微生物學(xué)檢驗(yàn)技術(shù) 課件 11項(xiàng)目十一：細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)

項(xiàng)目十一細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)學(xué)習(xí)目標(biāo)項(xiàng)目十一細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)1、掌握細(xì)菌有氧培養(yǎng)、二氧化碳培養(yǎng)的方法。2、了解細(xì)菌厭氧培養(yǎng)的方法。3、熟悉全自動(dòng)血液培養(yǎng)系統(tǒng)的原理及檢測(cè)方法。思維導(dǎo)圖項(xiàng)目十一細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)一、細(xì)菌有氧培養(yǎng)項(xiàng)目十一細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)一、細(xì)菌有氧培養(yǎng)概述有氧培養(yǎng)法是至需養(yǎng)菌或兼性厭氧菌在有氧條件下的培養(yǎng)。本法是臨床細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室最常用的培養(yǎng)方法。一、細(xì)菌有氧培養(yǎng)

方法將已接種好的平板、斜面、液體培養(yǎng)基等在空氣中置于37℃孵育箱內(nèi)孵育18~24h，無特殊要求的細(xì)菌均可以在此條件下生長(zhǎng)。少數(shù)生長(zhǎng)緩慢的細(xì)菌需要培養(yǎng)3~7d，甚至1個(gè)月才能生長(zhǎng)。另外，有的細(xì)菌最適生長(zhǎng)溫度是28~30℃，如鼠疫耶爾森菌，甚至在4℃也能生長(zhǎng)，如李斯特菌。為了孵育箱內(nèi)保持一定的濕度，可在其內(nèi)放置一杯水。對(duì)于培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)的培養(yǎng)基，接種后應(yīng)將試管口用棉塞或硅膠塞塞好，再用石蠟-凡士林封固，以防培養(yǎng)基干裂。一、細(xì)菌有氧培養(yǎng)方法二、細(xì)菌二氧化碳培養(yǎng)項(xiàng)目十一細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)二、細(xì)菌二氧化碳培養(yǎng)概述二氧化碳培養(yǎng)是將已經(jīng)接種的培養(yǎng)基放置于5％~10％co2環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)的方法。很多細(xì)菌在其生理生化代謝過程中需要co2，分解糖類產(chǎn)生的co2已足夠其所需，且空氣中還有微量co2，不必額外補(bǔ)充。只有少數(shù)細(xì)菌，如肺炎鏈球菌、淋病奈瑟菌、流感嗜血桿菌等的培養(yǎng)，特別是在其初次分離時(shí)需要在5％~10％co2環(huán)境中培養(yǎng)才能生長(zhǎng)良好。二、細(xì)菌二氧化碳培養(yǎng)方法co2培養(yǎng)箱是一臺(tái)特制的培養(yǎng)箱，既能調(diào)節(jié)co2的含量，又能調(diào)節(jié)所需溫度co2從培養(yǎng)箱外的鋼瓶通入培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)箱能自動(dòng)調(diào)節(jié)co2的含量、溫度和濕度，培養(yǎng)物置于培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)一段時(shí)間以后直接觀察其生長(zhǎng)結(jié)果，此法適于大型實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用。二氧化碳箱培養(yǎng)二、細(xì)菌二氧化碳培養(yǎng)方法二氧化碳箱培養(yǎng)二、細(xì)菌二氧化碳培養(yǎng)方法燭缸培養(yǎng)取有蓋磨口標(biāo)本缸或玻璃干燥器，將接種好的培養(yǎng)基放入缸內(nèi)，點(diǎn)燃蠟燭后放入缸內(nèi)，要將蠟燭放置在稍高于培養(yǎng)物的位置，缸蓋或缸口均勻涂抹凡士林，蓋嚴(yán)缸蓋。蠟燭燃燒消耗氧，因氧減少而使蠟燭自行熄滅，此時(shí)容器內(nèi)因蠟燭燃燒產(chǎn)生的co2約為5％~10％，基本可滿足細(xì)菌co2培養(yǎng)的要求。最后連同容器一起置于37℃孵育箱內(nèi)孵育，時(shí)間一般在18~24h，少數(shù)菌種需培養(yǎng)3~7d，甚至更長(zhǎng)。二、細(xì)菌二氧化碳培養(yǎng)方法燭缸培養(yǎng)二、細(xì)菌二氧化碳培養(yǎng)方法重碳酸鹽-鹽酸法

每升容積的容器內(nèi)，重碳酸鹽與鹽酸按0.4g與0.35mL比例，分別將兩種試劑各置一器皿（如平皿）內(nèi)，連同器皿置于標(biāo)本缸或干燥器內(nèi)，蓋嚴(yán)蓋后將容器傾斜，兩種試劑接觸后即可產(chǎn)生co2。三、細(xì)菌厭氧培養(yǎng)項(xiàng)目十一細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)三、細(xì)菌厭氧培養(yǎng)概述厭氧菌對(duì)氧非常敏感，培養(yǎng)過程中需造成低氧化還原電勢(shì)的厭氧環(huán)境。常用的厭氧培養(yǎng)法可分為：物理法、化學(xué)法、生物法。具體技術(shù)方法有：厭氧罐培養(yǎng)法、氣袋法、厭氧手套箱法和需養(yǎng)菌共生厭氧法等。三、細(xì)菌厭氧培養(yǎng)概述

厭氧培養(yǎng)箱四、全自動(dòng)血液培養(yǎng)項(xiàng)目十一細(xì)菌培養(yǎng)技術(shù)四、全自動(dòng)血液培養(yǎng)概述

健康人體的血液是無菌的，當(dāng)人體局部感染向全身播散并出現(xiàn)全身感染時(shí)，血液中可出現(xiàn)細(xì)菌。菌血癥（bactereimia)和膿毒血癥(sepsis)等可危及患者生命。準(zhǔn)確、快速的培養(yǎng)出血液中的細(xì)菌對(duì)診斷和治療具有重要的意義。全自動(dòng)血液培養(yǎng)檢測(cè)和分析系統(tǒng)，可檢測(cè)來自菌血癥或真菌血癥可疑患者的需氧及厭氧血液標(biāo)本。目前最常見的檢測(cè)系統(tǒng)有2種：BacT/ALert全自動(dòng)血液培養(yǎng)系統(tǒng)和BACTECTM9000系列。需氧血培養(yǎng)瓶四、全自動(dòng)血液培養(yǎng)概述血培養(yǎng)瓶厭氧血培養(yǎng)瓶成人血培養(yǎng)瓶?jī)和囵B(yǎng)瓶四、全自動(dòng)血液培養(yǎng)

BacT/ALert全自動(dòng)血液培養(yǎng)系統(tǒng)原理BacT/ALert全自動(dòng)血液培養(yǎng)系統(tǒng)采用非侵入性聲色檢測(cè)原理。利用微生物在培養(yǎng)基中代謝基質(zhì)時(shí)產(chǎn)生co2，進(jìn)而使瓶底對(duì)co2敏感的乳膠感應(yīng)器發(fā)生顏色改變，感應(yīng)器顏色由藍(lán)綠色不可逆的變淺，轉(zhuǎn)為黃色。儀器培養(yǎng)孔底的光電探測(cè)器測(cè)量反射光變化，并按相應(yīng)計(jì)算公式計(jì)算，及時(shí)報(bào)告生長(zhǎng)信號(hào)或在設(shè)定時(shí)間報(bào)告陰性。陽性生長(zhǎng)判讀公式主要有：起始閾值公式、加速度公式和速率公式。四、全自動(dòng)血液培養(yǎng)

BacT/ALert全自動(dòng)血液培養(yǎng)系統(tǒng)儀器基本結(jié)構(gòu)

恒溫孵育及檢測(cè)系統(tǒng):儀器設(shè)有恒溫及振蕩裝置，在培養(yǎng)瓶進(jìn)行培養(yǎng)的同時(shí)不斷進(jìn)行振蕩（結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)不用振蕩）和檢測(cè)分析。檢測(cè)系統(tǒng)設(shè)在每個(gè)儀器孔位的底部。四、全自動(dòng)血液培養(yǎng)

BacT/ALert全自動(dòng)血液培養(yǎng)系統(tǒng)

計(jì)算機(jī)及外圍設(shè)備：計(jì)算機(jī)接受感應(yīng)器信號(hào)，判斷檢測(cè)結(jié)果。通過條碼識(shí)別標(biāo)本編號(hào)，記錄、儲(chǔ)存和分析數(shù)據(jù)，打印報(bào)告。四、全自動(dòng)血液培養(yǎng)

BacT/ALert全自動(dòng)血液培養(yǎng)系統(tǒng)主要機(jī)型BacT/ALert240、120、3D及MB/BacT。acT/ALert3D為抽屜式設(shè)計(jì)，每抽屜設(shè)計(jì)60個(gè)培養(yǎng)瓶檢測(cè)位。通過對(duì)單個(gè)抽屜的不同設(shè)置，可以在同一臺(tái)孵育系統(tǒng)中同時(shí)進(jìn)行普通細(xì)菌培養(yǎng)和結(jié)核分枝桿菌培養(yǎng)；MB/BacT是專用于培養(yǎng)分枝桿菌的系統(tǒng)。二、細(xì)菌二氧化碳培養(yǎng)

BacT/ALert全自動(dòng)血液培養(yǎng)系統(tǒng)四、全自動(dòng)血液培養(yǎng)

原理BACTECTM9000

微生物在生長(zhǎng)過程中消耗培養(yǎng)瓶中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，代謝引起co2濃度變化，而co2濃度的改變可直接激活培養(yǎng)瓶底部包埋的對(duì)co2濃度變化敏感的熒光物質(zhì)，在二極管的激發(fā)下熒光物質(zhì)釋放熒光，熒光強(qiáng)度變化可直接反應(yīng)培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)co2濃度變化。系統(tǒng)每10min自動(dòng)測(cè)定并記錄熒光強(qiáng)度。連續(xù)檢測(cè)獲得足夠數(shù)據(jù)后，由計(jì)算機(jī)處理系統(tǒng)進(jìn)行綜合分析并即刻報(bào)告培養(yǎng)結(jié)果。四、全自動(dòng)血液培養(yǎng)

儀器基本結(jié)構(gòu)恒溫孵育及檢測(cè)系統(tǒng)：儀器設(shè)有恒溫及振蕩裝置，在培養(yǎng)瓶進(jìn)行培養(yǎng)的同時(shí)不斷進(jìn)行振蕩和檢測(cè)分析。檢測(cè)系統(tǒng)設(shè)在儀器每個(gè)孔位的底部。每15min檢測(cè)一次熒光強(qiáng)度，檢測(cè)數(shù)據(jù)傳送至系統(tǒng)軟件及時(shí)處理。BACTECTM9000四、全自動(dòng)血液培養(yǎng)計(jì)算機(jī)及外圍設(shè)備：計(jì)算機(jī)