HIV樣品采集、運(yùn)送與保存

HIV樣品的采集、運(yùn)送與保存規(guī)范樣本采集的重要性高質(zhì)量的實(shí)驗(yàn)結(jié)果取決于規(guī)范化樣本采集和處理正確的病人準(zhǔn)備,標(biāo)本采集,標(biāo)本包裝和運(yùn)輸至關(guān)重要能夠保證研究對(duì)象和研究人員的安全規(guī)范性文件引用《艾滋病和艾滋病病毒感染診斷標(biāo)準(zhǔn)》中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)WS-293《艾滋病病毒感染者及艾滋病患者CD4+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)質(zhì)量及保證指南》中國CDC2013《HIV-1病毒載量測(cè)定及質(zhì)量保證指南》中國CDC2013《HIV-1基因型耐藥檢測(cè)及質(zhì)量保證指南》中國CDC2013ConsolidatedGuidelinesonHIVTestingServices.WHOJuly2015《可感染人類的高致病性病原微生物菌(毒)種或樣本運(yùn)輸管理規(guī)定》衛(wèi)生部第45號(hào)令，2006常見問題1.標(biāo)本量不足：血清樣本不足800ul，影響：

a.將不能滿足正常實(shí)驗(yàn)要求的樣本量；b.患者不相信檢測(cè)結(jié)果時(shí)，提出要求用原標(biāo)本復(fù)查而保存的標(biāo)本無法進(jìn)行二次復(fù)檢CD4檢測(cè)抗凝全血低于5ml，影響：

a.細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果；b.無法分離、保存血漿、淋巴細(xì)胞富集液樣本常見問題2.標(biāo)本運(yùn)輸、保存不當(dāng)血清標(biāo)本出現(xiàn)溶血、長菌、滲漏現(xiàn)象影響：a.引起結(jié)果出現(xiàn)假陰性或假陽性；b.交叉污染,出現(xiàn)假陽性抗凝血有溶血、凝血、結(jié)冰現(xiàn)象影響：a.用于CD4計(jì)數(shù)將影響細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果；b.血漿用于病毒載量實(shí)驗(yàn)將影響病載結(jié)果

常見問題3.標(biāo)本標(biāo)識(shí)問題：患者姓名缺失或姓名與送檢單不相符影響：

a.檢測(cè)報(bào)告無法發(fā)放;b.發(fā)出錯(cuò)誤報(bào)告引發(fā)糾紛準(zhǔn)備步驟1、根據(jù)檢測(cè)項(xiàng)目的具體要求，確定采集樣品的種類、處理、保存及運(yùn)輸?shù)臅r(shí)限和方法，按照臨床采血技術(shù)規(guī)范的要求操作，遵守生物安全要求準(zhǔn)備步驟2、要檢查所需物品是否已備齊，是否在有效期內(nèi)，有無破損，是否足量，特別應(yīng)檢查受檢者信息與樣品容器表面的標(biāo)記是否一致，并注明樣品采集時(shí)間及唯一編碼。采集血液標(biāo)本宜選擇合適的室內(nèi)（外）采血空間，受檢者坐（臥）于合適的位置準(zhǔn)備步驟采血用具、皮膚消毒用具的準(zhǔn)備1）.針頭；2）.針頭固定器；3）.5-10毫升EDTA或普通真空采血管：EDTA管為淺紫色蓋，普通管為紅色蓋，1支/人，采血前標(biāo)記姓名、編號(hào)20160001，全血）與采血日期（2014年5月28日）；4）.壓脈帶；5）.碘酒和酒精棉球；6）.枕頭墊；7）.無菌乳膠手套；8）.試管架9）.邦迪創(chuàng)可貼或醫(yī)用膠布；10）.硬質(zhì)廢棄物容器和針頭消毒液

口腔黏膜滲出液樣本應(yīng)使用試劑盒提供的專用采樣工具，不是唾液尿液樣本建議使用可保持尿液穩(wěn)定的專用采尿管，帶有唯一編碼，并保留唯一編碼準(zhǔn)備步驟3、樣品的編碼和記錄應(yīng)制定樣品編碼的標(biāo)準(zhǔn)操作程序(SOP)，規(guī)定樣品編碼的原則和方法，為樣品制定唯一性編碼(編號(hào))，保證其唯一性。對(duì)外送檢樣品應(yīng)該寫上受檢者姓名，不能用單位編碼代替(特殊規(guī)定除外）準(zhǔn)備步驟4、采血前，先對(duì)試管或?yàn)V紙進(jìn)行標(biāo)記，核對(duì)后編碼。要將標(biāo)簽貼在試管的側(cè)面，推薦使用預(yù)先印制好的、專門用于冷凍儲(chǔ)存的耐低溫標(biāo)簽

5、應(yīng)使用專門的樣品記錄本或登記表記錄樣品，同時(shí)錄入電腦保存準(zhǔn)備步驟6、采血者的準(zhǔn)備工作穿白大褂帶無菌乳膠手套、帽子、口罩原有創(chuàng)口要有保護(hù)：如創(chuàng)可貼準(zhǔn)備步驟7、被采血者的準(zhǔn)備工作

1）詢問有無出血史，如有，則放棄采血

2）坐姿

3）采血部位消毒

4）采血部位；肘部、頸部（吸毒者）

HIV血清學(xué)檢測(cè)樣本的采集和運(yùn)送抗體檢測(cè)：全血、血清、血漿、口腔黏膜滲出液、尿液、干血斑抗原檢測(cè)：全血、血清、血漿、病毒培養(yǎng)上清液HIV血液樣品的采集1、血清樣品采集:消毒局部皮膚，用一次性注射器（或不含抗凝劑的真空采血管）抽取5~10ml靜脈血，室溫下自然放置1

2h，待血液凝固、血塊收縮后再用1500~3000r/min離心15min，吸出血清，置于血清凍存管備用HIV血液樣品的采集2、抗凝全血樣品采集：消毒局部皮膚，用加有抗凝劑（EDTA鈉鹽或鉀鹽、枸櫞酸鈉、肝素鈉）的真空采血管抽取適量靜脈血，或用一次性注射器抽取靜脈血，轉(zhuǎn)移至加有抗凝劑的試管中，立即輕輕顛倒混勻6～8次，使抗凝管中的抗凝劑與血液充分混勻，備用HIV血液樣品的采集

3、末梢全血：消毒局部皮膚（成人和1歲以上兒童可選擇耳垂、中指、無名指或食指，1歲以下兒童采用足跟部）。用采血針刺破皮膚，用無菌紗布擦掉第一滴血。收集滴出的血液，備用HIV血液樣品的采集4、血漿：將采集的抗凝全血1500~3000r/min離心15min，上層即為血漿，吸出置于血清凍存管中，備用5、淋巴細(xì)胞富集液：將采集的抗凝全血1500~3000r/min離心15min，吸取血漿層下的淋巴細(xì)胞富集液，置于血清凍存管中，備用HIV血液樣品的采集6、濾紙干血斑制備：根據(jù)需要，可將采集的各種血液樣品制備成濾紙干血斑，用于檢測(cè)。最常用的是用抗凝全血、末梢全血和血漿制備濾紙干血斑用移液器從樣品管中吸取100μL抗凝全血（或血漿），對(duì)準(zhǔn)濾紙印圈的中心處，將樣品滴在濾紙上，或?qū)⒋┐毯笞云つw傷口流出的末梢全血直接滴加在濾紙印圈的中心處根據(jù)需要，連續(xù)在數(shù)個(gè)印圈上滴加樣品于室溫下自然干燥至少4小時(shí)（潮濕氣候下至少干燥24小時(shí)），不要加熱或堆疊血斑，勿與其它界面接觸血斑充分干燥后，將其放入密封袋中，每張干血斑單獨(dú)保存，避免血斑之間的相互污染，同時(shí)放入干燥劑及濕度指示卡，密封包裝，保存?zhèn)溆媚蛞汉涂谇火つB出液樣品的采集尿液：推薦使用專用采尿管，保持尿液穩(wěn)定，尿液樣品可采集隨機(jī)尿，女性經(jīng)期取中段尿口腔黏膜滲出液：非唾液，使用試劑盒提供的容器收集樣品，存放時(shí)間和是否凍存以試劑盒說明書為準(zhǔn)樣品運(yùn)送要求全血、血漿的運(yùn)送應(yīng)符合生物安全要求；要獲得相應(yīng)部門批準(zhǔn)并由具有資質(zhì)的人員專程護(hù)送應(yīng)采用三層容器對(duì)樣品進(jìn)行包裝，隨樣品應(yīng)附有與樣品唯一性編碼相對(duì)應(yīng)的送檢單。送檢單應(yīng)標(biāo)明受檢者姓名、樣品種類等信息，并應(yīng)放置在第二層和第三層容器之間樣品包裝要求第一層容器：直接裝樣品，應(yīng)防滲漏，樣品應(yīng)置于帶蓋的試管內(nèi),試管上應(yīng)有明顯的標(biāo)記，標(biāo)明樣品的唯一性編碼或受檢者姓名、種類、采集時(shí)間。在試管的周圍應(yīng)墊有緩沖吸水材料，以免碰碎和標(biāo)本溢出造成污染隨樣品應(yīng)附有送檢單，送檢單應(yīng)與樣品分開放置，送檢單裝在帶拉鏈封口塑料袋中運(yùn)輸?shù)诙尤萜鳎喝菁{并保護(hù)第一層容器，可以裝若干個(gè)第一層容器。要求不易破碎、帶蓋、防滲漏、易于消毒處理樣品包裝要求

第三層容器：容納并保護(hù)第二層容器的運(yùn)輸用外層包裝箱。外面要貼上醒目的標(biāo)簽，注明數(shù)量、收樣和發(fā)件人及聯(lián)系方式，同時(shí)要注明“小心輕放、防止日曬、小心水浸、防止重壓”等字樣，還應(yīng)易于消毒此外？樣品運(yùn)送注意事項(xiàng)(一)

做HIV血清學(xué)抗體檢測(cè)時(shí)，實(shí)驗(yàn)室間傳遞的樣品為血清或血漿,除特殊情況外一般不運(yùn)送全血。樣品應(yīng)置于帶蓋的試管內(nèi)，試管上應(yīng)有明顯的標(biāo)記，標(biāo)明樣品的編號(hào)或受檢者姓名、采集時(shí)間。隨樣品應(yīng)附有HIV抗體檢測(cè)送檢單和HIV抗體復(fù)檢檢測(cè)單，送檢單應(yīng)與標(biāo)本分開，不能混放；同時(shí)應(yīng)該填寫受檢者的詳細(xì)住址、聯(lián)系電話等信息樣品運(yùn)送注意事項(xiàng)（二）用于抗體檢測(cè)的血清和血漿樣品應(yīng)在凍存條件下運(yùn)送。每一包裝的體積不得超過50ml（三）運(yùn)送感染性材料必須有記錄（四）特殊情況下經(jīng)有關(guān)部門批準(zhǔn)可以用特快專遞郵寄樣品，但必須按三層包裝，將樣品管包扎好，嚴(yán)禁使用玻璃容器，以保證不會(huì)破碎和溢漏樣品的接收1、樣品包裹必須在具有處理感染性材料能力的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)、由經(jīng)過培訓(xùn)的、穿戴防護(hù)衣、戴口罩、防護(hù)眼鏡的工作人員在生物安全柜中打開，用后的包裹應(yīng)及時(shí)進(jìn)行消毒2、核對(duì)樣品與送檢單，檢查樣品有無破損和溢漏。如發(fā)現(xiàn)溢漏應(yīng)立即將尚存留的樣品移出，對(duì)樣品管和盛器消毒，同時(shí)報(bào)告實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人和上一級(jí)實(shí)驗(yàn)室技術(shù)人員樣品的接收3、檢查樣品的狀況，記錄有無嚴(yán)重溶血、微生物污染、血脂過多以及黃疸等情況，如污染過重或者認(rèn)為樣品不能被接受，則應(yīng)將樣品安全廢棄。并要將樣品情況立即通知送樣人，要求重新采集樣品4、接收樣品時(shí)應(yīng)填寫樣品接收單樣品的保存

1、用于抗體和抗原檢測(cè)的血清或血漿樣品，短期(一周)內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可存放于2～8℃，一周以上應(yīng)存放于-20℃以下

2、口腔黏膜滲出液樣品應(yīng)即刻使用，需要保存時(shí)應(yīng)以產(chǎn)品說明書為準(zhǔn)

3、尿液樣品，使用專用采尿管，室溫下可保存2周，一年內(nèi)存放應(yīng)2～8℃，一年以上凍存條件、是否添加防腐劑等以產(chǎn)品說明書為準(zhǔn)

4、全血樣品室溫保存不超過48h,如果用CD45設(shè)門，則不超過72h

樣品的保存5、篩查實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)出的陽性樣品應(yīng)及時(shí)送確診實(shí)驗(yàn)室，篩查陰性樣品可根據(jù)具體要求決定保存時(shí)間，建議至少保存1~2個(gè)月

6、確證實(shí)驗(yàn)室收到的篩查陽性樣品，無論確證結(jié)果如何，都應(yīng)將剩余的樣品保存至少10年，特殊用途或?qū)ｍ?xiàng)項(xiàng)目的樣品根據(jù)具體要求確定保存時(shí)間

CD4+T、CD8+T淋巴細(xì)胞檢測(cè)樣本的采集和運(yùn)送樣本的采集1.用EDTA鈉鹽或鉀鹽，枸櫞酸鈉、肝素鈉作抗凝劑的真空采血管采集抗凝血2.采血管上注明樣品姓名、編號(hào)、采集日期等信息3.采血后立即握住試管兩端，輕輕垂直顛倒混勻6~8次，防止血液凝固4.樣本不能溶血、凝血及結(jié)冰樣本的運(yùn)送

1.在室溫（18～25℃）或4℃（特殊要求時(shí)）下保存和運(yùn)輸樣品，避免極端溫度（冷凍或過熱）。超過37℃的溫度會(huì)破壞細(xì)胞，對(duì)細(xì)胞計(jì)數(shù)有影響。天氣熱時(shí)，需要用一個(gè)隔熱的容器裝樣品，并且把這個(gè)容器放于另一個(gè)有冰袋的容器中。這種方法有助樣品的保存。切忌用冰袋直接接觸樣本

2.應(yīng)采用三層容器對(duì)樣品進(jìn)行包裝，隨樣品應(yīng)附有與樣品唯一性編碼相對(duì)應(yīng)的送檢單。

3.采用統(tǒng)一規(guī)格的標(biāo)準(zhǔn)送檢單，按要求完整填寫送檢單（包括送檢單位、姓名、性別、年齡、治療編號(hào)、樣品種類、HIV確證日期、是否為第一次檢測(cè)CD4等）

4.對(duì)于HIV新確認(rèn)的病人，首次檢測(cè)CD4，須同時(shí)攜帶病人HIV確認(rèn)報(bào)告單復(fù)印件

5.樣本采集后必須在24小時(shí)之內(nèi)送達(dá)免疫功能檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室

6.樣品送達(dá)的同時(shí)應(yīng)加送excel電子版名單（要求有治療編號(hào)、姓名、性別、年齡、送檢單位、送檢日期、送檢人、HIV確認(rèn)日期、第一次檢測(cè)CD4請(qǐng)標(biāo)明“1”等信息）發(fā)送到郵箱____________。樣本的受理

1.專人接收樣品，檢查樣品質(zhì)量、數(shù)量并核對(duì)標(biāo)識(shí)

2.溶血、凝血或結(jié)冰的樣品應(yīng)視為不合格樣品，超過檢測(cè)允許時(shí)間的樣品不可檢測(cè)

3.如果樣品運(yùn)輸過程中溫度超出室溫范圍（18～25℃），但沒有明顯的溶血或結(jié)冰，可以處理樣品，但要在工作表的報(bào)告上注明溫度條件。不能立即加熱或冷凍樣品以使其達(dá)到室溫，否則會(huì)影響免疫表型檢測(cè)結(jié)果4.提前電話聯(lián)系受理樣本，聯(lián)系電話：________。5.按中心質(zhì)控要求需采用統(tǒng)一規(guī)格的標(biāo)準(zhǔn)送檢單，按要求完整填寫送檢單，送檢單上須標(biāo)明采樣時(shí)間，并具體到時(shí)、分6.HIV陽性樣本初次送檢必須附帶該樣本的HIV陽性確認(rèn)報(bào)告復(fù)印件7.若是復(fù)查樣本請(qǐng)?jiān)谒蜋z單上填寫上次CD4檢測(cè)時(shí)間8.送檢單應(yīng)與標(biāo)本分開，不能混放9.標(biāo)本標(biāo)識(shí)應(yīng)清晰、容易辨認(rèn)，與送檢單必須一致結(jié)果查詢

1.檢測(cè)結(jié)果查詢時(shí)間：請(qǐng)?jiān)谒蜆拥谌煲院蟛樵儥z測(cè)結(jié)果。

2.報(bào)告發(fā)放和結(jié)果查詢電話：________。

病毒載量樣本的采集和運(yùn)輸樣本的采集1.用加有EDTA或枸櫞酸鈉抗凝劑的真空采血管采集標(biāo)本，采樣后須反復(fù)顛倒采血管，使樣本與抗凝劑充分混勻，不能用肝素抗凝劑抗凝2.采集的樣本應(yīng)在6小時(shí)內(nèi)分離血漿*1500~3000r/min離心20min*3.凍存管需滅菌4.樣品量要求：分裝單管血漿1.8ml5.用于核酸檢測(cè)的血漿和血細(xì)胞樣品4天內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)的可存放于4℃，3個(gè)月以內(nèi)應(yīng)存放于-20℃以下，3個(gè)月以上應(yīng)置于-70℃以下6.樣品擺放順序，從左到右，從下到上我們實(shí)驗(yàn)室要求：分離血漿后，請(qǐng)馬上送往分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室；如不能立即送樣，須置于-20℃的冰箱內(nèi)，于一個(gè)月內(nèi)送至檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室樣本的運(yùn)送

1.病毒載量檢測(cè)樣本應(yīng)低溫下(