CSTM-植物油 苯并（a）芘測(cè)定 超臨界流體色譜在線(xiàn)凈化-反相高效液相色譜法編制說(shuō)明

《植物油苯并（a）芘測(cè)定超臨界流體色譜在線(xiàn)凈化-反相高效液相色譜法》標(biāo)準(zhǔn)編制說(shuō)明書(shū)1工作簡(jiǎn)況1.1任務(wù)來(lái)源根據(jù)CSTM標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)2021年7月30日材試標(biāo)字[2021]180號(hào)文件關(guān)于CSTM標(biāo)準(zhǔn)簽發(fā)的立項(xiàng)通告，批準(zhǔn)CSTM標(biāo)準(zhǔn)《植物油中苯并(a)芘快速自動(dòng)化測(cè)定法-超臨界流體色譜在線(xiàn)凈化法》立項(xiàng)，立項(xiàng)編號(hào)為：CSTMLX990000754-2021，英文版立項(xiàng)編號(hào)為：CSTMLX990000754-2021E，標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)目由CSTM/FC99綜合標(biāo)準(zhǔn)領(lǐng)域委員會(huì)歸口管理，由島津企業(yè)管理（中國(guó)）有限公司負(fù)責(zé)牽頭起草。1.2主編單位協(xié)作單位標(biāo)準(zhǔn)計(jì)劃中的負(fù)責(zé)起草單位為島津企業(yè)管理（中國(guó)）有限公司，由島津企業(yè)管理（中國(guó)）有限公司具體承擔(dān)標(biāo)準(zhǔn)起草工作。主編單位：島津企業(yè)管理（中國(guó)）有限公司、國(guó)家糧食和物資儲(chǔ)備局科學(xué)研究院、鋼研納克檢測(cè)技術(shù)股份有限公司、中糧集團(tuán)。1.3主要工作過(guò)程2021年6月8日由島津企業(yè)管理（中國(guó)）有限公司組織糧食和物資儲(chǔ)備局科學(xué)研究院、鋼研納克檢測(cè)技術(shù)股份有限公司等單位成員成立了標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)工作組暨第一次工作組會(huì)議，開(kāi)始進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)草稿的編寫(xiě)工作，確定了標(biāo)準(zhǔn)制定方案和時(shí)間安排，并進(jìn)行了工作劃分，島津企業(yè)管理（中國(guó)）有限公司、國(guó)家糧食和物資儲(chǔ)備局科學(xué)研究院主要負(fù)責(zé)國(guó)內(nèi)外苯并(a)芘測(cè)試方法及相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)制修訂情況的調(diào)研工作，完成植物油中苯并(a)芘快速自動(dòng)化測(cè)定法-超臨界流體色譜在線(xiàn)凈化法標(biāo)準(zhǔn)草案起草工作，鋼研納克檢測(cè)技術(shù)股份有限公司負(fù)責(zé)制定試驗(yàn)方案、準(zhǔn)備試驗(yàn)樣品。2021年7月13日標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)工作組在鋼研納克檢測(cè)技術(shù)股份有限公司召開(kāi)了第二次工作組會(huì)議，首先對(duì)標(biāo)準(zhǔn)文本草案進(jìn)行了討論和修改，初步確立了標(biāo)準(zhǔn)草案，然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)草案對(duì)試驗(yàn)方案進(jìn)行了討論和完善，決定開(kāi)始進(jìn)行試驗(yàn)驗(yàn)證工作。2021年7月13日-2021年11月1日由島津企業(yè)管理（中國(guó)）有限公司、國(guó)家糧食和物資儲(chǔ)備局科學(xué)研究院、鋼研納克檢測(cè)技術(shù)股份有限公司等單位進(jìn)行了試驗(yàn)驗(yàn)證工作。工作組對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)了匯總統(tǒng)計(jì)，初步確定了標(biāo)準(zhǔn)的各項(xiàng)技術(shù)參數(shù)。2021年11月初標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)工作組再次對(duì)標(biāo)準(zhǔn)文本進(jìn)行了修改，并開(kāi)始編寫(xiě)標(biāo)準(zhǔn)編制說(shuō)明和試驗(yàn)驗(yàn)證報(bào)告。…………1.4本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：…………2.標(biāo)準(zhǔn)化對(duì)象簡(jiǎn)要情況及標(biāo)準(zhǔn)制修訂原則2.1標(biāo)準(zhǔn)化對(duì)象簡(jiǎn)要情況3，4-苯并芘（即苯并(a)芘）被世界衛(wèi)生組織列為一類(lèi)致癌物，與人體DNA共價(jià)結(jié)合后可引起復(fù)制錯(cuò)誤從而極易引發(fā)癌變。一般認(rèn)為在油脂的高溫工藝過(guò)程中由多環(huán)芳烴通過(guò)組合、重排產(chǎn)生。此外，在儲(chǔ)存、運(yùn)輸或包裝的過(guò)程中也易受外源污染。我國(guó)GB2762-2017中針對(duì)部分谷物及其制品、熏燒烤肉類(lèi)、熏（烤）水產(chǎn)品、油脂及其制品中污染物質(zhì)苯并[a]芘的限量進(jìn)行了規(guī)定，其中針對(duì)油脂及其制品為10ug/kg，歐盟、韓國(guó)、西班牙等規(guī)定油脂中苯并(a)芘含量不得超2ug/kg，國(guó)際食品法典委員會(huì)（CAC）也規(guī)定了食用油中苯并[a]芘最高限量為5ug/kg。因此準(zhǔn)確測(cè)試食品中苯并(a)芘的含量，對(duì)食品安全的管控顯得尤為重要。2.2標(biāo)準(zhǔn)制定的必要性分析目前食用油中苯并（a）芘檢測(cè)手段主要有氣相色譜-質(zhì)譜法、高效液相色譜-熒光法和酶聯(lián)免疫吸附法。當(dāng)采用色譜法進(jìn)行分析時(shí)，上機(jī)之前，需要對(duì)食用油樣品中苯并（a）芘進(jìn)行提取，對(duì)樣品進(jìn)行凈化。前處理手段主要包括液液萃取、索氏提取和固相萃取等方法。其中，固相萃取結(jié)合液相色譜熒光檢測(cè)法對(duì)干擾基質(zhì)凈化能力好，檢測(cè)靈敏度高，作為國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)方法ISO15302-2017和國(guó)標(biāo)方法GB5009.27-2016被廣泛使用。但是現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)中的固相萃取的前處理手段，操作步驟仍然繁瑣費(fèi)時(shí)，對(duì)實(shí)驗(yàn)人員技術(shù)水平要求較高，無(wú)法滿(mǎn)足快速準(zhǔn)確檢測(cè)的需求。而且仍然需要使用大量有毒有害化學(xué)試劑，不僅成本高，而且不環(huán)保。本項(xiàng)目通過(guò)采用先進(jìn)環(huán)保的超臨界流體色譜分離技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了植物油樣品的在線(xiàn)凈化和苯并（a）芘的快速自動(dòng)化檢測(cè)，而且降低了樣品前處理過(guò)程中有機(jī)溶劑的使用成本，為植物油當(dāng)中苯并（a）芘的快速監(jiān)測(cè)和植物油的質(zhì)量管理提供了有力的工具。此外，該方法準(zhǔn)確可靠，具有普遍適用性，易于推廣使用。2.3標(biāo)準(zhǔn)制修訂的原則標(biāo)準(zhǔn)的編寫(xiě)格式按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫(xiě)規(guī)則》、GB/T20001.4標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)規(guī)則第4部分：試驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)的統(tǒng)一規(guī)定和要求進(jìn)行編寫(xiě)。本標(biāo)準(zhǔn)采使用超臨界流體色譜（SFC）-反相液相色譜（RPLC）二維系統(tǒng)對(duì)苯并（a）芘樣品溶液進(jìn)行在線(xiàn)超臨界流體色譜分離凈化后，用中心切割的方式將苯并（a）芘導(dǎo)入到第二維的反相高效液相色譜系統(tǒng)進(jìn)行分離，熒光檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。3.采用國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)和國(guó)外先進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)的情況，我國(guó)標(biāo)準(zhǔn)同被采用標(biāo)準(zhǔn)、和/或與國(guó)際、國(guó)外同類(lèi)標(biāo)準(zhǔn)的主要差異及其原因，或與測(cè)試的國(guó)外樣品的有關(guān)數(shù)據(jù)對(duì)比情況現(xiàn)有的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)為ISO15302：2017動(dòng)植物油脂苯并（a）芘的測(cè)定反相高效液相色譜法（Animalandvegetablefatsandoils-Determinationofbenzo[a]pyrene-Revers-phasehighperformanceliquidchromatographymethod)。國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB/T22509-2008《動(dòng)植物油脂苯并（a）芘的測(cè)定反相高效液相色譜法》修改采用了ISO15302。強(qiáng)制性國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB5009.27-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中苯并（a）芘的測(cè)定》替代了GB/T22509-2008。本標(biāo)準(zhǔn)在制定過(guò)程中參考了GB5009.27-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中苯并（a）芘的測(cè)定》中試劑材料、色譜分析條件，ISO15302動(dòng)植物油脂苯并（a）芘的測(cè)定反相高效液相色譜法（Animalandvegetablefatsandoils-Determinationofbenzo[a]pyrene-Revers-phasehighperformanceliquidchromatographymethod)中色譜條件、及精密度參數(shù)的規(guī)定。本標(biāo)準(zhǔn)與ISO15302：2017、GB5009.27-2016比對(duì)情況見(jiàn)表1.標(biāo)準(zhǔn)相比本標(biāo)準(zhǔn)采用了先進(jìn)環(huán)保的超臨界流體色譜分離技術(shù)，取代了采用氧化鋁住或中性分子印跡柱對(duì)植物油中苯并（a）芘進(jìn)行分離提取的前處理過(guò)程，有效減少了有機(jī)溶劑的使用，降低了標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)操作人員的技術(shù)要求，提高了方法標(biāo)準(zhǔn)的可操作性，給出了詳細(xì)的精密度數(shù)據(jù)，能夠有效保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度、可靠性和可重復(fù)性。表1標(biāo)準(zhǔn)對(duì)比情況匯總表序號(hào)項(xiàng)目本標(biāo)準(zhǔn)GB5009.27-2016ISO15302：20171整體結(jié)構(gòu)分為10章范圍、規(guī)范性引用文件、術(shù)語(yǔ)和定義、原理、試劑和材料、儀器和設(shè)備、試驗(yàn)步驟、試驗(yàn)數(shù)據(jù)處理、精密度、質(zhì)量控制、其他、附錄A（資料性）、附錄B（資料性）。分為8章范圍、原理、試劑和材料、儀器和設(shè)備、分析步驟、分析結(jié)果的表述、精密度、其他、附錄A。分為12章范圍、規(guī)范性引用文件、術(shù)語(yǔ)和定義、原理、試劑、設(shè)備、試樣、試樣處理、試驗(yàn)步驟、試驗(yàn)結(jié)果表述、精密度、試驗(yàn)報(bào)告。2范圍適用于測(cè)定植物油中的苯并(a)芘；測(cè)量范圍：0.5μg/kg-50μg/kg。適用于谷物及其制品（稻谷、糙米、大米、小麥、小麥粉、玉米、玉米面、玉米渣、玉米片）肉及肉制品（熏、燒、烤肉類(lèi)）、水產(chǎn)動(dòng)物及其制品（熏、烤水產(chǎn)品）、油脂及其制品中苯并(a)芘的測(cè)定；未明確給出測(cè)量范圍。適用于采用熒光檢測(cè)器的反相高效液相色譜檢測(cè)食用油脂中的苯并(a)芘。不適用于牛奶或牛奶制品的脂肪中苯并(a)芘的測(cè)定適用范圍：0.1μg/kg-50μg/kg。3術(shù)語(yǔ)和定義給出了“超臨界流體”、“超臨界流體色譜法”的術(shù)語(yǔ)定義無(wú)無(wú)4原理使用超臨界流體色譜（SFC）-反相液相色譜（RPLC）二維色譜系統(tǒng)在線(xiàn)分離凈化樣品，熒光檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。用有機(jī)溶劑提取待測(cè)成分，中性氧化鋁或分子印跡柱凈化，然后用反相液相色譜法分離，熒光檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法定量。用石油醚溶解樣品，并加入內(nèi)標(biāo)物，用過(guò)氧化鋁柱凈化待測(cè)成分，然后用反相液相高效色譜分離，熒光檢測(cè)器檢測(cè)，內(nèi)標(biāo)法定量。5試劑和材料凈化柱無(wú)中性氧化鋁或分子印跡柱凈化過(guò)氧化鋁柱內(nèi)標(biāo)物無(wú)無(wú)Benzo[b]chrysene6試驗(yàn)設(shè)備超臨界流體色譜—反相液相色譜聯(lián)用系統(tǒng)，配有熒光檢測(cè)器液相色譜儀，配有熒光檢測(cè)器液相色譜儀，配有熒光檢測(cè)器7試驗(yàn)步驟試液制備稱(chēng)取1g樣品，用正己烷溶解，定容至10mL，渦旋振蕩，待測(cè)。稱(chēng)取0.4g試樣，加入5mL正己烷溶解，渦旋振蕩，待凈化。稱(chēng)取0.4g試樣，加入2mL石油醚溶解，注入20μl內(nèi)標(biāo)物，待凈化。凈化超臨界流體色譜在線(xiàn)凈化用中性氧化鋁或分子印跡柱凈化，洗脫劑為正己烷，氮?dú)饬飨聺饪s至干，乙腈試劑復(fù)溶，待測(cè)。過(guò)氧化鋁柱凈化洗脫劑為石油醚，氮?dú)饬飨聺饪s至干，用乙腈四氫呋喃混合溶液復(fù)溶，待測(cè)。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)6個(gè)點(diǎn)無(wú)基體匹配，標(biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)過(guò)前處理過(guò)程5個(gè)點(diǎn)無(wú)基體匹配，標(biāo)準(zhǔn)溶液不經(jīng)過(guò)前處理過(guò)程5個(gè)點(diǎn)無(wú)基體匹配，標(biāo)準(zhǔn)溶液有內(nèi)標(biāo)，不經(jīng)過(guò)前處理過(guò)程。8實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)處理結(jié)果保留到小數(shù)點(diǎn)后一位。當(dāng)含量為0μg/kg-10μg/kg時(shí)，結(jié)果保留到小數(shù)點(diǎn)后一位；當(dāng)含量大于10μg/kg時(shí)，結(jié)果保留到整數(shù)。9精密度重復(fù)性給出了詳細(xì)的重復(fù)性數(shù)據(jù)在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)值不得超過(guò)算術(shù)平均值的20%。給出了低（2.12μg/kg）、中（38.02μg/kg）、高（58.30μg/kg）三個(gè)濃度點(diǎn)的重復(fù)性限r(nóng)分別為0.34μg/kg、2.12μg/kg、5.72μg/kg。再現(xiàn)性給出了詳細(xì)的再現(xiàn)性數(shù)據(jù)未給出給出了低（2.12μg/kg）、中（38.02μg/kg）、高（58.30μg/kg）三個(gè)濃度點(diǎn)的重復(fù)性限分別為1.54μg/kg、17.44μg/kg、23.4μg/kg。10質(zhì)量控制采用質(zhì)控樣進(jìn)行質(zhì)量控制未給出未給出11檢出限0.2μg/kg0.2μg/kg未給出12定量限0.5μg/kg0.5μg/kg未給出13試驗(yàn)報(bào)告給出了具體要求未給出詳細(xì)規(guī)定給出了具體要求4.標(biāo)準(zhǔn)主要內(nèi)容4.1標(biāo)準(zhǔn)名稱(chēng)本標(biāo)準(zhǔn)立項(xiàng)名稱(chēng)為植物油中苯并(a)芘快速自動(dòng)化測(cè)定法-超臨界流體色譜在線(xiàn)凈化法》，在編制過(guò)程中標(biāo)準(zhǔn)編寫(xiě)工作組決定采用符合GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)的結(jié)構(gòu)和編寫(xiě)規(guī)則》要求的三段式寫(xiě)法，將標(biāo)準(zhǔn)名稱(chēng)變更為《植物油苯并（a）芘測(cè)定超臨界流體色譜在線(xiàn)凈化-反相高效液相色譜法》（Vegetableoils—Determinationofbenzo(a)pyrene—ReversephaseHighperformanceliquidchromatographymethodwithon-linesupercriticalfluidchromatographycleanup）。4.2適用范圍1）本標(biāo)準(zhǔn)在制定過(guò)程中，采用該標(biāo)準(zhǔn)方法對(duì)市場(chǎng)上流通的20多種主要植物油進(jìn)行了測(cè)試，并對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行了匯總處理分析，驗(yàn)證了本標(biāo)準(zhǔn)適用于植物油中苯并（a）芘的測(cè)定。2）經(jīng)過(guò)前期試驗(yàn)驗(yàn)證采用超臨界流體色譜在線(xiàn)凈化-反相高效液相色譜法測(cè)定植物油中苯并(a)芘含量具有較寬的線(xiàn)性范圍。通過(guò)加標(biāo)回收試驗(yàn)證明了本方法在0.5μg/kg~50μg/kg測(cè)試范圍內(nèi)具有良好的準(zhǔn)確度和可靠性，詳見(jiàn)驗(yàn)證報(bào)告。4.3原理使用高壓切換六通閥將超臨界流體色譜（SFC）與液相色譜（LC）聯(lián)用，配合熒光檢測(cè)器，進(jìn)行植物油樣品的在線(xiàn)凈化和其中苯并（a）芘的檢測(cè)定量。樣品分析主要分以下三步完成。（1）當(dāng)六通閥處于圖1（a）所示位置時(shí)，Diol柱通過(guò)六通閥直接和背壓控制器BPR連接，正己烷稀釋后的植物油樣品通過(guò)自動(dòng)進(jìn)樣器注入，在超臨界二氧化碳流體和夾帶劑甲醇的共同作用下，弱極性的苯并（a）芘被保留在Diol柱上，非極性的脂質(zhì)被優(yōu)先洗脫下來(lái)，通過(guò)BPR流入廢液。(a)(b)(c)圖1SFC-LC植物油中苯并（a）芘檢測(cè)原理示意圖（2）在苯并（a）芘即將從Diol柱中溶出時(shí)，六通閥的位置切換至圖1（b）所示位置。此時(shí)，Diol柱通過(guò)六通閥與C18預(yù)處理小柱串聯(lián)后，進(jìn)一步和BPR進(jìn)行連接。使用甲醇將苯并（a）芘從Diol柱中洗脫下來(lái)，進(jìn)入到C18預(yù)處理小柱中并被保留。在這個(gè)過(guò)程中，系統(tǒng)中的超臨界二氧化碳流體被優(yōu)先洗脫到廢液當(dāng)中。（3）在苯并（a）芘即將從C18預(yù)處理小柱中溶出時(shí)，六通閥切換至圖1（c）所示位置。此時(shí)，C18預(yù)處理小柱和C18分析柱串聯(lián)，在第二維的分析流動(dòng)相的作用下，苯并（a）芘從預(yù)處理小柱進(jìn)入到分析柱中，與雜質(zhì)進(jìn)行分離后，使用熒光檢測(cè)器檢測(cè)。4.4儀器設(shè)備圖2超臨界流體色譜在線(xiàn)凈化-反相高效液相色譜聯(lián)用裝置圖檢測(cè)儀器采用超臨界流體色譜-反相液相色譜二維色譜系統(tǒng)，并配有熒光檢測(cè)器。使用高壓六通閥，可以將市售的超臨界流體色譜儀和液相色譜儀按照?qǐng)D2所示連接成二維色譜系統(tǒng)，用于該標(biāo)準(zhǔn)方法。4.5儀器參考條件（此處關(guān)于色譜條件的選擇和確定應(yīng)詳細(xì)描述，例如：流動(dòng)相配比、切換時(shí)間、流動(dòng)相流速是如何確定的？）本項(xiàng)目在開(kāi)發(fā)階段，針對(duì)色譜分離條件，檢測(cè)條件等進(jìn)行了考察和優(yōu)化。首先，針對(duì)超臨界流體背壓調(diào)節(jié)器（BPR）的參數(shù)設(shè)定，本實(shí)驗(yàn)采用了廠家的推薦條件。熒光檢測(cè)器的激發(fā)波長(zhǎng)和發(fā)射波長(zhǎng)，參考了GB5009.27的檢測(cè)條件。對(duì)色譜柱的類(lèi)型和規(guī)格，流動(dòng)相的條件，閥切換的時(shí)間等分析條件通過(guò)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行了考察和優(yōu)化。該標(biāo)準(zhǔn)同時(shí)使用3支色譜柱，分別進(jìn)行植物油的超臨界流體色譜在線(xiàn)凈化，系統(tǒng)中CO2超臨界流體的去除，以及苯并（a）芘的分離和檢出。其中，在選取SFC凈化柱時(shí)，在Diol柱，Silica柱和NH2柱三種不同填料中進(jìn)行選擇，發(fā)現(xiàn)Diol柱保留更強(qiáng)，由此推斷其凈化能力更好，最終選擇Diol填料柱作為SFC凈化柱。另外，C18預(yù)處理小柱選用了柱長(zhǎng)為5cm的且對(duì)苯并（a）芘保留能力強(qiáng)的C18填料柱。最終的分析柱同樣選用了碳含量高，對(duì)多環(huán)芳烴保留強(qiáng)的C18分析柱進(jìn)行分離。并且為了提高檢測(cè)靈敏度，選用了內(nèi)徑為2.1mm的色譜柱。流動(dòng)相分別為樣品凈化流動(dòng)相和分析流動(dòng)相。第一步中，樣品凈化流動(dòng)相為3mL/min的總流速，其中98%為超臨界CO2流體，2%為甲醇。此條件下，苯并（a）芘在Diol柱上可以實(shí)現(xiàn)足夠的保留（>10min）使得植物油樣品在SFC凈化柱上能夠得到充分的凈化。此時(shí)，系統(tǒng)壓力為23-24MPa，壓力適中，降低了對(duì)系統(tǒng)耐壓性能的要求。第二維的分離流動(dòng)相條件參考國(guó)標(biāo)條件，定為乙腈：水=90：10的混合溶液，可以快速檢出，流速設(shè)為1mL/min，此時(shí)第二維系統(tǒng)壓力為14MPa，壓力適中。分別對(duì)第一步到第二步（圖1（a）→（b））和第二步到第三步（圖1（b）→（c））的切換時(shí)間進(jìn)行了優(yōu)化。首先在第一步中，在苯并（a）芘溶出Diol柱前，分別在9min、9.5min和10min進(jìn)行閥的切換，隨后，考慮到Diol柱和預(yù)處理C18小柱的死體積，將第二步到第三步的切換時(shí)間分別設(shè)定為13min、13.5min和14min。分別在三個(gè)條件下進(jìn)行考察，均能得到苯并（a）芘的檢出。最終選擇中間條件2作為分析閥切換時(shí)間。表1SFC-LC閥切換時(shí)間條件1條件2條件3切換時(shí)間1第一步→第二步9min9.5min10min切換時(shí)間2第二步→第三步13min13.5min14min4.6校準(zhǔn)曲線(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液溶劑、濃度、保存時(shí)間以及配制方法均采用了GB5009.27-2016的方法。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)工作液用異丙醇進(jìn)行稀釋?zhuān)瑵舛炔捎?.05ng/mL、0.2ng/mL、0.5ng/ml、1.0ng/mL、2.0ng/mL、5.0ng/mL六個(gè)系列濃度。0.2ng/mL和1.0ng/mL分別對(duì)應(yīng)歐盟和國(guó)標(biāo)的限量值。曲線(xiàn)濃度最低點(diǎn)是方法的定量限，曲線(xiàn)濃度最高點(diǎn)是衛(wèi)生限量的5倍，最高濃度點(diǎn)是最低點(diǎn)的100倍，可以覆蓋大部分樣品的含量范圍，與GB5009.27-2016給出的適用范圍一致。本方法通過(guò)超臨界流體色譜在線(xiàn)凈化得到了去除基質(zhì)干擾的待測(cè)成分，因此采用外標(biāo)法進(jìn)行定量。在進(jìn)行分析時(shí)，標(biāo)準(zhǔn)溶液與試驗(yàn)樣品均經(jīng)過(guò)了超臨界流體色譜在線(xiàn)凈化和反相色譜分離的步驟，并且加標(biāo)回收試驗(yàn)的結(jié)果證明采用外標(biāo)法可準(zhǔn)確定量（見(jiàn)驗(yàn)證報(bào)告）。4.7檢出限、定量限依據(jù)美國(guó)EPA標(biāo)準(zhǔn)方法確定方法的檢出限，詳見(jiàn)驗(yàn)證報(bào)告，采用行業(yè)公認(rèn)的3倍檢出限作為方法的定量限。4.8精密度由于該標(biāo)準(zhǔn)方法的測(cè)量設(shè)備為創(chuàng)新裝置，暫未在各實(shí)驗(yàn)室普及使用，不能找到8家實(shí)驗(yàn)室組織共同試驗(yàn)，標(biāo)準(zhǔn)編制工作組依據(jù)HJ168《環(huán)境監(jiān)測(cè)分析方法標(biāo)準(zhǔn)制訂技術(shù)導(dǎo)則》制定了共同試驗(yàn)技術(shù)方案，組織島津企業(yè)管理（中國(guó)）有限公司組織糧食和國(guó)家糧食和物資儲(chǔ)備局科學(xué)研究院按不同人員分組，采用不同儀器設(shè)備、環(huán)境條件和不同批次試劑材料開(kāi)展共同試驗(yàn)，最終將試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析得出精密度數(shù)據(jù)，并將該數(shù)據(jù)與ISO15302動(dòng)植物脂肪和油中苯并（a）芘的測(cè)定反相高效液相色譜法（Animalandvegetablefatsandoils-Determinationofbenzo[a]pyrene-Revers-phasehighperformanceliquidchromatographymethod)進(jìn)行比對(duì)，通過(guò)系數(shù)校正得出本方法標(biāo)準(zhǔn)最終的精密度數(shù)據(jù)。主要試驗(yàn)（或驗(yàn)證）結(jié)果的分析、綜述報(bào)告等。詳見(jiàn)驗(yàn)證報(bào)告。6.與有關(guān)的現(xiàn)行的方針、政策、法律、法規(guī)和強(qiáng)制性標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系（1）本標(biāo)準(zhǔn)符合現(xiàn)行方針、政策、法律、法規(guī)的規(guī)定。（2）現(xiàn)行強(qiáng)制性國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)為GB5009.27-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中苯并(a)芘的測(cè)定》，規(guī)定了適用于谷物及其制品（稻谷、糙米、大米、小麥、小麥粉、玉米、玉米面、玉米渣、玉米片）肉及肉制品（熏、燒、烤肉類(lèi)）、水產(chǎn)動(dòng)物及其制品（熏、烤水產(chǎn)品）、油脂及其制品中苯并(a)芘的測(cè)定方法，該標(biāo)準(zhǔn)采用中性氧化鋁柱或分子印跡柱分離提取試驗(yàn)樣品中的待測(cè)成分，簡(jiǎn)單的給出了精密度數(shù)據(jù)，規(guī)定在重復(fù)性條件下獲得的兩次測(cè)試結(jié)果的絕對(duì)值不得超過(guò)算術(shù)平均值的20%。本標(biāo)準(zhǔn)主要針對(duì)植物油中苯并（a）芘的測(cè)試，采用超臨界流體在線(xiàn)凈化技術(shù)分離提取樣品中的待測(cè)成分，給出了詳細(xì)的精密度數(shù)據(jù)和質(zhì)量控制手段，主要標(biāo)準(zhǔn)性能參數(shù)嚴(yán)于、高于GB5009.27-2016《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中苯并(a)芘的測(cè)定》，符合團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)制定原則。7.對(duì)征求意