醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)課件：遺傳病的診斷

遺傳病的診斷

遺傳病的診斷第一節(jié)癥狀和體征分析OMIM(OnlineMendelianInheritanceinMan)/omim/OMIM號臨床特征、診斷、鑒別診斷、治療與預(yù)防致病基因及其染色體定位、連鎖關(guān)系、結(jié)構(gòu)和功能、動物模型等資料，并附有參考文獻(xiàn)。/entry/310200?search=310200&highlight=310200#310200MUSCULARDYSTROPHY,DUCHENNETYPE;DMD第二節(jié)系譜分析第三節(jié)染色體檢查顯帶技術(shù)、熒光原位雜交染色體檢查的指征第四節(jié)生化檢測分子病、先天性代謝缺陷第五節(jié)基因診斷(genediagnosis)

利用分子生物學(xué)技術(shù)，檢測體內(nèi)DNA或RNA在結(jié)構(gòu)或表達(dá)水平上的變化，從而對疾病做出診斷。一、基因診斷的策略（一）DNA水平的診斷（1）直接診斷（2）間接診斷連鎖分析遺傳標(biāo)記STR、SNP

例肝豆?fàn)詈俗冃訟R示圖16-2從D13S314、D13S313位點結(jié)果推斷胎兒正常（二）基因產(chǎn)物水平的診斷

mRNA或蛋白質(zhì)二、基因診斷的技術(shù)（一）核酸分子雜交點雜交DNA印記雜交示圖16-3①限制酶酶切DNA②電泳分離③堿變性④Southern印跡轉(zhuǎn)移⑤與標(biāo)記探針雜交⑥放射自顯影（二）聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）PCR、實時熒光定量PCR（三）DNA芯片技術(shù)大規(guī)模集成的固相雜交多種探針固定于芯片（四）熒光原位雜交(FISH)（五）比較基因組雜交患者和正常人基因組DNA探針兩重?zé)晒鈴?qiáng)度比值（六）多重探針連接擴(kuò)增（MLPA）多重探針雜交、連接及PCR擴(kuò)增（七）單鏈構(gòu)象多態(tài)性（SSCP）純合型正常2條帶與純合型突變2條帶位置不同，雜合型突變有4條帶。圖變性高效液相色譜（DHPLC）雜合型突變的擴(kuò)增產(chǎn)物變性再復(fù)性，形成2種異源雜合雙鏈和2種同源純合雙鏈，2種異源雜合雙鏈（部分錯誤配對）較2種同源純合雙鏈（全部正確配對）更容易變性，先從色譜柱上被洗脫，故呈現(xiàn)早些4個單鏈峰和晚些4個單鏈峰。純合型正常2個單鏈峰與純合型突變2個單鏈峰不同。高分辨率溶解曲線HRM雜合型突變的擴(kuò)增產(chǎn)物變性再復(fù)性，形成2種異源雜合雙鏈和2種同源純合雙鏈，4種分子復(fù)性速度不同。（八）DNA測序第一代測序雙脫氧測序法第二代測序高通量基因組測序第三代測序單分子實時測序（九）甲基化檢測甲基化特異性PCR(MSP)、亞硫酸氫鈉處理后測序（BSP）（十）反轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)和Northern印跡雜交三、基因診斷的實例（一）杜氏肌營養(yǎng)不良(DMD)XRDMD基因79個外顯子60%大片段缺失或重復(fù)，其余小片段結(jié)構(gòu)異?；螯c突變?nèi)笔停憾嘀豍CR圖然后Gap-PCRMLPA針對每個外顯子設(shè)計探針，同時進(jìn)行檢測。其余型：PCR擴(kuò)增外顯子后測序RT-PCR單體型連鎖分析圖（二）鐮狀細(xì)胞貧血GAG→GTG示圖16-8PCR-RFLP，即先PCR再MstII酶切擴(kuò)增片段。也可不經(jīng)PCR直接MstII酶切全基因組，用βA、βS探針，行Southern印記雜交。PCR-ASO示圖16-9（三）β654地中海貧血突變在內(nèi)含子中增加剪接位點從而增加一個外顯子RT-PCR（四）血友病AXRFVⅢ基因主要點突變或小片段堿基的缺失和插入，基因突變位點多。PCR-RFLP連鎖分析例BclI示圖16-11產(chǎn)前診斷女胎是攜帶者（五）脆性X綜合征FMR1基因（CGG）nn正常5-50，前突變59-200（未甲基化），全突變200-1000（甲基化）示圖16-12雙酶切（EcoRI和甲基化敏感酶EagI）Southern印跡雜交四、遺傳病診斷的時機(jī)臨床診斷早期診斷（癥狀前診斷、產(chǎn)前診斷、著床前診斷）五