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DB41DB41/T1525—2018豬圓環(huán)病毒Ⅱ型實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法2018-01-03發(fā)布2018-04-03實(shí)施河南省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布I1豬圓環(huán)病毒Ⅱ型實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)方法2.1.2酚/氯仿/異戊醇混合液(25:24:1)、0.01mol/L（pH7.2）的磷酸鹽緩沖），2.1.3消化液Ⅱ、陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照（見(jiàn)附錄A），置-20℃保存。實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀，高速冷凍離心機(jī)（12000×g以上二級(jí)生物安全柜，恒溫水浴鍋，2℃~，－采集疑似PCV2感染豬的肺臟、肝臟、腎臟、脾臟用無(wú)菌注射器自耳靜脈或前腔靜脈采集血液3mL～5mL，待血清析出后直接吸取至無(wú)菌Eppend管中，編號(hào)備用；用無(wú)菌注射器先吸入抗凝劑（阿氏液）2mL～3mL2采集的樣品密封后，采用保溫壺或保溫桶加冰密封，盡快運(yùn)送到實(shí)驗(yàn)室。樣品在2℃~8℃條件上清液，將無(wú)菌離心管倒置于吸水紙上，吸干液體；不同無(wú)菌離心管應(yīng)在吸3在質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)成立的前提下，樣品Ct值＞32.0或無(wú)，且無(wú)特定擴(kuò)增曲線，判定為PCV2核酸陰在質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)成立的前提下，樣品29.0＜Ct值≤32.04試劑的配制A.60.01mol/L（pH7.2）的磷酸鹽緩沖）：A.6.30.01mol/LPBS的配制：A液14mL，565'-FAM-TTACCAGCAATCAGACCCCGTT7

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