獸醫(yī)傳染病學(xué) 布氏桿菌病

布魯氏菌?。˙rucellosis）1一、概述本病簡稱布病，是由布氏桿菌引起的一種人畜共患急性或慢性傳染病，其特征是侵害生殖系統(tǒng)和關(guān)節(jié)，引起流產(chǎn)、不育及多種組織器官的炎癥、壞死及肉芽腫。人布病又稱地中海弛張熱，馬爾他熱，波浪熱或波狀熱，在家畜中，牛、羊、豬最常發(fā)生，且可傳染給人和其它家畜。21814年Burnet首先描述“地中海弛張熱”，1860年Marston對本病作了系統(tǒng)描述，且把傷寒與地中海弛張熱區(qū)別開。1886年Bruce在馬爾他島從死于“馬爾他熱”的士兵脾臟中分離出“布魯氏菌”，首次明確了該病的病原體。1897年Hughes根據(jù)本病的熱型特征，建議稱“波浪熱”。后來，為紀(jì)念Bruce，學(xué)者們建議將該病取名為“布氏菌病”。1897年Wright與其同事發(fā)現(xiàn)病人血清與布魯氏菌的培養(yǎng)物可發(fā)生凝集反應(yīng)，稱為Wright凝集反應(yīng)，從而建立了迄今仍用的血清學(xué)診斷方法。我國古代醫(yī)籍中對本病雖有描述，但直到1905年Boone于重慶對本病作正式報道。3本病廣流行于世界各國，危害嚴(yán)重。我國目前在人、畜間仍有發(fā)生，給畜牧業(yè)和人類健康帶來嚴(yán)重危害。我國東北和西北流行嚴(yán)重，主要是羊型、牛型和人型，廣東、廣西主要為豬型，內(nèi)地多為牛、羊型.城郊多為奶牛感染。對鄭州部分奶牛作本病調(diào)查，檢出陽性病牛多頭，病人2例，均有典型癥狀。近年有下降趨勢。許多發(fā)達(dá)國家已無本病。4一、病原1.分類本病病原為布氏桿菌屬，本菌主要有A、M抗原，制備單價A、M抗原可鑒別菌種。下分6個種，種下有生物型：馬爾他布氏菌

英國，3個生物型主要是山羊、綿羊，其它動物次之(羊布氏菌)。有M、A抗原，兩者之比為1∶20牛流產(chǎn)布氏菌丹麥，9個生物型，主要是牛，其它動物次之(牛布氏菌)。以A抗原為主，A與M之比為20∶15豬布氏菌

美國，5個生物型，主要是豬，其它次之。A與M之比為2:1綿羊布氏菌

新西蘭，1個生物型，主要是綿羊，其它動物無。沙漠森林(沙林)鼠布氏菌

美國，1個生物型，主要是鼠犬布氏菌美國，1個生物型，主要是犬上述種和生物型的劃分只是以宿主及致病性不同為依據(jù)，其他方面如形態(tài)、培養(yǎng)特性方面則無顯著差異。人幾乎對所有種均易感。6本菌DNA中的G+C含量為55-58%，單鏈DNA分子與同源DNA單鏈分子雜交率為100%，與異源單鏈DNA分子雜交率為80%以上(布魯氏菌屬內(nèi)的細(xì)菌)。用核酸限制性內(nèi)切酶消化布魯氏菌DNA，牛種、羊種、犬種菌的電泳圖譜較一致，但與綿羊附睪菌種有一定差別。通過對微孔蛋白基因（Omp2）的消化長度多肽性分析表明，6個菌種布氏菌的圖譜差異可作為鑒別指標(biāo)之一。7菌株間毒力差異布魯氏菌不產(chǎn)生外毒素，但有毒性較強(qiáng)的內(nèi)毒素。不同菌株間毒力差異較大羊布魯氏菌毒力最強(qiáng)豬布魯氏菌次之牛布魯氏菌較弱。各型布魯氏菌雖有其主要的宿主動物，但普遍存在宿主轉(zhuǎn)移現(xiàn)象。82.形態(tài)特征0.5×1-2μm小型球桿狀細(xì)菌，有莢膜，無芽孢，偶爾可見兩極著色，在病料中單個或成叢存在，G-

93.體內(nèi)分布特點存在于流產(chǎn)胎兒、胎衣、乳房及淋巴系統(tǒng)中，并隨胎兒、胎衣、乳汁、尿液等排出。只是在發(fā)病初期和剛流產(chǎn)后才出現(xiàn)在血液中引起菌血癥，平時則局限在生殖器官附近的淋巴結(jié)中及肝、脾、骨髓等組織器官中。布氏菌是典型的胞內(nèi)寄生菌，可在巨噬細(xì)胞(Mφ)及上皮細(xì)胞內(nèi)生存、繁殖，從而逃避宿主免疫系統(tǒng)及其藥物的作用。104.培養(yǎng)布魯氏菌為需氧菌，對營養(yǎng)要求較高，生長最佳溫度為37℃，pH值為6.6-7.4

，初代分離培養(yǎng)時，需在含血清或馬鈴薯浸液等培養(yǎng)基中才能較好發(fā)育，生長緩慢，7-14d或更長時間長出肉眼可見的圓形菌落；多次繼代培養(yǎng)后，24-72h即可長出菌落。在血液瓊脂上形成圓形、灰白色、隆起的不溶血小菌落；在馬鈴薯瓊脂斜面上2-3d后長出水溶性微棕色菌苔。115.抵抗力對外界環(huán)境抵抗力不強(qiáng)，對溫?zé)崦舾?，一般消毒藥物均可將其殺滅。但在流產(chǎn)胎兒和組織中可存活數(shù)月（乳、毛、肉等）。胞外菌對鏈、慶大、卡那霉素敏感，對青霉素不敏感。12三、流行病學(xué)1.易感動物幾乎所有的動物都易感，最易發(fā)病的是羊、牛，豬、鹿及人。試驗動物中豚鼠，小鼠和鴿最易感，家兔次之。人對各型菌的易感性依次為羊型、豬型、牛型。女性比男性易感，青壯年比幼、老齡易感。132.傳染源患病及帶菌動物，特別是受感染孕畜，其流產(chǎn)及分娩時排泄大量病原造成污染，傳播本病。對人來講，羊是最危險的傳染源，牛是主要傳染源，豬是散發(fā)性布病傳染源。在美國豬是主要傳染源,我國則為羊、牛、豬。布氏桿菌病可由直接接觸受染動物的分泌物和排泄物，飲用未經(jīng)消毒的牛奶、羊奶或食入含有活的布氏桿菌的奶制品（如黃油和奶酪）而引起。罕有人與人間傳播者。本病以農(nóng)村較多，是肉制品加工者、獸醫(yī)、農(nóng)民和牧民的職業(yè)病。143.傳播途徑和方式

多途徑、多方式傳播，可經(jīng)消化道(最常見)、呼吸道、皮膚、粘膜感染、交配。人有80-90﹪為皮膚感染。吸血昆蟲（蜱的叮咬，在蜱體內(nèi)存活時間較長）也是重要的傳播媒介。呼吸道感染者多為皮毛工人及實驗室人員。15人感染布病的傳染途徑牧民接羔為主要傳染途徑，獸醫(yī)為病畜接生也極易感染。剝牛羊皮、剪打羊毛、擠乳、切病畜肉、屠宰病畜、兒童玩羊等均可受染，病菌從接觸處的破損皮膚進(jìn)入人體。實驗室工作人員?？捎善つw、黏膜感染細(xì)菌。進(jìn)食染菌的生乳、乳制品和未煮沸病畜肉類時，病菌可自消化道進(jìn)入體內(nèi)。病菌也可通過呼吸道黏膜、眼結(jié)膜和性器官黏膜而發(fā)生感染。164.流行特點在動物中本病有一定的季節(jié)性，主要發(fā)生于產(chǎn)仔季節(jié)。人則表現(xiàn)為職業(yè)性。新疫區(qū)及初次懷孕感染者表現(xiàn)為流產(chǎn)，老疫區(qū)及流產(chǎn)后再次懷孕時表現(xiàn)胎衣不下17傳染源及傳播途徑18三、發(fā)病機(jī)理侵入——淋巴結(jié)——被吞噬——胞內(nèi)繁殖——原發(fā)病灶——再次進(jìn)入血液——菌血癥——臨診癥狀，同時又被吞噬——再次菌血癥——散布至各組織器官——敗血癥或毒血癥；同時隨糞、尿排出。少數(shù)動物可清除病原體不引起病變，細(xì)菌常在48h內(nèi)死亡，而大多數(shù)則通常終生帶菌，生存于單核吞噬系統(tǒng)及乳房。進(jìn)入絨毛膜上皮增殖，產(chǎn)生胎盤炎，并使絨毛漸進(jìn)性壞死，產(chǎn)生纖維素性膿性分泌物，胎兒胎盤與母體胎盤松離，發(fā)生流產(chǎn)。在絨毛膜與子宮黏膜間擴(kuò)散，致子宮內(nèi)膜炎。進(jìn)入胎衣、胎兒引起病變。流產(chǎn)胎兒消化道及肺可分離出布菌，其他組織通常則無菌。主要是細(xì)菌本身，而無毒素19抵抗力低而早期大量感染時，則流產(chǎn)發(fā)生于妊娠早期，反之，常見晚期流產(chǎn)甚至正常分娩。蛋白外衣保護(hù)它在胞內(nèi)生存并傳染全身，可逃避免疫系統(tǒng)而長期生存。赤蘚醇（erythritol）是布菌的有力生長刺激物，雄性生殖器也含有赤蘚醇，這就解釋了睪丸內(nèi)傳染局限化。布魯氏菌利用赤蘚醇優(yōu)先于利用葡萄糖，說明雄性及妊娠母畜生殖系統(tǒng)中赤蘚醇的存在，使細(xì)菌得到大量繁殖，在流產(chǎn)后的子宮內(nèi)，布魯氏菌存在時間不長，數(shù)日后消失，這可以解釋為赤蘚醇只有在妊娠子宮中才大量存在。20四、癥狀潛伏期短者2周，長者半年以上。除人外，本病為慢性或隱性感染居多，因此沒有特征癥狀，雖然流產(chǎn)、關(guān)節(jié)炎、不孕癥等均為可見癥狀，但與其它因素引起的這類癥狀無明顯不同。有意義的是流產(chǎn)多發(fā)生懷孕后期。21四、癥狀1.流產(chǎn)牛、豬、羊最容易看到的癥狀是流產(chǎn)，但既無特異性，也非必然性。主要表現(xiàn)神郁、食減、起臥不安，外生殖道及乳房發(fā)炎，表現(xiàn)腫脹、潮紅、粘膜上有粟粒狀結(jié)節(jié)，并排出淡黃、灰白、灰褐色、粘膿性污濁分泌物，2-3天后產(chǎn)出死胎或弱胎。流產(chǎn)后排出暗紅、灰白色粘液，腥臭。牛多發(fā)生在孕后6-8個月，羊多在3-4個月，豬多在1-3個月。22【布病】母牛流產(chǎn)，產(chǎn)出發(fā)育不完全的胎兒，全身腫脹，有出血斑23化膿性子宮內(nèi)膜炎，子宮出現(xiàn)粟粒性病變(在黏膜深層)24252.胎衣滯留、子宮內(nèi)膜炎流產(chǎn)過或慢性感染的動物往往發(fā)生胎衣滯留，多見于羊和牛，特別是山羊，而豬很少發(fā)生胎衣滯留。因胎衣滯留而易引起子宮內(nèi)膜炎，牛還可發(fā)生子宮蓄膿，很難治愈，即或治愈，也多失去繁殖能力。3.乳房炎主要見于牛和羊，輕者僅表現(xiàn)產(chǎn)奶數(shù)量及質(zhì)量下降，嚴(yán)重者表現(xiàn)乳房腫、硬，產(chǎn)奶停止。后者尤甚。26胎衣滯留,子宮內(nèi)膜炎↘↓274.睪丸炎除馬外，其他雄性動物均可發(fā)生2829北美馴鹿5.關(guān)節(jié)炎牛羊多見，病畜關(guān)節(jié)腫脹疼痛，特別是后肢。30膝、腕等關(guān)節(jié)炎、滑膜囊炎，偶見鞘膜炎316.人類癥狀本病是《傳染病防制法》規(guī)定的乙類病，已波及160多個國家和地區(qū)。病畜是主要傳染源，經(jīng)消化道或皮膚和黏膜傷口傳染。臨診表現(xiàn)復(fù)雜，有急性、亞急性和慢性之分。32急性和亞急性者有菌血癥，體溫呈波浪熱或長期低熱、寒戰(zhàn)、盜汗、全身不適；關(guān)節(jié)炎、神經(jīng)痛；肝、脾、淋巴結(jié)腫大。慢性則睪丸炎、附睪炎、卵巢炎、輸卵管炎及子宮內(nèi)膜炎等，孕婦可能流產(chǎn)。慢性者通常無菌血癥，但可持續(xù)多年。有些短期急性發(fā)作后可康復(fù)，有的則反復(fù)發(fā)作；33皮膚感染傷口感染全身感染34五、病理變化主要是胎兒胎衣和母體子宮的變化，各種動物基本相同。1.胎兒病理變化皮下、粘膜下漿膜下膠樣浸潤，漿膜上有纖維蛋白，胸腔、腹腔也有纖維蛋白，并有淡或暗紅色積液，胃中有微黃或白色粘液和絮狀物；消化道、膀胱粘膜及其它組織有不同程度出血點；肝、脾、淋巴結(jié)腫大并有壞死灶。胎死時間較長，則可見干尸胎即木乃伊。35五、病理變化——1.胎兒病理變化皮下、粘膜下漿膜下膠樣浸潤，漿膜上有纖維蛋白，胸腔、腹腔也有纖維蛋白，并有淡或暗紅色積液，胃中有微黃或白色粘液和絮狀物；消化道、膀胱粘膜及其它組織有不同程度出血點；肝、脾、淋巴結(jié)腫大并有壞死灶。胎死時間較長，則可見干尸胎即木乃伊。36五、病理變化——2.胎衣有黃色膠凍樣物，被覆纖維蛋白或膿汁，有時水腫、變厚、并有出血點。37五、病理變化——3.母體子宮絨毛膜充血、腫大、覆有黃綠色滲出物，腥臭難聞；粘膜發(fā)炎、腫脹、覆有膿汁，子宮增厚如皮革狀，輸卵管水腫。母豬少見上述子宮變化，主要表現(xiàn)粘膜表面有許多小結(jié)節(jié)，內(nèi)含干酪樣物或膿汁。人的病變特點是全身各組織器官均可產(chǎn)生增生性炎癥。383940牛胎衣停滯，分娩后胎衣未排出(母牛分娩后經(jīng)過8~12小時仍排不出胎衣。正常情況下，母牛在分娩后3~5小時即可排出胎衣。)4142六、診斷1.流行病學(xué)與臨床診斷2.細(xì)菌學(xué)診斷涂片鏡檢細(xì)菌的分離鑒定(危險)動物接種3.血清學(xué)診斷4.鑒別診斷偽狂犬病、乙型腦炎、鉤端螺旋體病、衣原體病、沙門氏菌病等。43診斷重點應(yīng)放在微生物學(xué)與免疫學(xué)診斷上采樣：最好采集整個胎兒，或單取其胃（腸），要扎緊。母畜胎衣、子宮分泌物、乳汁，局部膿腫液。44動物試驗

最易感動物為豚鼠，接種兩只豚鼠，腹腔或皮下接種10-20天后，心臟采血作血清凝集試驗，如滴度在1:5以上，可判陽性，陰性豚鼠繼續(xù)培養(yǎng)，4周后采血做血清凝集試驗，然后撲殺，無細(xì)菌分離出，只要有一只豚鼠的滴度在1:5以上，可診斷為布魯氏菌病。45血清學(xué)試驗方法很多，各有利弊，我國規(guī)定用試管凝集，平板凝集和補(bǔ)反試驗無疫牛群用乳環(huán)狀試驗羊群則多作變態(tài)反應(yīng)。46⑴血清凝集試驗操作簡便、應(yīng)用廣泛。①試管凝集試驗我國生產(chǎn)的布魯氏菌凝集抗原，是按聯(lián)合國世界衛(wèi)生組織和糧農(nóng)組織布魯氏菌病專家委員會規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)標(biāo)定的，可用凝集價來表示被檢血清所含的凝集素單位。47最近幾年對城市奶牛和進(jìn)出口牛的布魯氏菌檢疫則嚴(yán)格按照國際獸疫局（1982）規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行，即未接種過布魯氏菌苗的牛，血清凝集價必須少于30IU/ml才認(rèn)為陰性，3-

6月齡時接種過布魯氏菌苗的牛，凝集價必須少于80IU/ml方認(rèn)為陰性。48對未出現(xiàn)過布魯氏菌病的場，凝集出現(xiàn)陽性，則隔3～4周重檢，如血清凝集（素）價未上升，則宣布該場為布魯氏菌病檢驗為“－”。如重檢時血清凝集價上升，除隔離、消毒外，仍作分離培養(yǎng)，有待于進(jìn)一步確診。過去發(fā)生過布魯氏菌病的場，作凝集試驗，如1:100，則定為“+”，如1:50++，3～4周檢查出陽性，則予以淘汰。49②平板凝集試驗在平板凝集試驗中，抗原0.03ml。0.08ml血清量的反應(yīng)相當(dāng)于試管法中的1:25血清稀釋液的反應(yīng)，0.04ml相當(dāng)于1:50，0.02ml相當(dāng)于1:100，0.01ml相當(dāng)于1:200。在0.02ml量中的凝集反應(yīng)判為陽性，在0.04ml中出現(xiàn)反應(yīng)的判為可疑。50⑵全乳環(huán)狀試驗加1滴經(jīng)蘇木紫（或四氮唑紅色）染色的環(huán)乳抗原，振蕩放37℃水浴箱1小時，觀察，如出現(xiàn)紅色（四氮唑）藍(lán)色（蘇木紫）則為“+”。51影響因素：①奶酸度，酸度高，不反應(yīng)。②觀察遲，假陽性出現(xiàn)。③抗原太濃，敏感度降低，太淡，敏感度又偏高。52ELISA(EnzymeLinkedImmunosorbentAssay)

MilkRingTest(antibodydetectioninmilk)

53⑶補(bǔ)體結(jié)合試驗補(bǔ)體結(jié)合試驗，操作復(fù)雜。牛感染布魯氏菌，通常在10-20天出現(xiàn)補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)。①接種19號菌苗的牛，凝集反應(yīng)消失較晚（注射后9個月尚未完全消失），補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)消失較早（注射后3個月變?yōu)殛幮曰蚩梢桑?。②自然感染的牛與此不同，凝集反應(yīng)與補(bǔ)體結(jié)合反應(yīng)經(jīng)常相伴出現(xiàn)。54⑷變態(tài)反應(yīng)羊、豬：布魯氏菌水解素，經(jīng)被檢動物尾根皮內(nèi)注射，或肘關(guān)節(jié)皮膚較薄部位注射，24、48小時觀察，有無發(fā)熱，腫脹而判斷。部分病牛康復(fù)后，相當(dāng)長時期內(nèi)仍保持陽性變態(tài)反應(yīng)，因此根據(jù)變態(tài)反應(yīng)實行防制措施時，將有一部分已康復(fù)的牛被當(dāng)作病牛處理。55免、檢、殺!七、防制1.檢疫淘汰凝集試驗每年進(jìn)行1-2次檢疫，淘汰陽性動物，使之凈化。在未感染畜群中，控制本病傳入的最好辦法是自繁自養(yǎng)，必須引進(jìn)種畜或補(bǔ)充畜群時，要嚴(yán)格執(zhí)行檢疫，即將牲畜隔離飼養(yǎng)兩個月，同時進(jìn)行布魯氏菌病的檢查，全群兩次免疫生物學(xué)檢查為陰性者，才可以與原有牲畜接觸。清凈的畜群，還應(yīng)定期檢疫（至少每年一次），一經(jīng)發(fā)現(xiàn)，即應(yīng)淘汰，也可將查出的陽性畜隔離飼養(yǎng)，繼續(xù)利用，陰性者作為假定健康畜繼續(xù)觀察檢疫，經(jīng)1年以上無陽性（初期1個月檢查1次，2-3次后，可6個月檢查1次）出現(xiàn)者，且已正常分娩，即可認(rèn)為是無病牛群。562.培育健康畜群在檢疫的基礎(chǔ)上，利用人工哺乳方法建立健康畜群，尤其適合于奶牛，培養(yǎng)健康畜群最好從幼畜著手，由犢牛培育健康牛群，可以與培養(yǎng)無結(jié)核病牛群結(jié)合進(jìn)行，即病牛所產(chǎn)犢牛立刻隔離，用母牛初乳人工飼喂5-10d，此后喂以健康牛乳或巴氏滅菌乳，在第5、9個月各進(jìn)行l(wèi)次免疫生物學(xué)檢查，全部陰性時即可認(rèn)為健康犢牛。培養(yǎng)健康羔羊群則在羔羊斷乳后隔離飼養(yǎng)，一個月內(nèi)做2次免疫生物學(xué)試驗，如有陽性除淘汰外再繼續(xù)檢疫一個月，至全群陰性，則可認(rèn)為健康羔羊群。仔豬在斷乳后即隔離飼養(yǎng)，第2、4月齡各檢驗一次，如全為陰性即可視為健康仔豬。573.疫苗接種布魯氏菌病的免疫是以細(xì)胞免疫為主，其保護(hù)宿主抵抗流產(chǎn)布魯氏菌的細(xì)胞免疫作用機(jī)理是：特異的T細(xì)胞與流產(chǎn)布魯氏菌抗原反應(yīng)，產(chǎn)生淋巴因子，提高了巨噬細(xì)胞活性，從而消除了細(xì)胞內(nèi)的細(xì)菌。國際上多用活苗，如牛19號苗、羊菌RevI苗，也有使用滅活苗的，如牛流產(chǎn)45/20苗和羊菌53H38苗等。我國主要使用豬2號弱毒活苗和羊5號弱毒活苗。豬2號弱毒活苗（簡稱S2苗）是我國選育的一種優(yōu)良菌苗。對山羊、綿羊、豬和牛都有較好的免疫效力。毒力穩(wěn)定，使用安全，免疫力好，飲水、口服和氣霧免疫已經(jīng)收到良好效果?？勺⑸洹嬎驓忪F，間隔一個月免疫2次，可保護(hù)兩年以上。羊5號弱毒活苗（簡稱M5苗）也是我國選育的，可用于綿羊、山羊、牛和鹿的免疫。羊5號苗氣霧免疫已獲成功。58流產(chǎn)19號苗效果良好，但免疫譜窄，對綿羊免疫力差，對山羊和豬無免疫力，還引起流產(chǎn)，我國已停止生產(chǎn)。疫苗本應(yīng)只給免疫生物學(xué)檢查陰性牲畜接種，但牧區(qū)受實際條件限制，通過實驗，在羊群中不檢驗即進(jìn)行布魯氏菌病的免疫接種，已收到較好的效果。應(yīng)當(dāng)指出的是，各種弱毒活苗對人仍有一定毒力，因此有關(guān)人員應(yīng)做好自身防護(hù)。對狗布魯氏菌感染尚未研究出有效疫苗。人的預(yù)防要注意職業(yè)性感染，凡在養(yǎng)殖、屠宰、加工廠工作者及獸醫(yī)、實驗室人員須嚴(yán)守防護(hù)制度，尤其產(chǎn)仔季節(jié)更要注意；乳肉食品須滅菌后食用；必要時可皮上劃痕接種104－M苗，每年一次。接種前應(yīng)進(jìn)行變態(tài)反