專(zhuān)題01發(fā)酵工程與基因工程（期末考題猜想）（9大題型）（原卷版）

專(zhuān)題01發(fā)酵工程與基因工程【題型1傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用】【題型2微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用】【題型3酶的研究與應(yīng)用】【題型4基因工程的基本工具】【題型5基因工程的基本操作程序】【題型6基因工程的應(yīng)用】【題型7蛋白質(zhì)工程】【題型8發(fā)酵工程綜合】【題型9基因工程綜合】01傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用【例1】下列關(guān)于微生物培養(yǎng)和利用的敘述，正確的是（）A．培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)濃度越高，對(duì)微生物的生長(zhǎng)越有利B．接種前需對(duì)培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、操作者雙手等進(jìn)行嚴(yán)格的滅菌處理C．接種時(shí)連續(xù)劃線的目的是將聚集的菌種逐步稀釋獲得單個(gè)菌落D．腌制泡菜的過(guò)程中亞硝酸鹽含量變化是先減少后增加【變式11】南通某興趣小組按下圖流程制作蘋(píng)果醋。相關(guān)敘述正確的是（

）A．菌種甲、乙都具有線粒體，都能進(jìn)行有氧呼吸B．加糖的目的是直接為菌種甲、乙提供碳源和能源C．菌種甲、乙發(fā)酵過(guò)程中，發(fā)酵液pH下降、溫度上升D．發(fā)酵結(jié)束后取蘋(píng)果醋加酸性重鉻酸鉀檢測(cè)發(fā)酵效果【變式12】釀造陳醋的主要原料是高粱、麩皮、谷糠等，還需要加入一些釀造用水，釀造流程如圖所示。大曲是一種由糯米、小麥、大麥等多種谷物加工而成的發(fā)酵劑，其中富含發(fā)酵酵母和細(xì)菌。糖化主要是利用大曲中微生物產(chǎn)生的淀粉酶將原料中的淀粉分解成單糖。下列敘述正確的是（

）A．為了提高發(fā)酵效率，應(yīng)在原料蒸熟后立即加入大曲B．省略糖化的步驟，對(duì)陳醋的釀造不會(huì)產(chǎn)生影響C．酒精發(fā)酵和醋酸發(fā)酵所需溫度不同，但都會(huì)使發(fā)酵液的pH降低D．各種微生物都適合在陳醋中生長(zhǎng)，因此需通過(guò)殺菌來(lái)延長(zhǎng)保質(zhì)期【變式13】某研究小組設(shè)計(jì)了一個(gè)利用作物秸稈生產(chǎn)燃料乙醇的小型實(shí)驗(yàn)。其主要步驟是：先將粉碎的作物秸稈堆放在底部有小孔的托盤(pán)中，噴水浸潤(rùn)、接種菌T，培養(yǎng)一段時(shí)間后，再用清水淋洗秸稈堆（清水淋洗時(shí)菌T不會(huì)流失），在裝有淋洗液的瓶中接種酵母菌，進(jìn)行乙醇發(fā)酵（酒精發(fā)酵）。實(shí)驗(yàn)流程如圖所示。下列選項(xiàng)不正確的是（）A．菌T可能產(chǎn)生分解纖維素的酶，能夠高效催化纖維素分解B．淋洗液中還需要加入氮源等營(yíng)養(yǎng)成分，氮源的主要作用是合成一些氨基酸、核苷酸等含氮物質(zhì)C．可采用高壓蒸汽滅菌法對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌，在使用該方法時(shí)需要注意必須將冷空氣充分排除再開(kāi)始加壓D．將酵母菌接種到滅菌后的培養(yǎng)基中，擰緊瓶蓋，置于適宜溫度下培養(yǎng)、發(fā)酵。發(fā)酵過(guò)程中，要始終保持密封狀態(tài)02微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用【例2】采用平板劃線法和稀釋涂布平板法能將單個(gè)微生物分散在固體培養(yǎng)基上。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．由單一個(gè)體繁殖所獲得的微生物群體稱(chēng)為純培養(yǎng)物B．平板劃線法用到的接種環(huán)和稀釋涂布平板法用到的涂布器均要滅菌處理C．平板劃線法操作過(guò)程中每次劃線前都需要蘸取菌液D．稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)得到的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目要少【變式21】下表為培養(yǎng)某種微生物的培養(yǎng)基配方，下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）成分NaNO3K2HPO4KClMgSO4?7H2OFeSO4（CH2O）H2O青霉素（可殺死細(xì)菌）含量3g1g0.5g0.5g0.01g30g1L0.1萬(wàn)單位A．依物理性質(zhì)劃分，該培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基B．由培養(yǎng)基的原料可知，所培養(yǎng)微生物的同化作用類(lèi)型是異養(yǎng)型，培養(yǎng)的微生物可以是酵母菌C．若用該培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選能分解纖維素的細(xì)菌，則應(yīng)除去（CH2O），再添加纖維素作為唯一碳源D．培養(yǎng)基中的唯一碳源是（CH2O），唯一氮源是NaNO3【變式22】自然界中微生物種類(lèi)龐雜，要對(duì)其中的某種微生物進(jìn)行研究，就必須獲得具純凈培養(yǎng)物。下列關(guān)于微生物分離和培養(yǎng)的敘述，錯(cuò)誤的是（）A．培養(yǎng)基中加入牛肉膏和蛋白胨可以同時(shí)為微生物提供碳源和氮源B．以尿素作為唯一氮源的培養(yǎng)基可以分離得到能分解尿素的細(xì)菌C．可以采用高壓蒸汽滅菌法對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌D．在培養(yǎng)霉菌時(shí)一般需要將培養(yǎng)基調(diào)至中性或弱堿性【變式23】某科研小組用如圖所示方法統(tǒng)計(jì)1g土壤中淀粉分解菌的數(shù)量。下列敘述正確的是（

）A．該種方法的計(jì)數(shù)結(jié)果通常比顯微鏡直接計(jì)數(shù)法的結(jié)果小B．平板中應(yīng)以淀粉為唯一碳源，應(yīng)選擇稀釋106倍的平板計(jì)數(shù)C．應(yīng)將涂布好的平板立即倒置放入30～37℃恒溫箱中培養(yǎng)D．經(jīng)計(jì)算可知1g土壤中有5×107個(gè)淀粉分解菌03酶的研究與應(yīng)用【例3】加酶洗衣粉是指含有酶制劑的洗衣粉。某同學(xué)通過(guò)實(shí)驗(yàn)比較了幾種洗衣粉的去漬效果（“+”越多表示去漬效果越好），實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)下表。加酶洗衣粉A加酶洗衣粉B加酶洗衣粉C無(wú)酶洗衣粉（對(duì)照）血漬++++++++油漬++++++++下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．通常用清水洗滌衣服上的新鮮血跡時(shí)，不應(yīng)該使用開(kāi)水B．加酶洗衣粉A、B中添加的酶分別是蛋白酶、脂肪酶C．表中加酶洗衣粉B和加酶洗衣粉C不宜用于洗滌蠶絲織物D．相對(duì)于無(wú)酶洗衣粉，加酶洗衣粉去漬效果好【變式31】酶制劑在人們的生活實(shí)踐中有著廣泛的應(yīng)用，下列對(duì)酶的應(yīng)用的敘述，正確的是（

）A．加酶洗衣粉中的酶在結(jié)構(gòu)上比較穩(wěn)定，一般直接來(lái)自生物體B．運(yùn)用果膠酶可提高果汁的產(chǎn)量，并使果汁變得清亮C．由于消化酶是蛋白質(zhì)，故服用多酶片輔助消化食物時(shí)，效果并不理想D．胃蛋白酶隨食糜進(jìn)入小腸后可繼續(xù)發(fā)揮作用【變式32】紡織廠常用枯草芽孢桿菌生產(chǎn)的α淀粉酶除去織物中的淀粉。為探究α淀粉酶的最適溫度，某科研小組在適宜條件下進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，棉花初始質(zhì)量為5g，每組在各自溫度下保溫20min后測(cè)量棉花減重，結(jié)果如下表所示。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（）組別123456棉花減重/g00.120.160.220.230.15溫度/℃253545556575A．該實(shí)驗(yàn)應(yīng)保證每組的α淀粉酶濃度、體積及棉花的初始質(zhì)量相同且適宜B．每組應(yīng)先將α淀粉酶與棉花混合，再在相應(yīng)溫度條件下保溫處理C．圖中實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明α淀粉酶的最適溫度范圍為55℃75℃，具體溫度還需要進(jìn)一步探究D．0℃左右時(shí)，酶的活性很低，但酶的空間結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，因此酶制劑適宜在低溫下保存【變式33】酶是活細(xì)胞產(chǎn)生的具有催化作用的有機(jī)物，在細(xì)胞代謝中起著重要作用，在食品生產(chǎn)中，酶的應(yīng)用非常廣泛，下列說(shuō)法錯(cuò)誤的是（

）A．溶菌酶能夠溶解細(xì)菌的細(xì)胞壁，具有抗菌消炎作用B．酶都需在核糖體中才能合成，且只能在胞內(nèi)起作用C．果膠酶能分解果膠，提高果汁產(chǎn)量和澄清度D．工業(yè)化生產(chǎn)啤酒時(shí)，ɑ－淀粉酶可以增強(qiáng)糖化作用04基因工程的基本工具】【例4】研究人員將玉米的光敏色素基因A（256bp）導(dǎo)入到棉花體內(nèi)，對(duì)獲得的1~4號(hào)轉(zhuǎn)基因棉花進(jìn)行基因A的檢測(cè)，電泳結(jié)果如圖。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．轉(zhuǎn)基因技術(shù)用到的工具有限制酶、DNA連接酶和載體B．可采用花粉管通道法使基因A進(jìn)入棉花的胚囊C．PCR反應(yīng)過(guò)程中每次循環(huán)都要經(jīng)歷目的不同的兩次升溫和一次降溫D．由電泳結(jié)果可知，1、3和4號(hào)棉花均導(dǎo)入基因A且培育成功【變式41】基因工程需要三種工具——限制酶、DNA連接酶和載體。下列相關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A．不同限制酶切割后產(chǎn)生的DNA片段可能被某種DNA連接酶“縫合”B．常用載體質(zhì)粒的基本單位是脫氧核糖核酸，另外兩種工具的基本單位是氨基酸C．T4DNA連接酶可連接黏性末端和平末端，不具有專(zhuān)一性D．限制性核酸內(nèi)切酶主要從原核生物中分離獲得，具有識(shí)別特定核酸序列的能力【變式42】下列關(guān)于載體的敘述中，錯(cuò)誤的是（

）A．基因工程中所用的載體除質(zhì)粒外，還有噬菌體、動(dòng)植物病毒等B．質(zhì)粒DNA上要至少有一個(gè)限制酶切割位點(diǎn)C．質(zhì)粒是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、能自我復(fù)制的單鏈DNA分子D．質(zhì)粒上要有特殊的標(biāo)記基因，便于重組DNA分子的篩選【變式43】下列關(guān)于DNA粗提取與鑒定的敘述，錯(cuò)誤的是（

）A．DNA和蛋白質(zhì)都不溶于酒精B．DNA能溶于2mol/L的NaCl溶液C．提取DNA時(shí)，加入的酒精溶液應(yīng)預(yù)冷D．可用二苯胺試劑鑒定DNA05基因工程的基本操作程序【例5】常規(guī)PCR只能擴(kuò)增兩引物間的DNA區(qū)段，要擴(kuò)增已知DNA序列兩側(cè)的未知DNA序列，可用反向PCR技術(shù)。反向PCR技術(shù)擴(kuò)增的原理如圖所示。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．對(duì)M、N段酶切時(shí)要破壞4個(gè)磷酸二酯鍵，獲得3個(gè)DNA片段B．可以對(duì)M、N采用不同酶切，但要形成相同的黏性末端C．圖中引物，應(yīng)選擇引物1和引物4，且二者間不能互補(bǔ)配對(duì)D．PCR儀設(shè)置溫度時(shí)，一個(gè)循環(huán)依次是高溫變性、中溫復(fù)性、低溫延伸【變式51】某二倍體動(dòng)物種群有100個(gè)個(gè)體，其常染色體上某基因有A1、A2、A3三個(gè)等位基因。對(duì)這些個(gè)體的基因AA2、A3進(jìn)行PCR擴(kuò)增，凝膠電泳及統(tǒng)計(jì)結(jié)果如圖所示。該種群中A3的基因頻率是（

）A．52% B．27% C．32% D．2%【變式52】當(dāng)蘋(píng)果削好皮或切開(kāi)后放置一會(huì)兒，切口面的顏色就會(huì)由淺變深，最后變成深褐色。發(fā)生色變反應(yīng)主要是因?yàn)檫@些植物體內(nèi)存在著酚類(lèi)化合物。酚類(lèi)化合物易被氧化成醌類(lèi)化合物，即發(fā)生變色反應(yīng)變成黃色，隨著反應(yīng)的量的增加顏色就逐漸加深，最后變成深褐色。氧化反應(yīng)的發(fā)生是由于與空氣中的氧接觸和細(xì)胞中酚氧化酶的釋放。下圖是培育抗褐變的轉(zhuǎn)基因蘋(píng)果的過(guò)程，下列敘述不正確的是（

）A．要想獲得抗褐變的轉(zhuǎn)基因蘋(píng)果，目的基因可選擇抑制酚氧化酶表達(dá)的基因B．實(shí)施步驟①是需要限制性內(nèi)切核酸酶和DNA聚合酶的參與C．步驟④階段使用的MS培養(yǎng)基中要加入植物激素和卡那霉素等物質(zhì)D．為了評(píng)估目的基因抑制蘋(píng)果褐變的效果，可與導(dǎo)入含pBI121質(zhì)粒的植株作對(duì)照【變式53】為了獲得未知序列的堿基序列，可以通過(guò)利用已知序列設(shè)計(jì)的引物對(duì)未知序列進(jìn)行擴(kuò)增，再對(duì)其擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，其過(guò)程如圖。下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．圖示過(guò)程中需要用到限制酶、DNA連接酶和耐高溫的DNA聚合酶B．以環(huán)化的DNA為模板進(jìn)行PCR時(shí)，應(yīng)選擇引物2和引物3C．第三輪循環(huán)產(chǎn)物中只含有一種引物的DNA片段所占的比例為D．常采用瓊脂糖凝膠電泳鑒定PCR產(chǎn)物，產(chǎn)物的相對(duì)分子質(zhì)量比環(huán)化DNA小06基因工程的應(yīng)用【例6】下列實(shí)踐活動(dòng)包含基因工程技術(shù)的是（）A．將含抗病基因的重組DNA導(dǎo)入玉米細(xì)胞，經(jīng)組織培養(yǎng)獲得抗病植株B．抗蟲(chóng)小麥與矮稈小麥雜交，通過(guò)基因重組獲得抗蟲(chóng)矮稈小麥C．水稻F1花藥經(jīng)培養(yǎng)和染色體數(shù)目加倍，獲得基因型純合新品種D．用射線照射大豆使其基因結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，獲得種子性狀發(fā)生變異的大豆【變式61】據(jù)悉多基因編輯豬皮移植手術(shù)已獲成功，下列敘述錯(cuò)誤的是（

）A．為防止免疫排斥反應(yīng)，應(yīng)該把患者的抗體基因進(jìn)行刪除B．皮膚在人體的免疫中發(fā)揮重要作用，它屬于人體免疫的第一道防線C．器官移植中的免疫排斥反應(yīng)既有細(xì)胞免疫也有體液免疫D．更多的人加入到自愿捐獻(xiàn)器官行列中，有助于緩解供體器官的短缺【變式62】下列關(guān)于基因工程及其應(yīng)用的敘述，正確的是（

）A．農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法中農(nóng)桿菌可以直接將目的基因轉(zhuǎn)移到植物染色體的任意位置B．用PCR技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)基因棉花Bt基因的表達(dá)情況來(lái)判斷轉(zhuǎn)基因抗蟲(chóng)棉培育是否成功C．建構(gòu)乳腺生物反應(yīng)器時(shí)將特定基因?qū)氲饺橄偌?xì)胞中D．通過(guò)基因工程獲得工程菌，可用于生產(chǎn)人源胰島素【變式63】人乳鐵蛋白（hLF）是乳汁中一種重要的非血紅素鐵結(jié)合糖蛋白，具有抑菌、抗腫瘤等多種生理功能，被認(rèn)為是一種極具開(kāi)發(fā)潛力的食品添加劑。某科研團(tuán)隊(duì)將人乳鐵蛋白（hLF）基因轉(zhuǎn)入到山羊體內(nèi)，從山羊的乳液中獲得hLF，可以解決天然乳鐵蛋白資源短缺的問(wèn)題，下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A．可用PCR直接擴(kuò)增乳鐵蛋白的基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物B．重組載體中人乳鐵蛋白基因的啟動(dòng)子是乳腺蛋白基因啟動(dòng)子C．將目的基因?qū)肷窖蚴芫阎幸话銘?yīng)用的技術(shù)是顯微注射法D．檢測(cè)人乳鐵蛋白基因是否成功翻譯常采用抗原—抗體雜交技術(shù)07蛋白質(zhì)工程【例7】T4溶菌酶（A0）在溫度較高時(shí)易失去活性。研究人員通過(guò)蛋白質(zhì)工程對(duì)T4溶菌酶第3位上的異亮氨酸改成半胱氨酸，該處半胱氨酸可與第97位半胱氨酸之間形成一個(gè)二硫鍵，獲得了熱穩(wěn)定性高的T4溶菌酶（A1）。下列說(shuō)法正確的是（

）A．蛋白質(zhì)工程和基因工程的根本區(qū)別是操作對(duì)象的差異B．A0和A1空間結(jié)構(gòu)的差異是二者熱穩(wěn)定性不同的直接原因C．檢測(cè)A1活性時(shí)可先將A1與底物混合，再置于高溫環(huán)境中D．熱穩(wěn)定性高的T4溶菌酶（A1）是一種直接制造出的新蛋白質(zhì)，需要進(jìn)行功能的鑒定【變式71】蛋白質(zhì)工程取得的進(jìn)展向人們展示出了誘人的前景，下列關(guān)于蛋白質(zhì)工程應(yīng)用的敘述，錯(cuò)誤的是（

）A．經(jīng)蛋白質(zhì)工程改造后的抗體可以降低誘發(fā)免疫反應(yīng)的強(qiáng)度B．通過(guò)蛋白質(zhì)工程改造的胰島素類(lèi)似物能抑制胰島素的聚合C．利用膀胱生物反應(yīng)器生產(chǎn)人的生長(zhǎng)激素不屬于蛋白質(zhì)工程D．通過(guò)蛋白質(zhì)工程制造出了一種能降解石油的“超級(jí)細(xì)菌”【變式72】研究發(fā)現(xiàn)，天然胰島素制劑進(jìn)入血液循環(huán)后容易形成二聚體或六聚體，皮下注射胰島素后需要經(jīng)歷一個(gè)解離為單體的過(guò)程，這延緩了療效?？蒲腥藛T借助蛋白質(zhì)工程改變了胰島素中的某些氨基酸，有效抑制了胰島素的聚合，提高了胰島素的作用效果。下列有關(guān)敘述錯(cuò)誤的是（

）A．蛋白質(zhì)工程的實(shí)質(zhì)是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和改造B．氨基酸序列的差異是影響胰島素在患者體內(nèi)是否聚合的原因之一C．改造胰島素應(yīng)首先從設(shè)計(jì)胰島素基因中的脫氧核苷酸序列出發(fā)D．蛋白質(zhì)工程難度很大，主要是因?yàn)榈鞍踪|(zhì)發(fā)揮功能必須依賴(lài)于正確的高級(jí)結(jié)構(gòu)【變式73】干擾素是一種具有干擾病毒復(fù)制作用的糖蛋白，在臨床上被廣泛用于治療病毒感染性疾病。如果將干擾素分子上的一個(gè)半胱氨酸（密碼子：UGU、UGC）變成絲氨酸（密碼子：UCU、UCC、UCA、UCG），就可以延長(zhǎng)干擾素的體外保存時(shí)間?，F(xiàn)采用以下方法對(duì)干擾素進(jìn)行改造。下列相關(guān)敘述，錯(cuò)誤的是（

）A．預(yù)期新的干擾素的功能以干擾素基因的結(jié)構(gòu)和功能的關(guān)系為基礎(chǔ)B．對(duì)干擾素基因進(jìn)行定點(diǎn)突變（C→G）來(lái)實(shí)現(xiàn)堿基的替換C．新的干擾素基因必須插入到載體的啟動(dòng)子和終止子之間才能表達(dá)D．以上過(guò)程屬于蛋白質(zhì)工程，實(shí)質(zhì)是改造干擾素基因的結(jié)構(gòu)08發(fā)酵工程綜合【例8】蘋(píng)果醋富含果膠、維生素以及多種礦物質(zhì)等營(yíng)養(yǎng)成分，具有開(kāi)胃護(hù)肝、排毒養(yǎng)顏、減肥降脂等多種功效，是近年來(lái)的流行飲品。圖甲和圖乙分別表示蘋(píng)果醋的基本制作流程和簡(jiǎn)易制作裝置，請(qǐng)分析回答(1)酵母菌是制作蘋(píng)果酒的重要發(fā)酵菌種，從代謝類(lèi)型看，酵母菌屬于生物；酵母菌在無(wú)氧條件下利用葡萄糖進(jìn)行酒精發(fā)酵的反應(yīng)式是。酵母菌與醋酸菌細(xì)胞結(jié)構(gòu)的主要區(qū)別是。(2)先用圖乙所示裝置制作蘋(píng)果酒，加入鮮蘋(píng)果汁總量不要超過(guò)發(fā)酵瓶體積的。在果酒發(fā)酵過(guò)程中，氣閥a、b應(yīng)保持的狀態(tài)分別是、。（填“定期開(kāi)放”或“關(guān)閉”）(3)繼續(xù)用圖乙所示裝置制作蘋(píng)果醋，除打開(kāi)氣閥a、b以外，還需要從氣閥處不斷通入無(wú)菌空氣，并將發(fā)酵溫度適當(dāng)（填“升高”或“降低”）。(4)圖丙表示果酒發(fā)酵過(guò)程中，發(fā)酵液的糖度和酒精度隨時(shí)間變化的關(guān)系曲線圖。發(fā)酵的前24小時(shí)酒精度較低，原因是此階段酵母菌主要進(jìn)行呼吸，大量繁殖；96小時(shí)后酒精度基本維持穩(wěn)定的原因有消耗殆盡，高濃度酒精和代謝廢物會(huì)酵母菌的代謝而影響發(fā)酵?！咀兪?1】某生態(tài)研究小組為了從纖維素分解菌中獲取纖維素酶，以便將農(nóng)作物秸稈作為釀酒工業(yè)的原料，設(shè)計(jì)了如下操作流程分離提取較純的纖維素分解菌。請(qǐng)分析回答問(wèn)題：①土壤取樣→②選擇培養(yǎng)→③梯度稀釋→④將樣品接種到鑒別（加入剛果紅）纖維素分解菌的培養(yǎng)基上→⑤挑選菌落(1)纖維素分解菌選擇培養(yǎng)的培養(yǎng)基該如何設(shè)計(jì)。(2)在培養(yǎng)基中還要加入氮源等營(yíng)養(yǎng)成分，氮源的主要作用是。(3)圖甲所示接種方法常用的接種工具是接種環(huán)，對(duì)其通常用法滅菌。(4)若選擇培養(yǎng)后預(yù)估錐形瓶中細(xì)菌細(xì)胞數(shù)為2×107個(gè)/mL，若要在鑒別平板上涂布0.1ml稀釋后的菌液，且保證每個(gè)平板上長(zhǎng)出的菌落不超過(guò)200個(gè)，則至少應(yīng)將錐形瓶中的菌液稀釋倍。在鑒別培養(yǎng)基中含有KH2PO4和Na2HPO4，其作用是：（寫(xiě)兩點(diǎn)）。(5)圖乙中出現(xiàn)的無(wú)透明帶的菌落，其代謝類(lèi)型（同化作用類(lèi)型）最可能是。(6)流程圖中步驟⑤的操作中，應(yīng)挑選產(chǎn)生了的菌落。【變式82】蒽（C14H10）是石油化工領(lǐng)域常見(jiàn)的一種多環(huán)芳烴化合物，對(duì)生物有毒且難以降解，會(huì)帶來(lái)嚴(yán)重的環(huán)境問(wèn)題，因此從土壤中分離和篩選出蒽降解菌有非常重要的意義。研究人員進(jìn)行如下圖實(shí)驗(yàn)，成功地從環(huán)境樣品中分離得到蒽降解菌。已知蒽在水中溶解度低，含過(guò)量蒽的固體培養(yǎng)基不透明。請(qǐng)分析回答：(1)蒽降解菌富集培養(yǎng)基含有K2HPO4、NH4Cl、CaCl2、MgSO4、FeC3、MnSO4、水等，需再加入作為唯一碳源，該培養(yǎng)基屬于（填“固體”或“液體”）培養(yǎng)基。(2)配制培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)在滅菌（填“前”或“后”）調(diào)pH，對(duì)配制好的培養(yǎng)基應(yīng)采用法進(jìn)行滅菌處理。(3)上圖所示的分離、純化、計(jì)數(shù)蒽降解菌的方法是，使用該方法計(jì)算得到的細(xì)菌數(shù)量與待測(cè)樣品中實(shí)際的細(xì)菌數(shù)量相比往往偏（填“多”或“少”），其主要原因是一個(gè)菌落可以來(lái)源于個(gè)細(xì)胞。(4)實(shí)驗(yàn)中若在每個(gè)平板上涂布0.1mL稀釋了105倍后的菌液，且每個(gè)平板上長(zhǎng)出的菌落數(shù)約為150個(gè)，則初步估測(cè)A中細(xì)菌細(xì)胞數(shù)為個(gè)/mL。(5)研究人員為了進(jìn)一步篩選出高降解能力的菌種，對(duì)上圖得到的菌株再次進(jìn)行純化培養(yǎng)，測(cè)量不同菌株形成的菌落及透明圈直徑，結(jié)果見(jiàn)下表：編號(hào)菌落直徑（C，mm）透明圈直徑（H，mm）H/C菌株I8.113.01.6菌株Ⅱ5.111.22.2菌株Ⅲ9.517.11.8根據(jù)表中數(shù)據(jù)，可推斷其中降解蒽能力最高的菌株是?！咀兪?3】北京傳統(tǒng)小吃“豆汁”是一種以綠豆為原料，經(jīng)過(guò)一系列制作工藝流程（如下圖）得到的一種以酸味為主、摻雜著些許臭味的糊狀流體食品?；鞚{操作通常是將老漿直接倒入綠豆乳中，混合漿的沉淀與酸化過(guò)程實(shí)際屬于乳酸發(fā)酵，其主要產(chǎn)酸微生物為乳酸菌?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)混合漿發(fā)酵時(shí)所需乳酸菌主要來(lái)自。乳酸是由乳酸菌在氧條件下產(chǎn)生的，其產(chǎn)生量是影響豆汁風(fēng)味的重要因素之一。乳酸發(fā)酵過(guò)程中，能為乳酸菌同時(shí)提供碳源和能源的物質(zhì)主要是。(2)欲測(cè)定混合漿中乳酸菌的含量多少，研究小組可采用的接種方法是（填“平板劃線法”或“稀釋涂布平板法”），該方法測(cè)得的結(jié)果通常比實(shí)際值（填“更高”、“更低”或“相同”），原因是。(3)為了篩選出產(chǎn)酸能力強(qiáng)的乳酸菌菌種，研究小組將不同稀釋倍數(shù)的酸豆汁液接種到MRS固體（添加）培養(yǎng)基（添加質(zhì)量分?jǐn)?shù)1.5%碳酸鈣，遇酸發(fā)生反應(yīng)會(huì)出現(xiàn)透明圈）上，培養(yǎng)基常用的滅菌方法是法，此外，實(shí)驗(yàn)室滅菌方法還有。在適宜條件下培養(yǎng)一段時(shí)間后，應(yīng)挑?。ā坝小被颉皼](méi)有”）透明圈的菌落，進(jìn)行進(jìn)一步純化。09基因工程綜合【例9】結(jié)球甘藍(lán)是我國(guó)重要的蔬菜品種，危害甘藍(lán)生長(zhǎng)的主要是菜青蟲(chóng)等鱗翅目害蟲(chóng)。為使結(jié)球甘藍(lán)獲得抗蟲(chóng)性狀，科研人員將蘇云金芽孢桿菌中的BT毒蛋白基因?qū)虢Y(jié)球甘藍(lán)。回答下列問(wèn)題：(1)轉(zhuǎn)運(yùn)肽能引導(dǎo)細(xì)胞質(zhì)中合成的蛋白質(zhì)進(jìn)入葉綠體。為構(gòu)建BT毒蛋白基因和轉(zhuǎn)運(yùn)肽基因的融合基因（見(jiàn)圖1），需用限制酶處理相關(guān)的DNA片段，再用連接。圖1注：El、E2、E3、E4為限制酶。(2)構(gòu)建基因表達(dá)載體時(shí)，應(yīng)將融合基因插入Ti質(zhì)粒的區(qū)。用Ca2+處理農(nóng)桿菌后，使細(xì)胞處于一種的生理狀態(tài)，將其與基因表達(dá)載體混合完成轉(zhuǎn)化后，在添加的培養(yǎng)基中，經(jīng)篩選1得到含基因表達(dá)載體的農(nóng)桿菌。（注：GUS基因表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)染色能由無(wú)色變成藍(lán)色）(3)鑒定愈傷組織中是否含有目的基因，可以用分子水平檢測(cè)中的等技術(shù)，還可以通過(guò)肉眼觀察選擇的愈傷組織，以確定目的基因是否。(4)為獲得具有抗性的轉(zhuǎn)基因結(jié)球甘藍(lán)，還需要進(jìn)行個(gè)體生物學(xué)水平的簽定。請(qǐng)?jiān)O(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)方案?！咀兪?1】畢赤酵母（能以甲醇為唯一碳源）可作為生產(chǎn)抗原蛋白的工程菌。研究人員以pPIC9K質(zhì)粒為載體，構(gòu)建含乙型肝炎病毒表面抗原蛋白基因HBsAg的重組質(zhì)粒，酶切后導(dǎo)入畢赤酵母，經(jīng)同源重組整合到其染色體DNA上并實(shí)現(xiàn)復(fù)制與表達(dá)，部分過(guò)程如下圖。其中5'AOX1為AOX1基因啟動(dòng)子（一種甲醇誘導(dǎo)型啟動(dòng)子），3'AOX1（TT）為AOX1基因終止子，3'AOX1為AOX1基因的部分序列（同源重組的重要位點(diǎn)之一），Bg1Ⅱ、SacⅠ、SnaBⅠ和AyrⅡ?yàn)橄拗泼该盖形稽c(diǎn)，HBsAg基因中“→”表示基因轉(zhuǎn)錄方向。回答下列問(wèn)題。(1)過(guò)程①PCR除需要加入Taq酶、dNTP、緩沖液、Mg2+外，還需加入和。(2)為了后續(xù)將目的基因定向插入質(zhì)粒，在進(jìn)行過(guò)程①時(shí)應(yīng)在HBsAg基因兩側(cè)的A和B端分別添加的堿基序列是、。(3)過(guò)程③需用一定濃度的處理大腸桿菌使其成為感受態(tài)細(xì)胞，將重組質(zhì)粒導(dǎo)入大腸桿菌的目的是。(4)若用限制酶SnaBⅠ、Bg1Ⅱ聯(lián)合酶切pPIC9K質(zhì)粒，獲得的DNA片段的長(zhǎng)度分別是38kb、27kb、67kb用限制酶BgⅢ、AvrⅡ聯(lián)合酶切pPIC9K質(zhì)粒，得到的DNA片段的長(zhǎng)度分別是38kb、40kb、54kb：已知HBsAg基因長(zhǎng)度是55kb。則過(guò)程⑤應(yīng)選用的限制酶是，獲得的重組DNA的長(zhǎng)度為。(5)轉(zhuǎn)化的酵母菌需在培養(yǎng)基中加入甲醇，其目的是?！咀兪?2】T4溶菌酶是一種重要的工業(yè)用酶，但是它在溫度較高時(shí)容易失去活性?？蒲腥藛T借助PCR技術(shù)對(duì)T4溶菌酶的基因進(jìn)行改造，使T4溶菌酶的第3位異亮氨酸變?yōu)榘腚装彼?，并將改造的基因與質(zhì)粒重組后導(dǎo)入大腸桿菌，最終獲得耐熱型的T4溶菌酶，改造后的T4溶菌酶基因如圖所示，其中①～④表示引物?；卮鹣铝?/p>