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文檔簡介

專題1傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用

課題1果酒和果醋的制作

一、果酒的制作是否勝利

發(fā)酵后取樣,通過嗅味和品嘗進行初步鑒定。此外,還可用顯微鏡視察酵母菌,并用重銘酸鉀檢驗酒精的存在。

假如試驗結(jié)果不志向,請學生分析失敗緣由,然后重新制作。

二、果醋的制作是否勝利

首先通過視察菌膜的形成、嗅味和品嘗進行初步鑒定,再通過檢測和比較醋酸發(fā)酵前后的pH作進一步的鑒定。

此外,還可以通過在顯微鏡下視察發(fā)酵液中是否有醋酸菌,并統(tǒng)計其數(shù)量作進一步鑒定。

三、旁欄思索題

1.你認為應(yīng)當先沖洗葡萄還是先除去枝梗?為什么?

答:應(yīng)當先沖洗,然后再除去枝梗,以避開除去枝梗時引起葡萄破損,增加被雜菌污染的機會。

2.你認為應(yīng)當從哪些方面防止發(fā)酵液被污染?

提示:須要從發(fā)酵制作的過程進行全面的考慮。例如,榨汁機、發(fā)酵裝置要清洗干凈;每次排氣時只需擰松瓶蓋、

不要完全揭開瓶蓋等。

3.制葡萄酒時,為什么要將溫度限制在18?25℃?制葡萄醋時,為什么要將溫度限制在30?35℃?

答:溫度是酵母菌生長和發(fā)酵的重要條件。20℃左右最適合酵母菌繁殖。因此須要將溫度限制在其最適溫度范

圍內(nèi)。而醋酸菌是嗜溫菌,最適生長溫度為30?35℃,因此要將溫度限制在30?35℃?

4.制葡萄醋時,為什么要適時通過充氣口充氣?

答:醋酸菌是好氧菌,在將酒精變?yōu)榇姿釙r須要氧的參加,因此要適時向發(fā)酵液中充氣。

四、[資料]發(fā)酵裝置的設(shè)計探討題

請分析此裝置中的充氣口、排氣口和出料口分別有哪些作用。為什么排氣口要通過一個長而彎曲的膠管與瓶身連

接?結(jié)合果酒、果醋的制作原理,你認為應(yīng)當如何運用這個發(fā)酵裝置?

答:充氣口是在醋酸發(fā)酵時連接充氣泵進行充氣用的;排氣口是在酒精發(fā)酵時用來排出CO2的;出料口是用來

取樣的。排氣口要通過一個長而彎曲的膠管與瓶身連接,其目的是防止空氣中微生物的污染,其作用類似巴斯德

的鵝頸瓶。運用該裝置制酒時,應(yīng)當關(guān)閉充氣口;制醋時,應(yīng)將充氣口連接氣泵,輸入氧氣。

五、練習

2.提示:大規(guī)模生產(chǎn)時須要進行更為全面周詳?shù)目紤],如原料的來源與選擇、菌種的培育與選擇、發(fā)酵的設(shè)備、

發(fā)酵條件的自動化限制,以及如何嚴格限制雜菌污染;等等。此外,無論是葡萄酒或葡萄醋,試驗時所檢測的發(fā)

酵液,并非商品意義上的產(chǎn)品。在實際生產(chǎn)中還需沉淀過濾、滅菌裝瓶等獲得成品酒或醋。葡萄酒還需在肯定設(shè)

施和條件下(如橡木桶和地窖)進行后續(xù)發(fā)酵,以獲得特定的風味和色澤。

課題2腐乳的制作

一、是否完成腐乳的制作

學:是否完成腐乳的制作依據(jù)是:能夠合理地選擇試驗材料與用具;前期發(fā)酵后豆腐的表面長有菌絲,后期發(fā)酵

制作基本沒有雜菌的污染。

二、腐乳質(zhì)量的評價

制作勝利的腐乳應(yīng)當具有以下特點:色澤基本一樣、味道鮮美、咸淡適口、無異味、塊形整齊、厚薄勻稱、質(zhì)地

細膩、無雜質(zhì)。

三、答案和提示

1.你能利用誦學'的生物學學問,說明豆腐長白毛是怎么一回事?

答:豆腐上生長的白毛是毛霉的白色菌絲。嚴格地說是直立菌絲,在豆腐中還有匍匐菌絲。

2.王致和為什么要撒很多鹽,將長毛的豆腐腌起來?

答:鹽能防止雜菌污染,避開豆腐腐敗。

3.我們平常吃的豆腐,哪種適合用來做腐乳?

答:含水量為70%左右的豆腐適于作腐乳。用含水量過高的豆腐制腐乳,不易成形。

4.吃腐乳時,你會發(fā)覺腐乳外部有一層致密的“皮”。這層“皮”是怎樣形成的呢?它對人體有害嗎?它的作用

是什么?

答:“皮”是前期發(fā)酵時在豆腐表面上生長的菌絲(匍匐菌絲),它能形成腐乳的“體”,使腐乳成形?!捌ぁ?/p>

對人體無害。

(-)練習

1.答:越接近瓶口,雜菌污染的可能性越大,因此要隨著豆腐層的加高增加鹽的用量,在接近瓶口的表面,鹽要

鋪厚一些,以有效防止雜菌污染。

課題3制作泡菜

一、泡菜腌制的質(zhì)量如何

可以依據(jù)泡菜的色澤和風味進行初步的評定,還可以在顯微鏡下視察乳酸菌形態(tài),比較不同時期泡菜壇中乳酸菌

的含量。

二、是否進行了剛好細致的視察與記錄

在試驗進行過程中,應(yīng)剛好對泡菜中亞硝酸鹽含量進行鑒定,比較不同時期亞硝酸鹽含量的改變及其對泡菜質(zhì)量

的影響。

三、旁欄思索題

1.為什么含有抗生素的牛奶不能發(fā)酵成酸奶?

答:酸奶的制作依靠的是乳酸菌的發(fā)酵作用??股啬軌驓⑺阑蛞种迫樗峋纳L,因此含有抗生素的牛奶不能

發(fā)酵成酸奶。

2.為什么日常生活中要多吃簇新蔬菜,不吃存放時間過長、變質(zhì)的蔬菜?

答:有些蔬菜,如小白菜和蘿卜等,含有豐富的硝酸鹽。當這些蔬菜放置過久發(fā)生變質(zhì)(發(fā)黃、腐爛)或者煮熟

后存放太久時,蔬菜中的硝酸鹽會被微生物還原成亞硝酸鹽,危害人體健康。

3.為什么泡菜壇內(nèi)有時會長一層白膜?你認為這層白膜是怎么形成的?

答:形成白膜是由于產(chǎn)膜酵母的繁殖。酵母菌是兼性厭氧微生物,泡菜發(fā)酵液養(yǎng)分豐富,其表面氧氣含量也很豐

富,適合酵母菌繁殖。

四、練習

2.答:果酒的制作主要利用的是酵母菌的酒精發(fā)酵,果醋的制作利用的是醋酸菌將酒精轉(zhuǎn)變?yōu)榇姿岬拇x,腐乳

的制作利用的主要是毛霉分泌的蛋白酶等酶類,泡菜的制作利用的是乳酸菌的乳酸發(fā)酵。

傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)都奇妙地利用了自然菌種,都為特定的菌種供應(yīng)了良好的生存條件,最終的發(fā)酵產(chǎn)物不是單一的組

分,而是成分困難的混合物。

專題2微生物的培育與應(yīng)用

課題1微生物的試驗室培育

一、培育基的制作是否合格

假如未接種的培育基在恒溫箱中保溫1?2d后無菌落生長,說明培育基的制備是勝利的,否則須要重新制備。

二、接種操作是否符合無菌要求

假如培育基上生長的菌落的顏色、形態(tài)、大小基本一樣,并符合大腸桿菌菌落的特點,則說明接種操作是符合要

求的;假如培育基上出現(xiàn)了其他菌落,則說明接種過程中,無菌操作還未達到要求,須要分析緣由,再次練習。

三、是否進行了剛好細致的視察與記錄

培育12h與24h后的大腸桿菌菌落的大小會有明顯不同,剛好視察記錄的同學會發(fā)覺這一點,并能視察到其他

一些微小的改變。這一步的要求主要是培育學生良好的科學看法與習慣。

四、答案和提示

(-)旁欄思索題

1.無菌技術(shù)除了用來防止試驗室的培育物被其他外來微生物污染外,還有什么目的?

答:無菌技術(shù)還能有效避開操作者自身被微生物感染。

2.請你推斷以下材料或用具是否須要消毒或滅菌。假如須要,請選擇合適的方法。

(1)培育細菌用的培育基與培育皿

(2)玻棒、試管、燒瓶和吸管

(3)試驗操作者的雙手

答:(1)、(2)須要滅菌;(3)須要消毒。

(二)倒平板操作的探討

1.培育基滅菌后,須要冷卻到50℃左右時,才能用來倒平板。你用什么方法來估計培育基的溫度?

提示:可以用手觸摸盛有培育基的錐形瓶,感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時,就可以進行倒平板了。

2.為什么須要使錐形瓶的瓶口通過火焰?

答:通過灼燒滅菌,防止瓶口的微生物污染培育基。

3.平板冷凝后,為什么要將平板倒置?

答:平板冷凝后,皿蓋上會凝聚水珠,凝固后的培育基表面的濕度也比較高,將平板倒置,既可以使培育基表面

的水分更好地揮發(fā),又可以防止皿蓋上的水珠落入培育基,造成污染。

4.在倒平板的過程中,假如不當心將培育基濺在皿蓋與皿底之間的部位,這個平板還能用來培育微生物嗎?為什

么?

答:空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培育基上滋生,因此最好不要用這個平板培育微生物。

(三)平板劃線操作的探討

1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)?在劃線操作結(jié)束時,仍舊須要灼燒接種環(huán)嗎?為什

么?

答:操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避開接種環(huán)上可能存在的微生物污染培育物;每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了

殺死上次劃線結(jié)束后,接種環(huán)上殘留的菌種,使下一次劃線時,接種環(huán)上的菌種干脆來源于上次劃線的末端,從

而通過劃線次數(shù)的增加,使每次劃線時菌種的數(shù)目漸漸削減,以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán),能剛好殺

死接種環(huán)上殘留的菌種,避開細菌污染環(huán)境和感染操作者。

2.在灼燒接種環(huán)之后,為什么要等其冷卻后再進行劃線?

答:以免接種環(huán)溫度太高,殺死菌種。

3.在作其次次以及其后的劃線操作時,為什么總是從上一次劃線的末端起先劃線?

答:劃線后,線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少,每次從上一次劃線的末端起先,能使細菌的數(shù)目隨著劃線

次數(shù)的增加而逐步削減,最終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。

(四)涂布平板操作的探討

涂布平板的全部操作都應(yīng)在火焰旁邊進行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求,想一想,第2步應(yīng)如何進

行無菌操作?

提示:應(yīng)從操作的各個細微環(huán)節(jié)保證“無菌”。例如,酒精燈與培育皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他

物體、吸管要在酒精燈火焰四周;等等。

(五)練習

1.提示:可以從微生物生長須要哪些條件的角度來思索。例如,微生物的生長須要水、空氣、相宜的溫度,食品

保存可以通過保持干燥、真空的條件,以及冷藏等方法來阻擋微生物的生長。

2.提示:可以從這三種培育技術(shù)的原理、操作步驟等方面分別進行總結(jié)歸納。例如,這三種培育技術(shù)都須要為培

育物供應(yīng)足夠的養(yǎng)分,但無土栽培技術(shù)的操作并不須要保證無菌的條件,而其他兩種技術(shù)都要求嚴格的無菌條件。

課題2土壤中分解尿素的細菌的分別與計數(shù)

一、篩選菌株

微生物的選擇培育,是指利用培育基的組成使相宜生長的特定微生物得到較快繁殖的技術(shù),也稱為微生物的“選

擇培育”。在本課題供應(yīng)的選擇培育基的配方中,尿素是培育基中的惟一氮源,因此,原則上只有能夠利用尿素

的微生物才能夠生長。但事實上,微生物的培育是一個特別困難的問題,有些微生物可以利用其他微生物的代謝

產(chǎn)物生長繁殖,因此能夠在選擇培育基上生長的微生物不肯定是所須要的微生物,還須要進一步的驗證。

二、統(tǒng)計菌落數(shù)目

統(tǒng)計菌落數(shù)目的理論依據(jù)是:當樣品的稀釋度足夠高時,培育基表面生長的一個菌落,來源于樣品稀釋液中的一

個活菌。因此,恰當?shù)南♂尪仁莿倮亟y(tǒng)計菌落數(shù)目的關(guān)鍵。為了保證結(jié)果精確,通常將幾個稀釋度下的菌液都

涂布在平板上,培育后再選擇菌落數(shù)在30?300的平板進行計數(shù)。

三、設(shè)置比照

A同學的結(jié)箕與其他同學不同,可能的說明有兩種。一是由于土樣不同,二是由于培育基污染或操作失誤。原委

是哪個緣由,可以通過試驗來證明。試驗方案有兩種。一種方案是可以由其他同學用與A同學一樣的土樣進行

試驗,假如結(jié)果與A同學一樣,則證明A無誤;假如結(jié)果不同,則證明A同學存在操作失誤或培育基的配制有

問題。另一種方案是將A同學配制的培育基在不加土樣的狀況下進行培育,作為空白比照,以證明培育基是否

受到污染。通過這個事例可以看出,試驗結(jié)果要有勸服力,比照的設(shè)置是必不行少的。

四.課題成果評價

(一)培育物中是否有雜菌污染以及選擇培育基是否篩選出菌落

比照的培育皿在培育過程中沒有菌落生長,說明培育基沒有被雜菌污染。牛肉膏培育基的菌落數(shù)目明顯大于選擇

培育基的數(shù)目,說明選擇培育基已篩選出一些菌落。

(二)樣品的稀釋操作是否勝利

假如得到了2個或2個以上菌落數(shù)目在30?300的平板,則說明稀釋操作比較勝利,并能夠進行菌落的計數(shù)。

五、..練習

2.提示:反芻動物的瘤胃中含有大量的微生物,其中也包括分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多為厭氧菌,

接觸空氣后會死亡,因此分別其中能分解尿素的微生物除了須要準備選擇培育基外,還應(yīng)參照厭氧菌的培育方法

進行試驗設(shè)計.

課題3分解纖維素的微生物的分別

一、培育基的制作是否合格以及選擇培育基是否篩選出菌落:比照的培育基在培育過程中沒有菌落生長則說明培

育基制作合格。假如視察到產(chǎn)生透亮圈的菌落,則說明可能獲得了分解纖維素的微生物。

二、分別的結(jié)果是否一樣:由于在土壤中細菌的數(shù)量遠遠高于真菌和放線菌的數(shù)量,因此最簡單分別得到的是細

菌。但由于所取土樣的環(huán)境不同,學生也可能得到真菌和放線菌等不同的分別結(jié)果。

三、旁欄思索題

1.本試驗的流程與課題2中的試驗流程有哪些異同?

答:本試驗流程與課題2的流程的區(qū)分如下。課題2是將土樣制成的菌懸液干脆涂布在以尿素為惟一氮源的選擇

性培育基上,干脆分別得到菌落。本課題通過選擇培育,使纖維素分解菌得到增殖后,再將菌液涂布在選擇培育

基上。其他步驟基本一樣。

2.為什么要在富含纖維素的環(huán)境中找尋纖維素分解菌?

答:由于生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系,在富含纖維素的環(huán)境中,纖維素分解菌的含量相對提高,因此從這種土樣

中獲得目的微生物的幾率要高于一般環(huán)境。

3.將濾紙埋在土壤中有什么作用?你認為濾紙應(yīng)當埋進土壤多深?

答:將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對聚集,事實上是人工設(shè)置纖維素分解菌生存的相宜環(huán)境。一般應(yīng)將

紙埋于深約10cm左右腐殖土壤中。

4.想一想,這兩種方法各有哪些優(yōu)點與不足?你準備選用哪一種方法?兩種剛果紅染色法的比較

方法一是傳統(tǒng)的方法,缺點是操作繁瑣,加入剛果紅溶液會使菌落之間發(fā)生混雜;其優(yōu)點是這樣顯示出的顏色反

應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用。方法二的優(yōu)點是操作簡便,不存在菌落混雜問題,缺點是由于纖維素和瓊脂、

土豆汁中都含有淀粉類物質(zhì),可以使能夠產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。但這種只產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)

生的透亮圈較為模糊,因為培育基中纖維素占主要地位,因此可以與纖維素酶產(chǎn)生的透亮圈相區(qū)分。方法二的另

一缺點是:有些微生物具有降解色素的實力,它們在長時間培育過程中會降解剛果紅形成明顯的透亮圈,與纖維

素分解菌不易區(qū)分。

5.為什么選擇培育能夠“濃縮”所需的微生物?

答:在選擇培育的條件下,可以使那些能夠適應(yīng)這種養(yǎng)分條件的微生物得到快速繁殖,而那些不適應(yīng)這種養(yǎng)分條

件的微生物的繁殖被抑制,因此可以起到“濃縮”的作用。

四、練習

2.答:流程圖表示如下。

土壤取樣一選擇培育(此步是否須要,應(yīng)依據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的多少來確定)一梯度稀釋一將菌懸液涂布到

有特定選擇作用的培育基上一選擇單菌落一發(fā)酵培育

專題3植物的組織培育技術(shù)

課題1菊花的組織培育

一、無菌技術(shù)是植物組織培育能否獲得勝利的關(guān)鍵

植物組織培育不同于桿插、分根、葉插等常規(guī)無性繁殖。由于植物組織培育所利用的植物材料體積小、抗性差,

所以對培育條件的要求較高,對無菌操作的要求特別嚴格。假如不當心引起污染,將可能造成培育工作的前功盡

棄。

°無菌技術(shù)包括培育基消毒滅菌和植物材料(外植體)的消毒滅菌。對培育材料進行表面滅菌時,一方面要考

慮藥劑的消毒效果;另一方面還要考慮植物材料的耐受實力。不同藥劑、不同植物材料,甚至不同器官要區(qū)分對

待。

二、妥當處理被污染的培育物

即使對于有閱歷的操作人員,操作后出現(xiàn)培育物被污染的狀況也常有。一般狀況下,細菌污染可能是由接種人員

造成的,如未戴口罩,接種時說話,或手及器械消毒不嚴等。真菌污染可能是植物材料滅菌不當。須要特殊留意

的是,一旦發(fā)覺培育材料被污染,特殊是真菌性污染,肯定不要打開培育瓶。應(yīng)先將全部被污染的培育瓶統(tǒng)一放

在高壓蒸汽鍋內(nèi)進行高壓蒸汽滅菌,然后再打開培育瓶,進行清洗。

三、有毒藥品的用后處理

外植體滅菌用過的有毒藥品要妥當處理(如氯化汞等),以免引起環(huán)境污染。一般應(yīng)收集后統(tǒng)一交給有關(guān)專業(yè)部

門處理。

四、課題成果評價

(-)對接種操作中污染狀況的分析

接種3?4d后,在接種操作中被雜菌污染的培育物會表現(xiàn)出被污染的現(xiàn)象。請學生適時統(tǒng)計污染率,分析接種

操作是否符合無菌要求。

(-)是否完成了對植物組織的脫分化和再分化

視察試驗結(jié)果,看看是否培育出了愈傷組織,記錄多長時間長出愈傷組織。統(tǒng)計更換培育基后愈傷組織進一步分

化成根和芽的比例和時間。

(三)是否進行了統(tǒng)計、比照與記錄

做好統(tǒng)計和比照,填好結(jié)果記錄表,培育嚴謹?shù)目茖W看法。從試驗的第一步起先就要做好試驗記錄,可以分組配

制不同培育基,如誘導愈傷或干脆分化叢芽的培育基,然后做不同配方的比較。

(四)生根苗的移栽是否合格

生根苗移栽技術(shù)的關(guān)鍵是既要充分清洗根系表面的培育基,又不能傷及根系。一般運用無土栽培的方法。培育基

質(zhì)要提前消毒,可以向培育基質(zhì)噴灑質(zhì)量分數(shù)為5%的高鋸酸鉀,并用塑料薄膜覆蓋12h。掀開塑料薄膜后24h

才能移栽。新移栽的組培苗要在溫室過渡幾天,等壯苗后再定植大田或進行盆栽。統(tǒng)計自己移栽的成活率,看看

移栽是否合格。

五、答案和提示

(一)旁欄思索題

1.你能說出各種養(yǎng)分物質(zhì)的作用嗎?同專題2中微生物培育基的配方相比,MS培育基的配方有哪些明顯的不同?

答:微量元素和大量元素供應(yīng)植物細胞生活所必需的無機鹽;蔗糖供應(yīng)碳源,同時能夠維持細胞的滲透壓;甘氨

酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿意離體植物細胞在正常代謝途徑受到肯定影響后所產(chǎn)生的特殊養(yǎng)分需求。微生物

培育基以有機養(yǎng)分為主。與微生物的培育不同,MS培育基則需供應(yīng)大量無機養(yǎng)分,無機鹽混合物包括植物生長

必需的大量元素和微量元素兩大類。

2.你準備做幾組重復?你準備設(shè)置比照試驗嗎?

答:可以生分組,做不同的材料或配方,最終分別匯報成果。但每種材料或配方至少要做一組以上的重復。設(shè)置

比照試驗可以取用一個經(jīng)過滅菌的裝有培育基的錐形瓶,與接種操作后的錐形瓶一同培育,用以說明培育基制作

合格,沒有被雜菌污染。

(二)練習

1.答:植物組織培育所利用的植物材料體積小、抗性差,對培育條件的要求較高。用于植物組織培育的培育基同

樣適合于某些微生物的生長,如一些細菌、真菌等的生長。而培育物一旦受到微生物的污染,就會導致試驗前功

盡棄,因此要進行嚴格的無菌操作。

2.答:外植體的生理狀態(tài)是勝利進行組織培育的重要條件之一。生長旺盛的嫩枝生理狀況好,簡單誘導脫分化和

再分化。

課題2月季的花藥培育

假益接種的花藥長出愈傷組織或釋放出胚狀體,花藥培育的第一步就勝利了。要適時轉(zhuǎn)換培育基,以便愈傷組織

或胚狀體進一步分化成再生植株。

二、答案和提示

(一)旁欄思索題

為什么花瓣松動會給材料的消毒帶來困難?

答:花瓣松動后,微生物就可能侵入到花藥,給材料的消毒帶來困難。

(二)練習

1.答:F2代紫色甜玉米的基因型組成可能為Aasusu或AAsusu。假如運用常規(guī)育種方法,將F2代中的紫色甜玉

米與白色甜玉米(aasusu)進行測交,可以選擇出基因型為AAsusu純種紫色甜玉米。但這種方法比較繁瑣,耗

時也較長,須要至少三年的選種和育種時間。假如利用花藥培育的技術(shù),在F1代產(chǎn)生的花粉中就可能有Asu的

組合,再將花粉植株進行染色體加倍,就可以干脆得到紫色甜玉米的純合體(AAsusu)o這種方法可以大大縮短

育種周期。

2.答:植物組織培育技術(shù)與花藥培育技術(shù)的相同之處是:培育基配制方法、無菌技術(shù)及接種操作等基本相同。兩

者的不同之處在于:花藥培育的選材特別重要,需事先摸索時期相宜的花蕾;花藥裂開后釋放出的愈傷組織或胚

狀體也要剛好更換培育基;花藥培育對培育基配方的要求更為嚴格。這些都使花藥培育的難度大為增加。

課題1DNA的粗撮與鑒定技術(shù)

一、課題成果評價

(一)是否提取出了DNA

視察你提取的DNA顏色,假如不是白色絲狀物,說明DNA中的雜質(zhì)較多;二苯胺鑒定出現(xiàn)藍色說明試驗基本勝利,

假如不呈現(xiàn)藍色,可能所提取的DNA含量低,或是試驗操作中出現(xiàn)錯誤,須要重新制備。

(二)分析DNA中的雜質(zhì)

本試驗提取的DNA粗制品有可能仍舊含有核蛋白、多糖等雜質(zhì)。

(三)不同試驗方法的比較

對于不同的試驗方法,本課題可以采納分組的方法進行探討。首先選取不同的試驗材料,其次同種材料還可以采

納不同方法,從多方面比較試驗結(jié)果,如DNA的純度、DNA的顏色、二苯胺顯色的深淺等,看看哪種試驗材料、

哪種提取方法的效果更好。

二、旁欄思索題

1.為什么加入蒸儲水能使雞血細胞裂開?

答:蒸儲水對于雞血細胞來說是一種低滲液體,水分可以大量進入血細胞內(nèi),使血細胞脹裂,再加上攪拌的機械

作用,就加速了雞血細胞的裂開(細胞膜和核膜的裂開),從而釋放出DNA。

2.加入洗滌劑和食鹽的作用分別是什么?

答:洗滌劑是一些離子去污劑,能溶解細胞膜,有利于DNA的釋放;食鹽的主要成分是NaCL有利于DNA的溶

解。

3.假如研磨不充分,會對試驗結(jié)果產(chǎn)生怎樣的影響?

答:研磨不充分會使細胞核內(nèi)的DNA釋放不完全,提取的DNA量變少,影響試驗結(jié)果,導致看不到絲狀沉淀物、

用二苯胺鑒定不顯示藍色等。

4.此步驟獲得的濾液中可能含有哪些細胞成分?

答:可能含有核蛋白、多糖和RNA等雜質(zhì)。

5.為什么反復地溶解與析出DNA,能夠去除雜質(zhì)?

答:用高鹽濃度的溶液溶解DNA,能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì);用低鹽濃度使DNA析出,能除去溶解在低鹽

溶液中的雜質(zhì)。因此,通過反復溶解與析出DNA,就能夠除去與DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)。

6.方案二與方案三的原理有什么不同?

答:方案二是利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白,從而使提取的DNA與蛋白質(zhì)分開;方案三利用的是DNA和蛋白質(zhì)對高溫

耐受性的不同,從而使蛋白質(zhì)變性,與DNA分別。

三、練習

1.答:提取DNA的第一步是材料的選取,其目的是肯定要選取DNA含量較高的生物材料,否則會由于試驗過程

中或多或少的損失而造成檢測的困難;其次步是DNA的釋放和溶解,這一步是試驗勝利與否的關(guān)鍵,要盡可能使

細胞內(nèi)的DNA全部溶解;第三步是DNA的純化,即依據(jù)DNA的溶解特性、對酶及高溫的耐受性的不同等特性,最

大限度地將DNA與雜質(zhì)分開;最終一步是對DNA進行鑒定,這是對整個試驗的結(jié)果的檢測。

2.答:提取蛋白質(zhì)比提取DNA的難度大。這是因為,與DNA相比,蛋白質(zhì)對溫度、鹽濃度、pH等條件要敏感得

多,很簡單失活;并且蛋白質(zhì)的空間結(jié)構(gòu)多種多樣,理化性質(zhì)各不相同,使得蛋白質(zhì)的提取沒有一種統(tǒng)一的方法,

只能依據(jù)特定蛋白質(zhì)的特性摸索提取的條件,設(shè)計特定的方法。

專題6植物有效成分的提取

一、是否提取出了植物精油

視察提取出的玫瑰精油或橘皮精油,從顏色、氣味等方面來評價所提取的精油的純度和質(zhì)量。從玫瑰花提取的芳

香油是淺黃色至黃色的液體,并帶有甜韻的玫瑰香;從橘皮提取的橘皮精油無色透亮,具有迷人的橘香味。本課

題只是對兩種精油進行了初步的提取,其中仍舊含有大量的雜質(zhì)。

二、出油率的計算

依靠教科書供應(yīng)的公式計算出油率。假如出油率高,說明試驗方案設(shè)計合理;假如出油率低,老師可以幫助學生

從試驗方法的選擇、試驗過程的操作等各方面分析緣由,改進后再作嘗試。

三、答案和提示

(一、是否出現(xiàn)對應(yīng)的層析帶

假如萃取樣品中出現(xiàn)了和標準樣品一樣的層析帶,說明提取胡蘿卜素的試驗勝利。由于提取物中含有雜質(zhì),萃取

樣品的顏色可能比標準樣品的顏色淺,我們也可以

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