沉淀反應(yīng)（免疫學(xué)檢驗(yàn)課件）

沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng)（precipitation)

可溶性抗原與相應(yīng)抗體發(fā)生特異性結(jié)合，在適當(dāng)條件下而出現(xiàn)的沉淀現(xiàn)象。

前言1.液相內(nèi)沉淀試驗(yàn)

環(huán)狀沉淀反應(yīng)、絮狀沉淀反應(yīng)、免疫比濁度分析。2.凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)

單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)。3.凝膠免疫電泳技術(shù)

對(duì)流電泳技術(shù)、免疫電泳技術(shù)、火箭電泳技術(shù)、免疫固定電泳技術(shù)。沉淀反應(yīng)分類以含鹽緩沖液為反應(yīng)介質(zhì)的抗原抗體特異性結(jié)合的沉淀試驗(yàn)。沉淀現(xiàn)象不一環(huán)狀沉淀絮狀沉淀免疫濁度沉淀第一節(jié)液相內(nèi)沉淀試驗(yàn)一、環(huán)狀沉淀試驗(yàn)原理：將抗原溶液疊加在細(xì)小玻璃管中抗體溶液上面，因抗血清蛋白濃度高，比重大，在兩液交界的清晰界面上形成白色沉淀環(huán)為陽(yáng)性反應(yīng)。技術(shù)要點(diǎn)：用毛細(xì)滴管吸取抗血清加于沉淀管底部，避免產(chǎn)生氣泡；將抗原溶液沿管壁緩緩加于抗血清液面上，形成清晰的交界面；置沉淀管于室溫下使其反應(yīng)，1-5分鐘內(nèi)在兩液交界面間呈乳白色沉淀環(huán)為陽(yáng)性。30分鐘無(wú)沉淀環(huán)出現(xiàn)則為陰性。方法評(píng)價(jià)：簡(jiǎn)便快速，只能定性。二、絮狀沉淀試驗(yàn)原理：抗原溶液與相應(yīng)抗體溶液混合，在電解質(zhì)存在的條件下，抗原與抗體結(jié)合出現(xiàn)可見的絮狀沉淀。由此可作為最適比測(cè)定的基本方法。技術(shù)要點(diǎn)：抗原稀釋法抗體稀釋法方陣滴定法方法評(píng)價(jià)：簡(jiǎn)單、不需特殊設(shè)備，敏感度較低，受抗原抗體比例影響非常明顯。常用于滴定抗原抗體反應(yīng)的最適比例。三、免疫比濁度分析透射免疫比濁法（turbidimetricimmunoassay）散射免疫比濁法（nephelometryimmunoassay）速率散射比濁法終點(diǎn)散射比濁法免疫膠乳比濁法根據(jù)抗原抗體在體內(nèi)快速結(jié)合的原理

指可溶性抗原、抗體在含有電解質(zhì)的凝膠內(nèi)自由擴(kuò)散形成濃度梯度，二者在比例合適的位置形成肉眼可見的沉淀線或沉淀環(huán)。根據(jù)抗原與抗體反應(yīng)的方式和特性，可分為單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)和雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)。第二節(jié)凝膠內(nèi)沉淀試驗(yàn)

抗體與待測(cè)的抗原,在兩者比例合適的部位結(jié)合形成沉淀環(huán)。環(huán)的大小與抗原的濃度成正相關(guān)。本法穩(wěn)定、簡(jiǎn)便、無(wú)需儀器設(shè)備。重復(fù)性和線性均可信，但靈敏度稍差、耗時(shí)長(zhǎng)、影響因素多。一、單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（平板法）單向免疫擴(kuò)散試驗(yàn)將抗原抗體分別加在瓊脂糖凝膠不同的對(duì)應(yīng)孔中，兩者在凝膠中自由擴(kuò)散，在比例合適處形成白色沉淀線。沉淀線的位置、形狀以及對(duì)比關(guān)系，可進(jìn)行定性分析，如抗原或抗體的存在與否、相對(duì)含量估計(jì)、相對(duì)分子量分析和性質(zhì)分析。二、雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)（平板法）1.抗原或抗體的定性分析。2.抗原、抗體的相對(duì)分子量和相對(duì)濃度的估計(jì)。

雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)應(yīng)用A：Ag、Ab濃度及分子量近似；B：Ag、Ab濃度近似，分子量Ag＜Ab；C：Ag、Ab濃度近似，分子量Ag＞Ab；D：濃度Ag＞Ab，分子量近似；E：濃度Ag＞Ab，分子量Ag＜Ab；F：濃度Ag＜Ab，分子量Ag＞Ab抗原完全相同抗原完全不同抗原部分相同3.抗原性質(zhì)的分析4.抗體效價(jià)的測(cè)定5.抗原或抗體純度的鑒定

本法操作簡(jiǎn)單、特異性高、結(jié)果可靠、成本低廉，但靈敏度低，耗時(shí)長(zhǎng)，不能精確定量。電泳分析與沉淀反應(yīng)的結(jié)合產(chǎn)物，即可溶性抗原和抗體在直流電場(chǎng)的作用下，在凝膠內(nèi)加速定向泳動(dòng)，彼此相遇而特異性結(jié)合，在比例合適處形成可見的沉淀物。該技術(shù)提高了沉淀反應(yīng)的速度和敏感度，廣泛用于臨床實(shí)驗(yàn)診斷和科學(xué)研究。第三節(jié)凝膠免疫電泳技術(shù)對(duì)流免疫電泳01免疫電泳免疫固定電泳火箭免疫電泳030204凝膠免疫電泳技術(shù)

無(wú)沉淀線出現(xiàn)表明無(wú)相應(yīng)的抗原。沉淀線位于抗原抗體孔中間，說(shuō)明兩者比例較適合。沉淀線偏向抗原孔一方，表示抗體濃度＞抗原，反之，則是抗體濃度＜抗原濃度。一、對(duì)流免疫電泳技術(shù)雙向瓊脂擴(kuò)散與電泳相結(jié)合單向免疫擴(kuò)散和電泳的定量檢測(cè)技術(shù)。固定抗體不移動(dòng)，抗原向正極泳動(dòng)，隨著抗原量減少，基底區(qū)越來(lái)越窄，形成的沉淀線逐漸變窄，形成一個(gè)如火箭的沉淀峰，峰的高度與抗原量呈正相關(guān)?；鸺庖唠娪緢D①②③④為標(biāo)準(zhǔn)抗原；⑤⑥為標(biāo)本-+二、火箭免疫電泳技術(shù)單向瓊脂擴(kuò)散與電泳相結(jié)合三、免疫電泳技術(shù)區(qū)帶電泳與雙向瓊脂擴(kuò)散相結(jié)合（如MM患者出現(xiàn)M蛋白）SPGAMκ

λSPGAMκ

λSPGAMκ

λ四、免疫固定電泳技術(shù)返回章目錄區(qū)帶電泳與沉淀反應(yīng)相結(jié)合（免疫球蛋白分型、M蛋白鑒定）IgG

κ型血清

IgG

λ型血清

正常血清

小結(jié)

沉淀反應(yīng)是指可溶性抗原與相應(yīng)抗體在適當(dāng)條件下發(fā)生特異性結(jié)合而出現(xiàn)可見的沉淀現(xiàn)象。1.