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家畜生理學(xué)實驗血液生理之白細胞張宇飛指導(dǎo)教師:趙懷平(高級實驗室)了解白細胞計數(shù)原理,掌握其技術(shù)方法、紅細胞沉降速率的測定方法及測定、測定紅細胞膜對低滲溶液的抵抗能力。二、實驗原理白細胞舊稱白血球,也被稱為免疫細胞,體和動物血液及組織中的無色細胞,能吞噬異物或產(chǎn)生抗體,以幫助機體防御感染。白細胞一般有活躍的移動能力,它們可以從血管內(nèi)遷移到血管外,或從血管外組織遷移到血管內(nèi)。因此,白細胞除存在于血液和淋巴中外,也廣泛存在于血管、淋巴管以外的組織中。血液中的白細胞有五種,按照體積從小到大是:淋巴細胞,嗜堿粒細胞,中性粒細胞,單核細胞和嗜酸細胞。白細胞是無色有核的血細胞,在血液中一般呈球形,根據(jù)形態(tài)差異可分為顆粒和無顆粒兩大類。故白細胞計數(shù)具有重要的生理意義。懸浮于低張溶液中的紅細胞,由于溶液張力差異,可使紅細胞外的水漸漸進入紅細胞中。紅細胞先變?yōu)榍蛐?;?dāng)達到臨界容量時,則紅細胞破裂溶解。觀察上清液游離Hb量即可反映出紅細胞脆性。將抗凝血放入血沉管中垂直靜置,紅細胞由于密度較大而下沉。通常以紅細胞在第一小時末下沉的距離表示紅細胞的沉降速度,稱為紅細胞沉降率,即血沉。家兔血、血細胞計數(shù)板、顯微鏡、試管、血沉管四、實驗項目白細胞計數(shù)‘WBC’01紅細胞沉降率的測定02紅細胞的脆性實驗031、白細胞計數(shù)3、白細胞計數(shù)①吸血及血液的稀釋:吸血及血液的稀釋均在紅細胞吸管中進行。②推片及充液:在推片和充液前,先在顯微鏡下檢查計數(shù)板和蓋玻片是否清潔,若不干凈則清潔后使用。推片是指用手指將蓋玻片固定在計數(shù)板的正中間計數(shù)室邊緣,然后大拇指將其緩慢的推行,使蓋玻片貼在計數(shù)室兩側(cè)的槽上,充液是指將稀釋好的血液搖勻后,先棄去吸管內(nèi)的前兩滴,然后用半滴放到計數(shù)室和蓋玻片的間隙,同毛吸作用使血液進入計數(shù)室內(nèi)。③計數(shù):稀釋的血液進入計數(shù)室后,靜置2~3分鐘后,在低倍顯微鏡下找中央大方格,然后在高倍鏡下數(shù)4個角上的小方格和中央小方格中紅細胞數(shù)目。④結(jié)果計算:N指細胞總數(shù)稀釋200倍:x=N﹡107稀釋100倍:x=N﹡2.5﹡107紅細胞沉降率的測定用清潔、干燥的血沉管,小心吸血至最高刻度“0”處。絕對不能有氣泡,如果有氣泡重新做。將吸有血液的血沉管置于血沉管架上,分別在15min、30min、1h時讀取血沉管上部血漿的高度,以毫米表示。管號123456789101%氯化鈉/mL1.801.401.301.201.101.000.900.800.700.60蒸餾水/mL0.200.600.700.800.901.001.101.201.301.40氯化鈉濃度/%0.900.700.650.600.551.000.450.400.350.30取決10支小試管;分別配制上述不同濃度的氯化鈉溶液;各管再加入全血一滴;混勻后靜置1小時觀察結(jié)果。1、白細胞計數(shù)臨床意義
1.生理變化
(1)劇烈的體力勞動或情緒激動都使白細胞增加。
(2)新生兒的白細胞數(shù)較成人高,3日后降到每微升10,000左右。
(3)在妊娠期中,白細胞常輕度增多,分娩時增多可能更顯著。
(4)慢性特發(fā)性白細胞增多癥,其白細胞總數(shù)可持續(xù)在10,000~20,000/μl,但無其他異常發(fā)現(xiàn)。
(5)高溫作業(yè)、飲酒及飯后亦可能有輕度增加。
病理變化
增高見于
急性化膿性感染所引起的急性周身性感染,局部炎癥(膿腫、腦膜炎、大葉性肺炎、蘭尾炎、扁桃體炎、膿胸、敗血癥等)以及其他一些細菌感染(如猩紅熱、霍亂、白喉等)。此外,白血病、骨髓纖維化、惡性腫瘤、真性紅細胞增多癥、尿毒癥、酸中毒、手術(shù)后、急性失血后、某些藥物中毒和燒傷等亦常增高。其中尤以慢性白血病增高最多,有時可達幾十萬;骨髓纖維化大多在10,000~20,000;真性紅細胞增多癥大多在12,000~30,000。由于感染等所引起的類白血病反應(yīng),有時亦可高達數(shù)萬。
減少見于
(1)某些感染:細菌(如傷寒、付傷寒、布氏菌病等);病毒(如流感、麻疹、風(fēng)疹、登革熱等)及各種重度感染(如粟粒性肺結(jié)核病、嚴重敗血癥等)。
(2)脾功能亢進:見于肝硬化、班替氏綜合征等。
(3)血液?。涸偕系K性貧血,急性粒細胞缺乏癥(可減到只剩數(shù)百/μl),非白血病性白血病、惡性網(wǎng)狀細胞增多癥。
(4)化學(xué)因素:可致白細胞減少的有抗癌藥物(氮芥、環(huán)磷酰胺、長春花堿及長春新堿等)、解熱鎮(zhèn)痛藥(氨基比林、氨替比林、保太松、復(fù)方阿斯匹林及水揚酸鈉等)、抗甲狀腺藥(兩基硫氧嘧啶、甲基硫氧嘧啶,他巴唑、甲亢平等)、抗癲癇藥(苯妥英鈉、巴比妥類等)、磺胺類(磺胺噻唑、磺胺嘧啶、長效磺胺、磺胺異惡唑等)、抗生素(氯霉素、合霉素、新生霉素、青霉素、鏈霉素、金霉素等)、抗瘧藥(奎寧、撲瘧奎寧、伯氨奎寧等)、抗癆藥(異煙肼、異煙宗、對氨基水揚酸、氨硫脲等)、抗組織胺藥(苯海拉明、苯沙明等)、抗糖尿病藥(D860、P607等)、抗高血壓藥(氯噻嗪氫氯噻嗪、甲基多巴、利血平、氯丙嗪等)、利尿藥(汞利尿劑、利尿酸、乙酰唑胺等)、其它(苯、金鹽、鉍、有機砷、山道年、二硝基酚、DDT、青霉胺等)。
(5)物理因素(X線、放射性物質(zhì))。
注:白細胞計數(shù),對病情動態(tài)觀察具有一定的意義。鑒于白細胞的正常數(shù)值幅度較大,因此,臨床在分析結(jié)果時,須與分類和原來的白細胞基數(shù)結(jié)合起來,否則易造成延誤診斷。
2.紅細胞沉降率的測定紅細胞沉降率(ESR)測定
臨床意義
ESR的變化主要同血漿中球蛋白,如α2和γ球蛋白,尤其是與纖維蛋白原的含量多少有關(guān),如果球蛋白與纖維蛋白原含量多于正常,血沉就增快,所以變化無特異性。但對任何一種血沉增速的疾病,在病程內(nèi)定期觀察血沉的動態(tài)變化,可以幫助推斷病變的發(fā)展情況。
增高見于:
生理性:婦女月經(jīng)期,妊娠后3個月到產(chǎn)后1個月,小兒和50歲以上的老人。
病理性:
(1)各種急性的全身和局部感染,如活動性結(jié)核病、瘧疾、風(fēng)溫?zé)岷头窝住?/p>
(2)結(jié)締組織性疾患,如多發(fā)性肌炎。
(3)在產(chǎn)重貧血、白血病、某些惡性腫瘤、甲亢、腎炎以及鉛、砷、酒精中毒時亦常增高。
減低見于:
真性紅細胞增多癥及繼發(fā)性紅細胞增多癥、低纖維蛋白原血癥、球形紅細胞增多癥、心臟代償功能障礙等。
01020304紅細胞的脆性實驗結(jié)果:血:上層液開始呈透明紅色且管底有紅細胞者;血:溶液為透明紅色且管底無紅細胞者;必要時可離心后再觀察結(jié)果。No.3臨床意義:脆性增加:遺傳性球形紅細胞增多癥,口形紅細胞
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