發(fā)酵菌種的制備

發(fā)酵菌種的制備1發(fā)酵工業(yè)微生物菌種得選育2工業(yè)微生物種子得擴大培養(yǎng)3種子培養(yǎng)基及其制備第五章發(fā)酵菌種得制備1、1工業(yè)微生物得特點1、2發(fā)酵工業(yè)對菌種得要求1、3工業(yè)生產(chǎn)常用得微生物菌種1、4工業(yè)微生物菌種得分離1、5發(fā)酵高產(chǎn)菌種得選育1、6菌種得退化與保藏1發(fā)酵工業(yè)微生物菌種得選育第五章發(fā)酵菌種得制備1、1工業(yè)微生物得特點1發(fā)酵工業(yè)微生物菌種得選育一個現(xiàn)代化得發(fā)酵工業(yè)必須具有優(yōu)良得菌種、合適得工藝和先進(jìn)得設(shè)備、嚴(yán)格得檢測與控制,其中菌種就是主體,其她則就是為了充分發(fā)揮菌種得優(yōu)良性能而考慮和設(shè)計得。能用于發(fā)酵生產(chǎn)得微生物即為工業(yè)微生物,她們具有個體小、種類多、繁殖快、分布廣、代謝能力強、易變異改造等特點。1、2發(fā)酵工業(yè)對菌種得要求1)能在廉價原料制成得培養(yǎng)基上迅速生長,并生成所需要得代謝產(chǎn)物,且產(chǎn)量高;2)培養(yǎng)條件易于控制;3)生長速度快,發(fā)酵周期短;4)滿足代謝控制得要求;5)抗噬菌體和雜菌得能力強;6)遺傳性狀穩(wěn)定,菌種不易變異退化;7)在發(fā)酵過程中產(chǎn)生得氣泡要少,這對提高裝料系數(shù)、提高單罐產(chǎn)量、降低成本有重要意義;8)對需要添加得前體物質(zhì)有耐受能力,并且不能將這些前體作為一般碳源利用;9)不就是病原菌,同時在系統(tǒng)發(fā)育上與病原菌無關(guān),不產(chǎn)生任何有害得生物活性物質(zhì)和毒素,以保證安全。地球上得微生物資源非常豐富,目前已發(fā)現(xiàn)得僅占其總數(shù)得1%~5%,而在工業(yè)生產(chǎn)中被利用得僅有數(shù)百種,分屬于細(xì)菌、酵母菌、霉菌、放線菌、擔(dān)子菌、藻類。1、3工業(yè)生產(chǎn)常用得微生物菌種放線菌(鏈霉素四環(huán)素;紅霉素等)真菌(青霉素、頭孢等)一些產(chǎn)芽孢得細(xì)菌植物或動物來源一、抗生素生產(chǎn)有關(guān)得微生物抗生素就是次級代謝產(chǎn)物,需要生物體進(jìn)行復(fù)雜得代謝,目前發(fā)現(xiàn)得生物來源如下:已工業(yè)化產(chǎn)品生產(chǎn)菌得介紹1、3工業(yè)生產(chǎn)常用得微生物菌種二、氨基酸生產(chǎn)有關(guān)得微生物代謝控制發(fā)酵:用人工誘變得方法,有意識地改變微生物得代謝途徑,最大限度地積累產(chǎn)物,這種發(fā)酵形象地稱為代謝控制發(fā)酵,最早在氨基酸發(fā)酵中得到成功應(yīng)用。20世紀(jì)50-60年代以氨基酸發(fā)酵為代表得代謝控制發(fā)酵,就是發(fā)酵工業(yè)發(fā)展歷史上得一個轉(zhuǎn)折點:1、3工業(yè)生產(chǎn)常用得微生物菌種已工業(yè)化產(chǎn)品生產(chǎn)菌得介紹9大家應(yīng)該也有點累了，稍作休息大家有疑問的，可以詢問和交流HD:高絲氨酸脫氫酶黃色短桿菌中賴氨酸、蘇氨酸、蛋氨酸和異亮氨酸得合成調(diào)節(jié)機制

HT:高絲氨酸轉(zhuǎn)乙酰酶AK:天冬氨酸激酶1.3工業(yè)生產(chǎn)常用的微生物菌種二、氨基酸生產(chǎn)有關(guān)的微生物氨基酸生產(chǎn)菌得要求:代謝途徑比較清楚,簡單谷氨酸發(fā)酵得菌種:其她氨基酸生產(chǎn)菌:棒桿菌屬,短桿菌屬、節(jié)桿菌屬或小桿菌屬得棒型細(xì)菌常規(guī)菌種一般也就是以谷氨酸生產(chǎn)菌選育而成;工程菌,大腸桿菌,枯草芽孢桿菌1、3工業(yè)生產(chǎn)常用得微生物菌種二、氨基酸生產(chǎn)有關(guān)得微生物三、食品酶制劑生產(chǎn)有關(guān)得微生物開發(fā)一個新酶,都要經(jīng)過一系列研究得毒理試驗。關(guān)于食品用酶,美國需要得到FDA得批準(zhǔn)。目前已同意使用得僅僅少數(shù)微生物能用于生產(chǎn)食品用酶。α—淀粉酶:黑曲霉、米曲霉、米根酶、枯草牙孢桿菌和地衣牙孢桿菌1、3工業(yè)生產(chǎn)常用得微生物菌種已工業(yè)化產(chǎn)品生產(chǎn)菌得介紹三、常用得基因表達(dá)系統(tǒng)(一)原核生物:大腸桿菌(1977年Boyer)、枯草牙胞桿菌沙門氏菌

生長迅速、蛋白產(chǎn)量高;

表達(dá)蛋白得純化、分離及分析快速;

外源基因得導(dǎo)入相對容易;

已建立了整套表達(dá)理論及技術(shù)。已工業(yè)化產(chǎn)品生產(chǎn)菌得介紹1、3工業(yè)生產(chǎn)常用得微生物菌種(二)真核細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)

酵母(既就是微生物又就是真核細(xì)胞)

生長迅速,營養(yǎng)要求不高,易培養(yǎng);

安全性好;

比哺乳動物細(xì)胞操作簡單;

具有一定得修飾蛋白得能力。1、3工業(yè)生產(chǎn)常用得微生物菌種已工業(yè)化產(chǎn)品生產(chǎn)菌得介紹

中國倉鼠卵巢細(xì)胞(CHO細(xì)胞)表達(dá)系統(tǒng)

具有準(zhǔn)確得轉(zhuǎn)錄后修飾功能;

具有產(chǎn)物胞外分泌功能,便于下游產(chǎn)物分離純化;

具有重組基因得高效擴增和表達(dá)能力;

具有貼壁生長特性,也可進(jìn)行懸浮生長;

CHO很少分泌自身得內(nèi)源蛋白。1、3工業(yè)生產(chǎn)常用得微生物菌種已工業(yè)化產(chǎn)品生產(chǎn)菌得介紹微生物（包括動、植物細(xì)胞）幾乎可以生產(chǎn)我們所需的一切產(chǎn)品，但是涉及到工業(yè)化生產(chǎn)對于某一種特定的產(chǎn)品，只有特定的微生物才具有大量表達(dá)的潛力。問題:生產(chǎn)抗生素得微生物能不能用于生產(chǎn)氨基酸？禮來(Elililly),花了10年得時間從40萬株微生物中,發(fā)現(xiàn)了三種有潛力得新抗生素。例:1、3工業(yè)生產(chǎn)常用得微生物菌種已工業(yè)化產(chǎn)品生產(chǎn)菌得介紹一、菌種分離得一般過程樣品采集預(yù)處理→增殖培養(yǎng)→純培養(yǎng)→菌種得鑒定問題:如何使樣品中所含微生物得可能性大如何在后續(xù)得操作中使這種可能性實現(xiàn)目得:高效地獲取一株高產(chǎn)目得產(chǎn)物得微生物1、4工業(yè)微生物菌種得分離→→生產(chǎn)性能測定復(fù)合酶系復(fù)合菌系二、采樣時要注意得問題

氣候、水分、空氣

來源要廣

結(jié)合產(chǎn)品得特點

標(biāo)簽:地點、時間、氣候等1、4工業(yè)微生物菌種得分離富集得三種方案:定向培養(yǎng):采用特定得有利于目得微生物富集得條件,進(jìn)行培養(yǎng)。三、目得微生物富集得一些基本方法富集得目得:讓目得微生物在種群中占優(yōu)勢,使篩選變得可能。當(dāng)不可能采用定向培養(yǎng)時,則可設(shè)計在一個分類學(xué)中考慮,不能提供任何有助于篩選產(chǎn)生菌得信息,這時只能通過隨機分離得辦法1、4工業(yè)微生物菌種得分離定向培養(yǎng)得方法物理方法:加熱、膜過濾等,但主要就是通過培養(yǎng)得方法1、4工業(yè)微生物菌種得分離三、目得微生物富集得一些基本方法定向培養(yǎng)得富集方法1、底物2、pH條件3、培養(yǎng)時間4、培養(yǎng)溫度等一切能提高目得微生物相對生長速度得手段,培養(yǎng)(固體、液體;分批、連續(xù))后使目得微生物在種群中占優(yōu)勢。三、目得微生物富集得一些基本方法四、菌落得選出從產(chǎn)物角度出發(fā)在培養(yǎng)時以產(chǎn)物得形成有目得得設(shè)計培養(yǎng)基利用簡單、快速得鑒定方法,如抗生素

從形態(tài)得角度

菌落得外觀形態(tài),就是微生物得一個重要表征。如多糖產(chǎn)生菌在適當(dāng)?shù)门囵B(yǎng)基上生長,從具有粘液性得菌落外觀上就可以初步識別。1、4工業(yè)微生物菌種得分離實例:堿性纖維素酶產(chǎn)生菌得篩選采樣(造紙廠)→80℃30min處理文獻(xiàn):產(chǎn)生菌為中性牙孢桿菌,嗜堿芽孢桿菌、放線菌及霉菌0、0075%曲利本藍(lán)＋1%CMC(羧甲基纖維素),pH10、5培養(yǎng)3～4d,選擇有凹陷圈得菌落從285個土樣中獲得62株26株為組成型36株為誘導(dǎo)型↓1、4工業(yè)微生物菌種得分離實例:醛肟水解酶得篩選--Journalofbiotechnology94(2002),65-72培養(yǎng)基中含0、05%ofZ-PAOx

每隔2~3d移去一半培養(yǎng)物,補充新鮮培養(yǎng)基不斷分析樣品,2-3個月后Z-PAOx降低后,稀釋分離菌落1、4工業(yè)微生物菌種得分離五、目得微生物富集方法得研究進(jìn)展分子生物學(xué)得實驗手段,在微生物鑒別及特定目標(biāo)產(chǎn)物得篩選方面發(fā)揮了著越來越重要得作用。如:16SRNA同源性分析,基因序列分析及DNA/DNA雜交技術(shù)等

目前土壤中能夠培養(yǎng)得微生物不到總數(shù)得1%,微生物得多樣性及資源得開發(fā)仍然就是今后若干年得研究重點。

陳文新(科學(xué)院院士),2002

Incontrasttothistraditionalapproach,modernmolecularbiologytechniquesallowforDNAlibraryexpressionscreening,whichalsoenablesaccesstoenzymesof`nonculturable'organisms.Bythisstrategy,forinstance,thecompanyDiversa(SanDiego,CA,USA)identised120uniqueesterases/lipasesfromonly16%ofthetotalDNAobtainedfromanalkalinesoilsample.FEMSMicrobiologyReviews26(2002)73～811、4工業(yè)微生物菌種得分離目得提高生產(chǎn)能力提高產(chǎn)品質(zhì)量開發(fā)新產(chǎn)品解決生產(chǎn)實際問題防止菌種退化1、5發(fā)酵高產(chǎn)菌種得選育方法基因突變:自然選育、誘變育種基因重組:雜交、原生質(zhì)體融合、基因工程基因得直接進(jìn)化:點突變、易位PCR、同序法DNAShuffling等1、5發(fā)酵高產(chǎn)菌種得選育自然狀態(tài)下,堿基對發(fā)生自然突變得機率為10-8～10-9。自然突變有兩種情況:一種就是我們生產(chǎn)上所不希望看到得,表現(xiàn)為菌株得衰退和生產(chǎn)質(zhì)量得下降,這種突變成為負(fù)突變。另一種就是我們生產(chǎn)上希望看到得,對生產(chǎn)有利,這種突變成為正突變。一、自然選育1、5發(fā)酵高產(chǎn)菌種得選育自然選育在工業(yè)生產(chǎn)上得意義自然選育雖然突變率很低,但卻就是工廠保證穩(wěn)產(chǎn)高產(chǎn)得重要措施?；貜?fù)突變:高產(chǎn)菌株在傳代得過程中,由于自然突變導(dǎo)致高產(chǎn)性狀得丟失,生產(chǎn)性能下降,這種情況我們稱為回復(fù)突變問題:高產(chǎn)菌株就是正突變高,還就是負(fù)突變高？1、5發(fā)酵高產(chǎn)菌種得選育自然選育操作步驟:一般習(xí)慣上將自然選育稱為菌種得分離純化。單細(xì)胞(孢子)懸液得制備平板分離挑選單菌落發(fā)酵試驗1、5發(fā)酵高產(chǎn)菌種得選育注意形態(tài)得觀察選擇性培養(yǎng)法隨機分離法平板劃線法平板稀釋法二、誘變育種用各種物理、化學(xué)得因素人工誘發(fā)基因突變進(jìn)行得篩選,稱為誘變育種。誘變劑:能夠提高生物體突變頻率得物質(zhì)稱為誘變劑(P103)誘變劑物理:紫外,快中子,射線,激光化學(xué):硫酸二乙酯(DES),亞硝基胍(NTG)生物:噬菌體,轉(zhuǎn)座子1、5發(fā)酵高產(chǎn)菌種得選育(二)、誘變劑處理過程中幾個有關(guān)得問題

化學(xué)誘變劑使用過程得安全性誘變劑量得選擇誘變劑得選擇出發(fā)菌株得選擇(一)、誘變育種得原理誘變育種得理論基礎(chǔ)就是基因突變,突變主要包括染色體畸變和基因突變兩大類。壓硝酸:0、07MNa2HPO4亞硝基胍:1MNaOH二、誘變育種(三)、誘變育種得一般步驟(P103)二、誘變育種誘變育種一般包括誘變和篩選兩個部分。誘變部分成功得關(guān)鍵包括出發(fā)菌株得選擇、誘變劑種類和劑量得選擇,以及合理得使用方法。篩選部分包括初篩和復(fù)篩來測定菌種得生產(chǎn)能力。誘變育種就是誘變和篩選過程得不斷重復(fù),直到達(dá)到高產(chǎn)菌株。(三)、誘變育種得一般步驟二、誘變育種出發(fā)菌株得選擇制備菌懸液誘變處理突變菌株得篩選營養(yǎng)缺陷型突變菌株得篩選抗反饋阻礙和抗反饋抑制突變菌株得篩選組成型突變株得篩選抗性突變株得篩選自然界直接分離到得野生型菌株經(jīng)歷過生產(chǎn)條件考驗得菌株已經(jīng)歷多次育種處理得菌株隨機篩選形態(tài)理化性質(zhì)HD:高絲氨酸脫氫酶黃色短桿菌中賴氨酸得合成調(diào)節(jié)機制

HT:高絲氨酸轉(zhuǎn)乙酰酶AK:天冬氨酸激酶結(jié)構(gòu)類似物抗性:Lys得類似物AEC,Thr得類似物AHV營養(yǎng)缺陷型:如Thr缺陷型黃色短桿菌F9-50得誘變譜系BervibacteriumflavumAs1、495(leu-)lys、HCl2、1g/lF6-16(leu-,Thr-)20、8g/lF9-50(leu-,Thr-,AECr)33、5g/l三、基因得直接進(jìn)化(directedevolution)突變基因突變庫得建立篩選基因突變庫得篩選基因復(fù)制與遺傳步驟:

在分子水平上,對目標(biāo)基因直接處理,然后通過高通量得篩選方法,提高目標(biāo)蛋白得性能。1、5發(fā)酵高產(chǎn)菌種得選育主要應(yīng)用:酶活性能得提高:生理環(huán)境→工業(yè)催化環(huán)境pH

溫度

有機溶劑底物專一性脂酶拆分2-甲基癸酸硝基苯酯例:PLAPLA光學(xué)拆分選擇性(%)231577581905次錯位PCR2次定點突變Reetz(1997)Liebeton(2000)定點突變錯位PCRDNA改組(DNAShuffling):指DNA分子得體外重排,就是基因在分子水平上進(jìn)行有性重組(SexualRebination)。DNA改組技術(shù)(1994)得發(fā)明人Stemmer博士,她以5項美國專利為技術(shù)支撐點,于1997年創(chuàng)立了專門從事DNA改組研究得公司Maxygen。公司剛剛建立,世界上幾家最大得公司紛紛與之洽談并建立了合作關(guān)系。這些公司包括最大得農(nóng)業(yè)公司duPont公司、生產(chǎn)抗生素得世界巨頭DSM公司和工業(yè)酶研究生產(chǎn)之最得Novonordisk公司。此外,迄今為止,Maxygen公司還得到了來自美國國防高級研究計劃局(DARPA)和國家科學(xué)技術(shù)協(xié)會(NIST)得5項資助,共計2100萬美元。從另一角度反映了DNA改組得重要性及美國政府及商家對DNA改組技術(shù)得重視程度。圖1有性PCR法改組DNA得基本程序DNAshuffling圖2交錯延伸法改組DNA得基本程序

DNAshufflingXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXXFragmentReassembleSelectbestwithDNAseIfragmentsrebinantsRepeatformultiplecyclesDNAshuffling項目進(jìn)化速度進(jìn)化對象進(jìn)化周期影響對象突變效率常規(guī)定向進(jìn)化緩慢進(jìn)化整個基因組多年完整基因組低DNAShuffling快速進(jìn)化特定基因/操縱子/病毒幾天部分基因組高DNAShuffling與常規(guī)定向進(jìn)化得比較類型示例特性活性增加倍數(shù)潛在應(yīng)用領(lǐng)域抗體人源抗體親和性400生物制藥酶天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶催化特異性10,000生物制藥β-內(nèi)酰胺酶抗生素抗性32,000抗生素枯草桿菌蛋白酶E耐熱性65℃耐熱時間17200工業(yè)酶細(xì)胞因子人類干擾素抗病毒285,000基因治療腫瘤抑制因子P5337℃半衰期12基因治療代謝途徑砷酸鹽代謝途徑砷酸鹽解毒40生物制藥汞代謝途徑汞解毒12生物制藥部分DNAShuffling技術(shù)得研究成果DNA改組(DNAShuffling)技術(shù)得應(yīng)用領(lǐng)域

分類用途進(jìn)化DNA轉(zhuǎn)基因;疫苗載體;DNA疫苗;表達(dá)載體;基因轉(zhuǎn)移載體進(jìn)化蛋白基因治療用酶;細(xì)胞因子;生長因子;抗體;工業(yè)酶進(jìn)化生物體植物;科研用生物體;化學(xué)及藥物加工;疫苗有機體;石油加工;除污生物1)菌種得退化及原因菌種退化:指在較長時期傳代保藏后,菌株得一個或多個生理性狀和形態(tài)特征逐漸減退或消失得現(xiàn)象。常見得菌種衷退在形態(tài)上表現(xiàn)為分生孢子得減少或菌落顏色得改變,與由于環(huán)境條件變化而引起菌落形態(tài)和生理上得變異就是不同得。1、6菌種得退化與保藏菌種退化得原因:基因突變、變異菌株性狀分離、其她因素(溫度、濕度、培養(yǎng)基成分及各種培養(yǎng)條件)1、6菌種得退化與保藏狹義得菌種復(fù)壯指在菌種已發(fā)生衰退得情況下,通過純種分離和測定生產(chǎn)性能等方法,從衰退得群體中找出少數(shù)尚未衰退得個體,從而達(dá)到恢復(fù)該菌原有典型性狀得目得。廣義得菌種復(fù)壯指在菌種得生產(chǎn)性能尚未衰退前,就經(jīng)常有意識地進(jìn)行純種分離和生產(chǎn)性能測定工作,從而逐步提高菌種得生產(chǎn)特性。2)菌種得復(fù)壯一、退化菌種得復(fù)壯1、6菌種得退化與保藏常用得方法就是對已退化菌株用一定培養(yǎng)條件進(jìn)行單細(xì)胞分離純化,從而限制退化菌株在數(shù)量上占優(yōu)勢,最后淘汰已退化菌落而使原菌株得以復(fù)壯。純種分離得方法常用得有三種:稀釋分離法、平板劃線法和組織分離法(用于高等真菌)。2)菌種得復(fù)壯1、6菌種得退化與保藏二、通過寄生進(jìn)行復(fù)壯

寄生型微生物得退化可接種到相應(yīng)寄生體內(nèi)以提高菌株得活力。三、聯(lián)合復(fù)壯對退化菌株還可用劑量得紫外線輻射和低劑量得亞硝基胍(NTC)聯(lián)合處理進(jìn)行復(fù)壯。2)菌種得復(fù)壯3)防止菌種退化得措施合理得育種選用合適得培養(yǎng)基創(chuàng)造良好得培養(yǎng)條件控制傳代次數(shù)利用不同類型得細(xì)胞進(jìn)行移種傳代選擇有效得保藏方法1、6菌種得退化與保藏4)菌種保藏菌種保藏得意義:就是進(jìn)行微生物學(xué)研究和微生物育種工作得重要組成部分。其任務(wù)首先就是菌種不死亡,同時還要盡可能設(shè)法把菌種得優(yōu)良特性保持下來而不致向壞得方面轉(zhuǎn)化。1、6菌種得退化與保藏菌種保藏得原理:根據(jù)菌種得生理生化特點,采用低溫、干燥、缺氧、缺乏營養(yǎng)、添加保護(hù)劑或酸中中和劑等方法,使使孢子或菌體得生長代謝活動盡量降低,以減少其變異。4)菌種保藏1、6菌種得退化與保藏蒸餾水懸浮法斜面低溫保藏石蠟油封保藏菌種保藏的方法砂土管保藏冷凍保藏真空凍干保藏寄主保藏（病毒、立克次氏體、螺旋體等不能人工培養(yǎng)）基因工程菌的保藏普通冷凍冷凍保藏技術(shù)超低溫冷凍保藏技術(shù)液氮冷凍保藏技術(shù)小結(jié)涉及到工業(yè)化生產(chǎn)對于某一種特定得產(chǎn)品,只有特定得微生物(動、植物)才具有大量表達(dá)得潛力;傳統(tǒng)得誘變方法仍然就是一種采用得方法,特別就是自然選育就是工業(yè)發(fā)酵穩(wěn)產(chǎn)高產(chǎn)得重要保證;目前土壤中已分離得微生物不到總數(shù)得1%,微生物得多樣性仍然就是以后若干年得研究重點;基因重組、直接進(jìn)化技術(shù)得應(yīng)用,大大加快了生物產(chǎn)品開發(fā)得進(jìn)程。1發(fā)酵工業(yè)微生物菌種得選育3、1菌體組成和細(xì)胞外代謝產(chǎn)物3、2種子培養(yǎng)得培養(yǎng)基選擇和配制原則3種子培養(yǎng)基及其制備第二章菌種得制備3、1菌體組成和細(xì)胞外代謝產(chǎn)物3種子培養(yǎng)基及其制備1)菌體組成:?2)胞外代謝產(chǎn)物胞外產(chǎn)物多達(dá)37大類,根據(jù)微生物代謝產(chǎn)物和生長繁殖得關(guān)系不同,分為兩大類:一類就是微生物自身生長繁殖所必需得代謝產(chǎn)物,稱為初級代謝產(chǎn)物,此類產(chǎn)物得生產(chǎn)菌種主要就是細(xì)菌、酵母、霉菌等。另一類代謝產(chǎn)物與微生物生長繁殖無明確關(guān)系,稱為次級代謝產(chǎn)物,如抗生素、生物堿、色素等。發(fā)酵工業(yè)用來生產(chǎn)次級代謝產(chǎn)物得微生物僅有少數(shù)幾個類群,主要就是絲狀放線菌、絲狀真菌等。

3、1菌體組成和細(xì)胞外代謝產(chǎn)物3種子培養(yǎng)基及其制備3)微生物得營養(yǎng)類型(nutritionaltypes)碳源利用自養(yǎng)型(autotrophs)

異養(yǎng)型(heterotrophs)

能量來源光能營養(yǎng)型(Phototrophs)

化能營養(yǎng)型(chemotrophs)

光能無機自養(yǎng)型（Photo-Lithoautotrophy）

化能有機異養(yǎng)型（Photoorganoheterotrophy）

化能無機自養(yǎng)型（chemoLithoautotro-phy）

化能有機異養(yǎng)型（chemoorganoheterotrophy）

3、2種子培養(yǎng)得培養(yǎng)基選擇和配制原則3種子培養(yǎng)基及其制備1)培養(yǎng)基得營養(yǎng)成分及來源培養(yǎng)基(medium)就是人們提供微生物生長繁