DB34∕T 1535-2011 乳制品中恩諾沙星、麻保沙星、二氟沙星殘留量測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法　　

DB34/T1535—2011留量測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法安徽省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局發(fā)布IDB34/T1535—2011本標(biāo)準(zhǔn)按照GB/T1.1-2009給出的規(guī)則起草。本標(biāo)準(zhǔn)由安徽省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局、安徽省食品質(zhì)量安全檢驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)提出。本標(biāo)準(zhǔn)由安徽省食品質(zhì)量安全檢驗(yàn)方法標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)歸口。本標(biāo)準(zhǔn)起草單位：國(guó)家農(nóng)副加工食品質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)中心、安徽國(guó)家農(nóng)業(yè)標(biāo)準(zhǔn)化與監(jiān)測(cè)中心。本標(biāo)準(zhǔn)主要起草人：顧亮、徐彥輝、丁磊、陶運(yùn)來、羅亮、王蘇紅、劉坤、彭濤。1DB34/T1535—2011乳制品中恩諾沙星、麻保沙星、二氟沙星殘留量測(cè)定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。3原理用0.1mol/LEDTA-Mcllvaine緩沖液(pH=4.0)提取乳制品中的喹諾酮類抗生素，經(jīng)離心后，上清4試劑4.4檸檬酸。4.9磷酸氫二鈉溶液(0.2mol/L):稱取71.63g磷酸氫二鈉，用水溶解，定容至1000mL。4.10檸檬酸溶液(0.1mol/L):稱取20.01g檸檬酸，用水溶解，定容至1000mL。4.11Mcllvaine緩沖液：將1000mL0.1mol/L檸檬酸溶液(4.10)與625mL0.2mol/L磷酸氫二鈉溶液(4.9)混合，用鹽酸或氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH至4.0±0.05。4.12EDTA-Mcllvaine緩沖液(0.1mol/L):稱取60.5g乙二胺四乙酸二鈉(4.8)放入1625mLMcllvaine緩沖液(4.11)中，振搖使其溶解。4.13甲醇水溶液：5%(體積分?jǐn)?shù))。2DB34/T1535—20114.14甲酸水溶液：0.1%(體積分?jǐn)?shù))。5.2電子天平：感量0.0001g和感量0.01g。5.4高速冷凍離心機(jī)(轉(zhuǎn)速10000r/min)。稱取約5.0g(精確至0.01g)試樣于50mL聚丙烯離心管中，加入40.0mL0.1mol/LEDTA-Mcllvaine緩沖液(4.12),漩渦混勻，超聲提取10min,10000r/min離心5min(溫度低于5℃),取上清液(上清液若除脂不完全，可加5mL正己烷除脂，離心分層取下層清液過柱)。HLB固相萃取柱(200mg,6mL),使用前依次用6mL甲醇、6mL水活化。將6.1提取的溶液以2～3mL/min的速度過柱，棄去濾液，用2mL5%甲醇水溶液(4.13)淋洗，棄去稱取與試樣基質(zhì)相應(yīng)的陰性樣品5.0g,按照6.1、6.2與試樣同時(shí)進(jìn)行提取和凈化，用系列標(biāo)準(zhǔn)溶液3DB34/T1535—2011e)流動(dòng)相：流動(dòng)相A(0.1%甲酸)+流動(dòng)相B(乙腈),參考梯度條件見表1。時(shí)間(min)流速(μL/min)流動(dòng)相A(0.1%甲酸)流動(dòng)相B(乙腈)055655a)離子源：電噴霧離子源(ESI);c)檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM);d)霧化氣(NEB)、氣簾氣(CUR)、碰撞氣(CAD)均為高純氮?dú)?；使用前?yīng)調(diào)節(jié)各氣體流量以f)定性離子對(duì)、定量離子對(duì)、碰撞電壓和碰撞能量等參數(shù)見表2。名稱母離子(m/z)子離子(m/z)碰撞電壓(V)碰撞能量(V)恩諾沙星316.1麻保沙星363.25二氟沙星400.2382.1356.1各檢測(cè)目標(biāo)化合物以保留時(shí)間和兩對(duì)離子的(特征離子對(duì)/定量離子對(duì))所對(duì)應(yīng)的LC-MS/MS色譜一致(偏差±0.5%),同時(shí)要求被測(cè)試樣中目標(biāo)化合物的兩對(duì)離子豐度比與標(biāo)準(zhǔn)溶液中目標(biāo)化合物的豐度比一致，相對(duì)豐度>50%、20～50%、10～20%、<10%時(shí)，允許偏差分別為±20%、±25%、士30%和±50%。4按以上步驟，對(duì)同一試樣進(jìn)行平行測(cè)定。8結(jié)果計(jì)算測(cè)定結(jié)果按式(1)計(jì)算：.......................................(1)式中：X——樣品中目標(biāo)化合物含量，單位為微克每千克(μg/kg);C——測(cè)定濃度，單位為微克每升(μg/L);V樣品定容體積，單位為毫升(mL);W——樣品稱樣量，單位為克(g)。9方法回收率和精密度9.1回收率本方法在0.50μg/kg～100.0μg/kg添加濃度范圍內(nèi)，用陰性樣品進(jìn)行添加回收試驗(yàn)，恩諾沙星、