實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)完整版本

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)1.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)緒論2.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物質(zhì)量控制3.常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物4.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物營養(yǎng)與飼料5.實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境和設(shè)施6.基因工程動(dòng)物7.“3Rs”理論及其研究進(jìn)展8.怎樣才能作好動(dòng)物實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)緒論實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：是指經(jīng)人工培育的、遺傳背景清楚、對(duì)其攜帶微生物和寄生蟲實(shí)行控制、用于科學(xué)實(shí)驗(yàn)、教學(xué)、檢定及藥品、生物制品生產(chǎn)的動(dòng)物。實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、家畜、野生動(dòng)物、伴侶動(dòng)物實(shí)驗(yàn)動(dòng)物科學(xué)內(nèi)容：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物醫(yī)學(xué)、比較醫(yī)學(xué)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)1988年，國家科委發(fā)布《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》1996年10月，《北京市實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例》出臺(tái)，于2005年1月1日實(shí)施實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理：是人與實(shí)驗(yàn)動(dòng)物關(guān)系的倫理信念、道德態(tài)度和行為規(guī)范。主要體現(xiàn)在尊重實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的價(jià)值和權(quán)利。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物福利：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的一種康樂狀態(tài)。在此狀態(tài)下，其基本需求得到滿足，而痛苦被減至最小。五項(xiàng)基本福利：一，提供適當(dāng)?shù)那鍧嶏嬎捅３纸】岛途λ枰氖澄?，使?dòng)物不受饑渴之苦二，提供適當(dāng)?shù)臈鏊軌蚴孢m地休息和睡眠，使動(dòng)物不受困頓不適之苦三，做好防疫，預(yù)防疾病和給患病動(dòng)物及時(shí)診治，使動(dòng)物不受疼痛、傷病之苦四，保證擁有良好的條件和處置（包括安樂死），使動(dòng)物不受恐懼和精神上的痛苦五，提供足夠的空間、適當(dāng)?shù)脑O(shè)施以及與同類動(dòng)物伙伴在一起，使動(dòng)物能夠自由表達(dá)正常的習(xí)性動(dòng)物實(shí)驗(yàn)需要考慮實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理的幾個(gè)環(huán)節(jié)：實(shí)驗(yàn)?zāi)康拇_定和必要性評(píng)估、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)遵循3Rs原則、實(shí)驗(yàn)操作過程避免或減輕動(dòng)物疼痛及恐懼、日常飼養(yǎng)及護(hù)理、安樂死CRO：ContractResearchOrganizationInclude:Clinicaltrial、PreclinicalresearchAAALAC認(rèn)證（國際實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理評(píng)估和認(rèn)證協(xié)會(huì)）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳學(xué)控制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按遺傳學(xué)控制分類：近交系、封閉群（遠(yuǎn)交群）雜交群近交系：經(jīng)連續(xù)20代以上的全同胞兄妹交配或親子交配，近交系數(shù)大于99%，品系內(nèi)所有個(gè)體都可追溯到第20代或以后代數(shù)的一對(duì)共同祖先。近交系數(shù)：群體中某個(gè)體通過遺傳攜帶兩個(gè)同源等位基因的概率。命名：大寫英文字母或大寫英文字母加阿拉伯?dāng)?shù)字命名。BALB,DBA,TA1,C3H等，還有例外：如129等名稱縮寫：C57BL/6B6BALB/cCDBA/2D2C3HC3主要特征：基因位點(diǎn)的純合性、遺傳組成的同源性、表型的一致性、長期遺傳的穩(wěn)定性、遺傳特征的可分辨性、背景資料的完整性動(dòng)物個(gè)體具有相同的遺傳組成和特性，因而對(duì)實(shí)驗(yàn)反應(yīng)極為一致,只需用少量的動(dòng)物，即可得到非常規(guī)律的實(shí)驗(yàn)結(jié)果；動(dòng)物個(gè)體之間組織相容性抗原一致，異體移植不產(chǎn)生排斥反應(yīng)；每個(gè)近交系都有各自鮮明的生物學(xué)特點(diǎn)。亞系：由同一個(gè)近交系分離出來的有不同特性的分支，這些分支間有遺傳差異，稱為該品系的亞系。亞系的形成1.兄妹交配20-40代時(shí)形成的分支；主要原因是殘留雜合2.某分支與其他分支分開繁殖超過100代；主要原因是突變3.發(fā)現(xiàn)一個(gè)分支與其他分支的差異。原因?yàn)闅埩綦s合、突變或遺傳污染命名：在品系名稱后加一道斜線（/），斜線后標(biāo)明亞系的符號(hào)，亞系的符號(hào)可以是以下三種：數(shù)字，如DBA/1、DBA/2等。培育或產(chǎn)生亞系的單位或人的縮寫英文名稱，第一個(gè)字母用大寫，以后的字母用小寫。使用縮寫英文名稱應(yīng)注意不要和已公布過的名稱重復(fù)。例如：A/He，表示A近交系的Heston亞系；CBA/J，表示由Jackson保持的CBA近交系的亞系。當(dāng)一個(gè)保持者保持的一個(gè)近交系具有兩個(gè)以上的亞系時(shí)，可在數(shù)字后再加保持者的縮寫英文名稱來表示亞系。如：C57BL/6J，C57BL/10J分別表示由美國杰克遜研究所保持的C57BL近交系的兩個(gè)亞系。作為以上命名方法的例外情況是一些建立及命名較早，并為人們所熟知的近交系，亞系名稱可用小寫英文字母表示，如BALB/c、C57BR/cd等。由于遺傳污染形成的亞系，通常與原品系之間遺傳差異較大，因此對(duì)這樣形成的亞系應(yīng)重新命名。例如由GLaxo保持的A近交系在發(fā)生遺傳污染后，重新命名為A2G。近交系名稱中常見的縮寫符號(hào)：f(fosternursing):代乳、o(ovary):卵巢移植、p:表示移植的胚胎經(jīng)過冷凍處理、e(egg):受精卵轉(zhuǎn)輸、BR:BarrierReared近交系動(dòng)物命名實(shí)例：DBA/1fC57BL/6JDBA:小鼠品系名1：亞系名f：表示代乳C57BL:代乳母鼠品系名稱6：亞系名J：亞系名特殊類型的近交系：重組近交系：由兩個(gè)近交系雜交后，經(jīng)連續(xù)20代以上兄妹交配育成的近交系。命名：由兩個(gè)親代近交系的縮寫名稱中間加大寫英文字母X重組同類系：由兩個(gè)近交系雜交后，子代與兩個(gè)親代中的一個(gè)進(jìn)行數(shù)次回交（通常2次），通過不對(duì)特殊基因進(jìn)行選擇的近親交配而育成的近交系。命名：兩個(gè)親代近交系縮寫名稱中間加小寫字母c。同源突變系：兩個(gè)近交系，除了一個(gè)指明位點(diǎn)等位基因不同外，其遺傳基因全部相同的品系。命名：由發(fā)生突變的近交系名稱后加突變基因符號(hào)（用英文斜體印刷體），二者之間以連接號(hào)分開。如：DBA/Ha-D同源導(dǎo)入系：通過雜交、互交或回交等方式將一個(gè)基因?qū)氲浇幌抵校纬傻男碌慕幌抵辉谝粋€(gè)很小的染色體片段上的基因不同，也稱同類系。命名由以下三部分組成：a.接受導(dǎo)入近交系縮寫名稱；b.提供導(dǎo)入基因的近交系縮寫名稱并與a之間用英文句號(hào)分開；c.導(dǎo)入基因符號(hào)（英文斜體），與b之間用連字符分開。如：B10.129-H-12b,表示該同類系背景為C57BL/10,導(dǎo)入基因?yàn)镠-12b,基因提供者為129。封閉群：以非近親交配方式進(jìn)行繁殖生產(chǎn)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物種群,在不從外部引入新個(gè)體的條件下,至少連續(xù)繁殖4代以上,稱為一個(gè)封閉群,或叫遠(yuǎn)交群。命名：封閉群由2-4個(gè)大寫英文字母命名,種群名稱前標(biāo)明保持者的英文縮寫名稱,第一個(gè)字母須大寫,后面字母小寫,一般不超過4個(gè)字母。保持者名稱與種群名稱之間用冒號(hào)分開。N:NIH美國衛(wèi)生研究院（N)保持的NIH封閉群小鼠Lac:LACA英國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心（Lac)保持的LACA封閉群小鼠特例：Wistar大鼠，日本的ddy小鼠等特點(diǎn)：遺傳組成具有很高的雜合性；具有類似于人類群體遺傳異質(zhì)性的遺傳組成；具有較強(qiáng)的繁殖力、生活力和抵抗力；突變種所攜帶的突變基因通常導(dǎo)致動(dòng)物在某方面的異常，從而成為生命科學(xué)研究的模型常用封閉群動(dòng)物：昆明小鼠（KM)、NIH小鼠、ICR小鼠；Wistar大鼠、SD大鼠；Hartley豚鼠；日本大耳白兔、新西蘭白兔、青紫藍(lán)兔；Beagle狗雜交群：由不同品系或種群之間雜交產(chǎn)生的后代雜交一代動(dòng)物（F1代)：兩個(gè)不同近交系或種群雜交所生的第一代動(dòng)物命名：雌性親代名稱在前，雄性親代名稱居后，二者之間以大寫英文字母―X‖相連，將以上部分用括號(hào)括起，再在其后標(biāo)明雜交的代數(shù)（如F1、F2等）例如：（C57BL/6XDBA/2）F1=B6D2F1表示以C57BL/6為母系,DBA/2為父系雜交后生育的雜交一代,可簡寫為B6D2F1.特征和應(yīng)用：遺傳和表型上的一致性：表型變異率低，對(duì)周圍環(huán)境變化適應(yīng)性較強(qiáng)，實(shí)驗(yàn)反應(yīng)高度均一；雜交優(yōu)勢：具較強(qiáng)的生命力和對(duì)疾病的抵抗能力，壽命較長，適合于保存某些有害基因和長期慢性致死實(shí)驗(yàn)，也可作為代乳動(dòng)物以及卵、胚胎和卵巢移植的受體；雜合的遺傳組成：同時(shí)具有兩個(gè)親本品系的特點(diǎn)，可接受兩個(gè)親本品系的細(xì)胞、組織、器官和腫瘤移植。如何保持實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳穩(wěn)定？1嚴(yán)格的繁育制度2按期進(jìn)行遺傳監(jiān)測：毛色基因測試法；生化標(biāo)記基因檢測法；下頜骨測定法；皮膚移植法實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物與寄生蟲控制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物按微生物控制程度分級(jí)：1.普通級(jí)動(dòng)物2.清潔級(jí)動(dòng)物3.無特定病原體動(dòng)物(SpecificPathogenFree,SPF)4.無菌動(dòng)物1.普通級(jí)動(dòng)物：飼養(yǎng)在普通環(huán)境中，不攜帶人畜共患病和動(dòng)物烈性傳染病病原體的動(dòng)物。普通級(jí)動(dòng)物應(yīng)排除的病原體：鼠痘病毒、流行性出血熱、狂犬病、猴B病毒、沙門氏細(xì)菌、志賀氏細(xì)菌、結(jié)核分枝桿菌、皮膚真菌、弓形體等2.清潔級(jí)動(dòng)物：飼養(yǎng)在屏障環(huán)境，除普通級(jí)動(dòng)物應(yīng)排除的病原體外，不攜帶對(duì)動(dòng)物危害大和對(duì)科學(xué)研究干擾大的病原體。3.無特定病原體動(dòng)物(SPF)：飼養(yǎng)在屏障環(huán)境，無特定病原體的動(dòng)物。4.無菌動(dòng)物：飼養(yǎng)在隔離環(huán)境，體內(nèi)外無任何可檢出的生命體●已知菌動(dòng)物：動(dòng)物體內(nèi)外所攜帶的生命體是已知的,也可叫已知菌動(dòng)物?！裣ど鷦?dòng)物：悉生動(dòng)物是由無細(xì)菌動(dòng)物植入已知細(xì)菌而得到的。常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠一般特性：性情溫順、膽小易驚，對(duì)外來刺激敏感；晝伏夜出，傍晚開始活躍；喜歡啃咬，非同窩雄鼠好斗雄鼠可分泌醋酸銨臭氣；白化小鼠怕強(qiáng)光；不耐餓、不耐熱剖學(xué)特點(diǎn)：門齒終身生長，需經(jīng)常磨損來維持恒定；無汗腺,尾有四條明顯的血管；胃容量小,約1-1.5ml；淋巴系統(tǒng)發(fā)達(dá),外界刺激可使淋巴系統(tǒng)增生；雌性為雙子宮,成Y型；有褐色脂肪組織,參與代謝和增加熱能；雄鼠生殖器官中有凝固腺，分泌物在交配后凝固與雌性陰道和子宮頸內(nèi)形成陰栓；雄鼠脾臟比雌鼠明顯大，可達(dá)到50%生理學(xué)特點(diǎn)：成熟早,繁殖力強(qiáng),一般雌鼠35-50日齡,雄鼠45-60日齡成熟;雌鼠性周期4-5天,妊娠期19-21天,哺乳期20-22天,胎產(chǎn)仔5-16只,每年6-10胎,生育期1年;為全年多發(fā)情動(dòng)物;壽命約為2-3年。大鼠一般特性：性情溫順；嗅覺發(fā)達(dá)，味覺很差，對(duì)營養(yǎng)缺乏非常敏感（特別是VA)喜安靜環(huán)境，噪音對(duì)其繁殖影響很大對(duì)環(huán)境中的粉塵、氨氣和硫化氫等極為敏感，會(huì)引起肺大面積壞死對(duì)濕度極為敏感，太低易致環(huán)尾癥解剖學(xué)特點(diǎn)●門齒終生生長，需磨損維持其恒定；食道與十二指腸相距很近，胃中有一條皺折，收縮時(shí)會(huì)堵住噴門口；●肝臟再生能力強(qiáng)，無膽囊，來自各葉的膽管形成總膽管，開口于十二指腸的乳突；汗腺極不發(fā)達(dá)?！穹谓Y(jié)構(gòu)特別。左肺為1個(gè)大葉，右肺分成4葉●心臟和外周循環(huán)與其他哺乳動(dòng)物不同。心臟的血液供給既來自冠狀動(dòng)脈，也來自冠狀外動(dòng)脈●無扁桃體；眼角膜無血管；有棕色脂肪組織生理學(xué)特點(diǎn)●壽命為3-3.5年；2月齡時(shí)性成熟，為全年多發(fā)情動(dòng)物；妊娠期19-23天；不能嘔吐豚鼠一般生物學(xué)特性●草食性；膽小、溫順、對(duì)外界刺激極為敏感。不傷人，不打斗，喜歡安靜、干燥、清潔的環(huán)境●喜群居,有專制型社會(huì)行為，1-2雄鼠處于統(tǒng)治地位●聽覺發(fā)達(dá)，能識(shí)別多種不同的聲音，當(dāng)有尖銳的聲音刺激時(shí)，常表現(xiàn)耳廓微動(dòng)，稱為普萊厄反射或聽覺耳動(dòng)發(fā)射●有食糞癖，食軟糞補(bǔ)充營養(yǎng)，幼子從母鼠糞獲取正常菌叢解剖學(xué)特點(diǎn)●耳蝸網(wǎng)發(fā)達(dá)，聽覺敏銳，音域廣；上唇分裂，嚼肌發(fā)達(dá)；胸腺在頸部，位于下頜骨角到胸腔入口之間●盲腸極大，占腹腔容積三分之一；陰莖端有兩個(gè)特殊的角形物，呈圓錐狀；雌性有陰道閉合膜，一對(duì)乳腺生理學(xué)特點(diǎn)●性成熟早，雌鼠30-45日齡，雄鼠70日齡，妊娠期59-72天,一般產(chǎn)仔3-4只，哺乳期2-3周●出生時(shí)即被毛完整，一小時(shí)后可走動(dòng)，數(shù)小時(shí)后能吃食●壽命一般4-5年，最長可達(dá)8年。2月齡體重可達(dá)350克，5月齡可達(dá)700克●自動(dòng)調(diào)節(jié)體溫能力較差，飼養(yǎng)最適溫度18-22度;●體內(nèi)缺乏左旋葡萄糖內(nèi)酯氧化酶，其自身不能合成維生素C●易被致敏、引起變態(tài)反應(yīng)，對(duì)免疫抑制劑敏感應(yīng)用●免疫學(xué)血清中含有豐富的補(bǔ)體，血清學(xué)診斷上的―補(bǔ)體‖就是由豚鼠血清制成，常用補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)來進(jìn)行實(shí)驗(yàn)診斷；●營養(yǎng)學(xué)體內(nèi)不能合成維生素C,對(duì)維生素C缺乏十分敏感，如果飼料中缺乏時(shí)，很快會(huì)出現(xiàn)一系列壞血病癥狀，是目前唯一用于研究實(shí)驗(yàn)性壞血病的動(dòng)物；●各種傳染病的研究：豚鼠對(duì)很多致病菌和病毒十分敏感過敏反應(yīng)或變態(tài)反應(yīng)的研究；豚鼠對(duì)缺氧的耐受性強(qiáng)；毒物對(duì)皮膚局部作用實(shí)驗(yàn)倉鼠（地鼠）一般生物學(xué)特性雜食性動(dòng)物，有儲(chǔ)存食物的習(xí)性，可將食物存于頰囊內(nèi)牙齒堅(jiān)硬，可咬斷細(xì)鐵絲；有食仔癖；晝伏夜出，嗜睡，熟睡時(shí)全身松軟，如死亡狀，不易醒?室溫18-22度為宜，低于9度時(shí)可出現(xiàn)冬眠（中國地鼠無冬眠現(xiàn)象）；好斗，受驚嚇時(shí)會(huì)咬人，雌性比雄性大且兇猛解剖學(xué)特點(diǎn)●口腔內(nèi)兩側(cè)各有一個(gè)頰囊，常用來運(yùn)輸和儲(chǔ)存食物；中國地鼠無膽囊；盲腸較大，結(jié)腸長（水的利用率高）生理學(xué)特點(diǎn)●妊娠期15-17天，哺乳期21天，每年可產(chǎn)5-7胎，每胎產(chǎn)仔約7只，平均壽命2-3年；成年體重約為150克地鼠對(duì)皮膚移植的反應(yīng)特別，封閉群內(nèi)個(gè)體間皮膚移植?？纱婊?，并能長期生存下來，但不同群體間移植則100%排斥頰囊缺少組織相容性反應(yīng)，可進(jìn)行腫瘤移植家兔一般生物學(xué)特性●草食性動(dòng)物，性情溫順，群居性差；聽覺嗅覺靈敏，膽小怕驚；喜干怕熱；夜行性、嗜眠性●食糞特性；喜磨牙，有啃木、扒土習(xí)慣解剖學(xué)特點(diǎn)●六顆切齒，比嚙齒動(dòng)物多一對(duì)小切齒；●胸腔由縱隔分為互不相通的左右兩部，縱隔由膈胸膜和縱隔胸膜兩層胸膜組成，肺被肋胸膜和肺胸膜隔開，心臟又被心包胸膜隔開。因此，開胸心臟手術(shù)無需人工呼吸；●頸部神經(jīng)血管特殊，有減壓神經(jīng)的獨(dú)立分支和迷走神經(jīng)與交感神經(jīng)干完全分開生理學(xué)特點(diǎn)●恒溫動(dòng)物，對(duì)致熱物質(zhì)反應(yīng)敏感，適于用做熱源實(shí)驗(yàn)●刺激性排卵，妊娠期30-33天，產(chǎn)仔數(shù)4-10只，哺乳期40-45天，生育年齡5-6年，平均壽命8年●胃常處于排空狀態(tài)，不會(huì)嘔吐；尿液呈堿性(pH8.2)，饑餓時(shí)尿液變酸(pH6-7)，幼兔尿偏酸犬一般生物學(xué)特性●嗅覺、聽覺、觸覺靈敏●視力很差，視角25度以下，視野20-30米，紅綠色盲●正常的犬鼻尖呈油狀滋潤，觸摸有涼感●喜歡肉類的脂肪，習(xí)慣啃骨頭，味覺差解剖學(xué)特點(diǎn)●嗅腦、嗅覺器官、嗅神經(jīng)發(fā)達(dá)，鼻粘膜上布滿嗅神經(jīng)；無鎖骨，肩胛骨由骨骼肌連接軀體●食道全部由橫紋肌構(gòu)成；發(fā)達(dá)的心血管和神經(jīng)系統(tǒng)，內(nèi)臟與人相似●唾液中缺少淀粉酶；皮膚汗腺極不發(fā)達(dá)，趾墊有少量汗腺比格犬：又稱小獵兔犬貓一般生物學(xué)特性：交配后24小時(shí)開始排卵，屬典型刺激性排卵。對(duì)嘔吐反應(yīng)靈敏，受機(jī)械和化學(xué)刺激易咳嗽；平衡感好，血壓穩(wěn)定動(dòng)物實(shí)驗(yàn)替代方法3R：Reduction（減少）：在科學(xué)研究中，通過科學(xué)合理的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，使用少量動(dòng)物獲取同樣多的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)或使用一定數(shù)量的動(dòng)物獲得更多實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的科學(xué)方法。絕對(duì)數(shù)量的減少（實(shí)驗(yàn)動(dòng)物用量下降）—相對(duì)數(shù)量的減少（實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)獲取量上升）Replacement（替代）：使用沒有知覺的實(shí)驗(yàn)材料（體外方法）替代活體動(dòng)物（體內(nèi)方法），或使用低等動(dòng)物替代高等動(dòng)物進(jìn)行試驗(yàn)，并獲得相同實(shí)驗(yàn)效果的科學(xué)方法。Refinement（優(yōu)化）：在符合科學(xué)原則的基礎(chǔ)上，通過改善實(shí)驗(yàn)環(huán)境條件，善待動(dòng)物，提高動(dòng)物福利；或完善實(shí)驗(yàn)程序和改進(jìn)實(shí)驗(yàn)技術(shù)，避免或減輕給動(dòng)物造成的與實(shí)驗(yàn)?zāi)康臒o關(guān)的疼痛和緊張不安的科學(xué)方法。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)仁慈終點(diǎn)：仁慈終點(diǎn)是動(dòng)物遭受疼痛、痛苦或是動(dòng)物瀕臨死亡前的最早指征，它是人為確定的、具有典型的臨床表現(xiàn)、并在達(dá)到試驗(yàn)?zāi)康那疤嵯驴梢越K止試驗(yàn)的某一階段（點(diǎn)）。選擇仁慈終點(diǎn)的目的是能夠在對(duì)大程度上減輕動(dòng)物所承受痛苦。科技部在2006年11月7日發(fā)布了科學(xué)技術(shù)部令第11號(hào)《國家科技計(jì)劃實(shí)施中科研不端行為處理辦法（試行）》，明確見―違反實(shí)驗(yàn)動(dòng)物保護(hù)規(guī)范‖列為六種不端行為之一，需要進(jìn)行堅(jiān)決治理。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物營養(yǎng)與飼料水對(duì)水的攝取:飼料中（不推薦用青飼料作為水源，可能會(huì)伴隨潛在寄生蟲感染）;飲水蛋白質(zhì)粗蛋白：蛋白質(zhì)：由氨基酸組成非蛋白氮：未結(jié)合成蛋白質(zhì)分子的個(gè)別氨基酸、植物體中由無機(jī)氮合成蛋白質(zhì)的中間產(chǎn)物和植物蛋白質(zhì)經(jīng)酶類和細(xì)菌分解后的產(chǎn)物等必須氨基酸與非必須氨基酸●必須氨基酸：動(dòng)物體內(nèi)不能合成，必須由飼料來提供。其中，賴氨酸、蛋氨酸和色氨酸在植物性飼料中常不足，缺乏還會(huì)影響其它氨基酸利用，又被稱為限制性氨基酸。●非必須氨基酸：動(dòng)物體內(nèi)能夠合成。氨基酸平衡與氨基酸失衡●氨基酸失衡：一種或幾種必需氨基酸過多或過少，相互間比例與動(dòng)物的需要不一致，從而造成飼料利用率降低，生長遲緩、繁殖力下降的現(xiàn)象。蛋白質(zhì)含量不足或氨基酸比例不當(dāng)●生長發(fā)育緩慢，體重減輕；抵抗力下降，貧血，低蛋白血癥，水腫等；影響生殖。蛋白質(zhì)含量過高:引起代謝紊亂，嚴(yán)重者甚至出現(xiàn)酸中毒脂肪來源:動(dòng)物性脂肪、植物性脂肪亞油酸、亞麻酸和花生四烯酸在動(dòng)物體內(nèi)不能合成，稱為必需脂肪酸。必需脂肪酸對(duì)維持細(xì)胞及亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)的功能和完整性很重要，還參與類脂代謝，在調(diào)節(jié)膽固醇代謝，特別是輸送、分解和排泄方面有重要意義。亞油酸是合成前列腺素的原料。碳水化合物及其營養(yǎng)功能分為粗纖維：纖維素、半纖維素、木質(zhì)素等所組成草食性動(dòng)物，粗纖維是必不可少的，如不足可造成消化機(jī)能紊亂，消化道疾病等。反芻動(dòng)物和馬屬動(dòng)物，粗纖維在瘤胃及盲腸中經(jīng)發(fā)酵形成揮發(fā)性脂肪酸（乙酸、丙酸、丁酸），參與碳水化合物代謝，通過三羧酸循環(huán)，形成高能磷酸化合物，產(chǎn)生熱能?？扇苄蕴妓衔锏V物質(zhì)常量元素（占動(dòng)物體重的0.01％以上）包括鈣、磷、鈉、氯、硫、鎂、鉀等微量元素（不足體重的0.01％）包括鐵、銅、鋅、錳、碘等元素。鈣和磷：含量最多，占機(jī)體礦物質(zhì)總量的70％以上，既要保證適量的鈣磷數(shù)量又要保持兩者適宜的比例維生素大多數(shù)在動(dòng)物體內(nèi)不能合成，必須由飼料或腸道寄生的細(xì)菌合成后提供。正常情況下,水溶性維生素和維生素K不會(huì)缺乏，但在高溫滅菌時(shí)應(yīng)當(dāng)給予補(bǔ)充。豚鼠和靈長類動(dòng)物體內(nèi)不能合成維生素C，必須在飼料中供給。脂溶性維生素：DAKE,吸收后可在體內(nèi)貯存，短期供給不足不會(huì)對(duì)生長發(fā)育和健康產(chǎn)生不良影響。維生素K:一般不會(huì)缺乏，因廣泛存在于飼料中，且大腸內(nèi)的細(xì)菌也能合成，但無菌動(dòng)物可發(fā)生維生素K缺乏。水溶性維生素:BC.由于很少或幾乎不在體內(nèi)貯存，水溶性維生素短時(shí)間缺乏或不足均會(huì)引起體內(nèi)某些酶活性的改變，阻抑相應(yīng)的代謝過程，從而影響動(dòng)物生長發(fā)育和抗病力具有食糞癖的動(dòng)物如兔，可從糞中得到維生素B族的補(bǔ)充各種營養(yǎng)素間的關(guān)系能量物質(zhì)和蛋白質(zhì)的比例（也稱為蛋能比）應(yīng)適當(dāng)，不當(dāng)會(huì)影響營養(yǎng)素的利用率，甚至造成營養(yǎng)障礙粗纖維與其他營養(yǎng)素的利用一般呈負(fù)相關(guān)，但對(duì)于草食動(dòng)物是必需的一種營養(yǎng)素蛋白質(zhì)的供給量對(duì)某些維生素如A、D、B2等的吸收也有明顯的影響脂類含量與維生素尤其是脂溶性維生素的吸收有明顯關(guān)系高脂飼料會(huì)影響鈣的吸收，高蛋白質(zhì)飼料則能提高機(jī)體對(duì)鈣磷的吸收實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的營養(yǎng)需要維持需要生長需要繁殖需要影響動(dòng)物營養(yǎng)需要的主要因素遺傳和環(huán)境因素：不同品種動(dòng)物營養(yǎng)需要明顯不同；各品系間營養(yǎng)需要有明顯差異；在隔離或屏障環(huán)境中飼養(yǎng)動(dòng)物其營養(yǎng)需要和同品系在普通環(huán)境中飼養(yǎng)動(dòng)物的營養(yǎng)需要差別明顯小鼠營養(yǎng)需要特點(diǎn)：飼料中含18-20%左右的蛋白質(zhì)即可；喜糖；泌乳期喜脂；對(duì)維生素A的過量很敏感,特別是妊娠小鼠,過量會(huì)造成胚胎畸形；對(duì)維生素A和D的需要量較高，應(yīng)注意補(bǔ)充。大鼠營養(yǎng)需要特點(diǎn)：18-20%的蛋白質(zhì)；生長期的大鼠易發(fā)生脂肪酸缺乏，飼料中必需脂肪酸的需要量應(yīng)占熱能物質(zhì)的1.3％；對(duì)鎂的需要量較高，應(yīng)注意補(bǔ)充。生長期以后蛋白質(zhì)需要量銳減，可適當(dāng)減少蛋白質(zhì)量；豚鼠營養(yǎng)需要特點(diǎn)：對(duì)幾種必需氨基酸需要量高，尤其是精氨酸；粗纖維需要量高，不足可發(fā)生排糞較粘和脫毛現(xiàn)象；不能自身合成維生素C，對(duì)其缺乏特別敏感，地鼠營養(yǎng)需要特點(diǎn):像反芻動(dòng)物一樣有效利用非蛋白氮;蛋白質(zhì)需要量高，如不足成年地鼠將會(huì)出現(xiàn)性機(jī)能減退，幼鼠則生長發(fā)育遲緩,一般要求達(dá)到21-24%;膽固醇代謝較特殊家兔營養(yǎng)需要特點(diǎn)：草食性，應(yīng)注意提高飼料粗纖維含量；蛋白質(zhì)：14-17%；可耐受高鈣；初生時(shí)鐵儲(chǔ)備高，故不易貧血；通過食糞行為可利用腸道微生物合成的B族維生素和維生素K狗營養(yǎng)需要特點(diǎn)：能耐受高脂肪，要求日糧中有一定水平的不飽和脂肪酸；維生素A需要量大。盡管腸道內(nèi)微生物可合成B族維生素，但仍需要補(bǔ)充維生素B12；肉食性，應(yīng)考慮適口性，動(dòng)物性蛋白應(yīng)占全部蛋白飼料的三分之一，蛋白質(zhì)含量要求22-25%猴營養(yǎng)需要特點(diǎn)：自身不能合成維生素C貓營養(yǎng)需要特點(diǎn)：飼料中需加一定量牛黃酸；飼料中亞油酸含量應(yīng)大于1%飼料的消毒：干熱、濕熱、輻照、藥物熏蒸動(dòng)物實(shí)驗(yàn)及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選擇原則：相似性、特殊性、標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)格化、經(jīng)濟(jì)性大鼠肝臟再生能力強(qiáng)，切除60-70%肝葉仍有再生能力，適合肝外科實(shí)驗(yàn)研究。但大鼠無膽囊，不能用作膽囊功能研究。人類疾病動(dòng)物模型：是研究中所建立的具有人類疾病模擬性表現(xiàn)的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)對(duì)象和相關(guān)材料動(dòng)物模型復(fù)制原則：相似性、可重復(fù)性、可靠性、適用性喝可控性、易行性喝經(jīng)濟(jì)性動(dòng)物模型分類按產(chǎn)生原因分類：自發(fā)性動(dòng)物模型、誘發(fā)性或?qū)嶒?yàn)性動(dòng)物模型影響動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果的主要因素：R=(A+B+C)×D±EA:動(dòng)物種的共同反應(yīng)B:動(dòng)物品種、品系特有的反應(yīng)C:動(dòng)物的個(gè)體反應(yīng)D:環(huán)境因素（包括實(shí)驗(yàn)處理）E:實(shí)驗(yàn)誤差A(yù),B,C是由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物本身的遺傳因素決定的，被選擇的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，在嚴(yán)格控制環(huán)境因素D或改變其中某一條件后就可能得到一個(gè)理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果R影響動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的主要因素：動(dòng)物因素、環(huán)境因素、營養(yǎng)因素、實(shí)驗(yàn)技術(shù)因素基本動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù)動(dòng)物的編號(hào)：染色法：一般適用于短期實(shí)驗(yàn)，大、小鼠常用耳緣剪孔法：適用于長期實(shí)驗(yàn)，大、小鼠常用掛牌法：適用于貓、犬等如何做好動(dòng)物實(shí)驗(yàn)？1、明確目的及必要性2、確認(rèn)必要性―3R‖原則；動(dòng)物實(shí)驗(yàn)倫理和動(dòng)物福利3、作好實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)：對(duì)照原則隨機(jī)化原則重復(fù)原則均衡性原則4、選擇適宜的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物遺傳特性的選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物等級(jí)的選擇實(shí)驗(yàn)動(dòng)物數(shù)量、規(guī)格和性別的選擇5、做好實(shí)驗(yàn)操作和實(shí)驗(yàn)條件保障工作6、搞好動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果的統(tǒng)計(jì)、分析和資料的整理、歸檔工作研究論文中有關(guān)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的描述：(1)品種、品系描述清楚；(2)來源明確；(3)體重明確；(4)等級(jí)明確；(5)飼養(yǎng)環(huán)境和實(shí)驗(yàn)環(huán)境明確；(6)性別明確；(7)有對(duì)飼養(yǎng)方式的描述(如飼料類型、營養(yǎng)水平、照明方式、溫度、濕度要求)；(8)所用動(dòng)物數(shù)量準(zhǔn)確；(9)對(duì)動(dòng)物的健康狀況的描述詳細(xì)；(10)對(duì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的處理方式有單獨(dú)清楚的交代；(11)動(dòng)物福利倫理審查情況。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物定義:用實(shí)驗(yàn)的方法將外源基因?qū)朐缙谂咛ゼ?xì)胞，使之整合于細(xì)胞基因組中而建立的動(dòng)物品系。整合的外源基因稱為轉(zhuǎn)基因（transgene)轉(zhuǎn)基因小鼠的制備原理與方法(一)轉(zhuǎn)基因小鼠制備的基本程序：1.選擇小鼠品系，可以用遠(yuǎn)交系也可以用近交系。一般采用兩種近交系的雜交一代。2.準(zhǔn)備不育雄鼠和假孕母鼠。用輸精管結(jié)扎的方法制備不育雄鼠，不育雄鼠與雌鼠交配可獲得假孕母鼠。3.收獲受精卵-超排卵4.將導(dǎo)入外源基因的受精卵植入假孕母鼠的輸卵管或子宮內(nèi)發(fā)育。5.首建轉(zhuǎn)基因鼠(founder)中轉(zhuǎn)基因的檢測。6.通過繁育建立轉(zhuǎn)基因小鼠品系。（1）.互交得到轉(zhuǎn)基因純合子小鼠（2）.回交至少10代建立純系轉(zhuǎn)基因小鼠（二）外源基因?qū)敕椒ǎ?.顯微注射法。2.逆轉(zhuǎn)錄病毒載體法。3.電脈沖法。轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的應(yīng)用：1.基因功能的研究2.建立轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生物反應(yīng)器3.異種器官移植基因打靶（Genetargeting）(一)基因打靶的原理：DNA同源重組的原理打靶載體(targetingvector)：根據(jù)DNA同源重組的原理，導(dǎo)入的外源基因必須和靶基因有一定的同源序列。因此，外源基因?qū)肭氨仨毥?jīng)過精巧的構(gòu)建，經(jīng)構(gòu)建的外源基因稱為打靶載體(targetingvector)。(二)基因打靶的方法：進(jìn)行基因打靶要經(jīng)歷以下步驟：（1）構(gòu)建打靶載體。――在打靶載體中需要一個(gè)與靶基因同源的DNA片段，這一片段稱為同源重組指導(dǎo)序外源基因插入這一同源序列之中。（2）打靶載體導(dǎo)入受體細(xì)胞(常用胚胎干細(xì)胞(embryonicstemcell，即ES細(xì)胞)。外源基因?qū)隕S細(xì)胞與否，還需經(jīng)過G418和GANC培養(yǎng)基篩選。由于同源重組的頻正負(fù)選擇法：－（3）打靶ES細(xì)胞導(dǎo)入囊胚。（4）囊胚植入假孕母鼠子宮發(fā)育?；虼虬行∈蟮姆庇没虼虬械姆椒óa(chǎn)生的第一代子鼠為嵌合體小鼠，并非小鼠的全部細(xì)胞中都整合有導(dǎo)入的外源基因，為獲得純合子的轉(zhuǎn)基因小鼠，還需要用打靶后出生的雄性小鼠與提供囊胚的正常雌鼠交配，即回交?；亟缓蟪錾淖哟笾杏须s合子的小鼠(-/+)。再用雜合子小鼠互交，從出生的子代鼠中可鑒定、篩選出純合子的基因打靶小鼠。(三)組織特異性基因打靶：Cre/loxP系統(tǒng)(四)外源基因的時(shí)間可控性表達(dá)：用編碼Cre重組酶與人雌激素受體(ER)融合蛋白的基因制備了Cre–ER轉(zhuǎn)基因小鼠，給這種轉(zhuǎn)基因小鼠注射人雌激素，可誘導(dǎo)Cre–ER的大量表達(dá)。再用插入兩個(gè)反向loxP序列之間的基因制備另一種基因打靶小鼠，并使該基因DNA序列與其上游的啟動(dòng)子方向相反，則該基因必須依賴Cre重組酶調(diào)轉(zhuǎn)方向后方能表達(dá)。實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境設(shè)施控制實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境設(shè)施控制：一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物設(shè)施概念：是從事飼養(yǎng)、育種、保種、生產(chǎn)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等的建筑物、設(shè)備以及運(yùn)營管理在內(nèi)的總和。它是由實(shí)驗(yàn)動(dòng)物繁育、生產(chǎn)設(shè)施和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)設(shè)施兩部分組成。二、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境設(shè)施分類：分為三級(jí)，控制程度從低到高，依次為普通環(huán)境：教學(xué)等用途的普通實(shí)驗(yàn)動(dòng)物屏障環(huán)境：清潔實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及SPF隔離環(huán)境：悉生、無菌實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及SPF單走廊房間的壓強(qiáng)：SPF室>內(nèi)室>緩沖間>外室層流架：正壓型層流架主要用于清潔動(dòng)物或SPF動(dòng)物的飼養(yǎng)；負(fù)壓型層流架，主要用于感染動(dòng)物的飼養(yǎng)。三實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)常用的輔助設(shè)施：籠具、籠架、飲水裝置、運(yùn)輸籠和墊料等水：屏障和隔離環(huán)境內(nèi)飼養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飲用水須經(jīng)滅菌處理實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的飲水一般無需作蒸溜、離子交換或反滲透等處理，有助于動(dòng)物對(duì)微量元素的利用。墊料：吸濕性好、塵埃少、無異味、無毒性、無油脂的材料。環(huán)境因素對(duì)