單核細(xì)胞增生李斯特氏菌實(shí)驗(yàn)活動(dòng)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告

單核細(xì)胞增生李斯特氏菌實(shí)驗(yàn)活動(dòng)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估報(bào)告生物學(xué)特性種類和細(xì)菌分型目前，國(guó)際上公認(rèn)的李斯特氏菌共有以下七個(gè)菌株：?jiǎn)魏思?xì)胞增生李斯特氏菌（Listeriamonocytogenes）,綿羊李斯特菌（Listeriaiuanuii）,英諾克李斯特菌(Listeriainnocua),威爾斯李斯特菌(Listeriawelshimeri),西爾李斯特菌(Listeriaseeligeri),格雷李斯特菌(Listeriagrayi),默里李斯特菌(Listeriamurrayi)。其中，單核細(xì)胞增生李斯特氏菌是唯一能夠引起人類疾病的，它是一種人畜共患病的病原菌，中毒嚴(yán)重的可引起血液和腦組織感染。單核細(xì)胞增生李斯特氏菌簡(jiǎn)稱單增李斯特氏菌，為革蘭陽性菌，屬厚壁菌門。根據(jù)單核細(xì)胞增生李斯特氏菌的菌體（O）抗原和鞭毛(H)抗原，將單核細(xì)胞增生李斯特氏菌分成13個(gè)血清型，分別是1/2a,1/2b,1/2c,3a,3b,3c,4a,4b,4ab,4c,4d,4e和7。致病菌株的血清型一般為1/2b,1/2c,3a,3b,3c,4a,1/2a和4b，以后兩型居多。該菌與多種革蘭陽性菌有共同抗原，故血清學(xué)診斷無意義。(二)來源李斯特氏菌是1926年英國(guó)南非裔科學(xué)家穆里在病死的兔子體內(nèi)首次發(fā)現(xiàn)的。為紀(jì)念近代消毒手術(shù)之父,英國(guó)生理學(xué)家約瑟夫·李斯特（1827~1912），1940年，在第三屆國(guó)際微生物學(xué)大會(huì)上將其命名為李斯特氏菌。(三)傳染性單核細(xì)胞增生李斯特氏菌是一種人畜共患病的病原菌，它能引起人,畜的李斯特菌病，感染后主要表現(xiàn)為敗血癥,腦膜炎和單核細(xì)胞增多癥。(四)傳播途徑單核細(xì)胞增生李斯特氏菌主要以食物為傳染媒介，是最致命的食源性病原體之一，造成二至三成的感染者死亡，其致死率甚至高過沙門氏菌及肉毒桿菌。人主要通過食入軟奶酪,未充分加熱的雞肉,未再次加熱的熱狗,鮮牛奶,巴氏消毒奶,冰激凌,生牛排,羊排,卷心菜色拉,芹菜,西紅柿,法式餡餅,凍豬舌等而感染。約85%~90%的病例是由被污染的食品引起的。該菌可通過眼及破損皮膚,黏膜進(jìn)入體內(nèi)而造成感染，孕婦感染后通過胎盤或產(chǎn)道感染胎兒或新生兒。棲居于產(chǎn)道,子宮頸的該菌也可引起感染。性接觸也是本病傳播的可能途徑，且有上升趨勢(shì)。(五)易感性易感者為新生兒,孕婦及40歲以上的成人。此外，酗酒者,免疫系統(tǒng)損傷或缺陷者,接受免疫抑制劑和皮質(zhì)激素治療的患者及器官移植者也易被該菌感染。(六)潛伏期單核細(xì)胞增生李斯特氏菌在感染后3~70d出現(xiàn)癥狀。健康成人可出現(xiàn)類似流感的輕微癥狀，而易感者的癥狀為突然發(fā)熱,劇烈頭痛,惡心,嘔吐,腹瀉,敗血癥,腦膜炎，孕婦出現(xiàn)流產(chǎn)。(七)劑量一效應(yīng)關(guān)系單增李氏菌進(jìn)入人體后是否發(fā)病，與該菌的毒力和宿主的年齡,免疫狀態(tài)有關(guān)，因?yàn)樵摼且环N細(xì)胞內(nèi)寄生菌，宿主對(duì)它的清除主要靠細(xì)胞免疫功能。(八)致病性1.致病機(jī)理單核細(xì)胞增生李斯特氏菌的抗原結(jié)構(gòu)與毒力無關(guān)，該菌誘導(dǎo)以CD8+H和CD4+T介導(dǎo)的特異性免疫應(yīng)答，破壞宿主免疫。單核細(xì)胞增生李斯特氏菌能夠黏附和進(jìn)入消化道上皮細(xì)胞，侵入上皮細(xì)胞的單核細(xì)胞增生李斯特氏菌被單核巨噬細(xì)胞吞噬，并隨其擴(kuò)散到局部淋巴結(jié)，最后到達(dá)內(nèi)臟器官。單核細(xì)胞增生李斯特氏菌能在單核巨噬細(xì)胞,肝細(xì)胞,內(nèi)皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞等多種細(xì)胞內(nèi)存活并繁殖，在很大程度上防止了體液免疫如抗體和補(bǔ)體介導(dǎo)的裂解反應(yīng)。2.所致疾病單核細(xì)胞增生李斯特氏菌廣泛分布于自然界，在健康人群中的攜帶率為1%~5%。其致病物質(zhì)為李斯特溶素o，與鏈球菌溶素o和肺炎鏈球菌溶素的基因具有同源性。此溶血素需細(xì)菌被吞噬后在細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)時(shí)釋放，這與細(xì)菌能在巨噬細(xì)胞和上皮細(xì)胞內(nèi)生長(zhǎng)及在細(xì)胞間轉(zhuǎn)播有關(guān)。本菌所致的新生兒疾患有早發(fā)和晚發(fā)兩種類型。早發(fā)型為宮內(nèi)感染，常致嬰兒敗血癥，病死率極高，晚發(fā)型在出生后2~3周引起腦膜炎和敗血癥等。本菌致成人感染的癥狀主要是引起腦膜炎和敗血癥等。(九)變異性對(duì)于單核細(xì)胞增生李斯特氏菌的變異性目前尚未有確鑿證據(jù)資料可以證實(shí)。(十)環(huán)境中的穩(wěn)定性單核細(xì)胞增生李斯特氏菌能在2~42℃下生存，能在冰箱冷藏室內(nèi)較長(zhǎng)時(shí)間進(jìn)行生長(zhǎng)繁殖，是冷藏食品威脅人類健康的主要病原菌之一。(十一)藥物敏感性單核細(xì)胞增生李斯特氏菌對(duì)青霉素,氨芐西林,四環(huán)素,磺胺均敏感。(十二)消毒劑敏感性70%酒精5min，2.5%石炭酸,2.5%氫氧化鈉,2.5%福爾馬林20min可殺死此菌，對(duì)堿和鹽的抵抗力強(qiáng)。(十三)物理滅活對(duì)理化因素抵抗力較強(qiáng)，60~70℃經(jīng)5~20min可殺死。(十四)在宿主體外存活體外培養(yǎng)菌營(yíng)養(yǎng)要求不高，在20~25℃培養(yǎng)有動(dòng)力，最適培養(yǎng)溫度為35~37℃，在pH中性至弱堿性(pH9.6),氧分壓略低,二氧化碳張力略高的條件下該菌生長(zhǎng)良好。(十五)與其他生物和環(huán)境的交互作用單增李斯特氏菌廣泛存在于自然界中，不易被凍融，能耐受較高的滲透壓，該菌在土壤,地表水,污水,廢水,植物,青儲(chǔ)飼料,爛菜中均有存在，所以動(dòng)物很容易食入該菌，并通過口腔—糞便的途徑進(jìn)行轉(zhuǎn)播。(十六)預(yù)防和治療方案預(yù)防單核細(xì)胞增生李斯特氏菌在一般熱加工處理中能存活，熱處理已殺滅了競(jìng)爭(zhēng)性細(xì)菌群，使單增李斯特氏菌在沒有競(jìng)爭(zhēng)的環(huán)境條件下易于存活，所以在食品加工中，中心溫度必須達(dá)到70℃持續(xù)2min以上。單核細(xì)胞增生李斯特氏菌在自然界中廣泛存在，所以即使產(chǎn)品已經(jīng)過熱加工處理后充分滅活了單增李斯特氏菌，但有可能造成產(chǎn)品的二次污染，因此，蒸煮后防止二次污染是極為重要的。因?yàn)閱魏思?xì)胞增生李斯特氏菌在4℃下仍然能生長(zhǎng)繁殖，所以未加熱的冰箱食品增加了食物中毒的危險(xiǎn)。冰箱食品需加熱后再食用。如果是生魚片之類的海鮮，則專業(yè)酒店都會(huì)存放于零下40℃左右的大型冰柜，以確保殺滅寄生蟲及防止病菌感染。治療單核細(xì)胞增生李斯特氏菌感染治療可用青霉素,氨芐西林,慶大霉素,紅霉素等。對(duì)青霉素過敏的可用紅霉素和其他廣譜抗生素。二,實(shí)驗(yàn)室相關(guān)活動(dòng)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與控制實(shí)驗(yàn)室感染性因子的種類,來源和危害感染性因子的種類單核細(xì)胞增生李斯特氏菌的毒力因子主要有李斯特溶血毒素,肌動(dòng)蛋白聚合蛋白,C型磷脂酶,內(nèi)化素,細(xì)胞壁水解酶,酰胺酶以及毒力調(diào)節(jié)因子等。根據(jù)其生物學(xué)特性和本中心實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)能力范圍，實(shí)驗(yàn)室可能的感染因子為單核細(xì)胞增生李斯特氏菌病原體本身。感染性因子的來源標(biāo)本或樣品的采樣,運(yùn)輸,接收,處理,實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)操作，菌株保存，銳器及生物安全柜等設(shè)備的使用,廢棄物處置等。實(shí)驗(yàn)操作包括樣品制備,細(xì)菌分離及培養(yǎng),生化試驗(yàn)等。感染性因子造成的危害被污染的實(shí)驗(yàn)器材,器皿對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境造成污染。實(shí)驗(yàn)室含有病原菌的廢棄物對(duì)環(huán)境造成污染。實(shí)驗(yàn)人員被銳器刺傷造成的皮膚黏膜等暴露后感染。實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)活動(dòng)工作中，各種原因?qū)е碌囊后w飛濺或微滴濺出及氣溶膠對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境造成污染。單核細(xì)胞增生李斯特氏菌主要通過糞-口途徑感染，還可通過眼及破損皮膚,黏膜進(jìn)入體內(nèi)而造成感染。在實(shí)驗(yàn)室工作中，各種原因?qū)е碌囊后w飛濺或微滴濺出，從而污染器物表面或地面等，造成感染性物質(zhì)被意外食入而感染；被可能存在的感染性病原體的銳器刺傷,割傷造成皮膚黏膜感染；這是兩種較可能的實(shí)驗(yàn)室獲得性感染方式。積極地預(yù)防和防護(hù)是實(shí)驗(yàn)室感染的最有效措施。實(shí)驗(yàn)活動(dòng)風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別與風(fēng)險(xiǎn)控制試驗(yàn)方法風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別未采用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)；使用新的或變更的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)或行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)前，未經(jīng)技術(shù)確認(rèn)，可能存在安全風(fēng)險(xiǎn)。風(fēng)險(xiǎn)控制措施盡量采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn),行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行檢測(cè)，或使用經(jīng)過充分驗(yàn)證的實(shí)驗(yàn)方法；在使用新的或變更過的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn),行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)前，必須經(jīng)過嚴(yán)格的技術(shù)確認(rèn)。樣品采集食品和水樣等樣品采集主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備和器材散裝樣品需用剪刀或鑷子,不銹鋼扣蓋飯盒,螺旋蓋塑料采樣罐,螺旋蓋玻璃瓶的容器；定型包裝樣品視產(chǎn)品本身包裝而定。主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別食品和水樣等樣品中可能存在感染性病原體，采用人員采樣不規(guī)范,盛裝容器密合不嚴(yán),玻璃容器意外破損等，可導(dǎo)致樣品濺灑,溢出,,滲漏而污染環(huán)境；同時(shí)，玻璃容器意外破損和剪刀,鑷子的使用不當(dāng)，存在意外刺傷或劃傷采用人員的風(fēng)險(xiǎn)。風(fēng)險(xiǎn)控制措施食品和水樣等樣品采集容器必須防水,防漏，容器外面要包裹足量的吸收性材料，以便容器打破或泄露時(shí)，能吸收溢出的所有液體。在使用剪刀,鑷子,玻璃容器等銳器時(shí)必須規(guī)范操作，做好防護(hù)，防止刺傷或劃傷。鼻咽部分泌物,腦脊液,糞便,嘔吐物,食品加工環(huán)節(jié)涂抹物等樣本采集主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備和器材PV螺旋蓋采便盒（管）,玻璃試管或培養(yǎng)皿,采樣消毒棉簽。主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別鼻咽部分泌物,腦脊液,糞便,嘔吐物,食品加工環(huán)節(jié)涂抹物等樣本中可能存在感染性病原體，采集過程中樣本濺出從而形成小顆粒氣溶膠；工作人員采樣不規(guī)范,個(gè)人防護(hù)不到位，導(dǎo)致環(huán)境污染和人員感染；破碎玻璃試管或培養(yǎng)皿存在刺傷或劃傷采樣人員的隱患。風(fēng)險(xiǎn)控制措施采集鼻咽拭子時(shí)，采用人員應(yīng)戴手套,口罩,防護(hù)眼鏡；采樣動(dòng)作輕柔，采樣容器盡量使用外螺旋蓋塑料管；發(fā)生污染時(shí)應(yīng)立即進(jìn)行消毒處理。(3)血液的采集①主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備和器材一次性采血針和塑料采血管。②主要風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別點(diǎn)血液樣品可能存在感染性病原體，采血管密封蓋意外脫落或注射器內(nèi)殘留血滴落，造成血樣濺灑從而污染人員或環(huán)境；采血針頭存在意外刺傷或劃傷采樣人員的風(fēng)險(xiǎn)。風(fēng)險(xiǎn)控制措施使用一次性采血針和真空采血管，采樣人員經(jīng)過正規(guī)培訓(xùn)，并熟練掌握采血技巧。采血前做好個(gè)人防護(hù)(防護(hù)衣，乳膠手套，口罩)；認(rèn)真，仔細(xì)，謹(jǐn)慎操作，抽血后的針頭直接放入利器盒內(nèi)，禁止用手直接接觸使用后的針頭或?qū)⑹褂煤蟮尼橆^重新套上針頭套；采好血后直立與試管架上，防止倒翻；消毒棉簽等污染物放入醫(yī)療廢棄物專用袋中，統(tǒng)一進(jìn)行消毒處理。樣品的包裝運(yùn)送主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備和器材真空密封采血管，外螺旋蓋玻璃瓶，PV螺旋蓋采樣管主容器，95千帕樣品運(yùn)輸罐，B類標(biāo)本運(yùn)輸箱（UN3373冷藏箱），運(yùn)送車輛。主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別盛樣容器不堅(jiān)固，密合不嚴(yán)，有可能存在樣品濺灑，溢出，滲漏；使用不合格運(yùn)輸包裝進(jìn)行樣本運(yùn)送，存在玻璃容器或包裝容器意外破碎，刺傷或劃傷采送樣人員的隱患。風(fēng)險(xiǎn)控制措施盛裝樣品容器必須堅(jiān)固，不易破碎，盡可能選用塑料制品，采樣后必須檢查容器的密合性。樣品的運(yùn)輸需使用三層合格包裝材料。樣品接收和前處理主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備和器材剪刀，鑷子，振蕩器，均質(zhì)器，均質(zhì)袋，離心機(jī)，生物安全柜和潔凈工作臺(tái)。主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別樣品管理員未按實(shí)驗(yàn)室《樣品管理程序》（XJK/CX32）要求接受樣本；樣品前處理時(shí)，打開鼻咽部分分泌物,腦脊液,糞便標(biāo)本等感染性樣品包裝的動(dòng)作過猛，會(huì)造成樣品側(cè)翻；對(duì)食品等固形物樣品進(jìn)行剪切時(shí)，操作不慎發(fā)生手剪傷，均質(zhì)器均質(zhì)樣本時(shí)發(fā)生均質(zhì)袋破裂；離心操作時(shí)發(fā)生離心管破裂等意外情況。風(fēng)險(xiǎn)控制措施樣品接收必須在專用的區(qū)域進(jìn)行，合同評(píng)審人員和收樣人員嚴(yán)格按照《樣品管理程序》(XJK/CX32)要求交接樣品，不得擅自打開樣品包裝，收樣后及時(shí)洗手。開始檢測(cè)前，對(duì)盛裝感染性材料樣品的容器，必須在生物安全柜中緩慢打開，食品和水樣必須在潔凈工作室內(nèi)打開，開啟的容器管口不能對(duì)著操作者。對(duì)食品等固形無樣品取樣，要小心使用剪刀和鑷子，盡可能剪取食物的可食部分，以防止樣品均質(zhì)時(shí)堅(jiān)硬物質(zhì)刺破均質(zhì)袋，從而造成樣液濺灑。對(duì)含有感染性的樣品進(jìn)行離心振蕩時(shí)，必須將離心蓋封嚴(yán)實(shí)，并關(guān)上離心機(jī)蓋。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)配備應(yīng)急藥箱，發(fā)生手剪傷等意外事件，應(yīng)立即進(jìn)行消毒包扎處理。當(dāng)發(fā)生離心管或均質(zhì)袋意外破裂、濺出時(shí)，及時(shí)對(duì)所有涉及污染的部位進(jìn)行消毒處理，同時(shí)按《二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室建設(shè)與管理》實(shí)驗(yàn)室意外事故的處置章節(jié)處置。5．樣本檢測(cè)過程（1）主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備和器材培養(yǎng)箱、水浴箱、細(xì)菌鑒定和藥敏測(cè)試儀（ATB儀）、全自動(dòng)快速致病菌檢測(cè)儀（miniVIDAS）、生物安全柜、振蕩器、吸管和試管、移液器及吸頭、接種環(huán)、培養(yǎng)皿等。（2）主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別 ①對(duì)食品、水樣、鼻咽部分分泌物、腦脊液、糞便標(biāo)本等樣品進(jìn)行單核細(xì)胞增生李斯特氏菌菌株分離鑒定、生化試驗(yàn)、藥敏試驗(yàn)等實(shí)驗(yàn)活動(dòng)均涉及活菌操作。在檢測(cè)過程中移液或混勻震蕩等操作可能釋放較大顆粒和小液滴，雖然單核細(xì)胞增生李斯特氏菌不通過呼吸道感染，但由于樣品可能含有其他未知的病原體，也不應(yīng)忽視、②離心振蕩過程中容器的破損或滲漏等意外事故，都可能造成感染性物質(zhì)污染操作者的手、操作臺(tái)面、物器表面及地面，從而污染實(shí)驗(yàn)室環(huán)境和人員。實(shí)驗(yàn)室人員通過皮膚接觸或粘膜接觸感染或者意外食入感染。③實(shí)驗(yàn)過程中未正確操作銳器、玻璃實(shí)驗(yàn)器材意外破碎等，造成人員割傷和刺傷而導(dǎo)致的接種感染隱患。品檢測(cè)時(shí)試管開啟、樣品轉(zhuǎn)移、稀釋混勻吹打、劃線分離、涂片染色、離心等操作都可產(chǎn)生氣溶膠，但單核細(xì)胞增生李斯特氏菌不通過吸入感染。實(shí)驗(yàn)室人員通過氣溶膠感染單核細(xì)胞增生李斯特氏菌的風(fēng)險(xiǎn)非常小。風(fēng)險(xiǎn)控制措施開展檢測(cè)時(shí)檢測(cè)人員應(yīng)按照二級(jí)生物安全防護(hù)要求做好自身防護(hù)措施，若接觸傳染性危險(xiǎn)大的病原微生物，工作人員應(yīng)戴雙層（兩副）手套以增加保護(hù)。進(jìn)行食品、水樣等樣品制備、均質(zhì)等操作，應(yīng)在潔凈實(shí)驗(yàn)室內(nèi)進(jìn)行；鼻咽部分分泌物、腦脊液、糞便標(biāo)本、嘔吐物等所有具有感染性材料的操作必須在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，必須保證潔凈實(shí)驗(yàn)室和生物安全柜處于正常運(yùn)行狀態(tài)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后對(duì)桌面、臺(tái)面及時(shí)進(jìn)行消毒處理。進(jìn)行活菌操作時(shí)，應(yīng)在安全柜工作臺(tái)面上放置一塊浸有消毒液的紗布或吸有消毒液的紙，避免感染性物質(zhì)的擴(kuò)散；涉及高濃度或大體積的感染性材料離心操作時(shí)，應(yīng)選用密封轉(zhuǎn)頭或帶安全罩的離心機(jī)離心。若有意外污染，應(yīng)及時(shí)消毒、沖洗并檫干飛濺出的液體。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后必須對(duì)桌面、臺(tái)面及時(shí)進(jìn)行消毒處理。必須使用移液器或吸球移取樣液，旋蓋和移液操作時(shí)動(dòng)作要輕緩，所有吸管應(yīng)用棉塞，移液頭盡可能使用帶濾芯的，以減少對(duì)移液器或吸球的污染。使用直徑2~3mm且完全封閉、手柄的長(zhǎng)度小于6cm的接種環(huán)分離細(xì)菌，盡可能使用封閉式微型電加熱器消毒接種環(huán)，避免在酒精燈的命火上加熱而引起的感染性物質(zhì)的爆濺。盡可能以塑料器皿代替玻璃器皿，若必須使用玻璃器皿，只能用實(shí)驗(yàn)室級(jí)玻璃（硼硅酸鹽），且任何破碎或有裂紋的器皿都應(yīng)丟棄。禁止用手直接接觸使用后的針頭、刀片、玻璃碎片等銳器。嚴(yán)禁用帶有注射針頭的注射器吸液，更不可當(dāng)吸管用，用過的銳器應(yīng)直接放入利器盒，經(jīng)消毒后廢棄。在任和可能導(dǎo)致潛在的傳染性物質(zhì)濺出的操作過程中，應(yīng)保護(hù)好面部、眼睛和嘴；發(fā)生液體濺出、溢出等事故或經(jīng)明顯暴露與傳染源時(shí)，應(yīng)立即向科室負(fù)責(zé)人報(bào)告，及時(shí)處理并對(duì)事故的發(fā)生與處理做記錄，必要時(shí)進(jìn)行適當(dāng)?shù)尼t(yī)學(xué)評(píng)估、觀察、治療并保留書面記錄。菌株使用、保存和運(yùn)輸主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備和器材接種針、菌株保存管、振蕩器、生物安全柜、95千帕樣品運(yùn)輸罐、B類標(biāo)本運(yùn)輸箱（UN3373冷藏箱）和運(yùn)輸車輛。主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別工作人員對(duì)陽性菌株保菌操作不規(guī)范、個(gè)人防護(hù)不到位、磁珠管等保存容器意外破損、磁珠掉落等會(huì)導(dǎo)致病原菌污染實(shí)驗(yàn)室環(huán)境和實(shí)驗(yàn)人員。單核細(xì)胞增生李斯特氏菌使用和保存未按照《菌（毒）種管理規(guī)程》（XJK/CX37）要求實(shí)施管理，存在菌株被惡意使用及污染環(huán)境等生物安全隱患。在單核細(xì)胞增生李斯特氏菌陽性菌株上送等運(yùn)輸過程中如使用不合格包裝進(jìn)行運(yùn)輸，容器密封不嚴(yán)，或運(yùn)輸工具無安全保障，可能導(dǎo)致運(yùn)輸過程中包裝容器意外破損，存在病原體的擴(kuò)散，甚至樣本丟失的隱患。風(fēng)險(xiǎn)控制措施單核細(xì)胞增生李斯特氏菌分離純化及保菌操作應(yīng)在生物安全柜內(nèi)進(jìn)行，若發(fā)生磁珠管破損、磁珠掉落時(shí)，應(yīng)立即對(duì)所涉及的器物進(jìn)行消毒，并按《二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室建設(shè)與管理》中“意外事故處理辦法章節(jié)規(guī)范”處置。單核細(xì)胞增生李斯特氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌株的使用、保存嚴(yán)格按照《菌（毒）種管路規(guī)程》（XJK/CX37）要求進(jìn)行操作，嚴(yán)格實(shí)行雙人雙鎖保管，嚴(yán)防菌株被惡意使用而造成的生物危害在單核細(xì)胞增生李斯特氏菌陽性菌株上送過程中嚴(yán)格執(zhí)行B類運(yùn)輸包裝（同“樣品采集”），攜帶“可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸許可證”，由專車運(yùn)送，由專業(yè)人員全程護(hù)送。7.實(shí)驗(yàn)室的清潔和消毒主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備和器材70%~75%的酒精、施康清洗消毒液I。主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別工作完畢后，若不及時(shí)對(duì)工作臺(tái)面、地面和生物安全柜進(jìn)行消毒，則有可能會(huì)對(duì)下次的操作人員造成污染或感染。風(fēng)險(xiǎn)控制措施工作完畢后，及時(shí)對(duì)檢測(cè)所涉及的工作臺(tái)面、地面和生物安全柜進(jìn)行消毒，使用稀釋100倍的施康清洗液毒液I擦拭，用消毒液清潔后要干燥20min以上。生物安全柜用70%~75%的酒精擦拭消毒。待實(shí)驗(yàn)和消毒完畢，先脫去手套，在脫去防護(hù)服，并正確用肥皂和流水洗手。8.廢棄物處置主要實(shí)驗(yàn)設(shè)備和器材醫(yī)療廢棄物專用袋、耐高壓且防滲漏的垃圾桶、高壓滅菌器。主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別樣品采集和實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過程產(chǎn)生的感染性廢棄物（食品、水樣等剩余樣品；血液血清及排泄物標(biāo)本；病原菌的培養(yǎng)基、標(biāo)本和菌種、毒種保存液及所有實(shí)驗(yàn)過程涉及的用品）釋放前未按照規(guī)范要求處理，導(dǎo)致感染或致病因子外泄而污染環(huán)境。樣品采集和實(shí)驗(yàn)檢測(cè)過程產(chǎn)生的被污染的損傷性廢棄物（一次性使用采血用具、載玻片、玻璃試管、玻璃安瓿、培養(yǎng)皿等）未按照規(guī)范處理，存在意外刺傷或劃傷工作人員的隱患。風(fēng)險(xiǎn)控制措施實(shí)驗(yàn)室廢棄物處理應(yīng)遵循《醫(yī)療廢棄物管理?xiàng)l例》》醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu)醫(yī)療廢物管理辦法》《醫(yī)療廢物專用包裝袋、容器和警示標(biāo)志標(biāo)準(zhǔn)》等相關(guān)法規(guī)要求，分類收集，規(guī)范處置。所有損傷性廢棄物必須放置于有警示標(biāo)識(shí)的硬質(zhì)、防漏、防銳器刺破的專用利器盒中；所有感染性廢棄物必須放置于有警示標(biāo)識(shí)的醫(yī)療廢物專用包裝袋中；使用高效消毒液浸泡或高溫高壓滅菌后集中處理，集中存放至中心指定的醫(yī)療廢棄室，由有資質(zhì)的醫(yī)療廢棄物處理單位上門收集、集中處置。同時(shí)，做好廢棄物處理交接記錄，所有相關(guān)記錄應(yīng)定期整理歸檔。（三）實(shí)驗(yàn)過程中其他風(fēng)險(xiǎn)識(shí)別和控制1.電力（1）主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別單核細(xì)胞增生李斯特氏菌的分離和鑒定對(duì)溫度有明確要求，當(dāng)實(shí)驗(yàn)過程中突然間隙斷電或電力供應(yīng)不穩(wěn)定對(duì)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性帶來一定的影響。實(shí)驗(yàn)室沒有布置雙路供電或者相關(guān)儀器未配備不間斷電源，當(dāng)電力供應(yīng)發(fā)生故障時(shí)，可導(dǎo)致設(shè)備突然停止工作，實(shí)驗(yàn)活動(dòng)被迫終止等所帶來的相關(guān)安全風(fēng)險(xiǎn)。（2）預(yù)防控制措施盡可能在實(shí)驗(yàn)室布置雙路供電，若客觀條件受限制，對(duì)單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢測(cè)所用的關(guān)鍵儀器需配備不間斷電源。2.電氣操作（1）主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別實(shí)驗(yàn)室活動(dòng)涉及的電氣操作，包括實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)內(nèi)電氣設(shè)備的啟動(dòng)、關(guān)閉、安裝和維修；設(shè)備層內(nèi)UPS、空調(diào)機(jī)組等電器設(shè)備的啟動(dòng)、關(guān)閉和維修等。這些電氣操作的過程可能產(chǎn)生觸電、電擊、造成電氣故障等風(fēng)險(xiǎn)。（2）預(yù)防控制措施①電氣設(shè)備的設(shè)計(jì)及制造符合相關(guān)安全標(biāo)準(zhǔn)的要求。實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)內(nèi)若有380V電源插座，則需明確標(biāo)識(shí)，并由有資質(zhì)的專業(yè)人員進(jìn)行操作。②新的、改裝過的或修理過的電氣設(shè)備在未經(jīng)專業(yè)人員（如有資質(zhì)的電工）完成電氣安全測(cè)試和設(shè)備符合安全使用要求前，不允許使用。③電氣設(shè)備使用人員接受正確操作的培訓(xùn)，操作方式不降低電氣安全性。電氣設(shè)備使用人員要定期檢查設(shè)備可能引起電氣故障的破損。只有專業(yè)人員才可從事電氣設(shè)備和電路工作。禁止未經(jīng)授權(quán)的工作。采取措施對(duì)設(shè)備去污染，以降低維護(hù)人員感染的風(fēng)險(xiǎn)。3.實(shí)驗(yàn)室給排水設(shè)施設(shè)備（1）主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別實(shí)驗(yàn)室含有給排水的設(shè)施設(shè)備，包括位于工作區(qū)和洗消區(qū)的高壓滅菌器和洗滌池。水管道意外破裂、排水管道阻塞降低可能導(dǎo)致感染性材料溢出，有污染實(shí)驗(yàn)人員和環(huán)境的風(fēng)險(xiǎn)。（2）預(yù)防控制措施實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)生的所有染菌物及器具，必須先經(jīng)高壓滅菌或含氯消毒劑浸泡消毒后洗滌，洗消產(chǎn)生的污水集中排入中心污水池進(jìn)行消毒處理，嚴(yán)禁直接排放。按照GB18466要求，檢測(cè)總余氯、糞大腸菌群和其他致病菌。4.實(shí)驗(yàn)室設(shè)施設(shè)備管道（1）主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別實(shí)驗(yàn)室設(shè)施設(shè)備管道穿越維護(hù)結(jié)構(gòu)的部位可能存在密封不嚴(yán)的問題，當(dāng)感染性材料溢出時(shí)，有污染環(huán)境的風(fēng)險(xiǎn)。（2）預(yù)防控制措施所有管道穿越維護(hù)結(jié)構(gòu)的部位應(yīng)嚴(yán)格密封，定期進(jìn)行檢查檢測(cè)，避免感染性材料外溢從而污染環(huán)境。5.檢測(cè)儀器設(shè)備（1）細(xì)菌鑒定和藥敏測(cè)試儀（ATB儀）、全自動(dòng)快速致病菌檢測(cè)儀（miniVIDAS）、顯微鏡、核酸提取儀、PCR儀、凝膠成像儀等設(shè)備①主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別對(duì)可疑單核細(xì)胞增生李斯特氏菌鑒定時(shí)要用到ATB儀、miniVIDAS核酸提取儀等設(shè)備，在使用這些設(shè)備時(shí)如果不按操作規(guī)程進(jìn)行，則會(huì)導(dǎo)致病原體濺出、滲漏而污染實(shí)驗(yàn)環(huán)境。②預(yù)防控制措施嚴(yán)格按ATB儀、miniVIDAS等設(shè)備操作規(guī)程操作和維護(hù)，每次使用完畢后對(duì)設(shè)備箱體及可能污染的實(shí)驗(yàn)環(huán)境進(jìn)行消毒。（2）離心機(jī)①主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別在分離血清、濃縮菌液等檢測(cè)活動(dòng)中會(huì)使用到離心機(jī)，離心過程中可能存在離心管破裂、離心管蓋脫落、離心轉(zhuǎn)子和離心腔被污染的風(fēng)險(xiǎn)。②預(yù)防控制措施離心時(shí)配備耐離心壓力的且?guī)菪苌w的離心管，離心前做好平衡，選擇正確的離心速度和離心力。規(guī)范正確操作，定期維護(hù)，確保離心機(jī)能正常，每次做好清潔消毒和使用記錄，定期進(jìn)行功能檢查。6.生物安全設(shè)施設(shè)備（1）生物安全柜①主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別在進(jìn)行單核細(xì)胞增生李斯特氏菌的大量活菌操作時(shí)，應(yīng)在生物安全柜中進(jìn)行，未對(duì)生物安全柜實(shí)施年度監(jiān)測(cè)，無法有效監(jiān)控奇防護(hù)效能；操作時(shí)未按照操作規(guī)程或使用說明書進(jìn)行正確操作和維護(hù)，造成生物安全柜的氣溶膠防護(hù)效果明顯降低，甚至消失，失去安全防護(hù)作用；長(zhǎng)時(shí)間使用或不及時(shí)更換HEPA過濾膜，會(huì)使其功能喪失，造成工作窗口氣流速度降低或流向紊亂；生物安全柜使用后未按要求進(jìn)行徹底消毒處理，會(huì)造成使用和維護(hù)人員間接接觸污染。②預(yù)防控制措施正確選配生物安全柜，操作人員應(yīng)接受相關(guān)的操作、維護(hù)培訓(xùn)，日常操作和維護(hù)嚴(yán)格按照設(shè)備操作規(guī)程或使用說明書進(jìn)行。每年請(qǐng)有檢測(cè)資質(zhì)的服務(wù)機(jī)構(gòu)對(duì)生物安全柜進(jìn)行風(fēng)速、氣流、塵埃粒子、紫外線強(qiáng)度等關(guān)鍵要素的檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)室定期進(jìn)行空氣沉降菌檢測(cè)，確保其正常性能。一旦生物安全柜的使用造成污染，應(yīng)及時(shí)進(jìn)行消毒。（2）高壓滅菌器①主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢測(cè)過程中，被病原菌污染的玻璃、耐高壓的實(shí)驗(yàn)器材及實(shí)驗(yàn)廢棄物要進(jìn)行高壓滅菌消毒才可能被移出實(shí)驗(yàn)室。在高壓消毒時(shí)，如果沒有按照高壓鍋的操作規(guī)程或使用說明書進(jìn)行操作、維護(hù)，就可能使高壓滅菌器效果明顯降低，甚至失效，失去去污染與無害化的作用。若長(zhǎng)時(shí)間使用有不定期檢測(cè)滅菌效果，則對(duì)其滅菌效果無從考證，可能產(chǎn)生功能缺損，存在滅菌不徹底從而引起污染的隱患；在長(zhǎng)期關(guān)停期間，若內(nèi)部水分不及時(shí)排干，將會(huì)使內(nèi)部器件老化從而失去正常功能。②預(yù)防控制措施選擇下排式高壓滅菌器，防止氣溶膠污染，操作人員持證上崗，正確規(guī)范操作，定期維護(hù)，確保高壓滅菌器性能正常，做好使用記錄。對(duì)壓力滅菌器每次檢測(cè)化學(xué)指示物，監(jiān)控記錄溫度、壓力、時(shí)間等滅菌參數(shù)，每周進(jìn)行生物監(jiān)測(cè)，以保證滅菌質(zhì)量。（3）個(gè)人防護(hù)用品主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別單核細(xì)胞增生李斯特氏菌分類屬于第三類，危險(xiǎn)程度為II級(jí)。進(jìn)行單核細(xì)胞增生李斯特氏菌大量活菌操作時(shí)，個(gè)人防護(hù)如未采取二級(jí)生物安全防護(hù)水平，儀造成實(shí)驗(yàn)人員感染；個(gè)人防護(hù)用品若穿戴不規(guī)范、大小不合適或使用過期的防護(hù)用品等，將會(huì)導(dǎo)致防護(hù)效果失效或降低。預(yù)防控制措施進(jìn)行單核細(xì)胞增生李斯特氏菌大量活菌操作時(shí)個(gè)人防護(hù)采取二級(jí)生物安全防護(hù)水平，選擇大小合適、有效的防護(hù)用品。應(yīng)急救治設(shè)施和用品主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別實(shí)驗(yàn)室若沒有配備洗眼器、應(yīng)急藥箱等必要的應(yīng)急設(shè)施和物品，或配備的應(yīng)急用品種類不全、不合適或過期，則導(dǎo)致急用時(shí)無法發(fā)揮作用。預(yù)防控制措施在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)配備洗眼器，確保功能正常。配備的75%乙醇、碘附或其他消毒劑、創(chuàng)可貼等急救物品與實(shí)驗(yàn)活動(dòng)相適應(yīng)并在有效期內(nèi)使用，由專人負(fù)責(zé)管理，定期維護(hù)、清理和更新。消毒滅菌劑主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別消毒劑產(chǎn)品無生產(chǎn)許可證、過期、配制方法或濃度不正確、種類選擇不合理，將會(huì)導(dǎo)致消毒效果降低、生物滅活能力降低或?qū)ξ锲犯g性增加、對(duì)皮膚造成刺激等問題。預(yù)防控制措施選擇符合國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)的正規(guī)廠家生產(chǎn)的產(chǎn)品，選擇合適的消毒劑，按照規(guī)定的消毒方法、消毒時(shí)間、消毒濃度（劑量）進(jìn)行消毒，避免使用過期產(chǎn)品；消毒過程中消毒人員應(yīng)做好必要的個(gè)體防護(hù)，防止發(fā)生意外。根據(jù)單核細(xì)胞增生李斯特氏菌特點(diǎn)，選用70%~75%酒精和稀釋10~25倍、50~100倍、200倍的施康消毒劑I（主要成分為次氯酸鈉）作為實(shí)驗(yàn)室常用消毒劑。7.管理體系的風(fēng)險(xiǎn)（1）主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別管理體系（包括應(yīng)急預(yù)案）是否健全和完善，是否符合實(shí)際管理要求，程序文件、作業(yè)指導(dǎo)書和操作規(guī)范是否科學(xué)和具有可操作性，是能否確保生物安全的主要因素。如果組織結(jié)構(gòu)不健全、設(shè)置不合理，體系文件與實(shí)際工作不匹配，以及部門職責(zé)不清或銜接不當(dāng)?shù)?，就都可能帶來安全風(fēng)險(xiǎn)。（2）預(yù)防控制措施定期開展對(duì)管理體系的評(píng)審，發(fā)現(xiàn)問題及時(shí)修訂和完善，以確保生物安全管理體系持續(xù)有效運(yùn)行。（四）工作人員的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與預(yù)防控制措施1.人員數(shù)量和素質(zhì)（1）人員數(shù)量①主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別人員過少會(huì)缺少相互提示監(jiān)督或因工作量增大而導(dǎo)致操作過程中工作失誤增加，風(fēng)險(xiǎn)增加。②預(yù)防控制措施采樣和檢測(cè)人員的數(shù)量應(yīng)與工作量相匹配，盡量有2名工作人員同時(shí)進(jìn)行采樣和檢測(cè)工作。（2）人員結(jié)構(gòu)①主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員的結(jié)構(gòu)與資質(zhì)、職稱分布不合理，新進(jìn)人員若沒有高資歷人員帶教操作，就不能很好地處理意外事件，風(fēng)險(xiǎn)增加。實(shí)驗(yàn)人員不熟悉實(shí)驗(yàn)檢測(cè)方法及操作規(guī)范，在進(jìn)行實(shí)驗(yàn)前為進(jìn)行相關(guān)的專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)，無法保證工作質(zhì)量和安全。②防控制措施實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)人員的年齡和資質(zhì)結(jié)構(gòu)應(yīng)配備合理，新進(jìn)人員應(yīng)由高資歷人員帶教或監(jiān)督操作。（3）職業(yè)操守主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢測(cè)存在一定的生物安全風(fēng)險(xiǎn)，若政治思想素質(zhì)不高、責(zé)任心不強(qiáng)的人員參與該項(xiàng)工作，則產(chǎn)生生物危害而危及人員安全、環(huán)境安全與社會(huì)安定的可能性較大。預(yù)防控制措施加強(qiáng)職業(yè)道德教育，培養(yǎng)工作責(zé)任心。2.健康管理（1）主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別健康狀況主要包括生理、心理素質(zhì)與免疫狀態(tài)。若實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)相關(guān)人員出現(xiàn)呼吸道或者消化道感染癥狀、機(jī)體免疫力低下等其他不合適工作的狀況，職業(yè)暴露風(fēng)險(xiǎn)增加。（2）預(yù)防控制措施建立健康申報(bào)制度，遇有呼吸道或者消化道感染及其他不合適工作的情況時(shí)，應(yīng)及時(shí)向科室負(fù)責(zé)人報(bào)告并暫停工作；若接觸物的傳染性大，應(yīng)加強(qiáng)防護(hù)。3.人員資質(zhì)（1）主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別檢測(cè)人員不具備衛(wèi)生檢測(cè)相關(guān)學(xué)歷教育背景，不熟悉檢測(cè)方法及操作規(guī)范，未執(zhí)行相關(guān)的專業(yè)知識(shí)培訓(xùn)和考核并未獲得上崗證，無法保證工作質(zhì)量和安全。（2）預(yù)防控制措施檢測(cè)人員必須是檢驗(yàn)或相關(guān)專業(yè)畢業(yè)，經(jīng)過上崗證培訓(xùn)、考核合格和持證上崗。4.生物安全培訓(xùn)要求（1）主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別檢測(cè)人員、輔助人員、后勤保障人員、進(jìn)修實(shí)習(xí)人員上崗前沒有接受嚴(yán)格的生物安全，以及相關(guān)生物安全設(shè)備操作的技術(shù)培訓(xùn)，易造成生物安全事故的發(fā)生。（2）預(yù)防控制措施檢測(cè)人員、輔助人員、后勤保障人員每年參加本中心組織的生物安全知識(shí)或生物安全操作技術(shù)培訓(xùn)、考核。上崗前熟練掌握生物安全儀器設(shè)備、設(shè)施操作技術(shù)，，具備相關(guān)的安全防護(hù)能力。進(jìn)修實(shí)習(xí)人員參與實(shí)驗(yàn)活動(dòng)前必須進(jìn)行生物安全知識(shí)的培訓(xùn)，在帶教老師的監(jiān)督下工作。5.應(yīng)急事件處理能力（1）主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別實(shí)驗(yàn)室人員上崗前沒有接受實(shí)驗(yàn)室意外事故處理、職業(yè)暴露后預(yù)防等突發(fā)事件處置的培訓(xùn)，一旦發(fā)生意外事件，就不能有效地進(jìn)行早期處理和控制生物安全事件。（2）預(yù)防控制措施實(shí)驗(yàn)室工作人員必須嚴(yán)格按照《實(shí)驗(yàn)室意外事故和職業(yè)性疾病報(bào)告制度》和《病原微生物生物安全應(yīng)急處置技術(shù)方案》中規(guī)定的要求進(jìn)行應(yīng)急事件的處置，強(qiáng)化職業(yè)暴露的應(yīng)急處理能力。（五）實(shí)驗(yàn)室非常規(guī)活動(dòng)中的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與預(yù)防控制措施1.主要的實(shí)驗(yàn)室非常規(guī)活動(dòng)（1）實(shí)驗(yàn)室外專業(yè)人員對(duì)實(shí)驗(yàn)室設(shè)施設(shè)備的維護(hù)、維修、檢定、校準(zhǔn)、檢測(cè)驗(yàn)證（如主要設(shè)施設(shè)備的檢測(cè)驗(yàn)證）和更換（如高效過濾器等的更換）等。（2）實(shí)驗(yàn)室后勤保障人員對(duì)實(shí)驗(yàn)室及公共環(huán)境的保潔、實(shí)驗(yàn)器材的清洗消毒。（3）實(shí)驗(yàn)室外人員參觀實(shí)驗(yàn)室和上級(jí)部門對(duì)實(shí)驗(yàn)室的檢查。（4）任何其他人員需要進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室從事實(shí)驗(yàn)活動(dòng)外的行為（如發(fā)生水災(zāi)時(shí)消防人員、急救人員的進(jìn)入）。2.主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別（1）上述人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室從事相關(guān)活動(dòng)，特別是不慎打翻、打破標(biāo)本管或損壞儀器零部件等情況，可能會(huì)引起實(shí)驗(yàn)室感染。（2）實(shí)驗(yàn)室運(yùn)行過程中某些人員需要進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室參觀，存在影響實(shí)驗(yàn)活動(dòng)正常運(yùn)行或者導(dǎo)致相關(guān)或不相關(guān)的設(shè)施設(shè)備損壞的風(fēng)險(xiǎn)。3.預(yù)防控制措施（1）實(shí)行人員準(zhǔn)入、等級(jí)制度。進(jìn)修實(shí)習(xí)人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室從事檢測(cè)活動(dòng)前，必須先進(jìn)行生物安全和實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度的培訓(xùn)。若中心實(shí)驗(yàn)室外專業(yè)人員和實(shí)驗(yàn)室后勤保障人員確實(shí)需要進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行相關(guān)活動(dòng)，或上級(jí)部門需要進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢查，應(yīng)由中心實(shí)驗(yàn)室人員協(xié)助和陪同。（2）實(shí)驗(yàn)室外專業(yè)人員和實(shí)驗(yàn)室后勤保障人員必須要有相應(yīng)的專業(yè)知識(shí)，應(yīng)對(duì)其進(jìn)行生物安全培訓(xùn)，提供安全指南，實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)協(xié)助、指導(dǎo)和規(guī)范進(jìn)入人員在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的活動(dòng)并對(duì)其安全行為進(jìn)行監(jiān)督，進(jìn)入人員必須遵守實(shí)驗(yàn)室的各項(xiàng)管路規(guī)定，以確保人員和環(huán)境安全。（3）進(jìn)入人員未經(jīng)許可絕對(duì)不能私自動(dòng)用實(shí)驗(yàn)室內(nèi)有標(biāo)志的危險(xiǎn)品（除非經(jīng)過授權(quán)），絕不能將未經(jīng)消毒處理的物品拿出實(shí)驗(yàn)區(qū)。（4）在生物安全全實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行設(shè)施、設(shè)備維護(hù)維修過程中，若發(fā)生意外事故，應(yīng)立即報(bào)告實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人。實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人根據(jù)造成的事故進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估，采取應(yīng)對(duì)措施。（5）當(dāng)需要更換HEPA過濾膜或高效過濾器時(shí)，應(yīng)先對(duì)高效過濾器、HEPA過濾膜等作原位消毒后，專業(yè)人員才能進(jìn)行更換。（6）為確保自己和他人的安全，禁止未穿防護(hù)服的人員隨意進(jìn)出實(shí)驗(yàn)室的防護(hù)區(qū)域。同時(shí)也禁止穿防護(hù)服的人員走出實(shí)驗(yàn)室的防護(hù)區(qū)域。（7）對(duì)實(shí)驗(yàn)室的設(shè)施、設(shè)備進(jìn)行維護(hù)工作時(shí)動(dòng)作輕柔，避免產(chǎn)生氣溶膠。（8）離開實(shí)驗(yàn)室前，必須正確洗手。（六）被誤用和惡意使用的風(fēng)險(xiǎn)與預(yù)防控制措施1.主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別陽性標(biāo)本未明確標(biāo)識(shí)并未嚴(yán)格實(shí)施雙人雙鎖管理，實(shí)驗(yàn)活動(dòng)結(jié)束后不及時(shí)對(duì)操作場(chǎng)所進(jìn)行消毒，工作人員在不知情的情況下可能誤用標(biāo)本、實(shí)驗(yàn)材料和設(shè)施設(shè)備等，導(dǎo)致人員感染和實(shí)驗(yàn)室環(huán)境污染、人員受傷或設(shè)施設(shè)備損壞等事故。2.預(yù)防控制措施（1）實(shí)行嚴(yán)格的人員準(zhǔn)入和執(zhí)證上崗制度。（2）所有獲得批準(zhǔn)進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室工作的人員，必須嚴(yán)格按照規(guī)程操作實(shí)驗(yàn)材料和設(shè)施設(shè)備，以及其他一切實(shí)驗(yàn)活動(dòng)，不得私自動(dòng)用實(shí)驗(yàn)室內(nèi)任何不熟悉物品。（3）發(fā)生事故時(shí)必須及時(shí)報(bào)告并作必要的處理和記錄。（4）實(shí)驗(yàn)所用材料和試劑等必須有明確標(biāo)識(shí)。（5）陽性標(biāo)本嚴(yán)格實(shí)施雙人雙鎖管理，上送的陽性標(biāo)本必須經(jīng)中心蓋章批準(zhǔn)，攜帶“可感染人類的高致病性病原微生物菌（毒）種或樣本運(yùn)輸許可證”，由專車運(yùn)送，并由專業(yè)人員全程護(hù)送。（七）相關(guān)實(shí)驗(yàn)室已發(fā)生的事故分析和從中得到的啟示目前尚未有明確因單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢測(cè)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室人員感染的相關(guān)報(bào)道，但仍然存在實(shí)驗(yàn)室人員進(jìn)行采樣檢驗(yàn)、廢棄物處置等工作過程中，個(gè)人防護(hù)不到位而導(dǎo)致感染的風(fēng)險(xiǎn)。因此要嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室相關(guān)規(guī)定，防止職業(yè)暴露風(fēng)險(xiǎn)。三、實(shí)驗(yàn)室理化因素風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估劑安全防護(hù)措施紫外線主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別二級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室、潔凈實(shí)驗(yàn)室內(nèi)傳遞窗、生物安全柜均使用紫外線燈進(jìn)行物體表面消毒。紫外線波長(zhǎng)為250~280nm，主要影響眼睛和皮膚，引起急性角膜炎和結(jié)膜炎、慢性白內(nèi)障等眼疾病，還可誘發(fā)皮膚癌。紫外燈開啟時(shí)，人員在不知情的情況下進(jìn)入可受傷害。安全防護(hù)措施在實(shí)驗(yàn)室工作應(yīng)避免紫外線直接照射人體，特別是眼部。生物安全柜表面應(yīng)張貼紫外線危害的標(biāo)識(shí)，提醒實(shí)驗(yàn)人員小心紫外線危害。在進(jìn)行紫外線消毒時(shí)，實(shí)驗(yàn)人員盡量遠(yuǎn)離消毒區(qū)域，基本可以規(guī)避紫外線對(duì)人體的危害。輻射主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別實(shí)驗(yàn)室籌建選址時(shí)未對(duì)周圍輻射源進(jìn)行排查，使用含輻射的儀器未嚴(yán)格管理，存在輻射源或輻射事故間接導(dǎo)致病原微生物屏障系統(tǒng)破壞的隱患。安全防護(hù)措施實(shí)驗(yàn)室籌建選址時(shí)對(duì)周邊建筑群嚴(yán)格排查輻射源，實(shí)驗(yàn)室不使用有輻射源的儀器設(shè)備，輻射造成的風(fēng)險(xiǎn)基本不予考慮。施康清洗消毒劑I主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別施康清洗消毒劑I屬于含氯消毒劑，有效氯的含量為4.55%~5.55%，次氯酸鈉為主要?dú)⒕蜃?。含氯的消毒液?huì)殘留在空氣中不揮發(fā)，長(zhǎng)期使用會(huì)使人感到頭疼、惡心，刺激黏膜，對(duì)于有體質(zhì)過敏的人，還容易引發(fā)過敏、哮喘疾病等。高濃度的含氯消毒劑對(duì)人的呼吸道黏膜和皮膚有明顯的刺激作用，可使人流淚、咳嗽，并刺激皮膚和黏膜，嚴(yán)重者可發(fā)生氯氣中毒。急性中毒者出現(xiàn)躁動(dòng)、惡心、嘔吐、呼吸困難等癥狀，甚至因窒息而死。安全防護(hù)措施按照使用說明，根據(jù)消毒對(duì)象不同而配制不同的稀釋倍數(shù)，避免使用不必要的高濃度的消毒劑，稀釋和使用時(shí)戴好手套，消毒后可及時(shí)開窗通風(fēng)，基本可規(guī)避消毒液對(duì)人體的危害。其他主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的照明和聲音（生物安全柜等）有可能因強(qiáng)光和噪聲對(duì)人員造成損害。安全防護(hù)措施對(duì)實(shí)驗(yàn)室的照明和聲音等參數(shù)進(jìn)行檢測(cè)，確保合格，避免強(qiáng)光和噪聲對(duì)人員的損害。四、實(shí)驗(yàn)室火災(zāi)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與預(yù)防控制措施主要風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別超負(fù)荷用電，電線過長(zhǎng)。電器和電源老化、電器保養(yǎng)不良，列如電纜的絕緣層破舊或損壞。用火不當(dāng)?shù)纫l(fā)火災(zāi)。儀器設(shè)備在不使用時(shí)未關(guān)閉電源。(5)使用的儀器設(shè)備不是專為實(shí)驗(yàn)室環(huán)境設(shè)計(jì)。易燃、易爆品處理、保存不當(dāng)。不相容化學(xué)品沒有正確隔離。在易燃物品和蒸汽附近有能產(chǎn)生火花的設(shè)備。(9)通風(fēng)系統(tǒng)不當(dāng)或不充分。預(yù)防控制措施實(shí)驗(yàn)室采取以下預(yù)防控制措施以避免火災(zāi)發(fā)生，保證發(fā)生火災(zāi)后能夠安全撤離實(shí)驗(yàn)室。定期檢查電器插座、電線絕緣層是否完好，保證用電負(fù)荷，對(duì)易燃、易爆等危險(xiǎn)品進(jìn)行有效區(qū)域隔離。(2)實(shí)驗(yàn)室配備滅火器。放置在易取的地點(diǎn)，擺放部位張貼滅火器標(biāo)識(shí)。改滅火器用于撲滅可控制的火災(zāi)，幫助人員撤離火場(chǎng)；對(duì)滅火器進(jìn)行定期檢查和維護(hù)，確保其有效使用。(3)實(shí)驗(yàn)室需裝設(shè)應(yīng)急燈，所有出口都有黑暗中可見的“緊急出口”標(biāo)識(shí)；當(dāng)出現(xiàn)緊急狀況時(shí)，實(shí)驗(yàn)室所有出口的鎖必須處開啟狀態(tài)，出口設(shè)計(jì)應(yīng)保證在經(jīng)過高危險(xiǎn)區(qū)域就能逃脫，所有出口都能通向一個(gè)開放空間。(4)走廊、流通區(qū)域不得放置障礙物，不受人員流動(dòng)和滅火設(shè)備移動(dòng)的影響。在實(shí)驗(yàn)室工作區(qū)顯著位置張貼火警電話標(biāo)識(shí)。實(shí)驗(yàn)室每年對(duì)工作人員進(jìn)行消防知識(shí)培訓(xùn)，包括消防器材的使用、火災(zāi)發(fā)生時(shí)的應(yīng)急行動(dòng)等。五、自然災(zāi)害風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與安全防護(hù)措施自然災(zāi)害可能導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)室緊急狀況主要包括水災(zāi)和地震等。水災(zāi)風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別水災(zāi)可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室維護(hù)結(jié)構(gòu)和設(shè)施損壞，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)感染性材料隨水外溢。安全防護(hù)措施在安全手冊(cè)中制訂《實(shí)驗(yàn)室緊急事件應(yīng)急預(yù)案》，并對(duì)所有實(shí)驗(yàn)室人員進(jìn)行培訓(xùn)。實(shí)驗(yàn)室一旦發(fā)生水災(zāi)報(bào)警時(shí)，應(yīng)立即停止工作。首先，考慮實(shí)驗(yàn)室內(nèi)感染性物質(zhì)和人員的轉(zhuǎn)移。實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人、中心主任根據(jù)條件及時(shí)采取對(duì)策，第一時(shí)間聯(lián)系相關(guān)消防人員。消防人員應(yīng)有防護(hù)措施，并在受過訓(xùn)練的實(shí)驗(yàn)室工作人員陪同下，進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室完成菌毒種和人員的安全轉(zhuǎn)移工作。地震風(fēng)險(xiǎn)點(diǎn)識(shí)別發(fā)生地震等自然災(zāi)害會(huì)導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)室維護(hù)結(jié)構(gòu)和設(shè)施損壞，存在人員受傷和實(shí)驗(yàn)室感染性材料外溢的風(fēng)險(xiǎn)。安全防護(hù)措施實(shí)驗(yàn)室應(yīng)采取措施降低自然災(zāi)害帶來的風(fēng)險(xiǎn)，保證發(fā)生后能夠安全撤離實(shí)驗(yàn)室，減少對(duì)人員和環(huán)境的影響。發(fā)生地震后，首先設(shè)立距實(shí)驗(yàn)室維護(hù)結(jié)構(gòu)20m范圍內(nèi)的封鎖區(qū)。其次，對(duì)封鎖區(qū)進(jìn)行消毒，然后由專業(yè)人員在做好個(gè)人防護(hù)的前提下對(duì)實(shí)驗(yàn)內(nèi)部環(huán)境邊消毒邊清理，清理到樣品保存地點(diǎn)。如果保藏樣品的容器沒有被破壞，可把它安全轉(zhuǎn)移到其他安全的實(shí)驗(yàn)室存放。如果保藏樣品的容器已有破壞和發(fā)生外溢，則應(yīng)立即用可靠方法進(jìn)行徹底消毒滅菌。六、生物安全及其他緊急事件（事故）處理預(yù)案（一）實(shí)驗(yàn)室生物安全事件（事故）處理措施（1）當(dāng)生物安全柜或潔凈實(shí)驗(yàn)室出現(xiàn)持續(xù)正壓時(shí)，室內(nèi)人員應(yīng)立即停止操作，通知運(yùn)行保障人員采取措施恢復(fù)負(fù)壓。如果不能及時(shí)恢復(fù)和保持負(fù)壓，應(yīng)停止實(shí)驗(yàn)，按規(guī)程退出。發(fā)生此類事故或發(fā)生意外停電，造成具有傳染性物質(zhì)暴露潛在危險(xiǎn)的事故和污染時(shí)，工作人員除了采取緊急措施外，還應(yīng)立即報(bào)告實(shí)驗(yàn)室安全負(fù)責(zé)人，組織對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行終末消毒。（二）其他緊急事件（事故）處理措施在制訂的應(yīng)急預(yù)案中應(yīng)包括消防人員和其他緊急救助人員。應(yīng)事先告知他們哪些實(shí)驗(yàn)室有潛在的感染性物質(zhì)，讓他們熟悉實(shí)驗(yàn)室的布局和設(shè)備。實(shí)驗(yàn)室人員要熟悉緊急撤離的情況及緊急撤離的路線標(biāo)識(shí)，在實(shí)驗(yàn)室發(fā)生不可控制的火災(zāi)、水災(zāi)、爆炸或其他危險(xiǎn)情況時(shí)，為確保工作人員的安全，要進(jìn)行緊急撤離。所有實(shí)驗(yàn)室人員需了解緊急撤離的行動(dòng)計(jì)劃、撤離路線和緊急撤離的集合地點(diǎn)，每年至少參加一次緊急撤離演習(xí)，包括急救設(shè)備使用和采取相應(yīng)急救措施。生物安全及其他緊急事件（事故）報(bào)告和記錄發(fā)生生物安全及其他緊急事件時(shí)，在緊急處理的同時(shí)必須向中心主管領(lǐng)導(dǎo)和生物安全委員會(huì)報(bào)告。對(duì)于生物安全事件必須進(jìn)行登記，記錄發(fā)生的時(shí)間、地點(diǎn)、詳細(xì)經(jīng)過及處理方法等。七、生物安全和生物安全保障風(fēng)險(xiǎn)管理（一）生物安全風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估所依據(jù)的數(shù)據(jù)及擬采取的風(fēng)險(xiǎn)控制措施、安全操作規(guī)程等均應(yīng)以國(guó)家衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會(huì)、世界衛(wèi)生組織、國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織等機(jī)構(gòu)或行業(yè)權(quán)威發(fā)布的指南、標(biāo)準(zhǔn)等為依據(jù)。（二）危險(xiǎn)發(fā)生的概率評(píng)估（見表7-5）表7-5單核細(xì)胞增生李斯特氏菌實(shí)驗(yàn)活動(dòng)危險(xiǎn)發(fā)生的概率評(píng)估序號(hào)潛在危險(xiǎn)因素危害程度發(fā)生概率固有風(fēng)險(xiǎn)措施合理性殘留風(fēng)險(xiǎn)風(fēng)險(xiǎn)可控程度1樣品運(yùn)輸過程中容器意外側(cè)翻、泄露、破裂造成污染中度可能中度合理低風(fēng)險(xiǎn)可控2樣品的接收、開啟及加樣等常規(guī)實(shí)驗(yàn)活動(dòng)中產(chǎn)生的氣溶膠中度較大可能中度合理低風(fēng)險(xiǎn)可控3離心、加樣等實(shí)驗(yàn)活動(dòng)中意外事故造成盛裝標(biāo)本容器破裂、溢出瞬間產(chǎn)生的氣溶膠中度可能中度合理低風(fēng)險(xiǎn)可控4檢測(cè)未經(jīng)滅活的樣品對(duì)儀器與環(huán)境造成的污染中度較大可能中度合理低風(fēng)險(xiǎn)可控5標(biāo)本、實(shí)驗(yàn)材料、設(shè)施設(shè)備等被誤用的風(fēng)險(xiǎn)中度可能中度合理低風(fēng)險(xiǎn)可控6陽性標(biāo)本被惡意使用的風(fēng)險(xiǎn)高度較小可能高度合理低風(fēng)險(xiǎn)可控7實(shí)驗(yàn)器材未經(jīng)規(guī)范消毒造成污染中度可能中度合理低風(fēng)險(xiǎn)可控8廢棄物處理不當(dāng)造成病原微生物擴(kuò)散中度較大可能中度合理低風(fēng)險(xiǎn)可控9滅菌裝置不符合要求，滅菌不徹底造成污染中度較小可能中度合理低風(fēng)險(xiǎn)可控10檢測(cè)人員和工勤人員被銳器誤傷造成職業(yè)暴露高度可能高度合理低風(fēng)險(xiǎn)可控11檢測(cè)人員個(gè)人防護(hù)不當(dāng)造成的病原微生物擴(kuò)散中度可能中度合理低風(fēng)險(xiǎn)可控12非檢測(cè)人員、進(jìn)修實(shí)習(xí)等外來人員進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的不當(dāng)操作中度可能中度合理低風(fēng)險(xiǎn)可控13水、電、火災(zāi)及自然災(zāi)害造成的風(fēng)險(xiǎn)中度較小可能中度合理低風(fēng)險(xiǎn)不可控（三）風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估人員風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估由中心主任組織檢驗(yàn)科、質(zhì)量管理科和熟悉單核細(xì)胞增生李斯特氏菌檢驗(yàn)相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)的專業(yè)人員進(jìn)行風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估并形成風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估