免疫學(xué)技術(shù) 免疫細(xì)胞的分離純化（臨床免疫檢驗(yàn)）

免疫細(xì)胞的分離與純化免疫細(xì)胞在人體中擔(dān)任著十分重要的角色，各種免疫細(xì)胞是完成免疫應(yīng)答及其調(diào)控的基礎(chǔ)。因此，將免疫細(xì)胞從混合細(xì)胞群體中分離出來對(duì)于了解其在免疫應(yīng)答中的作用及相互關(guān)系有著重要意義前言免疫細(xì)胞的分離純化指參與免疫應(yīng)答或與免疫應(yīng)答相關(guān)的細(xì)胞主要包括淋巴細(xì)胞、單核-巨噬細(xì)胞和樹突狀細(xì)胞等通過分離、純化免疫細(xì)胞及其亞群并對(duì)其數(shù)量和功能測(cè)定，可以判斷機(jī)體免疫功能狀態(tài)對(duì)指導(dǎo)臨床實(shí)踐和科學(xué)研究具有重要意義免疫細(xì)胞白細(xì)胞分離

自然情況下紅細(xì)胞的沉降速度快于白細(xì)胞從而達(dá)到分離白細(xì)胞的目的

某些高分子聚合物（如明膠、右旋糖酐、聚乙烯吡咯烷酮等）可使紅細(xì)胞凝集呈串錢狀，加速紅細(xì)胞沉降使之更易與白細(xì)胞分離自然沉降法高分子聚合物沉降法外周血單個(gè)核細(xì)胞分離外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC）：主要是指淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞常用分離液：Ficoll液和Percoll液分離人外周血中各類血細(xì)胞密度表細(xì)胞種類相對(duì)密度紅細(xì)胞1.093白細(xì)胞1.092血小板1.030~1.035淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞1.075~1.090Ficoll分離法注意溫度以20℃最適宜，超過25℃影響細(xì)胞得率Percoll分離法連續(xù)密度梯度分離液（Percoll液+PBS，離心）加入PBMC懸液或抗凝全血1000×g離心20min淋巴細(xì)胞的純化1.黏附法用于去除單核細(xì)胞2.羧基鐵吞噬法磁鐵吸引羧基鐵原理3.苯丙氨酸甲酯去除法苯丙氨酸甲酯具有親溶酶體性質(zhì)1.多次洗滌離心法2-3次離心、洗滌去除大部分血小板2.胎牛血清梯度離心法適用于外周血中血小板異常增多的情況1.低滲裂解法不同細(xì)胞對(duì)滲透壓的滲透脆性不同2.氯化銨裂解法在PBMC懸液中加入適量0.83%氯化銨去除血小板去除單核細(xì)胞去除紅細(xì)胞淋巴細(xì)胞亞群的分離PBMC懸液與SRBC混合Ficoll法密度梯度離心收集管底細(xì)胞并低滲裂解E花環(huán)沉降法：主要用于T細(xì)胞的分離淋巴細(xì)胞亞群的分離PBMC懸液加入尼龍棉柱37℃中靜置1～2小時(shí)獲得T細(xì)胞獲得B細(xì)胞預(yù)熱的含小牛血清培養(yǎng)液洗脫冷培養(yǎng)液邊沖洗邊擠壓尼龍棉分離法可分離T細(xì)胞和B細(xì)胞淋巴細(xì)胞亞群的分離免疫磁珠分離法淋巴細(xì)胞亞群的分離流式細(xì)胞術(shù)分離法是目前比較先進(jìn)的細(xì)胞分離手段和方法吞噬細(xì)胞的分離單核細(xì)胞分離巨噬細(xì)胞分離中性粒細(xì)胞分離Percoll密度梯度分離法流式細(xì)胞術(shù)分離法免疫磁珠分離法黏附法斑蝥敷貼法腹腔滲出液分離法右旋糖酐沉降法0102030405白細(xì)胞分離外周血單個(gè)核細(xì)胞分離淋巴細(xì)胞純化淋巴細(xì)胞亞群分離吞噬細(xì)胞的分離

小結(jié)思考題BC1.為什