人體肌肉干細胞分離制備規(guī)范編制說明

團體標準《人體肌肉干細胞分離制備規(guī)范》（征求意見稿）編制說明標準起草工作組2024年9月一、工作簡況（一）任務來源根據(jù)2024年全國標準化工作要點，加強質(zhì)量支撐和標準引領(lǐng)，深入推進國家標準化發(fā)展綱要各項重點任務實施，以標準有力引領(lǐng)現(xiàn)代化產(chǎn)業(yè)體系建設(shè)，推動標準化更好服務經(jīng)濟社會高質(zhì)量發(fā)展。依據(jù)《中華人民共和國標準化法》和《團體標準管理規(guī)定》（國標委聯(lián)[2019]1號）的相關(guān)要求，中國食品藥品企業(yè)質(zhì)量安全促進會批準立項并聯(lián)合相關(guān)單位共同制定《人體肌肉干細胞分離制備規(guī)范》團體標準。（二）制定背景隨著再生醫(yī)學和干細胞治療技術(shù)的快速發(fā)展，人體肌肉干細胞作為具有自我更新和多向分化潛能的細胞類型，在治療肌肉損傷、退行性疾病以及促進組織修復等方面展現(xiàn)出巨大的醫(yī)療潛力和市場價值。隨著全球范圍內(nèi)干細胞技術(shù)和產(chǎn)業(yè)化的不斷進步，以及人口老齡化、慢性病負擔加重等社會問題的凸顯，人體肌肉干細胞治療的市場需求持續(xù)增長。近年來，人體肌肉干細胞分離制備技術(shù)取得了顯著突破，包括采集方法、分離純化技術(shù)、擴增培養(yǎng)條件等方面的優(yōu)化和創(chuàng)新。然而，技術(shù)的快速發(fā)展也帶來了監(jiān)管和標準化的需求。為了確保干細胞治療的安全性和有效性，各國政府和監(jiān)管機構(gòu)紛紛出臺相關(guān)政策，要求干細胞產(chǎn)品的制備過程必須遵循嚴格的規(guī)范和標準。因此，人體肌肉干細胞分離制備規(guī)范的制定成為市場發(fā)展的必然趨勢。在市場需求增長和技術(shù)突破的推動下，人體肌肉干細胞分離制備領(lǐng)域吸引了眾多企業(yè)和研究機構(gòu)的關(guān)注。目前，國內(nèi)外已經(jīng)有多家企業(yè)和研究機構(gòu)在從事人體肌肉干細胞的分離制備工作，市場競爭格局逐漸形成。為了搶占市場份額和提升競爭力，各企業(yè)和研究機構(gòu)紛紛加大研發(fā)投入，致力于提升干細胞產(chǎn)品的質(zhì)量和制備效率。同時，規(guī)范的制定也為市場競爭提供了公平、透明的環(huán)境，有助于促進市場的健康發(fā)展。各國政府對干細胞治療技術(shù)的發(fā)展給予了高度重視和支持，紛紛出臺相關(guān)政策文件加強監(jiān)管和審批力度。例如，中國政府將干細胞與再生醫(yī)學列為國家戰(zhàn)略發(fā)展支柱產(chǎn)業(yè)，并出臺了一系列政策文件加強監(jiān)管和審批力度。這些政策的出臺為人體肌肉干細胞分離制備規(guī)范的制定提供了有力保障和更多發(fā)展機遇。同時，法規(guī)建設(shè)的不斷完善也為市場參與者提供了明確的指導和規(guī)范框架。隨著技術(shù)的不斷進步和政策的持續(xù)支持，人體肌肉干細胞分離制備領(lǐng)域?qū)⒂瓉砀訌V闊的發(fā)展前景。一方面，市場需求的持續(xù)增長將推動該領(lǐng)域的快速發(fā)展；另一方面，規(guī)范的制定和實施將提升干細胞產(chǎn)品的質(zhì)量和安全性，進一步拓展市場應用空間。未來，人體肌肉干細胞有望在更多疾病領(lǐng)域得到應用并成為常規(guī)治療手段之一，為醫(yī)學進步和人類健康事業(yè)做出重要貢獻。制定《人體肌肉干細胞分離制備規(guī)范》是干細胞領(lǐng)域發(fā)展的重要一步，對于保障干細胞質(zhì)量和安全、促進技術(shù)統(tǒng)一與標準化、指導臨床研究與應用、保障患者權(quán)益、推動干細胞產(chǎn)業(yè)發(fā)展以及促進國際合作與交流等方面都具有重要意義。隨著干細胞技術(shù)的不斷發(fā)展和應用范圍的擴大，規(guī)范的制定和實施將發(fā)揮越來越重要的作用。（三）起草過程3.1標準研制階段2024年3～6月，起草組通過企業(yè)調(diào)研，了解企業(yè)實際生產(chǎn)情況，并組織收集、整理相關(guān)標準化資料、專業(yè)文獻等，經(jīng)成分分析、研討、論證后編寫完成《人體肌肉干細胞分離制備規(guī)范》立項申請書及標準框架相關(guān)內(nèi)容，并向中國食品藥品企業(yè)質(zhì)量安全促進會提出標準立項申請。3.2標準立項階段2024年7月，中國食品藥品企業(yè)質(zhì)量安全促進會正式發(fā)布了《人體肌肉干細胞分離制備規(guī)范》團體標準立項通知，并在全國團體標準信息平臺進行公示。3.3標準起草階段2024年7月～2024年9月，依據(jù)《中華人民共和國標準化法》、《國務院關(guān)于深化標準化工作改革方案》等文件的要求，按照團體標準的制修訂程序組織有關(guān)技術(shù)人員成立標準起草工作組，通過相關(guān)信息化手段進行多次內(nèi)容討論和交流，并向相關(guān)單位和專家咨詢，在廣泛聽取各方意見和充分論證的基礎(chǔ)上，對標準初稿進行了完善和修改后經(jīng)起草組確認，同意作為征求意見稿，公開征求意見。二、編制原則在標準制定過程中，標準起草工作組按照GB/T1.1—2020給出的規(guī)則編寫，主要遵循以下原則：（1）協(xié)調(diào)性:保證標準與國內(nèi)現(xiàn)行國家標準、行業(yè)標準協(xié)調(diào)一致。（2）規(guī)范性：嚴格按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》給出的規(guī)則起草，保證標準的編寫質(zhì)量。（3）適用性：結(jié)合生產(chǎn)企業(yè)管理實踐和產(chǎn)品的主要環(huán)境影響，提出對企業(yè)產(chǎn)品的具體質(zhì)量要求和生產(chǎn)經(jīng)營規(guī)范。三、主要技術(shù)內(nèi)容及其確定依據(jù)本標準規(guī)定了人體肌肉干細胞的基本要求、樣本采集、樣本運輸、樣本接收、分離與培養(yǎng)、記錄、質(zhì)量控制、質(zhì)量評價與放行。本標準適用于人體肌肉干細胞的分離制備與質(zhì)量控制。

本標準給出了人體肌肉干細胞的術(shù)語和定義。將人體肌肉干細胞定義為從人體肌肉組織中分離得到的一種具有多向分化潛能的干細胞?；疽髨龅嘏c設(shè)施人體肌肉干細胞制備機構(gòu)的場地和設(shè)施應滿足以下要求：選址應符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》的要求，空氣質(zhì)量標準應符合GB3095標準分級二級標準；實驗室或廠房應由具有潔凈實驗室設(shè)計建設(shè)資質(zhì)的工程公司設(shè)計與建造，并應符合GB19489、GB50073、GB50346和GB50591的規(guī)定。建設(shè)完成后，各功能區(qū)域的潔凈級別應由專業(yè)機構(gòu)進行檢測并出具合格證明；各功能區(qū)應按肌肉干細胞制備工藝進行各區(qū)域設(shè)計，符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導原則》的要求。應配備獨立質(zhì)量檢測實驗室，并符合GB19489和GB50346的規(guī)定。設(shè)備和耗材人體肌肉干細胞制備機構(gòu)的設(shè)備和耗材應滿足以下要求：應優(yōu)先選用符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導原則》要求，獲得國家資質(zhì)認證的設(shè)備、儀器、耗材和試劑；應對設(shè)備、儀器、耗材和試劑供應商進行資質(zhì)審核認證，要求供應商提供產(chǎn)品質(zhì)量報告和批次檢驗報告，并對耗材及試劑進行質(zhì)量抽檢，避免采購質(zhì)量不合格的產(chǎn)品；設(shè)備和儀器正式使用前應做安裝確認(IQ)、運行確認（OQ）和性能確認(PQ)，并定期進行第三方校準，不得使用有安全隱患的儀器操作樣本及細胞制品；應對設(shè)備與儀器進行編號建檔，并建立標準操作流程(SOP)，確保使用、運行、保養(yǎng)、維修記錄完整可追溯，對于關(guān)鍵工藝相關(guān)設(shè)備參數(shù)應進行實時監(jiān)測，及時對狀態(tài)異常的設(shè)備進行校對和維修。人員管理人體肌肉干細胞制備機構(gòu)人員管理應滿足以下要求：應分別設(shè)立干細胞制備負責人、質(zhì)量管理負責人和質(zhì)量授權(quán)人崗位。由法人授權(quán)任命，任職資質(zhì)應符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導原則》要求，定期接受崗位專業(yè)培訓，制備負責人與質(zhì)量管理負責人、質(zhì)量授權(quán)人不得相互兼任；干細胞制備和質(zhì)量技術(shù)人員應具備的健康要求：HAV、HBV、HCV、HIV及梅毒的抗體檢測應為陰性，并且(矯正)視力正常，無色盲、色弱；干細胞制備和質(zhì)量技術(shù)人員應半年接受體檢一次，有呼吸道感染或發(fā)熱等疾病狀態(tài)下不得進入潔凈操作區(qū)，需完全康復后方可恢復崗位操作；干細胞制備和質(zhì)量技術(shù)人員上崗前應經(jīng)過專業(yè)培訓，內(nèi)容包括但不限于干細胞理論與實踐、生命倫理、干細胞法律法規(guī)、GMP管理、GCP資質(zhì)、制劑基本知識、細胞培養(yǎng)基礎(chǔ)、生物安全、儀器設(shè)備使用與維護方法、物料管理與清潔衛(wèi)生、崗位職責、操作規(guī)范等內(nèi)容。樣本采集一般要求a）人體肌肉樣本采集與處理應符合GB/T37864的要求。采集和處理程序可供樣本采集人員使用。b）人體肌肉樣本采集方應具備相關(guān)的資質(zhì)和設(shè)施環(huán)境。c）人體肌肉樣本采集應通過倫理審查批準并履行知情同意程序，應建立適當?shù)馁|(zhì)量管理體系確保符合用戶需求并持續(xù)改進。供者健康a）人體肌肉樣本采集方應對供者的基本信息與健康信息進行詳細采集與記錄，同時做好對供者的隱私保護，相關(guān)記錄入檔保留至少30年。b）供者應無血液系統(tǒng)疾病、內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病、惡性腫瘤史、性傳播疾病及高危人群史、吸毒史，不應具有包括但不限于以下疾病或健康狀況：c）一般傳染性疾病或其他遺傳疾病：HIV、HBV、HCV、梅毒、HTLV、EBV與CMV抗體與核酸檢測應為陰性；傳染性皮膚病(未治愈的)；大面積皮膚損傷(未治愈的)；f）鼻/咽喉傳染病(未治愈的)。g）采集前12個小時內(nèi)用過酒精，鎮(zhèn)靜藥等。采集場所人體肌肉的采集場所應達到Ⅲ級潔凈手術(shù)室要求。采集人員采集人員應具有醫(yī)師職業(yè)證，且經(jīng)過相應的技術(shù)培訓。采集流程信息填寫a）采集人員應按照要求填寫個人信息，個人信息表應包括但不限于：姓名、性別、有效身份證件、聯(lián)系方式、緊急聯(lián)絡(luò)人、住址等。b）采集人員在采集前填寫健康調(diào)查表。采集前準備肌肉組織采集前應由醫(yī)師制定手術(shù)方案和術(shù)前術(shù)后的防感染措施。b）應確定供者身體健康，精神狀態(tài)良好，保持供者的血壓、血糖控制在較好的范圍內(nèi)。c）采集前的三天內(nèi)應停用抗凝藥、激素、阿司匹林、維生素E等。采集術(shù)前兩天應清淡飲食，合理安排作息時間。e）采集前應對客戶進行身體檢查，包括但不限于：病毒全套、血常規(guī)、凝血系列、心電圖等。耗材器械確認采集人員應按照采集套裝清單核查器材種類和數(shù)量，一次性使用物品在有效期內(nèi)且包裝完好。手術(shù)前應對采集器材進行復核，復核內(nèi)容主要包括：手術(shù)包：無破損、無滲漏、無污染，處于有效期內(nèi)；消毒劑：一般選用含碘消毒液，對碘過敏者可選用其他消毒劑；應處于有效期內(nèi)；應標明啟用日期；采集容器上均已粘貼供者識別碼。采集過程由醫(yī)師行肌肉切取手術(shù)，置于無菌采集瓶中，密封保存，并粘貼條形碼作為唯一標識。采集后注意事項a)采集后盡量平躺休息60分鐘，盡量減少肢體運動。b)采集后一周建議溫水擦浴，傷口不要碰水。c)采集后三天內(nèi)禁止飲酒，飲食以清淡為主。d)保持心情舒暢，合理飲食，作息時間規(guī)律。e)特殊情況（如感染、血腫、疼痛等）及時復診。樣本運輸一般要求a）樣本運輸人員應是經(jīng)過專業(yè)培訓合格的人員，對樣本運輸應制定規(guī)范及應急預案，并對樣本運輸全程做記錄，包括但不限于運輸?shù)姆绞?、條件、路徑、時間、人員、地址及樣本信息，相關(guān)記錄入檔保留至少30年。b）樣本運輸應采用平穩(wěn)、安全、快速的運輸途徑，宜采用冷藏運輸車或?qū)Ｓ脴吮纠洳剡\輸箱運輸。c）運輸過程中應防滲漏、防輻射、抗震動、耐壓、耐熱等，樣本包裝應貼上條形碼作為唯一標識。d）樣本運輸溫度應維持在2℃～8℃，運輸時間不超過12小時。運輸箱運輸箱應有相應的標識，標識內(nèi)容應完整、清晰，標識至少包括以下內(nèi)容：——采集方名稱及聯(lián)系方式；——最大承重量；——放置方向、防摔、防曬、防雨標識；——最多疊放層數(shù)；——樣本的品名、運輸起始地和目的地、樣本保存溫度；——生物危害標識；——禁止輻射標識。質(zhì)量監(jiān)控樣本運輸過程中應有可供追溯的記錄，記錄應包括下列內(nèi)容：品名、數(shù)量、規(guī)格；狀態(tài)是否正常；運輸?shù)氖及l(fā)地和目的地；采集機構(gòu)交接人、時間和日期；運輸承接人、時間和日期；運輸方式和運輸箱編號及溫度狀態(tài)；運輸箱的外觀和標識是否完整。運輸前應檢查冷藏運輸箱及控溫設(shè)備的性能和運行狀態(tài)是否符合要求。運輸設(shè)備應定期進行監(jiān)控和評估：溫度：隨機抽取運輸箱進行腔體空載和滿載條件下的測定，確認其滿足性能要求；微生物：對箱體的內(nèi)壁進行取樣開展微生物培養(yǎng)，不得檢出致病性的微生物。運輸過程的記錄應放入樣本檔案，保存至樣本使用或銷毀后10年以上。樣本接收a）樣本接收人員應是經(jīng)過專業(yè)培訓合格的人員，應遵從安全與準確的原則對樣本接收制定規(guī)范及應急預案，并對樣本接收過程進行記錄，相關(guān)記錄入檔保留至少30年。b）樣本接收時，接收人員應做好自我防護工作，接觸樣本之前應佩戴手套與口罩，并對接收場所進行消毒。c）接收樣本后應先觀察樣本容器外包裝的外觀，檢查有無破損。檢查外觀后，工作人員應檢查樣本采集信息記錄表是否齊全，同時確認記錄表上信息是否填寫完整，檢查信息記錄表信息是否與樣本信息一一對應，樣本及記錄表上應貼有一致對應的條形碼，做到樣本與供者信息相對應，確認無誤后進行接收。d）樣本接收后，使用75%醫(yī)用酒精消毒清理容器外表面，如不能及時對樣本進行處理，需把樣本保存在2℃～8℃條件下，最長時間不超過12小時。樣本量應能夠滿足制備和檢測的最低要求。樣本接收后應及時將信息反饋給樣本發(fā)送方。f）制備機構(gòu)應制定樣本拒收標準，按照樣本拒收標準處理樣本。分離與培養(yǎng)基本要求a）人體肌肉干細胞分離與培養(yǎng)應符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細胞制劑質(zhì)量控制及臨慶前研究指導原則》要求的車間內(nèi)進行。b）所有操作應事先制定標準規(guī)范，由經(jīng)專業(yè)培訓的技術(shù)人員嚴格遵照執(zhí)行，并進行記錄登記，相關(guān)記錄入檔保留至少30年。c）分離與培養(yǎng)過程中應標識干細胞的名稱、代次、批次、操作日期、培養(yǎng)條件、操作人員姓名等信息。d）所使用試劑應采用符合《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》、《中華人民共和國藥典》和《干細胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導原則》要求的藥品輔料或已獲批的藥品，應出具產(chǎn)品質(zhì)檢合格報告，并對各批次試劑進行質(zhì)量抽檢。e）應避免人源或動物源性血清及蛋白，不得使用同種異體人血清或血漿。如必須使用動物血清，應確保其無特定動物源性病毒污染。嚴禁使用海綿體狀腦病流行區(qū)來源的牛血清。分離前準備工作a）環(huán)境確認：潔凈室和潔凈工作臺或生物安全柜應使用紫外燈滅菌30分鐘，并啟動凈化風機和空調(diào)系統(tǒng)自凈20分鐘以上。b）工作人員核對樣本與采集信息內(nèi)容一致性，用75%的乙醇對采集瓶外表面自下而上進行清潔消毒，并放置傳遞窗自凈15分鐘后，傳入分離、處理區(qū)域。c）物料準備：取出所需的試劑及耗材放置物料推車上，放置于潔凈化工作臺或生物安全柜旁邊，待用。核查確認所用試劑及耗材的批號及是否在有效期內(nèi)。d）培養(yǎng)液準備：自配培養(yǎng)液使用前確認微生物培養(yǎng)72小時以上結(jié)果為陰性；商品化的細胞培養(yǎng)液使用前應核查確認合格證和有效期。分離與培養(yǎng)方法將肌肉組織剪碎至糜狀，以膠原酶、中性酶和胰酶消化法分離原代細胞，采用貼壁法（膠原蛋白包埋的培養(yǎng)板）進行人肌肉間充質(zhì)干細胞（鐵壁快，24小時之內(nèi)）和肌肉干細胞（貼壁慢，48小時之后)的分離。細胞換液a）換液操作應嚴格遵照《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導原則》要求，保證無外源微生物污染，相關(guān)操作均進行記錄并入檔保存至少30年。b）換液時間及頻次應根據(jù)肌肉干細胞生長情況及培養(yǎng)基狀態(tài)進行判斷，以保障肌肉干組胞生長所需營養(yǎng)物質(zhì)水平，并消除代謝物毒害作用。c）換液操作時吸棄培養(yǎng)瓶中原有的部分或全部培養(yǎng)液，再加入新鮮培養(yǎng)液。首次換液需要在鏡下觀察到原代細胞完全貼壁和延展后方可進行。d）培養(yǎng)基成分應符合肌肉干細胞分離與培養(yǎng)基本要求，盡量采用已獲國家批準的臨床級產(chǎn)品或藥品輔料。細胞傳代a）傳代操作應嚴格遵照《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導原則》要求，保證無外源微生物污染，相關(guān)操作均進行記錄并入檔保存至少30年。b）一般情況在達到65%～80%融合度可講行傳代操作，傳代操作應密度適宜、及時，迅速。c）傳代所使用消化酶應符合肌肉干細胞分離與培養(yǎng)的基本要求，盡量采用國家已批準的臨床級產(chǎn)品。如必須使用動物源性消化酶，應確保其無特定動物源性病毒污染。細胞凍存a）凍存操作應嚴格遵照《藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》和《干細胞制劑質(zhì)量控制及臨床前研究指導原則》要求，保證無外源微生物污染，相關(guān)操作均進行記錄并入檔保存至少30年。b）經(jīng)制備數(shù)量達到凍存要求的肌肉干細胞系可進行凍存操作，凍存細胞應加入適當?shù)膬龃姹Ｗo液，遵循程序降溫原則，并在液氮中進行保存。c）凍存液成分應符合肌肉干細胞分離與培養(yǎng)的基本要求，盡量采用國家已批準的臨床級產(chǎn)品或藥品輔料，二甲基亞砜含量不得超過10%，如必須使用動物源性血清，應確保其無特定動物源性病毒污染，嚴禁使用海綿狀腦病流行區(qū)來源的牛血清。d）凍存細胞應標明干細胞名稱、培養(yǎng)條件、代次、批次、操作人員、凍存日期等信息，并具有唯一標識。e）液氮凍存應使用符合要求的液氮容器，氣相凍存，由專人負責，保證液氮充足，溫度恒定。穩(wěn)定性考察a）細胞庫應依據(jù)儲存的干細胞產(chǎn)品的特性，制定年度的儲存細胞質(zhì)量穩(wěn)定性考察方案和計劃，并制定穩(wěn)定性考察的相關(guān)質(zhì)量標準。b）穩(wěn)定性考察的相關(guān)質(zhì)量標準包括但不限于以下內(nèi)容：凍存容器完整性和密閉性；細胞活率；微生物培養(yǎng)；細胞凍存復蘇回收率；細胞表面標記物表達；細胞生物學效力。c）肌肉干細胞在凍存后1周復蘇存活率不應低于80%，1年復蘇存活率不應低于60%。d）常規(guī)每年至少執(zhí)行一次穩(wěn)定性考察計劃，如遇特殊情況（例如液相液氮罐故障）可臨時性增加穩(wěn)定性考察計劃。e）應對年度性的穩(wěn)定性考察結(jié)果進行趨勢分析，便于監(jiān)測細胞儲存的連續(xù)穩(wěn)定性并改進細胞儲存工藝。記錄原始記錄應確保其可追溯細胞分離、處理和儲存操作所有環(huán)節(jié)，記錄內(nèi)容包含但不限于以下信息：供者身份號碼；產(chǎn)品描述碼、采集類型和分類碼；產(chǎn)品名稱和組分；供者唯一身份辨識符，如果適用；采集日期和時間；生產(chǎn)制備機構(gòu)的名稱和地址；制備、保存、凍存中關(guān)鍵步驟的細節(jié)及結(jié)果；關(guān)鍵步驟的日期和時間，如果適用；每一步驟的操作人員姓名；10）在分離、處理、凍存、儲存過程中使用的關(guān)鍵物料的名稱、生產(chǎn)商、批號、有效期限；使用試劑的數(shù)量；12）使用設(shè)備編碼。記錄的審核：應對記錄的準確性和完整性以及標準、法律法規(guī)的符合性進行審核。記錄的保存：記錄應歸檔于受控區(qū)域進行保存，確保整個保存期間記錄的清晰和完整性，并應避免意外或非授權(quán)的調(diào)閱、丟失、損壞、破壞、混淆或篡改。記錄的修改：機構(gòu)應建立并保持合適的記錄修改程序。記錄修改人的簽名及日期應記錄下來；修改前的記錄內(nèi)容應清晰可辨認。隱私保護：應建立保密機制，確保供者、員工信息的保密性。記錄保存期限：文件記錄是要保存至細胞應用或處理后20年。質(zhì)量控制質(zhì)控內(nèi)容a）人體肌肉干細胞安全性人體肌肉干細胞安全性檢驗項目包括：1）無菌檢測：參照《中華人民共和國藥典》2020年版四部通則1101無菌檢測法執(zhí)行，對肌肉干細胞樣本采集、運輸、分離、培養(yǎng)、凍存、復蘇等生產(chǎn)制備環(huán)節(jié)進行留樣（保存液、清洗液、培養(yǎng)基上清、凍存液等）檢測。細菌和真菌檢測結(jié)果都應為陰性；2）支原體檢測：參照《中華人民共和國藥典》2020年版四部通則3301支原體檢測法執(zhí)行，對肌肉干細胞樣本采集、運輸、分離、培養(yǎng)、凍存、復蘇等生產(chǎn)制備環(huán)節(jié)進行留樣（保存液、清洗液、培養(yǎng)基上清、凍存液等）檢測。支原體檢測結(jié)果都應為陰性；3)細胞內(nèi)外源致病因子檢測：采用血清ELISA檢測法或核酸檢測法，對肌肉干細胞樣本采集、運輸、分離、培養(yǎng)、凍存、復蘇等生產(chǎn)制備環(huán)節(jié)進行留樣（保存液、清洗液、培養(yǎng)基上清、凍存液、細胞等）檢測。HIV抗體、HBsAg、HCV抗體、TP抗體、CMV-IgM、HTLV抗體、HPV抗體、HHV抗體、EBV抗體檢測應為陰性；HCV、HBV、HIV病毒核酸檢測應為陰性；4)內(nèi)毒素檢測：參照《中華人民共和國藥典》2020年版四部通則1143細菌內(nèi)毒素檢測法執(zhí)行，對肌肉干細胞樣本采集、運輸、分離、培養(yǎng)、凍存、復蘇等生產(chǎn)制備環(huán)節(jié)進行留樣（保存液、清洗液、培養(yǎng)基上清、凍存液等）檢測。各類樣本中的內(nèi)毒素檢測值應≤0.5EU/mL。5)致瘤性檢測：采用免疫缺陷動物（裸鼠或SCID鼠），通過局部或靜脈方式接種肌肉干細胞，評價肌肉干細胞致瘤性。體內(nèi)致瘤試驗嚴格遵照動物倫理要求執(zhí)行，單只小鼠接種肌肉干細胞數(shù)量≥106細胞/kg，觀察期≥12周。肌肉干細胞應無致瘤性。人體肌肉干細胞穩(wěn)定性人體肌肉干細胞穩(wěn)定性檢測項目包括：a）細胞數(shù)量和活率檢測：選用血球細胞計數(shù)板或細胞計數(shù)儀進行細胞計數(shù)，將待檢測細胞使用臺盼藍或A0/PI熒光染料染色，讀取細胞數(shù)并計算活率。各代數(shù)及批次肌肉干細胞活細胞比例≥90%。b）生長活性檢測：通過檢測細胞倍增時間、細胞周期、克隆形成率以及端粒酶活性對肌肉干細胞生長活性進行測定，各代數(shù)及批次肌肉干細胞應處于指數(shù)生長期，GO期細胞數(shù)≤10%，具有端粒酶活性。c）細胞純度和均一性檢測：采用肌肉干細胞表面標志物流式檢測以及人基因組DNA短片段重復序列(STR)測序進行檢定。各代數(shù)及批次肌肉干細胞表面標志物表達應符合流式檢測比例要求，單一細胞系的肌肉干細胞各代次及批次細胞STR檢測結(jié)果應保持一致。人體肌肉干細胞生物學特征人體肌肉干細胞生物學特征檢測項目包括：a）細胞形態(tài)檢測：顯微鏡下觀察，肌肉干細胞貼壁生長，呈短梭形外觀，形態(tài)均一，細胞之間無密切接觸；b）細胞表面標志物檢測：采用流式細胞術(shù)進行測定，肌肉干細胞表面標志物Integrinα7、Notch1和細胞核內(nèi)標志物Pax7、myogenin陽性率不低于95%；CD31、CD34、CD45、CD73、CD90、CD105陽性率不高于5%。c）分化能力檢測：采用體外條件培養(yǎng)基誘導培養(yǎng)下，肌肉干細胞應能夠分化為成肌肉、脂肪、骨、軟骨細胞。成肌分化經(jīng)觀察多核的肌管的形成鑒定，成脂分化經(jīng)油紅0染色法鑒定，成骨分化經(jīng)茜素紅染色法鑒定，成軟骨分化經(jīng)阿爾辛藍染色法鑒定。d）染色體核型檢測：采用G帶分析法進行測定，肌肉干細胞染色體數(shù)量為46(含XX/XY)，無染色體缺失、異位和重排現(xiàn)象。質(zhì)控分類批次質(zhì)量檢驗人體肌肉干細胞制備機構(gòu)應對由同一供體、同一時間、使用同一工藝采集和分離獲得的干細胞進行例行批次質(zhì)量檢驗。當制備工藝、耗材、試劑、場地或規(guī)模等條件發(fā)生時，制備機構(gòu)應對多批次干細胞制劑進行質(zhì)量檢驗，確保工藝和質(zhì)量穩(wěn)定合格，記錄入檔保存至少30年。質(zhì)量控制檢測表參見附錄A。放行質(zhì)量檢驗每一批次肌肉干細胞制劑在臨床使用前應在完成例行質(zhì)量檢驗的基礎(chǔ)上，由干細胞臨床研究機構(gòu)質(zhì)檢平臺進行快速和簡化的質(zhì)量檢測，應包括但不限于活率、細胞表型、細菌、病毒、支原體和內(nèi)毒素含量等，確認細胞合格后方可申請臨床放行使用。相關(guān)記錄報告應入檔保存至少30年。復核質(zhì)量檢驗人體肌肉干細胞制備機構(gòu)應對每一批次干細胞制劑單獨留樣保存，詳細記錄批號、代次、生產(chǎn)日期、來源等信息。定期由國家或地方相關(guān)部門授權(quán)的專業(yè)細胞檢驗機構(gòu)或?qū)嶒炇疫M行肌肉干細胞制劑的質(zhì)量復核檢驗，并出具檢驗報告，入檔保存至少30年。復核質(zhì)量檢驗報告出具時間應在該批次肌肉干細胞制劑提出放行申請之前，并作為放行檢驗參考。質(zhì)量評價與放行質(zhì)量評價內(nèi)容供者健康篩查結(jié)果應符合合格供者要求并簽署了知情同意書。肌肉及檢測標本的采集和運輸符合標準要求。肌肉及檢測標本的接收、標識以及暫存符合標準要求。細胞分離、處理、檢測區(qū)域應滿足操作要求，有潔凈要求的操作環(huán)境應滿足相應級別環(huán)境要求，應有定期環(huán)境監(jiān)控；細胞分離、處理各工序完畢后均應及時清場；現(xiàn)場應無污染及交叉污染，如有傳染病原體或污染物，應得到有效隔離或清除。細胞在分離、處理及檢測等過程中所涉及的人員均已通過考核合格后上崗。細胞分離、處理、檢測等所使用的設(shè)備應符合設(shè)備管理要求（標識清晰正確，在合格計量校驗期內(nèi)定期維護保養(yǎng)等）；與細胞接觸的器械應經(jīng)消毒滅菌并在有效期內(nèi)。細胞制備、檢測所用物料應經(jīng)確認來自合格供應商，關(guān)鍵物料均應經(jīng)抽樣檢測并確認其質(zhì)量合格。試劑及耗材的有效期應在規(guī)定期限內(nèi)，批號應按照要求記錄下來以便具有可追溯性。應核對供者檢測報告，其內(nèi)容至少包括：乙型肝炎病毒表面