消毒質量現(xiàn)場采樣及檢測方法

消毒質量現(xiàn)場采樣及檢測方法采樣及檢測原則

GB15982-1995醫(yī)院消毒衛(wèi)生標準規(guī)定：

采樣時間：消毒處理后，醫(yī)療活動前期間

采樣后盡快檢測，送檢時間≤6小時，若樣品保存0—4℃，送檢時間≤24h一、空氣器材：9cm普通營養(yǎng)瓊脂平板方法：平板暴露法（沉降法）一般情況：按GB15982-1995醫(yī)院消毒衛(wèi)生標準：布點方法：室內(nèi)面積≤30m2,設內(nèi)、中、外對角線三點，內(nèi)外布點距墻壁1m；室內(nèi)面積＞30m2，設中央及四角5點，四點的布點位置距墻1m，暴露時間5min培養(yǎng)時間：48小時計算公式：細菌總數(shù)（cfu/m3）=50000N/(A×T)A：平板面積（cm2）T：平板暴露時間N：平均菌落數(shù)檢出限：對于≤30m2房間，如果3塊平板共長1個菌，則根據(jù)公式，計算結果為52.3報＜53cfu/m3如果先四舍五入，保留一位小數(shù)，以平均菌量0.3計，結果是47.2，報＜48cfu/m3數(shù)值的不同與在哪一步采取數(shù)字修約有關對于＞30m2房間計算結果為31.4，報＜32cfu/m3上述情況說明：平板沉降5分鐘只能適用于衛(wèi)生標準值高于檢測限的空氣采樣，例如普通手術室，標準值≤200cfu/m3對于潔凈度要求高的環(huán)境，該方法的最低檢出限與評價標準不一致GB15928-1995規(guī)定Ⅰ類環(huán)境≤10cfu/m3怎么解決？延長采樣時間潔凈手術室：依據(jù)GB50333-2002檢測平板沉降方法：沉降時間30min布點要求及沉降菌標準區(qū)域等級潔凈度布點數(shù)標準（cfu/皿）特別潔凈手術室手術區(qū)百級≥13點≤0.2周邊區(qū)千級≥5點≤0.4標準潔凈手術室手術區(qū)千級≥5點≤0.75周邊區(qū)萬級≥2點≤1.5一般潔凈手術室手術區(qū)萬級≥2點≤2周邊區(qū)十萬級≥2點≤4二、物體表面1、采樣液對于只清潔、未消毒的表面：無菌生理鹽水消毒后的物體表面：根據(jù)使用消毒劑選擇含相應中和劑的采用液2．采樣方法5cm×5cm標準規(guī)格板棉拭采樣≥100cm2；門把手等不規(guī)則物體表面：直接涂抹3、中和劑的選擇消毒劑中和劑成分0.5%碘伏0.5%硫代硫酸鈉、0.5%吐溫80消毒劑2000mg/L有效氯0.5%硫代硫酸鈉、0.5%吐溫8075%乙醇0.5%卵磷脂、0.5%吐溫80季銨鹽0.5%卵磷脂、0.5%吐溫80洗必泰0.5%卵磷脂、0.5%吐溫802%戊二醛1%甘氨酸、0.5%吐溫80中和劑中需要加硫代硫酸鈉的：過氧化氫、過氧乙酸、二氧化氯、氧化還原電位水、臭氧、含氯消毒劑、碘和其他消毒劑要加卵磷脂和吐溫80的：乙醇、洗必泰、季銨鹽類、要加甘氨酸的：戊二醛、三氯生、對氯間二甲苯酚、要加皂基的：聚六亞甲基胍（若沒有皂基，可將1%組氨酸、5%卵磷脂、10%吐溫80加入D/E肉湯

醫(yī)院常用手消毒劑的中和劑舉例：愛護佳（3M公司）：2%卵磷脂4%吐溫80百能牌免洗外科手消毒液：2%甘氨酸6%卵磷脂10%吐溫80詩樂氏（含雙氯苯雙胍乙烷）、凈手（氯羥基二苯醚）：1%組氨酸4%卵磷脂6%吐溫804、檢測細菌總數(shù)：取1ml接種平皿金黃色葡萄菌：1ml接種9mlSCDLP液體培養(yǎng)基，36±1℃培養(yǎng)24h，血平板分離乙型溶血性鏈球菌：樣品1ml接種1%葡萄糖肉湯沙門氏菌：按照GB4789.41ml加入增菌液中四、工作人員手1．采樣液：無菌生理鹽水適合只清潔，未用消毒劑的情況含相應中和劑的采樣液適用于消毒后采樣手衛(wèi)生效果的監(jiān)測方法WS/T313-2009《醫(yī)務人員手衛(wèi)生規(guī)范》附錄B如果消毒后采樣，需要用證實符合要求的中和劑怎樣知道用何種中和劑？通過進貨時查驗產(chǎn)品的檢驗報告或進行中和劑鑒定試驗2．采樣方法被檢人員五指并攏，用浸有含相應中和劑的無菌洗脫液的棉拭子，在雙手指屈面從指根到指端往返涂擦2次（一只手涂擦面積約30cm2）并隨之轉動采樣棉拭，剪去操作者手接觸部位，將棉拭投入10ml采樣液。檢測方法：混勻器振蕩20秒或用力振打80次，取1ml接種，36℃培養(yǎng)48小時。標準：衛(wèi)生手消毒：監(jiān)測的細菌菌落總數(shù)應≤10cfu/cm

外科手消毒：監(jiān)測的細菌菌落總數(shù)應≤5cfu/cm五．使用中消毒液1．采樣時間：更換前，使用中的消毒液2．需要檢測微生物污染情況的：采樣液：含相應中和劑的營養(yǎng)肉湯，采樣方法：取1.0ml消毒液加入9.0ml含中和劑的營養(yǎng)肉湯3．需要測定含量：另取干凈、干燥的采樣瓶直接取樣采樣量＞100ml要求采樣量滿足檢測需要。標準要求：使用中的消毒液污染的微生物≤100cfu/ml；不得檢出致病性微生物使用中消毒液有效成分含量要求符合標識濃度六、內(nèi)窺鏡采樣依據(jù)：內(nèi)鏡清洗消毒技術規(guī)范方法檢測部位：內(nèi)鏡的內(nèi)腔面用無菌注射器抽取10ml含相應中和劑的緩沖液，從待檢內(nèi)鏡活檢口注入，用15ml無菌試管從活檢出口收集，及時送檢，2小時內(nèi)檢測一般情況的中和劑

酸化水：0.5%硫代硫酸鈉、0.5%吐溫80

戊二醛：1%甘氨酸、0.5%吐溫80采樣時注意事項：避免污染防止酒精燈火焰?zhèn)皟?nèi)鏡鏡頭操作一人難以完成，需要兩人配合采樣時最好標明內(nèi)鏡編號，有問題好追溯（不合格查明原因，消毒液問題還是生物膜問題）

檢測：菌落計數(shù)：充分振蕩，取0.5ml接種2個平皿后傾注營養(yǎng)瓊脂，35℃培養(yǎng)48h后計數(shù)致病菌：0.2ml接種血平板

0.2ml接種中國蘭平板

0.2ml接種SS平板涂布35℃培養(yǎng)48h

觀察有無致病菌生長七．污水1、檢測依據(jù)：GB18466-2005醫(yī)療機構水污染排放標準2、檢測項目余氯的檢測：用干凈空瓶采樣，現(xiàn)場檢測。直接用余氯測試盒檢測余氯糞大腸菌群沙門氏菌志賀氏菌的檢測：采樣：污水采樣加入含1g硫代硫酸鈉的滅菌瓶中，根據(jù)GB18466-2005檢測八．滅菌器1、壓力蒸汽滅菌器滅菌效果：嗜熱脂肪桿菌芽孢培養(yǎng)溫度：56±1℃《消毒技術規(guī)范》2002年a.檢測方法：下排氣式壓力蒸汽滅菌器、預真空和脈動真空滅菌器，生物指示劑置于標準包中心部位，標準包置于排氣口上方。b.手提壓力蒸汽滅菌器用通氣儲物盒代替標準包，盒內(nèi)盛滿中試管，生物指示劑放于中心部位放于中心部位兩只滅菌試管內(nèi)，儲物盒平放于手提壓力蒸汽滅菌器底部WS310.3-2009《醫(yī)院消毒供應中心第3部分：清洗消毒及滅菌效果》

按照《消毒技術規(guī)范》的規(guī)定，將嗜熱脂肪桿菌芽胞菌片制成標準生物測試包，或使用一次性標準生物測試包，對滅菌器的滅菌質量進行生物監(jiān)測。標準生物監(jiān)測包置于滅菌器排氣口的上方或生產(chǎn)廠家建議的滅菌器內(nèi)最難滅菌的部位，并設陽性對照和陰性對照。具體監(jiān)測方法為：將生物指示物置于標準試驗包的中心部位。標準試驗包由16條41cm×66cm的全棉手術巾制成。制作方法：將每條手術巾的長邊先折成3層，短邊折成2層，然后疊放，制成23cm×23cm×15cm大小的測試包。經(jīng)一個滅菌周期后，在無菌條件下取出標準試驗包的指示菌片，投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，經(jīng)56℃±1℃培養(yǎng)7d（自含式生物指示物按產(chǎn)品說明書執(zhí)行），觀察培養(yǎng)結果。小型壓力蒸汽滅菌器因一般無標準生物監(jiān)測包，應選擇滅菌器常用的、有代表性的滅菌包制作生物測試包，置于滅菌器最難滅菌的部位，且滅菌器應處于滿載狀態(tài)。生物測試包應側放，體積大時可平放。采用快速壓力蒸汽滅菌程序滅菌時，應直接將一支生物指示物，置于空載的滅菌器內(nèi)，經(jīng)一個滅菌周期后取出，規(guī)定條件下培養(yǎng)，觀察結果。2、環(huán)氧乙烷滅菌器滅菌：枯草桿菌黑色變種芽孢生物指示管置于常規(guī)生物測試包中，測試包放在最難滅菌的部位（整個裝載滅菌包的中心部位），滅菌周期完成后取出，36±1℃培養(yǎng)7天觀察結果（自含式生物指示物應遵循產(chǎn)品說明），觀察顏色變化，同時設陽性對照和陰性對照。常規(guī)生物指示包的制備：取一個20ml無菌注射器，去年針頭，拔出針栓，將生物指示劑放入針筒內(nèi)，帶孔的塑料帽應朝向針頭處，再將注射器的針栓插回針筒，之后用一條全棉小毛巾兩層包裹，置于紙塑包裝袋中，封裝。3、干熱滅菌器：按照《消毒技術規(guī)范》采用枯草桿菌黑色變種芽孢菌片，制成標準生物測試包，置于滅菌器最難滅菌的部位，并設陽性和陰性對照。將枯草桿菌芽孢菌片分別裝入無菌試管內(nèi)（1片/管）。滅菌器與每層門把手對角線內(nèi)、外角處放置2個含菌片的試管，試管帽于試管旁，關好柜門，經(jīng)一個滅菌周期后，待溫度降至80℃時，加蓋試管帽后取出試管。在無菌條件下，加入普通營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（5ml/管）,36℃±1℃培養(yǎng)48h，觀察初步結果，無菌生長管繼續(xù)培養(yǎng)至第7日九．紫外線輻照強度1．器材：紫外輻照計2．檢測方法：開燈5min后，探頭放在燈管中心距高1m處檢測3．注意事項：儀器定期檢定，在檢定期內(nèi)使用每次使用時需要儀器調零個人防護：眼罩、口罩、帽子、防止紫外線灼傷。十、血液凈化室（中心）的監(jiān)測依據(jù)：血液凈化標準操作規(guī)程2010版透析用水的水質監(jiān)控：（P22~23)1.電導率約10μs/cm2.純水的pH值應維持在5~73.細菌培養(yǎng)應每月1次，要求細菌數(shù)<200cfu/ml；采樣部位為反滲水輸水管路末端，每臺透析機每年至少監(jiān)測1次內(nèi)毒素檢測每3個月1次，<2Eu/ml，每臺透析機至少每年檢測1次?；瘜W污染物監(jiān)測1次1年工作人員手衛(wèi)生依據(jù)：血液凈化標準操作規(guī)程2010版P19：要求遵守《醫(yī)務人員手衛(wèi)生規(guī)范》衛(wèi)生手≤10cfu/cm2外科手≤5cfu/cm2空氣和物體表面血液凈化標準操作規(guī)程2010版P20參照血液透析中心感染控制的管理要求，明顯被污染的表面應用≥500mg/L有效氯消毒液消毒應達到《醫(yī)院消毒衛(wèi)生標準》GB15982-1995規(guī)定的對三類環(huán)境的要求空氣培養(yǎng)≤500cfu/m3物體表面≤10cfu/cm2

國內(nèi)消毒產(chǎn)品相關評價標準

談智一、滅菌劑與高水平消毒劑(一)定義滅菌劑：能殺滅一切微生物達滅菌要求的制劑。高水平消毒劑：可殺滅各種微生物，對細菌芽孢的殺滅作用達到消毒效果的制劑。(二)相關評價標準

1、消毒技術規(guī)范(衛(wèi)生部，2002)：滅菌劑能在說明書規(guī)定時間的一半（0.5T）殺滅芽孢，定性滅菌試驗達到合格；高水平消毒劑懸液法對芽孢的殺滅指數(shù)≥5.00：載體法對芽孢的殺滅指數(shù)≥3.00。2、美國官方分析化學協(xié)會(AOAC)消毒劑標準測試方法：滅菌劑效果評價，要求以枯草桿菌黑色變種芽孢為指標，720個載體全部無菌生長。3、歐洲標準化委員會消毒劑與防腐劑測試標準(CEN)：滅菌保證水平10-6。二、抗（抑）菌劑與皮膚黏膜消毒劑(一)定義

抗菌劑：殺滅或妨礙細菌生長繁殖及其活性的制劑。

抑菌劑：抑制或妨礙細菌生長繁殖及其活性的制劑。

皮膚黏膜消毒劑：殺滅皮膚黏膜上的微生物達消毒要求的制劑。

(二)相關評價標準

1、我國：評價依據(jù)《消毒技術規(guī)范》(衛(wèi)生部，2002)》《一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準(GB15979-2002)》。(1)皮膚黏膜消毒劑；懸液法對細菌殺滅對數(shù)值≥5.00，對真菌殺滅對數(shù)值≥4.00；載體法的殺滅對數(shù)值≥3.00①外科洗手和皮膚消毒：金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、大腸桿菌作用時間≤3min。

②衛(wèi)生洗手消毒：金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、大腸桿菌作用時間≤1min。

⑧皮膚黏膜消毒：金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、綠膿桿菌作用時間≤5min。

④足部消毒：金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、黑曲霉菌作用時間≤5min。(2)抗(抑)菌洗劑：接觸皮膚黏膜，具有一定殺(抑)菌作用的制劑(栓劑、皂劑除外)。抑菌洗劑不得用于破損的皮膚黏膜。

①抗菌洗劑：對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌與白色念珠菌殺滅率≥90%。參照國標進行定量殺菌試驗。

②抑菌洗劑：對大、金、白念抑菌率≥50%。參照國標進行定量抑菌試驗。消毒劑