TNAIA 0288-2024 一次性使用衛(wèi)生用品中金黃色葡萄球菌檢驗(yàn) 實(shí)時(shí)熒光PCR法

DeterminationofStaphylococcusaureusindisposablesanitaryproducts—2024-05-17發(fā)布2024-05-30實(shí)施I II 1 1 1 1 1 2 2 3 4 5 6本文件按照GB/T1.1-2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定本文件起草單位：寧夏計(jì)量質(zhì)量檢驗(yàn)檢測(cè)研究院、寧夏食品檢測(cè)研究1GB/T27403實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范食醫(yī)用手套或指套）、紙巾、濕巾、衛(wèi)生濕巾、電話膜、帽子、口罩、婦女經(jīng)期衛(wèi)生用品（包括衛(wèi)生護(hù)3.2DNA(deoxyribonuleicaci3.3Nuc(thermost3.4PCR(polymerasechain一次性使用衛(wèi)生用品樣品經(jīng)擴(kuò)增培養(yǎng)后，提取增菌液中DNA，以提取的DNA為模板，以金黃色葡萄球菌中（Nuc）基因中相對(duì)保守且高度特異的引物和探針進(jìn)行目標(biāo)物的實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增，根據(jù)Ct值2在100級(jí)凈化條件下用無(wú)菌方法打開(kāi)用于檢測(cè)的至少3個(gè)包裝，從每個(gè)包裝中取樣7.3.1手動(dòng)提取法。從樣品增菌液（7.2）表層吸取1mL增菌液。離心收集細(xì)菌（4000rpm/min，37.3.2試劑盒法。從樣品增菌液（7.2）表層吸取1mL增菌液，離心收集細(xì)菌（4000rpm按照商品化細(xì)菌基因組提取試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行細(xì)菌基因組DNA提取，如不能即時(shí)檢驗(yàn)，提取后DNA取適量DNA原液加無(wú)菌雙蒸水稀釋至一定倍數(shù)后，使用核酸蛋白分析儀或紫外分光光度計(jì)測(cè)定ρ—DNA濃度，單位為微克每毫升(μg/mL體積(μL）1檢驗(yàn)過(guò)程中分別設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照、陰性對(duì)照和空白對(duì)照。陽(yáng)性對(duì)照為金黃色葡萄球菌標(biāo)準(zhǔn)菌株DNA，陰性對(duì)照為大腸埃希氏菌標(biāo)準(zhǔn)菌株DNA，空白對(duì)照為等體積的無(wú)菌雙蒸水。每個(gè)待檢樣品提取DNA溶c)陽(yáng)性對(duì)照：有熒光對(duì)數(shù)增長(zhǎng)且熒光通道出現(xiàn)典型的擴(kuò)增曲4結(jié)果為陽(yáng)性者，該樣品檢驗(yàn)結(jié)果為金黃色葡萄球菌初篩陽(yáng)性，對(duì)樣品增菌液進(jìn)一步按照GB5A.1.1成分A.1.2制法6F:5'-CACCTGAAACAAAGCATCCTAA5'-FAM-TGCTTCAGGGCCATATTTCTR:5'-CGCTAAGCCACGTCCATATNuc基因的擴(kuò)增片段atgtacaaaggtcaaccaatgacattcagactattattgggtgcatttacgaaaaaaatggtagaaaatgcaaataa