西瓜炭疽病鑒定與評價技術(shù)規(guī)程

1霜霉病抗病性鑒定評價的術(shù)語和定義、抗病性鑒定方法本文件適用于各種西瓜（包括西瓜（CitrulluslanatusL.）種下2個亞種和16個變種，以及育種種質(zhì)NY/T2118蔬菜育苗基質(zhì)24接種體制備4.1基本設(shè)備持在20℃~30℃)、塑料盆、鋁鍋、電爐、培養(yǎng)皿、試管、剪刀、鑷子、廣口瓶、酒精燈、濾紙、三4.2接種體分離物，采用單孢分離純化。分離物經(jīng)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定，以及致病性測定確認(rèn)為西瓜炭疽病菌（Colletotrrichumorbiculare(Berk.4.3接種體確定選擇分布較廣、致病力較強(qiáng)的病原菌優(yōu)勢菌株作為人工接種鑒定4.4病原物保存將西瓜炭疽病菌接種于PDA平板培養(yǎng)基上，并在接種點周圍28℃培養(yǎng)7d后，取出濾紙片，經(jīng)真空干燥后于-20℃~-80℃的低溫冰箱中保存?；?qū)⑽鞴咸烤也【臃N于PDA斜面，在25℃~28℃培養(yǎng)7d后，置4℃~8℃的冰箱中保存。34.5接種體繁殖西瓜炭疽病菌接種體接種于PDA平板培養(yǎng)基上，置于25℃~28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7d～10d，用5鑒定西瓜苗培育將待鑒定西瓜的種子經(jīng)5%次氯酸鈉溶液浸種10min，用清水沖洗3次，再用清水浸泡5h后，置于30℃~32℃恒溫箱中保濕催芽。露白發(fā)芽后播植于溫室，采用營養(yǎng)缽盆栽法進(jìn)行育苗，基質(zhì)應(yīng)自來水澆透育苗基質(zhì)，隨后將已催芽的待鑒定西瓜種子播于上述塑料營養(yǎng)缽中，每缽1粒種子，然后用泥炭育苗基質(zhì)覆蓋，以蓋住種子為宜。重復(fù)3次，每重復(fù)30缽，5.5接種前管理播種后將塑料缽置于溫室中，進(jìn)行培育，出苗前，溫室溫度保持在25℃~30℃,保持盆中土壤濕度；西瓜苗出土后，溫室溫度保持在23℃每年4月～6月和9月～11月為西瓜對炭疽病抗性鑒定與抗4接種后的西瓜苗，置于溫度為23℃~28℃的溫室中，黑暗保濕（RH85%～100%）24h；以后每天光照12h～14h，溫室溫度保持在23℃~28℃,適時澆水，保持正常栽培管理，不施用殺菌劑。接種后20d～25d時進(jìn)行調(diào)查。也可根據(jù)感病的對照品種病級擴(kuò)展到最高病級的將待鑒定西瓜的種子經(jīng)5%次氯酸鈉溶液浸種10min，用清水沖洗3次，再用清水浸泡5h后，置于30℃~32℃恒溫箱中保濕催芽。出芽后，挑選胚根長至0.2cm～0.3cm的種子，一起播于裝有草炭、蛭石和菜田土（2：1：1）的滅菌育苗基質(zhì)的育苗盤中，每份待鑒定的西瓜品種（系）播種30株，重復(fù)3接種后的西瓜苗，置于溫度為25℃~30℃的溫室中，黑暗保濕（RH85%～100%）24h；以后每天5株發(fā)病率以“Ri”計，數(shù)值以“%9.1鑒定有效性判別當(dāng)感病對照品種達(dá)到其相應(yīng)感病程度（DI≥50.0），該批9.2抗病性劃分1HR2R345S69.3鑒定結(jié)果記錄編號品種/種質(zhì)名稱來源重復(fù)病情級別株發(fā)病率%病情指數(shù)平均病指抗性評價013579ⅠⅡⅢ……播種日期接種日期接種生育期接種病原物分離編號接種病原物株系類型調(diào)查時間鑒定人（簽字）：校核人（簽字）：鑒定技術(shù)負(fù)責(zé)人（簽字）：鑒定單位蓋章）7A.1PDA培養(yǎng)基200g，切成小塊放入鍋中，加水1000ml，在加熱器上加熱至沸騰，維持30min，用2層紗布趁熱在量杯上過濾，棄濾渣，取濾液補(bǔ)充水分到1000ml；把濾液放入鍋中，加入葡萄糖20g，瓊脂17g，然后至6.8～7.0。將配制的培養(yǎng)基分裝入試管或500ml三角瓶內(nèi)，在試管口或三角燒瓶口上塞上棉塞或泡沫度的1/5，滅菌后制成斜面；三角瓶的分裝量以不超過其容積的一半為宜，滅菌后倒入滅菌培養(yǎng)皿，制8西瓜炭疽病菌：Colletrichumorbiculare(西瓜炭疽病