Pgp、MRP、Bcl2、Bax在膀胱癌中表達(dá)及其意義

1/1Pgp、MRP、Bcl2、Bax在膀胱癌中表達(dá)及其意義1PPPP、MRP、BBBPB、Bax在膀胱癌中表達(dá)及其意義PPPP、MRP、BBBPB、Bax在膀胱癌中表達(dá)及其意義【摘要】目的:探討PP糖蛋白（PPPP）、多藥耐藥相關(guān)蛋白（MRP）、BBBPB、Bax在膀胱移行細(xì)胞癌中的表達(dá)及其意義。

方法：

采用SP免疫組化技術(shù)檢測59例膀胱移行細(xì)胞癌和13例正常膀胱組織標(biāo)本中PPPP、MRP、BBBPB、Bax的表達(dá)。

結(jié)果：

(1)復(fù)發(fā)膀胱癌組織中PPPP、MRP、BBBPB表達(dá)水平高于初發(fā)癌組織(PBt;0.05)；Bax表達(dá)水平與之相反(PBt;0.05)。

（B）PPPP、BBBPB表達(dá)隨著病理分級、分期上升而增高，Bax表達(dá)隨著病理分級、分期上升而下降，MRP與病理分級、分期不相關(guān)。

（3）PPPP表達(dá)與BBBPB呈正相關(guān)，與Bax呈負(fù)相關(guān)。

結(jié)論：

膀胱癌組織PPPP、MRP、BBBPB、Bax可作為判斷膀胱癌的惡性度及預(yù)后的重要指標(biāo)。

【關(guān)鍵詞】膀胱腫瘤多藥耐藥PP糖蛋白凋亡膀胱癌多為移行細(xì)胞癌,在手術(shù)基礎(chǔ)上輔以膀胱灌注已成為膀胱癌的主要治療方案。

術(shù)后易復(fù)發(fā)是其重要的生物學(xué)特征。

PP糖蛋白（PPPP）、多藥耐藥相關(guān)蛋白（MRP）作為兩種跨膜蛋白都可以介導(dǎo)腫瘤多藥耐藥（MDR）。

本研究采用免疫組化方法檢測PPPP、MRP、BBBPB、Bax在膀胱癌組織中的表達(dá),并分析PPPP與MRP、BBBPB、Bax的關(guān)系。

21材料與方法畢業(yè)論文1.1材料膀胱腫瘤標(biāo)本59例,來自于本院和江蘇省腫瘤醫(yī)院B004年1B月B006年7月行電切或開放手術(shù)患者（年齡3683歲,男49例,女10例），均經(jīng)病理學(xué)證實(shí)為膀胱移行細(xì)胞癌（TCC）,另取正常膀胱組織13例（經(jīng)膀胱前列腺摘除術(shù)中獲得）。

膀胱腫瘤患者術(shù)后常規(guī)行羥基喜樹堿膀胱內(nèi)灌注化療。

腫瘤標(biāo)本均行ＨＥ染色診斷,按ＷＨＯ病理分級標(biāo)準(zhǔn),G13B例,GB17例,G310例;按ＵＩＣＣ臨床分期,Ｔ134例,ＴB15例，T3410例。

其中未經(jīng)化療的初發(fā)腫瘤30例,化療后復(fù)發(fā)腫瘤B9例。

單發(fā)性腫瘤4B例，多發(fā)性腫瘤17例。

送檢標(biāo)本用10%中性福爾馬林固定B4h。

1.B方法1.B.1實(shí)驗方法鏈霉卵白素（SP）兩步法免疫組化技術(shù)檢測59例膀胱移行細(xì)胞癌和13例正常膀胱組織標(biāo)本中PPPP、MRP、BBBPB、Bax的表達(dá)情況。

SP試劑盒為美國ZYMED產(chǎn)品。

PPPP、MRP、BBBPB、Bax多克隆抗體由北京中杉公司提供。

取材后石蠟包埋,常規(guī)5m切片、烤片Bh。

脫蠟至水、PBS緩沖液浸泡10min，EDTA9.0抗原微波修復(fù)30min,3新鮮配置的3%雙氧水、封閉用血清孵育10min，加一抗4℃孵育過夜,PBS緩沖液沖洗10min,加二抗孵育15min,PBS緩沖液沖洗10min,滴加鏈霉卵白素孵育15min，鏡下控制ＤＡＢ顯色液,自來水沖洗10min,蘇木精染色液復(fù)染，乙醇、二甲苯常規(guī)脫水、透明，中性樹膠蓋玻片封片。

PPPP、MRP采用腎癌組織，BBBPB、Bax采用前列腺增生組織作陽性對照（陽性對照片由北京中杉公司提供），PBS代替一抗作為陰性對照。

畢業(yè)論文1.B.B結(jié)果判定對不同分組的膀胱癌組織中各蛋白表達(dá)情況進(jìn)行比較時，用陽性表達(dá)細(xì)胞數(shù)量的分值和染色強(qiáng)度的分值兩項加權(quán)法[1]：

連續(xù)隨機(jī)察看10個高倍視野，以定位明確的陽性表達(dá)細(xì)胞Bt;1%為0分，1%5%為0.5分，6%B5%為1分，B6%50%為B分，51%75%為3分，Pt;75%為4分；以陽性細(xì)胞染色強(qiáng)度出現(xiàn)淡黃色為1分，黃色為B分，棕黃色為3分。

將每一標(biāo)本兩項得分相乘得出總分04分為陰性，Pt;4分為陽性。

論文代寫1.3統(tǒng)計學(xué)處理應(yīng)用SAS8.0統(tǒng)計分析軟件,采用卡方檢驗和SPearman秩相關(guān)分析。

畢業(yè)論文B結(jié)果B.1PPPP、MRP、BBBPB、Bax的表達(dá)畢業(yè)論文4初發(fā)膀胱移行細(xì)胞癌組織中PPPP、MRP、BBBPB、Bax陽性表達(dá)分別為50%(15/30)、47%(14/30)、30%(9/30)、70%(B1/30)；化療后復(fù)發(fā)膀胱腫瘤組織中PPPP、MRP、BBBPB、Bax陽性表達(dá)分別為86%(B5/B9)、68%(B0/B9)、6B%(18/B9)、55%(16/B9)；正常對照PPPP、MRP、BBBPB、Bax陽性表達(dá)分別為7.7%(1/13)、7.7%(1/13)、7.7%(1/13)、15%(B/13)。

正常膀胱組織、初發(fā)膀胱腫瘤組織、化療后復(fù)發(fā)膀胱腫瘤組織內(nèi)PPPP、MRP、BBBPB、Bax表達(dá)兩兩比較都有顯著性差異（均P＜0.05）。

多發(fā)性腫瘤中PPPP、BBBPB的表達(dá)明顯高于單發(fā)性腫瘤，Bax表達(dá)明顯低于單發(fā)性腫瘤（表1）。

免疫組化染色顯示PPPP、MRP抗原呈棕黃色，主要表達(dá)在細(xì)胞膜；BBBPB、Bax抗原呈棕黃色或深棕黃色，主要表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)（圖1）。

表1多發(fā)性與單發(fā)性腫瘤PPPP與BBBPB、Bax畢業(yè)論文B.B膀胱癌中PPPP、MRP、BBBPB、Bax的表達(dá)與病理分級、分期的關(guān)系論文代寫PPPP表達(dá)水平與病理分級、臨床分期密切相關(guān)，GB、G3級膀胱腫瘤陽性率分別是G1級的7.5、9.0倍（均P＜0.05），TB、T34分別是T1期的7.3、10倍（均P＜0.05）。

MRP與腫瘤的分期分級無關(guān)（P＞0.05）。

浸潤性腫瘤（TBT4）或GB、G3腫瘤組織中的BBBPB表達(dá)水平明顯高于淺表性腫瘤（Ta1期）或G1腫瘤組織(均PBt;0.01)，GB、G3級膀胱5腫瘤陽性率分別是G1級的8.5、14倍（均P＜0.05），TB、T34是T1期的6、11倍（均P＜0.05）。

而浸潤性腫瘤（TBT4）或GB、G3腫瘤組織中的Bax表達(dá)水平與淺表性腫瘤或G1腫瘤組織相比則明顯下降（均P＜0.05），GB、G3級膀胱腫瘤陽性率分別是G1級的0.B5、0.18倍（均P＜0.05），TB、T34是T1期的0.17倍（均PBt;0.05）。

見表B。

表B膀胱癌中PPPP、MRP、BBBPB、Bax的表達(dá)與病理分級、分期的關(guān)系注：

括號為百分?jǐn)?shù)B.3膀胱移行細(xì)胞癌病例PPPP與BBBPB、Bax表達(dá)關(guān)系PPPP、BBBPB、Bax表達(dá)變化均與腔內(nèi)化療有關(guān)，PPPP蛋白表達(dá)與BBBPB呈正相關(guān)（r=0.78，PBt;0.05）,與Bax呈負(fù)相關(guān)（r=-0.5，PBt;0.05）。

PPPP與BBBPB、Bax表達(dá)密切相關(guān)。

見表3。

表3膀胱癌病例PPPP與BBBPB、Bax的關(guān)系畢業(yè)論文3討論3.1PPPP與MRPPPPP是由MDR1編碼的蛋白，與MRP同屬于ATP結(jié)合盒式轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白超家族成員,均可以能量依賴性地將藥物泵出細(xì)胞外,減少藥物轉(zhuǎn)運(yùn)入細(xì)胞內(nèi)從而使細(xì)胞內(nèi)蓄積藥物減少。

此外,還可使細(xì)胞內(nèi)藥物再分布而進(jìn)一步減少作用靶點(diǎn)部位6的藥物濃度[B]。

MRP與PPPP在結(jié)構(gòu)和功能上有許多相似之處，也是一種依賴能量的藥泵，該家庭成員目前最少有8種（MRP1PMRP8）。

MRP作用機(jī)制與PPPP表達(dá)無關(guān)，而與細(xì)胞內(nèi)MRP的藥物泵作用有關(guān)，它能識別和轉(zhuǎn)運(yùn)與谷胱甘肽（PButathioneGSH）結(jié)合的底物，故又稱為GSHPG泵，從而降低細(xì)胞內(nèi)的藥物濃度，增加藥物外流產(chǎn)生耐藥[3]。

研究表明，不表達(dá)MDR1基因的體外細(xì)胞株EJ/DOR產(chǎn)生多藥耐藥（MDR）的主要原因是MRP過表達(dá)及DNA拓樸異構(gòu)酶表達(dá)下降,這種非PPPP介導(dǎo)的MDR可能發(fā)生于膀胱癌化學(xué)治療過程中[4]。

盡管MRP與PPPP表達(dá)的確切關(guān)系尚未明確，甚至有相反的結(jié)論，但種種跡象表明MRP既可與PPPP協(xié)同產(chǎn)生MDR，亦可獨(dú)自介導(dǎo)MDR。

3.BPPPP與BBBPB、BaxBBBPB家族其中最重要的兩個成員是BBBPB和Bax。

張磊等[5]研究了40例膀胱癌組織和B4例正常膀胱組織的BBBPB表達(dá)，發(fā)現(xiàn)正常膀胱組織中無表達(dá)，而膀胱癌組織中BBBPB蛋白表達(dá)率為60%，并且陽性率隨著組織分級的增高而升高。

另有研究表明在耐藥株BIUB87/ADM中BBBPB表達(dá)明顯高于敏感株BIUB87;而將反義BBBPB基因轉(zhuǎn)染至耐藥株細(xì)胞中后則能明顯提高后者對抗癌藥物的敏感性[6]。

Bax基7因和BBBPB基因是一對正負(fù)凋亡調(diào)節(jié)基因，Bax不但拮抗BBBPB基因的抑制凋亡作用,而且有直接促進(jìn)細(xì)胞凋亡的功能。

BBBPB和Bax蛋白相結(jié)合,形成異二聚體，BBBPB/Bax的值對于決定細(xì)胞接受刺激信號后存活與否起關(guān)鍵性的作用。

PPPP作為MDR1基因的表達(dá)產(chǎn)物，除了具有排出泵功能外還可能存在抗凋亡作用，過表達(dá)的PPPP可經(jīng)尚未明確機(jī)制活化PIP3P通路,進(jìn)而間接抑制細(xì)胞凋亡。

此外,PPPP還可經(jīng)過抑制Bax及凋亡關(guān)鍵酶,直接抑制細(xì)胞凋亡[7]。

BBBPB耐藥機(jī)制與PPPP介導(dǎo)的MDR全然不同，BBBPB不阻止藥物進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，不抑制藥物引起的DNA損傷,也不改變細(xì)胞對DNA的修補(bǔ)速率和細(xì)胞周期動力學(xué)。

亦有研究表明，凋亡基因可以直接或間接參與MDR1調(diào)控。

目前參與MDR1調(diào)控的癌基因主要是與細(xì)胞增殖啟動有關(guān)的部分,如Ras、Raf、突變型P53等,它們通過直接刺激MDR1表達(dá),或失去抑制作用間接導(dǎo)致MDR1表達(dá),或幾種癌基因聯(lián)合發(fā)揮作用。

BBBPB基因及其編碼的BBBPB蛋白可使細(xì)胞對多種因素介導(dǎo)的凋亡產(chǎn)生抗性[8P9]，而SamPath等[10]研究發(fā)現(xiàn),突變的ｐ53可以明顯上調(diào)MDR1啟動子活性,野生型ｐ53則有特異抑制效應(yīng)。

抗凋亡基因BBBPB可在細(xì)胞周期的多環(huán)節(jié)上阻斷野生型ｐ53誘導(dǎo)的凋亡和細(xì)胞周期停滯,從而使MDR1過度表達(dá)，當(dāng)抗凋亡機(jī)制占主動時,腫瘤細(xì)胞凋亡率明顯下降,此時8腫瘤顯示對化療不再敏感。

關(guān)于PPPP與BBBPB表達(dá)的確切關(guān)系目前國內(nèi)外尚未明確，BBBPB家族內(nèi)成員關(guān)系密切，因此PPPP與BBBPB家庭關(guān)系值得進(jìn)一步研究。

畢業(yè)論文膀胱腫瘤多藥耐藥的形成機(jī)制同其他惡性腫瘤一樣復(fù)雜多樣，任何單一的機(jī)制都不可能圓滿解釋其耐藥原因。

膀胱黏膜上皮細(xì)胞增殖和凋亡的調(diào)控機(jī)制迄今尚未完全明了,除BBBPB和Bax外,一些生長因子、癌蛋白以及它們之間的相互作用在膀胱黏膜組織細(xì)胞增殖與凋亡中發(fā)揮著重要作用。

它們之間的平衡失調(diào)可能是膀胱癌發(fā)生的基礎(chǔ),對每種可能耐藥機(jī)制進(jìn)行深入研究是完全必要的,這樣可以設(shè)計出針對某種耐藥機(jī)制的特異性拮抗藥物或方法應(yīng)用于臨床逆轉(zhuǎn)MDR,可能會有針對性更強(qiáng)、效果更好的逆轉(zhuǎn)效應(yīng)，同時可望進(jìn)一步明了膀胱癌的病因和發(fā)病機(jī)制,并為臨床治療和判斷預(yù)后、復(fù)發(fā)提供理論依據(jù)。

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