氣相色譜方法開發(fā)經(jīng)驗(yàn)分享

2/2氣相色譜方法開發(fā)經(jīng)驗(yàn)分享

2023-06-0110:42一、方法開發(fā)前準(zhǔn)備

1、確認(rèn)儀器狀態(tài)正常，如有必要，更換洗針液、廢液，清洗進(jìn)樣針；更換進(jìn)樣襯管、隔墊，清洗噴嘴等；

2、確保要使用的色譜柱狀態(tài)正常，色譜柱柱頭潔凈，必要時(shí)可切去1-2cm，柱效正常；

3、了解要檢測(cè)的項(xiàng)目，中控，純度，溶殘等；

4、了解樣品性狀，溶解度、穩(wěn)定性等；例如遇水、遇醇是否穩(wěn)定——如易水解、易發(fā)生酯交換，避免用水、甲醇、乙醇作稀釋劑，首選乙腈作稀釋劑；遇酸、遇堿是否穩(wěn)定，例如Boc結(jié)構(gòu)不耐酸，應(yīng)換全新的襯管；高溫是否穩(wěn)定等；

5、根據(jù)化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)及理化性質(zhì)初步判斷使用的檢測(cè)手段；當(dāng)化合物有紫外吸收時(shí)首先考慮使用液相色譜法進(jìn)行檢測(cè)，當(dāng)化合物沒有紫外吸收，含有一定的碳?xì)淝覠岱€(wěn)定性好時(shí)，優(yōu)先考慮使用氣相色譜法；當(dāng)檢測(cè)物質(zhì)的限度很低（幾十ppm）時(shí)可使用LC-MS進(jìn)行檢測(cè)；常見的適合做氣相的化合物如下：分子量150以下，沸點(diǎn)350℃以下（大于400℃不能使用氣相），具有四元環(huán)，五元環(huán)，六元環(huán)結(jié)構(gòu)和部分橋環(huán)螺環(huán)結(jié)構(gòu)；當(dāng)化合物是鹽時(shí)需要進(jìn)行游離后進(jìn)樣；當(dāng)化合物含一個(gè)或多個(gè)羧基時(shí)，沸點(diǎn)會(huì)提高很多，不一定適用于氣相檢測(cè)；當(dāng)化合物同時(shí)含有氨基及羧基時(shí)（氨基酸），一般有很高的沸點(diǎn)，不能采用氣相檢測(cè)。

二、方法開發(fā)思路

1、當(dāng)化合物不是特殊的大極性時(shí)，首先用HP-5、DB-624的通用方法（12min或20min，盡量選用運(yùn)行時(shí)間長(zhǎng)一點(diǎn)，讓所有物質(zhì)都出峰完全）作初步篩選，觀察峰高、峰形及分離度；

2、當(dāng)峰高太低時(shí)，可以通過改變進(jìn)樣量或提高樣品濃度來增大峰高（1000-6000），氣相的樣品濃度一般大于20mg/mL；或者適當(dāng)調(diào)整分流比來提高響應(yīng)值（分流比越大，越容易造成分流歧視）；

3、當(dāng)峰形不好時(shí)，可以適當(dāng)提高柱流量，提高分流比，提高尾吹氣流量來使峰形變得窄而尖銳；當(dāng)峰形前延或拖尾時(shí)，可以更換極性更大一點(diǎn)的色譜柱；對(duì)于早流出組分拖尾嚴(yán)重的情況，先確保色譜柱安裝沒有漏氣，然后可以降低進(jìn)樣口溫度50°C或調(diào)整程序升溫初始溫度低于溶劑沸點(diǎn)10~25°C（升溫梯度變緩）；

4、當(dāng)峰形好，但分離度不夠，兩峰沒有分開時(shí)，可以調(diào)整柱溫，降低流速，調(diào)整程序升溫梯度緩慢一點(diǎn)等；

5、當(dāng)峰高、峰形及分離度都合格時(shí)，要考察方法的耐用性；改變進(jìn)樣口的溫度，看低溫下有無物質(zhì)殘留，高溫下有無物質(zhì)分解；調(diào)整