abo基因相關(guān)多態(tài)性位點(diǎn)在abo血型不合hsct移植后嵌合體定量中的研究

1/1abo基因相關(guān)多態(tài)性位點(diǎn)在abo血型不合hsct移植后嵌合體定量中的研究ABO基因相關(guān)多態(tài)性位點(diǎn)在ABO血型不合HSCT移植后嵌合體定量分析中的研究博士研究生劉峰指導(dǎo)老師胡麗華教授中文摘要第一部分ABO常見等位基因相關(guān)NPs的模板篩選目的：

篩選出攜帶5個(gè)ABO等位基因相關(guān)的NPs（261,467,802,803,1061）的正常及突變純合子和/或雜合子，為后續(xù)嵌合體分析方法的建立及方法學(xué)評(píng)價(jià)提供合適的研究模板。

方法：

收集76例體檢者血樣，用抗-A、抗-B、抗A，B、抗A1、抗H和ABO反定紅細(xì)胞進(jìn)行ABO血型鑒定，要求正反定型一致，非孟買型，其中A18人，B27人，O18人，AB13人；抽提全血基因組DNA，設(shè)計(jì)5個(gè)NPs相應(yīng)的引物及PCR-SSP擴(kuò)增體系進(jìn)行分析。

結(jié)果：

篩選到的5個(gè)NPs按血型分布如下：

A（261雜合子、467正常純合子）有7例，A（261雜合子、467雜合子、1061正常純合子）有8例，A（261正常純合子、467雜合子、1061正常純合子）有3例；B（261雜合子、803雜合子）有23例，B（803突變純合子）有4例，O（均為261突變純合子）18例，AB（467雜合子、803雜合子、1061正常純合子）有10例，AB（467正常純合子、803雜合子）有3例,未能篩選出467突變純合子，802雜合子或突變純合子，1061雜合子或突變純合子。

結(jié)論：

直接在表型確定的DNA標(biāo)本進(jìn)行NPs篩選而不需要進(jìn)行基因分型是可行的，但受到篩選群體量及種群的ABO基因頻率限制，我們無法獲得467正常位點(diǎn)對(duì)應(yīng)的陰性模板，802及803正常及突變位點(diǎn)對(duì)應(yīng)的陽性模板或陰性模板，因此這些位點(diǎn)均不能進(jìn)入ABO基因相關(guān)NPsSYBRgreenI實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法的研究及方法學(xué)評(píng)價(jià)。

關(guān)鍵詞：

ABO等位基因核酸多態(tài)性位點(diǎn)序列特異性引物PCR第二部分建立ABO基因相關(guān)NPsSYBRgreenI實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法目的：

建立檢測(cè)261突變位點(diǎn)、261正常位點(diǎn)、467突變位點(diǎn)，803突變及正常位點(diǎn)的SYBRgreenI實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)體系。

方法：

以研究第一部分篩選到的261,467,803位點(diǎn)的模板為研究對(duì)象，分別建立依賴相應(yīng)的正常及突變位點(diǎn)SYBRgreenI實(shí)時(shí)熒光定量PCR，包括白蛋白基因內(nèi)參體系的建立，PCR反應(yīng)體系的建立和設(shè)計(jì)最優(yōu)的人為增加錯(cuò)配擴(kuò)增引物。

對(duì)各位點(diǎn)的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行融解曲線分析及電泳分析，各位點(diǎn)陰陽模板的△Ct值綜合確定最優(yōu)的人為增加錯(cuò)配擴(kuò)增引物，再對(duì)其擴(kuò)增產(chǎn)物通過測(cè)序分析來證實(shí)特異性。

結(jié)果：

建立的白蛋白基因內(nèi)參體系標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程為：

y=-3.04x+33.95,相關(guān)系數(shù)為1.00，此外在500