臨床常用抗菌藥物10.其他抗菌藥物（3）鏈陽霉素類：鏈陽霉素類（streptogramin）代表藥物是奎奴普丁-達(dá)福普?。╭uinupristin-dalfopristin）。用于由多重耐藥革蘭陽性菌引起的嚴(yán)重感染，尤其是醫(yī)院內(nèi)獲得性感染。本類藥物的特點是對MRSA感染的有效率可達(dá)90%以上。鏈陽霉素類除了對革蘭陽性菌具有抗菌活性外，對部分革蘭陰性菌和厭氧菌也有抗菌活性。一、藥物敏感試驗概述（一）臨床常用抗菌藥物10.其他抗菌藥物（4）噁唑烷酮類：噁唑烷酮類（oxazolidinones）對革蘭陽性球菌，特別是多重耐藥的革蘭陽性球菌，具有較強(qiáng)的抗菌活性，與其他藥物不存在交叉耐藥現(xiàn)象，代表藥物是利奈唑胺。一、藥物敏感試驗概述（一）臨床常用抗菌藥物10.其他抗菌藥物（5）利福霉素類：利福霉素類（rifamycins）具有廣譜抗菌作用，對結(jié)核桿菌、麻風(fēng)桿菌、鏈球菌、肺炎球菌等革蘭氏陽性細(xì)菌，特別是耐藥性金黃色葡萄球菌的作用都很強(qiáng)。目前在臨床應(yīng)用的有利福平、利福噴汀及利福布汀。一、藥物敏感試驗概述（一）臨床常用抗菌藥物1.根據(jù)抗菌藥物的抗菌譜每種抗菌藥物都有一定的抗菌譜，藥物的類型不同，其抗菌范圍也不同。同類別，不同品種的藥物，其作用也各有特點。如藥敏試驗中的青霉素G主要用于革蘭陽性菌，妥布霉素主要用于革蘭陰性菌。一、藥物敏感試驗概述（二）抗菌藥物選擇原則2.根據(jù)細(xì)菌的種屬①A組是對特定的菌種，常規(guī)測試并報告的基本抗菌藥物。②B組是常規(guī)測試，但只選擇性報告的基本抗菌藥物③C組包括替代性或補(bǔ)充性的抗菌藥物。在某些醫(yī)療機(jī)構(gòu)，地方或流行菌株對A組/B組多個藥物耐藥時，需測試該組藥物；當(dāng)對基本測試藥物過敏、或測試少見細(xì)菌時、或流行病學(xué)和感染控制需要時，需測試的補(bǔ)充藥物。④U組包括那些僅僅或主要用于治療泌尿道感染的抗菌藥物。⑤O組抗菌藥物對該組細(xì)菌有臨床適應(yīng)證，但一般不用做常規(guī)試驗和報告的候選。一、藥物敏感試驗概述（二）抗菌藥物選擇原則3.根據(jù)某些特殊的耐藥機(jī)制一般情況下，報告的藥物必須是藥敏試驗過的，但如果一種藥物的藥敏結(jié)果可以推測另外一種或一類藥物的結(jié)果則可以例外，如葡萄球菌對苯唑西林耐藥，提示其對所有β-內(nèi)酰胺類抗菌藥物均耐藥。一、藥物敏感試驗概述（二）抗菌藥物選擇原則4.根據(jù)抗菌藥物的藥代動力學(xué)特點不同的藥物在體內(nèi)吸收、分布、代謝，排泄的過程各不相同，即使作用完全相同的藥物，體內(nèi)過程也往往有所差別，選擇藥物時應(yīng)考慮這些因素。如尿液標(biāo)本測試呋喃妥因和某幾種喹諾酮類；腦脊液標(biāo)本測試美羅培南、氯霉素等，而不測試氨基糖苷類、四環(huán)素等。一、藥物敏感試驗概述（二）抗菌藥物選擇原則5.根鋸流行病學(xué)資料不同地區(qū)，不同時間病原菌的分布和耐藥情況各不相同，應(yīng)根據(jù)本地區(qū)病原菌的耐藥譜，咨詢感染科醫(yī)生，醫(yī)院藥事委員會及盛染控制委員會的醫(yī)生，以選擇最適于試驗和報告的抗菌藥物。一、藥物敏感試驗概述（二）抗菌藥物選擇原則6.所選藥物具有代表性實驗室不需要也不可能對每種抗菌藥物均進(jìn)行測試。原則上在各類抗菌藥物中透擇一種代表性藥物做測試，可反映一類藥物的耐藥特性，如大環(huán)內(nèi)酯類選紅霉素，喹諾酮類選環(huán)丙沙星或氧氟沙星，頭孢菌素類選一代、二代、三代頭孢菌素的代表藥物，選擇藥物時還需考慮價格因素。一、藥物敏感試驗概述（二）抗菌藥物選擇原則抗菌藥物敏感試驗（antimicrobialsusceptibilitytest，AST）是檢測微生物對抗菌藥物的體外敏感性，以指導(dǎo)臨床合理選用藥物的微生物學(xué)試驗，簡稱藥敏試驗。意義在于：①預(yù)測和監(jiān)控抗菌藥物的治療效果，指導(dǎo)臨床醫(yī)師選擇用藥；②發(fā)現(xiàn)或提示細(xì)菌耐藥機(jī)制的存在，能幫助臨床醫(yī)生選擇合適的藥物，避免產(chǎn)生或加重細(xì)菌的耐藥；③監(jiān)測細(xì)菌耐藥性，了解本醫(yī)院及本地區(qū)耐藥菌的變遷，掌握耐藥菌感染的流行病學(xué)，以控制和預(yù)防耐藥菌感染的發(fā)生和流行；④對病原菌耐藥譜進(jìn)行分析和分型，可用于某些菌種的鑒定。一、藥物敏感試驗概述（三）藥物敏感試驗概述1.最低抑菌濃度最低抑菌濃度（minimalinhibitoryconcentration，MIC）是指抗菌藥物能夠抑制被測菌生長的最低藥物濃度。一般用μg/ml或U/ml表示。對同一細(xì)菌而言MIC值越小，其抗菌能力越強(qiáng)，細(xì)菌對這種藥物就越敏感。一、藥物敏感試驗概述（三）藥物敏感試驗概述2.折點折點（Breakpoint）能預(yù)測臨床治療效果，用以判斷敏感、中介、劑量依賴型敏感、耐藥、非敏感的最低抑菌濃度（MIC）或者抑菌圈直徑（mm）的數(shù)值。3.敏感敏感（susceptible，S）指當(dāng)抗菌藥物對分離株的MIC值或抑菌圈直徑處于敏感范圍時，使用推薦劑量進(jìn)行治療，該藥在感染部位通常達(dá)到的濃度可抑制被測菌的生長，臨床治療可能有效。一、藥物敏感試驗概述（三）藥物敏感試驗概述4.中介中介（intermediate，I）當(dāng)菌株的MIC值或抑菌圈直徑處于中介時，該數(shù)值接近藥物在血液和組織中達(dá)到的濃度，從而治療反應(yīng)率低于敏感菌群。該分類意味著采用高于常規(guī)劑量治療時或在藥物生理濃集的部位，臨床治療可能有效。該分類同樣可作為“緩沖域”，以防止由微小、不可控的技術(shù)因素導(dǎo)致的重大偏差，尤其是毒性范圍較窄的藥物。一、藥物敏感試驗概述（三）藥物敏感試驗概述5.劑量依賴型敏感劑量依賴型敏感（Susceptible-dosedependent；SDD）細(xì)菌菌株對抗菌藥物的敏感性依賴于抗菌藥物的劑量。當(dāng)某種藥物對菌株的MIC或抑菌圈直徑在SDD范圍時，臨床可通過提高劑量和（或）增加給藥頻率等修正給藥方案以達(dá)到臨床療效。一、藥物敏感試驗概述（三）藥物敏感試驗概述6.耐藥耐藥（resistant，R）是指當(dāng)抗菌藥物對分離株的MIC值或抑菌圈直徑處于該分類范圍時，使用常規(guī)治療方案，該藥在感染部位所達(dá)到的藥物濃度不能抑制細(xì)菌的生長，和（或）被測菌株獲得特殊耐藥機(jī)制，且治療性研究顯示該藥臨床療效不確切。一、藥物敏感試驗概述（三）藥物敏感試驗概述7.非敏感非敏感（Nonsusceptible；NS）對于那些因未現(xiàn)或罕現(xiàn)耐藥，而僅具有敏感折點的抗菌藥物，當(dāng)該藥對某分離株的MIC值高于或抑菌圈直徑低于敏感折點時，此分類為非敏感。一、藥物敏感試驗概述（三）藥物敏感試驗概述將含有定量抗菌藥物的紙片貼在已接種測試菌的瓊脂平板上。紙片中所含的藥物吸收瓊脂中的水分溶解后，不斷向紙片周圍區(qū)域擴(kuò)散，形成遞減的梯度濃度。在紙片周圍抑菌濃度范圍內(nèi)測試菌的生長被抑制，從而形成透明的抑菌圈。抑菌圈的大小反映測試菌對測定藥物的敏感程度，并與該藥對測試菌的最低抑菌濃度（MIC）呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，即抑菌圈越大，MIC越小。二、擴(kuò)散法藥敏試驗操作方法（一）實驗原理1.培養(yǎng)基目前，在非苛養(yǎng)菌的常規(guī)藥敏試驗中，CLSI推薦使用的培養(yǎng)基是Mueller-Hinton（M-H）瓊脂，可直接購買M-H瓊脂平板或先購買脫水的培養(yǎng)基，再按照產(chǎn)品的說明自行制備。其厚度為4mm，pH應(yīng)為7.2～7.4。新制備的瓊脂平板可當(dāng)天使用或密封于塑料袋中以減少水分蒸發(fā)，保存于2～8℃，使用前如瓊脂表面過分潮濕，應(yīng)放于孵箱（35～37℃）或在室溫下敞開蓋子放置于層流罩中，直到多余的水分蒸發(fā)（通常10～30min）。在接種培養(yǎng)基時，其表面或平板蓋子的表面不應(yīng)有可見的潮濕水珠。（二）實驗材料二、擴(kuò)散法藥敏試驗操作方法2.抗菌藥物紙片藥敏紙片為直徑6.35mm、吸水量為0.02mL的專用藥敏紙片。藥敏紙片使用前需室溫平衡1h～2h。紙片需密封貯存于-20℃冰箱內(nèi)。開封后的紙片可置于含干燥劑的螺口塑料或玻璃管中2℃～8℃保存，不超過1周。（二）實驗材料二、擴(kuò)散法藥敏試驗操作方法3.標(biāo)準(zhǔn)比濁管0.5麥?zhǔn)蠁挝坏腂aSO4濁度標(biāo)準(zhǔn)管制備方法如下：取0.048mol/L的BaCl2（1.175％W/VBaCl2·2H2O）0.5ml加人到99.5ml的0.18mol/LH2SO4（1%，V/V）中并不斷攪動，以維持混懸狀態(tài)。標(biāo)準(zhǔn)比濁管的正確濃度應(yīng)使用光徑為1cm分光光度計來測定，0.5麥?zhǔn)蠁挝坏臉?biāo)準(zhǔn)比濁管在625mm處的吸光度值應(yīng)為0.08～0.13，按每管4-6ml將硫酸鋇懸液分裝于帶旋蓋的管子中貯存于室溫暗處，使用前漩渦震蕩混勻。（二）實驗材料二、擴(kuò)散法藥敏試驗操作方法4.被檢菌液為確保紙片擴(kuò)散法藥敏試驗的重復(fù)性，菌株接種必須經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)化，接種物的準(zhǔn)備可通過生長法或直接菌落懸液法，一般采用比濁法校正菌懸液濃度。（二）實驗材料二、擴(kuò)散法藥敏試驗操作方法4.被檢菌液（1）肉湯增菌法：從瓊脂平板上選取至少3～5個形態(tài)特征一致的菌落，用接種環(huán)接觸每個菌落頂部后將細(xì)菌轉(zhuǎn)移到含4～5m適宜的肉湯培養(yǎng)基管中。將此肉湯培養(yǎng)物置37℃孵育至其濁度等于或超過0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)（通常需2～6h）。用無菌生理鹽水或肉湯將旺盛生長的肉湯培養(yǎng)基的濁度調(diào)整到光學(xué)上相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠁挝唬藭r對于大腸埃希菌ATCC25922來說，肉湯懸液中細(xì)菌數(shù)為（1～2）×108CFU/ml。（二）實驗材料二、擴(kuò)散法藥敏試驗操作方法4.被檢菌液（2）直接菌落法：從孵育了18～24h的非選擇性培養(yǎng)基（如血瓊脂）平板上，挑取單個菌落，直接用胰大豆肉湯或無菌生理鹽水制成懸液作為接種物，然后按上述方法將濁度調(diào)整至0.5麥?zhǔn)蠁挝?。此法是檢測苛養(yǎng)菌（如嗜血桿菌屬、淋病奈瑟菌和鏈球菌）和潛在的對甲氧西林或苯唑西林耐藥的葡萄球菌的推薦方法。需要注意的是當(dāng)用此方法測試甲氧芐啶/磺胺甲噁唑時，來自血瓊脂培養(yǎng)基的菌落可能帶有足夠的甲氧芐啶或磺胺拮抗物，細(xì)菌可在抑菌圈內(nèi)部沿著敏感菌株的周圍產(chǎn)生模糊生長。接種物制備后最好應(yīng)在15min內(nèi)接種M-H瓊脂平板。（二）實驗材料二、擴(kuò)散法藥敏試驗操作方法1.接種用無菌棉拭子蘸取菌液，在管內(nèi)壁將多余菌液旋轉(zhuǎn)擠去后，在M-H瓊脂平板表面均勻涂抹接種3次，每次旋轉(zhuǎn)平板60°，最后沿平板內(nèi)緣涂抹1周。蓋上皿蓋，置室溫放置3～5min（不要超過15min），使平皿表面稍干。接種時，注意無菌操作。校正濃度后的菌液在15min內(nèi)接種完畢。（三）實驗過程二、擴(kuò)散法藥敏試驗操作方法2.貼抗菌藥物紙片接種菌懸液后的M-H瓊脂平板置室溫下干燥3min～5min。

用紙片分配器或無菌鑷子將抗菌藥物紙片緊密貼于平皿。各紙片中心相距≥24mm。紙片貼上后不應(yīng)再移動。（三）實驗過程二、擴(kuò)散法藥敏試驗操作方法3.孵育貼上紙片15min內(nèi)，須把平皿倒置放于35℃孵箱中孵育16h～18h。對于某些特殊抗菌藥物如苯唑西林或萬古霉素，孵育時間需延長至24h。（三）實驗過程二、擴(kuò)散法藥敏試驗操作方法將平皿置于黑色背景下，利用反射光從平皿背面用游標(biāo)卡尺或直尺測量無明顯細(xì)菌生長區(qū)域的直徑（含紙片），即抑菌圈直徑，取整數(shù)位，單位為mm。培養(yǎng)基若加入血液，須打開平皿蓋，借助反射光，從正面測量抑菌圈直徑。測量萬古霉素、利奈唑胺和苯唑西林等的抑菌圈時，使用透射光。測量甲氧芐啶和磺胺類藥物的抑菌圈時，可忽視輕微生長（20%或較少菌苔生長）而測量較明顯抑制的邊緣。三、擴(kuò)散法藥敏試驗結(jié)果判斷與分析（一）結(jié)果判斷1.影響因素（1）培養(yǎng)基：培養(yǎng)基在室溫下的pH應(yīng)為7.2～7.4，若pH過低某些藥物會失去效力（如氨基糖苷類、喹諾酮類和大環(huán)內(nèi)酯類），而另一些藥物活性可能增強(qiáng)（如四環(huán)素類）；瓊脂過厚、過硬會影響藥物滲透，造成抑菌圈縮小；反之，過薄會使抑菌圈偏大。（二）質(zhì)量控制三、擴(kuò)散法藥敏試驗結(jié)果判斷與分析1.影響因素（2）藥敏紙片：紙片質(zhì)量是影響藥敏試驗結(jié)果的主要因素。紙片含藥量、吸水性直接影響抑菌圈的大小。紙片保存不當(dāng)可使藥效降低。β-內(nèi)酰胺類藥敏紙片應(yīng)冷凍儲存，且不超過1周，否則效價降低。（3）細(xì)菌濃度：待檢菌液的濃度、接種量應(yīng)達(dá)到規(guī)定的麥?zhǔn)蠁挝唬簼舛冗^大可使抑菌圈縮小，反之可使抑菌圈擴(kuò)大。（4）操作方法：菌液配置好后放置過長時間、紙片貼放位置、紙片移動、孵箱內(nèi)平板的放置方法等都將影響結(jié)果。（二）質(zhì)量控制三、擴(kuò)散法藥敏試驗結(jié)果判斷與分析1.影響因素（5）培養(yǎng)條件、溫度和時間的控制：置35℃孵育16～24h，量取抑菌圈直徑。苯唑西林、甲氧