免疫診斷與防治課件

第二十二章

免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)主要內(nèi)容抗原或抗體的檢測(cè)免疫細(xì)胞的檢測(cè)高度特異性:表位---CDR表面化學(xué)集團(tuán)之間的可逆結(jié)合Ag-Ab通過(guò)非共價(jià)結(jié)合，影響易受溫度、酸堿度等影響而解離解離度取決于：親和力環(huán)境因素適宜的AgAb濃度和比例

抗原抗體比例合適肉眼可見(jiàn)IC(凝集物，沉淀物）AgAb反應(yīng)的兩個(gè)階段AgAb特異性結(jié)合：非共價(jià)結(jié)合可見(jiàn)反應(yīng)階段：正負(fù)電荷吸引形成較大復(fù)合物

第一節(jié)體外抗原抗體反應(yīng)特點(diǎn)1、抗原抗體反應(yīng)的可見(jiàn)性：比例適當(dāng)抗體過(guò)剩比例適當(dāng)抗原過(guò)剩抗原抗體的比例與其形成免疫復(fù)合物大小的關(guān)系二、抗原-抗體反應(yīng)影響因素1電解質(zhì)：中性或弱堿性條件，Ag/Ab帶負(fù)電0.85%的氯化鈉作為稀釋液2溫度：37℃3.酸堿度：pH6~8。二、檢測(cè)抗原抗體的體外試驗(yàn)?zāi)磻?yīng)（agglutinationreaction)沉淀反應(yīng)(precipitationreaction)免疫標(biāo)記技術(shù)（immunolabellingtechnique）

原理：抗原抗體在體外相遇，發(fā)生特異性結(jié)合，用已知Ag，可以判斷另外一種。（一）凝集反應(yīng)(agglutination)

顆粒性Ag與相應(yīng)Ab在電解質(zhì)存在的條件下結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集物。

直接凝集反應(yīng)間接(被動(dòng))凝集反應(yīng)1.直接凝集反應(yīng)①玻片法： 定性，已知抗體測(cè)未知抗原細(xì)菌的鑒定和分型人類ABO血型測(cè)定

1.直接凝集反應(yīng)②試管法： 半定量，用已知抗原測(cè)未知抗體的量

肥達(dá)氏試驗(yàn)-----診斷傷寒和付傷寒間接凝集反應(yīng)：可溶性Ag/Ab先吸附在某些顆粒載體上，形成為致敏顆粒，再與相應(yīng)Ab/Ab結(jié)合，出現(xiàn)凝集現(xiàn)象.常用的載體顆粒乳膠顆粒人O型RBC、綿羊RBC2.間接凝集反應(yīng)可溶性抗原 載體顆粒免疫微球（致敏載體）＋＋抗體凝集(二)沉淀反應(yīng)概念：可溶性Ag與相應(yīng)Ab在電解質(zhì)存在條件下結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的沉淀物。

可溶性抗原：血清蛋白、外毒素、組織浸出液、細(xì)菌濾液等

類型：

1）單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)(singlelagarimmunodiffusion)2）雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)(doubleagarimmunodiffusion)

1）單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)應(yīng)用：Ag鑒定，定量AbAg2）雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)(三)免疫標(biāo)記技術(shù)將抗體或抗原反應(yīng)與熒光素、酶、放射性核素等標(biāo)記技術(shù)相結(jié)合，通過(guò)檢測(cè)標(biāo)記物，間接測(cè)定Ag-Ab復(fù)合的一類方法。重要標(biāo)記技術(shù)：

1）免疫酶測(cè)定(enzymeimmunoassay,EIA)

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA）

2）免疫熒光技術(shù)(immunofluorescencetechnique)3）放射免疫測(cè)定法(radioimmunoassay,RIA)4）免疫膠體金技術(shù)（immunologicalcolloidalgoldsignature,ICS)1.酶免疫測(cè)定用酶標(biāo)記Ab進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)，通過(guò)酶作用于底物后顯色來(lái)判斷結(jié)果。

抗原抗體反應(yīng)＋酶促反應(yīng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

（enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA）將已知抗原/Ab吸附在固相載體表面，再用酶標(biāo)抗體/Ag進(jìn)行檢測(cè)的抗原抗體反應(yīng)。特點(diǎn)：敏感性高（ng-pg），操作簡(jiǎn)便類型：直接法(雙抗體夾心法):

Ab+Ag+Ab*

間接法:

Ag+Ab+抗Ab*

雙抗體夾心法2.免疫熒光技術(shù)免疫熒光技術(shù):用熒光素標(biāo)記一抗或二抗，檢測(cè)特異性抗原或抗體的方法。分類：

(1)直接熒光法

（2)間接熒光法結(jié)果觀察:(1)熒光顯微鏡

(2)流式細(xì)胞儀(Flowcytometer，F(xiàn)CM)3、放射免疫測(cè)定法(radioimmunoassay,RIA)用放射性核素標(biāo)記抗原或抗體進(jìn)行免疫學(xué)檢測(cè)的技術(shù)第二節(jié)免疫細(xì)胞功能的檢測(cè)

免疫細(xì)胞的分離、鑒定免疫細(xì)胞的功能測(cè)定一、免疫細(xì)胞的分離外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheralbloodmononuclearcell,PBMC）T、B細(xì)胞的分離與鑒定磁珠分離法熒光激活細(xì)胞分選儀分離法（流式細(xì)胞術(shù)，F(xiàn)CM)外周血單個(gè)核細(xì)胞外周血單個(gè)核細(xì)胞-----淋巴細(xì)胞分離液二、免疫細(xì)胞及其亞群的分離和分析免疫吸附分離法：Ab包被培養(yǎng)板免疫磁珠法：

Ab吸附在磁珠上，加至細(xì)胞懸液，細(xì)胞吸附磁珠吸附磁鐵，洗脫未結(jié)合細(xì)胞熒光激活細(xì)胞分離儀分離法（FACS）即流式細(xì)胞儀（Flowcytometry，F(xiàn)CM）抗原肽-MHC分子四聚體技術(shù)分析CTL流式細(xì)胞儀工作原理抗原肽-MHC四聚體技術(shù)

二、免疫細(xì)胞功能的測(cè)定

（一）

T細(xì)胞功能測(cè)定：

(1)T細(xì)胞增殖(轉(zhuǎn)化)試驗(yàn)：形態(tài)計(jì)數(shù)3H-TdR或125I-UdR摻入法MTT比色法（2）DTH檢測(cè)-----皮膚試驗(yàn)

淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)（形態(tài)學(xué)示意圖）

PHA刺激48~72小時(shí)培養(yǎng)液3H-TdRPHA淋巴細(xì)胞全血分層液離心過(guò)濾測(cè)量放射性淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)（3H-TdR摻入法）示意圖結(jié)核菌素注射受試者前臂內(nèi)側(cè)皮內(nèi)紅腫硬結(jié)＞0.5cm陽(yáng)性觀察局部超敏反應(yīng)48～72小時(shí)后無(wú)紅腫硬結(jié)或＜0.5cm陰性原理：Ⅳ型超敏反應(yīng)步驟： 皮膚試驗(yàn)（結(jié)核菌素試驗(yàn)）應(yīng)用： OT試驗(yàn)（二）B細(xì)胞功能測(cè)定

(1)單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)等測(cè)定Ig的含量

(2)抗體形成細(xì)胞測(cè)定

溶血空斑形成試驗(yàn)

（三）細(xì)胞毒試驗(yàn)51Cr釋放法LDH釋放法凋亡細(xì)胞檢測(cè)ELISPOT靶細(xì)胞51Cr洗滌去除游離的51Cr效應(yīng)細(xì)胞測(cè)量上清液中釋放的51Cr混合培養(yǎng)4-6小時(shí)細(xì)胞毒試驗(yàn)（51Cr釋放法）示意圖CK抗體包被的反應(yīng)板

CK抗原包被的反應(yīng)板加入淋巴細(xì)胞加入酶標(biāo)記二抗加入底物檢測(cè)抗原特異性B細(xì)胞加入底物T細(xì)胞產(chǎn)生CK的檢測(cè)加入淋巴細(xì)胞加入酶標(biāo)的CK抗體第二十三章免疫學(xué)防治適應(yīng)性免疫的獲得自然免疫人工免疫自然被動(dòng)免疫自然主動(dòng)免疫來(lái)自母親的抗體自然感染（隱性、顯性）人工被動(dòng)免疫抗毒素免疫球蛋白人工主動(dòng)免疫疫苗類毒素SIgAIgG

人工主動(dòng)免疫articleactiveimmunization用疫苗（抗原物質(zhì))接種機(jī)體，使之主動(dòng)產(chǎn)生適應(yīng)性免疫應(yīng)答，從而預(yù)防或治療疾病的方法。

人工被動(dòng)免疫articlepassitiveimmunization給人體注射特異性抗體，使之被動(dòng)獲得適應(yīng)性免疫應(yīng)答，達(dá)到治療或緊急預(yù)防疾病的方法。

兩類免疫方法的比較：人工免疫的種類自動(dòng)免疫被動(dòng)免疫

輸入物質(zhì)抗原抗體

免疫力出現(xiàn)的時(shí)間

1-4周后立即免疫力維持時(shí)間數(shù)月-數(shù)年2-3周

用途預(yù)防治療或緊急預(yù)防第一節(jié)免疫預(yù)防疫苗Vaccine：接種后能使機(jī)體對(duì)特定疾病產(chǎn)生免疫力的生物制劑類的統(tǒng)稱。疫苗的基本要求安全、有效、實(shí)用疫苗的種類及其發(fā)展第一代傳統(tǒng)疫苗：滅活疫苗、減毒活疫苗、類毒素、第二代疫苗：微生物的天然成分及其產(chǎn)物亞單位疫苗、重組蛋白疫苗第三代疫苗：基因疫苗

主動(dòng)免疫被動(dòng)免疫

(一)滅活疫苗（二）減毒活疫苗（三）類毒素病原體滅活減毒活病原體細(xì)菌外毒素脫毒體液免疫體液免疫、細(xì)胞免疫亞單位疫苗：提取病原體有效的免疫原成分制成的疫苗。

霍亂亞單位疫苗結(jié)合疫苗:細(xì)菌莢膜多糖+白喉類毒素DAN疫苗：用編碼病原體有效免疫原的基因與細(xì)菌質(zhì)粒構(gòu)建的重組體，注入人體，在宿主細(xì)胞中表達(dá)保護(hù)性抗原，從而誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答的疫苗。重組載體疫苗：用編碼病原體有效免疫原的基因插入載體（減毒的病毒/細(xì)菌）基因組中，接種后,疫苗增殖大量表達(dá)保護(hù)性Ag.新疫苗的發(fā)展合成肽疫苗：用人工合成多肽抗原連接適當(dāng)載體與佐劑制成的疫苗。豬口蹄疫合成肽疫苗基因工程疫苗：利用DNA重組技術(shù)制備的只含保護(hù)性抗原的純化疫苗。HBsAg疫苗三、疫苗的應(yīng)用

1.抗感染和計(jì)劃免疫

2.抗腫瘤：HPV疫苗

3.計(jì)劃生育:HCG4.防止免疫病理?yè)p傷:免疫偏離計(jì)劃免疫Planedimmunization

據(jù)某些傳染病的疫情監(jiān)測(cè)和人群免疫狀況，有計(jì)劃地用疫苗進(jìn)行免疫接種，預(yù)防相應(yīng)傳染病，最終達(dá)到控制乃至消滅相應(yīng)的傳染病的措施。疫苗名稱接種對(duì)象月（年）齡乙肝疫苗0、1、6月齡卡介苗出生時(shí)脊灰疫苗2、3、4月齡，4周歲百白破疫苗3、4、5月齡，18-24月齡白破疫苗6周歲麻風(fēng)、麻疹疫苗8月齡麻腮風(fēng)疫苗18-24月齡乙腦疫苗8月齡，2周歲A群流腦疫苗8-18月齡A+C流腦疫苗3周歲，6周歲甲肝減毒活疫苗18月齡我國(guó)計(jì)劃免疫程序表第二節(jié)免疫治療一、分子治療（輸入分子制劑）1.分子疫苗：治療性疫苗2.抗體：多克隆抗體：