檢驗(yàn)科血清總膽汁酸測定標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程

玉環(huán)縣人民醫(yī)院檢驗(yàn)科文件編號：JYK-3-SH-015版本/修訂號：C/0主題內(nèi)容生化室作業(yè)指導(dǎo)書生效日期：20110701第2頁共4頁編寫制定日期審核審核日期：核準(zhǔn)執(zhí)行日期李永臣2010-09-15李永臣2011-07-01章林華2011-07-01血清總膽汁酸測定（循環(huán)酶法）標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程1檢驗(yàn)申請單獨(dú)檢驗(yàn)項(xiàng)目申請：血清總膽汁酸測定(縮寫TBA)；組合項(xiàng)目申請：血生化中肝功能測定加選本項(xiàng)目。臨床醫(yī)生根據(jù)需要提出檢驗(yàn)申請。2標(biāo)本采集與處理2.1標(biāo)本采集2.1.1常規(guī)靜脈采血約2ml，不抗凝，置普通試管中?；虿捎煤蛛x膠的真空采血管。2.1.2檢驗(yàn)申請單和血標(biāo)本試管標(biāo)上統(tǒng)一且唯一的標(biāo)識符。2.1.3急診標(biāo)本采集后，在檢驗(yàn)申請單上填寫標(biāo)本采集時間。2.1.4標(biāo)本采集后與檢驗(yàn)申請單一起及時運(yùn)送至檢驗(yàn)科。專人負(fù)責(zé)標(biāo)本的接收并記錄標(biāo)本的狀態(tài)，對不合格標(biāo)本予以拒收。2.1.5下列標(biāo)本為不合格標(biāo)本2.1.5.1標(biāo)本量不足：少于0.3ml的全血標(biāo)本，或少于0.1ml的血清或血漿。2.1.5.2對反應(yīng)吸光度有干擾的標(biāo)本，包括嚴(yán)重溶血、嚴(yán)重渾濁的標(biāo)本。2.1.5.3無法確認(rèn)標(biāo)本與申請單對應(yīng)關(guān)系的。2.1.5.4其他如標(biāo)識涂改、標(biāo)本試管破裂等。2.2標(biāo)本保存2.2.1接收標(biāo)本后在30min內(nèi)將標(biāo)本離心分離出血清。2.2.2標(biāo)本保存時間：室溫（15～25℃）下可穩(wěn)定一周，在冰箱中（2～82.2.3已完成測試的標(biāo)本保持完整的識別號，置4～8℃2.3標(biāo)本采集的注意事項(xiàng)2.3.1采血前使受檢者保持平靜、松弛和空腹?fàn)顟B(tài)。2.3.2不建議采集抗凝血標(biāo)本，如果必須使用血漿，推薦的抗凝劑是肝素。3方法原理循環(huán)酶法。膽汁酸被3a-羥基類固醇脫氫酶（3a-HSDH）及β-硫代煙酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）氧化，生成3酮類固醇及β-硫代煙酰胺腺嘌呤二核苷酸還原型（Thio-NAD）。生成的3酮類固醇在3a-羥基類固醇脫氫酶及β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸還原型（Thio-NAD）存在下，生成膽汁酸及β-煙酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化型（Thio-NAD）。如此進(jìn)行循環(huán)反應(yīng)，最后測定生成的β-硫代煙酰胺腺嘌呤二核苷酸還原型（Thio-NAD）的吸光度，求得膽汁酸濃度值。4試劑及其他用品4.1試劑：酶循環(huán)法測定總膽汁酸試劑盒，北京利德曼公司出品。4.2試劑盒保存：保存2～8℃4.3試劑盒準(zhǔn)備：液態(tài)雙試劑型，即開即用，無特殊準(zhǔn)備。4.4試劑盒主要成分：試劑Ⅰ：Thio-NAD952.9mｇ/L，Tris緩沖液120mmol/L；試劑Ⅱ：3α-HSD125000mmol/L，NADH6.1mｇ/L。5校準(zhǔn)品與校準(zhǔn)模式5.1校準(zhǔn)品：與試劑盒配套的標(biāo)準(zhǔn)液。5.2校準(zhǔn)類型和數(shù)目：線性模式，1個校準(zhǔn)點(diǎn)。5.3校準(zhǔn)周期：校準(zhǔn)間隔時間不限。但在：①更換試劑或出現(xiàn)質(zhì)控漂移時；②當(dāng)儀器進(jìn)行全面保養(yǎng)后；③重要零件更換后；均須進(jìn)行一次校準(zhǔn)。5.4校準(zhǔn)液重建方法：即開即用，無需特殊準(zhǔn)備。6質(zhì)控品與室內(nèi)質(zhì)控規(guī)則6.1質(zhì)控品采用由Beckman-Coulter公司提供的兩個不同水平未定值質(zhì)控血清。6.2質(zhì)控液重建方法：即開即用，無需特殊準(zhǔn)備。6.3質(zhì)控品測定：在每一批標(biāo)本中測定兩個水平質(zhì)控血清各一次。6.4質(zhì)控規(guī)則：采用Westgard多規(guī)則質(zhì)控規(guī)則，由計(jì)算機(jī)程序進(jìn)行檢索與判斷。6.5如出現(xiàn)失控情況，按室內(nèi)質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)操作程序采取各種有效的糾正措施及時糾正，并在確認(rèn)重新回復(fù)到控制狀態(tài)后開始標(biāo)本檢測。7適用儀器適用AEROSET和C16000全自動生化分析儀器。8標(biāo)本檢測步驟裝載試劑→進(jìn)行校準(zhǔn)→進(jìn)行質(zhì)控→輸入標(biāo)本檢測項(xiàng)目→加載標(biāo)本→標(biāo)本測定→結(jié)果復(fù)核→報(bào)告。主要分析參數(shù)參見說明書。10結(jié)果計(jì)算計(jì)算公式：膽汁酸濃度（μmol/L）＝ΔA測定管/min/ΔA校準(zhǔn)管/min）×校準(zhǔn)液TBA濃度（μmol/L）儀器根據(jù)此公式自動給出每個標(biāo)本測定結(jié)果。11檢驗(yàn)結(jié)果的報(bào)告及范圍11.1結(jié)果的報(bào)告11.1.1結(jié)果經(jīng)審核后，確認(rèn)準(zhǔn)確無誤后發(fā)出報(bào)告。11.1.2報(bào)告單上標(biāo)明結(jié)果的計(jì)量單位、參考區(qū)間、報(bào)告日期、時間、操作者和審核者簽名，并有與申請單相同的醫(yī)學(xué)信息。11.1.3如收到標(biāo)本的質(zhì)量可能對測定結(jié)果有影響的也在報(bào)告單上指出。11.2報(bào)告范圍：0～180μmol/L。超過此范圍的結(jié)果報(bào)告時必須附有證明該結(jié)果準(zhǔn)確可靠的文字說明，例如：系根據(jù)標(biāo)本稀釋后重復(fù)測定的結(jié)果。12操作性能12.1精密度：批內(nèi)CV<3.0%，總CV<5.0%。12.2線性范圍：0-180mol/L。12.3方法的有限性及干擾因素：膽紅素<850μmol/L，血紅蛋白<5g/L，抗壞血酸<2.84mmol/L，乳酸<24mmol/L，乳酸脫氫酶<10000U/L時，偏差均<±5%。13參考范圍及醫(yī)學(xué)決定水平參考范圍：0-20umol/L14臨床意義14.1血清膽汁酸水平是反映肝實(shí)質(zhì)損傷的一個重要指標(biāo)。餐后TBA測定對檢出輕度肝臟病變的靈敏度優(yōu)于所有其他肝功能試驗(yàn)。對檢測酒精或工業(yè)化學(xué)品引起的肝細(xì)胞損傷的靈敏度優(yōu)于其它肝功能試驗(yàn)。14.2急性肝炎時血清TBA可達(dá)參考值上限的10～100倍，急性肝炎恢復(fù)時TBA與ALT同時下降至正常水平，如持續(xù)不降有可能轉(zhuǎn)為慢性。14.3血清TBA對慢性肝炎的鑒別以及預(yù)后的判斷有意義。慢性肝炎患者如空腹TBA>20μmol/L可能處于活動期。14.4肝硬化患者的空腹TBA和餐后TBA均增高，其異常率高于所有其他肝功能試驗(yàn)。14.5TBA測定對肝外膽管阻塞和肝內(nèi)膽汁淤積的診斷有較高的靈敏度。15結(jié)果審核以及分析與相關(guān)項(xiàng)目的聯(lián)系15.1由資深專業(yè)人員負(fù)責(zé)檢驗(yàn)結(jié)果的審核。15.2認(rèn)真審核每一個測定結(jié)果，審核者對發(fā)出報(bào)告結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性負(fù)責(zé)，并在報(bào)告單的審核者處簽名。15.3相關(guān)項(xiàng)目：審核與丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、堿性磷酸酶、谷胺酰轉(zhuǎn)移酶及膽紅素的關(guān)系，如出現(xiàn)與臨床不符甚至相悖的情況，應(yīng)分析與查找原因。16威脅生命的“緊急值”及報(bào)告規(guī)定（此項(xiàng)不作規(guī)定）17有關(guān)引用程序與文件17.1Abbott自動生化分析儀儀器標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程