涂片染色技術(shù)-血涂片染色技術(shù)（臨床檢驗(yàn)技術(shù)）

瑞氏染色染色原理

將一小滴血液均勻涂在玻片上，呈單層緊密分布，制成薄血片。用含天青B和伊紅的瑞氏染液進(jìn)行染色。細(xì)胞中的堿性物質(zhì)會(huì)與酸性染料伊紅結(jié)合成紅色；細(xì)胞中的酸性物質(zhì)會(huì)與堿性染料亞甲蘭結(jié)合染成藍(lán)色；在中性顆粒與伊紅和亞甲蘭均可結(jié)合，染成淡紫紅色。染色原理瑞氏染液亞甲蘭+++伊紅----堿性物質(zhì)(Hb、嗜酸性顆粒)+++++酸性物質(zhì)(淋巴細(xì)胞胞質(zhì)嗜堿性顆粒)---------中性物質(zhì)(中性顆粒)±±±±染色器材載玻片、推片、吸耳球、顯微鏡、酒精燈、采血針和EDTA-K2真空管試劑：瑞氏染液標(biāo)本：EDTA-K2抗凝血Ⅰ液染液Ⅱ液磷酸鹽緩沖液（PH）血壓片的制備

良好的血涂片

1.厚薄適宜

2.頭體尾要明顯

3.細(xì)胞分要均勻

4.血膜邊緣要整齊

5.留有一定空隙fastslow血壓片的制備血壓片的制備染色過程操作：1.靜脈采血2.制作血涂片3.干燥涂片4.標(biāo)記涂片5.染色6.觀察結(jié)果1.將玻片平置于染色架上2.滴加染液Ⅰ液3-5滴，迅速蓋滿血涂片，0.5-1.0分鐘3.滴加Ⅱ液(等量或稍多)4.用吸耳球吸勻，讓兩種液體充分混合，5-10分5.用流水沖去染液，待干染色過程染色結(jié)果注意事項(xiàng)1.瑞氏染液：要放置時(shí)間長，染液成熟。2.采血：不能使用肝素抗凝標(biāo)本

玻片必須清潔干燥無塵使用玻片只能手持玻片邊緣。3.制作涂片：角度、速度、血量4.干燥涂片：一定要干透后才可染色5.染色：染液要適量，沖洗時(shí)不能先倒掉染液，應(yīng)以流水一起沖洗，時(shí)間不能過久，沖洗完的血涂片應(yīng)立放于支架上。思考題：在緩沖液偏酸或偏堿的情況下，染色結(jié)果會(huì)有何變化？血紅蛋白、嗜酸性顆粒、嗜堿性顆粒、染色質(zhì)分別是酸性還是堿性？血涂片的制備血細(xì)胞分析儀能夠快速的進(jìn)行白細(xì)胞分類計(jì)數(shù)，但該法只是一種篩查的方法。

血涂片制備染色后顯微鏡檢查是血細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢查的基本方法，對(duì)于各種血液病的診斷和鑒別診斷，具有重要價(jià)值。一、主要器材推片載玻片二、操作好涂片的標(biāo)準(zhǔn)1234兩側(cè)應(yīng)該留有空隙邊緣整齊頭體尾分明厚薄適宜三、質(zhì)量保證4無油膩3干燥2中性1清潔1玻片載玻片和推片應(yīng)符合要求2標(biāo)本未抗凝的毛細(xì)血管血或靜脈血EDTA-K2抗凝靜脈血可以用肝素抗凝抗凝血嗎？3、制片①制備厚薄適宜的血涂片推片速度推片速度血滴大小②制備血膜分布均勻的血片A推片邊緣不整齊C用力不勻B載玻片不清潔血膜分布不均010203血膜太短涂片質(zhì)量問題角度大速度快可能原因調(diào)整推片的角度及推片的速度解決辦法血涂片質(zhì)量不佳的原因及解決辦法血涂片質(zhì)量不佳的原因及解決辦法010203血膜太薄太長涂片質(zhì)量問題角度小速度慢可能原因調(diào)整推片的角度及推片的速度解決辦法血涂片質(zhì)量不佳的原因及解決辦法010203血膜太厚兩邊未留空隙涂片質(zhì)量問題血量太大血滴展開太寬可能原因減少血量展開血滴時(shí)間不可太長解決辦法血涂片質(zhì)量不佳的原因及解決辦法010203血膜不規(guī)則間斷涂片質(zhì)量問題推片用力不均勻推片與載玻片貼太緊可能原因推片與載玻片接觸即可，不可貼太緊推片用力勻速均勻解決辦法4.制片后處理制備好的血涂片應(yīng)在一小時(shí)內(nèi)染色3