流式細胞術(shù)應用課件

流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)的原理和臨床應用流式細胞術(shù)應用FACSCalibur特點：光路調(diào)節(jié)系統(tǒng)固定自動化程度高操作簡便使用壽命長配備1-2根激光主要用于細胞分析臨床型（臺式機）流式細胞術(shù)應用BDLSR特點：配置三種激光器488/UV/633最多可檢測六種熒光和兩個側(cè)向參數(shù)可與下面FACSVantage連用.高效分選細胞流式細胞術(shù)應用FACSVantageDiVa科研型（大型機）

BDBiosciences

特點：多數(shù)字化適用用各類細胞分選4路分選分選10,000cells/secondormore

流式細胞術(shù)應用FACSAria科研型特點：分辨率高選配多種波長和類型激光器可把感興趣細胞分選到特定培養(yǎng)孔或板上（4路和24孔板）適用于高速分選和多色分析流式細胞術(shù)應用常用的臨床型流式細胞儀主機數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)的發(fā)展史1934年細胞在顯微鏡載物臺的毛細管中流過。1949年流動的懸浮粒子計數(shù)方法—Coulter效應。1967年發(fā)展了一種液流束、照明光軸、檢測系統(tǒng)三者垂直的流式細胞儀。80年代出現(xiàn)了完善的流式細胞儀。流式細胞術(shù)應用顯微鏡的發(fā)展史?J.PaulRobinson流式細胞術(shù)應用顯微鏡的發(fā)展史?J.PaulRobinson流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)的奠基人LouHerzenberg-1969-sorterbasedonfluorescence(arclamp)builtafterworkingwithoneofKamentsky’sRCSsystemswheretheybuiltaninstrumenttheycalledtheFluorescenceActivatedCellSorter(FACS)流式細胞術(shù)應用1970年的流式細胞儀Kamentsky-Bio/PhysicsSystems-1970commercialcytometer-the“Cytograph”He-Nelasersystemat633nmforscatter(andextinction)-supposedlythefirstcommercialinstrumentincorporatingalaser.ItcouldseparateliveanddeadcellsbyuptakeofTrypanblue.Afluorescenceversioncalledthe“Cytofluorograph”followedusinganaircooledargonlaserat488nmexcitation1970CytographpresentlyatthePurdueUniversityCytometryLaboratories流式細胞術(shù)應用1975年的流式細胞儀CoulterElectronicsmanufacturedtheTPS-1(Twoparametersorter)in1975whichcouldmeasureforwardscatterandfluorescenceusinga35mWargonlaser.Photo?2000–J.P.Robinson流式細胞術(shù)應用1977年的流式細胞儀1977-78developedtheEpicsseriesofinstrumentswhichwereessentially5wattargonionlaserinstruments,completewithamultiparameterdataanalysissystem,floppydriveandgraphicsprinter.Photo?2000–J.P.Robinson流式細胞術(shù)應用Actin-Rhodamine-phalloidinAntibodytoT.cruzi-FITCDNA-DapiImagedusinganMRC1000ConfocalMicroscope,40x1.3NAFluor流式細胞術(shù)應用Actin-Rhodamine-phalloidinAntibodytoT.cruzi-FITCDNA-DapiImagedusinganMRC1000ConfocalMicroscope,40x1.3NAFluor流式細胞術(shù)應用Actin-Rhodamine-phalloidinAntibodytoT.cruzi-FITCDNA-DapiImagedusinganMRC1000ConfocalMicroscope,40x1.3NAFluor流式細胞術(shù)應用Actin-Rhodamine-phalloidinAntibodytoT.cruzi-FITCDNA-DapiImagedusinganMRC1000ConfocalMicroscope,40x1.3NAFluor流式細胞術(shù)應用Actin-Rhodamine-phalloidinAntibodytoT.cruzi-FITCDNA-DapiImagedusinganMRC1000ConfocalMicroscope,40x1.3NAFluor流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應用

流式細胞儀概述

流式細胞術(shù)（FlowCytometry,FCM）是一種自動分析細胞的高技術(shù)，其原理是懸浮在液體中的分散細胞一個個地依次通過測量區(qū)，當每一個細胞通過測量區(qū)時產(chǎn)生電信號，這些信號可以代表熒光、光散射，光吸收或細胞的阻抗等。這些信號可以被測量、存貯、顯示，于是細胞的一系列重要的物理特性和生化特性就被快速地、大量地測定。流式細胞術(shù)應用

上述特性可以是細胞的大小、活性，核酸的數(shù)量、酶、抗原等等。儀器還可以根據(jù)所規(guī)定的參量把指定的細胞亞群從整個細胞群體中分選出來。流式細胞術(shù)在當前的細胞生物學、免疫學、腫瘤學、血液學、遺傳學、病理學、臨床檢驗學等各領(lǐng)域有著十分廣泛的用途。

流式細胞儀概述流式細胞術(shù)應用

流式細胞術(shù)是對懸液中的細胞或細胞器進行快速可達每秒鐘數(shù)千個乃至上萬個細胞。顯微鏡術(shù)可以研究組織的結(jié)構(gòu)、細胞定位和熒光在細胞中的分布。流式細胞術(shù)是一種零分辨率的儀器，它只能測量一個細胞的總核酸，總蛋白等，這是它的不足之處。流式細胞儀概述流式細胞術(shù)應用FluorescenceMicroscopewith

ColorVideo(CCD) 35mmCamera流式細胞術(shù)應用熒光顯微鏡的細胞熒光定量流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應用流式細胞儀概述

現(xiàn)代熒光技術(shù)和多參數(shù)相關(guān)測量技術(shù)的發(fā)展，流式細胞術(shù)在細胞群體或組成群體的亞群進行定量分析時，具有其他手段無法比擬的優(yōu)越性。

流式細胞術(shù)應用流式細胞儀的結(jié)構(gòu)一.流動室及液流驅(qū)動系統(tǒng);二.激光光源及光束成形系統(tǒng);三.光學系統(tǒng);四.信號檢測與存貯、顯示、分析系統(tǒng);五.細胞分選系統(tǒng)。流式細胞術(shù)應用細胞流動室

細胞流動室是FCM的心臟，它是根據(jù)流體力學中的層流鞘液原理設計而成，其結(jié)構(gòu)包括石英小室形成的鞘液腔及插入其中的樣品管。細胞呈單個排列通過流動室。FlowCellFluorescencesignalsFocusedlaserbeamSheathfluid流式細胞術(shù)應用流式細胞儀的液流系統(tǒng)示意圖流式細胞術(shù)應用激光光源與光束形成系統(tǒng)激光(Laser,lightamplificationbystimulatedemissionofradiation)是一種相干光源，它能提供單一波長、高強度及穩(wěn)定性高的光照激光波長:488nm,635nm及UV流式細胞術(shù)應用激光器常用激光器：氫離子激光器488nm蘭色激光氬離子激光器氪離子激光器流式細胞術(shù)應用聚光系統(tǒng)和檢測系統(tǒng)透鏡、小孔、多種濾片檢測器、放大器將光信號變成電脈沖信號流式細胞術(shù)應用計算機信號變成數(shù)據(jù)文件存儲、分析。流式細胞術(shù)應用

流式細胞儀的工作原理

待測細胞被制備成單個細胞的懸液，經(jīng)特異性熒光染料染色后放入樣品管中，在氣體的壓力下進入流動室。流動室內(nèi)充滿鞘液，在鞘液的約束下，細胞排成單列由流動室的噴嘴噴出，成為細胞液柱。液柱與入射的激光束垂直相交，相交點稱為測量區(qū)。流式細胞術(shù)應用流式細胞儀的工作原理

通過測量區(qū)的細胞被激發(fā)產(chǎn)生熒光。在與入射光束和液柱垂直的方向放置光學系統(tǒng)（透鏡、光闌、濾片和檢測器等）用以收集熒光信號。阻斷濾片用于阻擋激發(fā)光，二色性反射鏡用于選擇被測熒光波長，熒光檢測器是光電倍增管（PMT），散射光檢測器是光電二極管，用來收集前向角散射光（FSC）。流式細胞術(shù)應用流式細胞儀的原理流式細胞術(shù)應用光學系統(tǒng)

FCM的光學系統(tǒng)是由若干組透鏡,濾波片,小孔組成流式細胞術(shù)應用長通濾片流式細胞術(shù)應用短通濾片流式細胞術(shù)應用帶通濾片流式細胞術(shù)應用流式細胞儀的原理流式細胞術(shù)應用流式細胞儀的原理Signal流式細胞術(shù)應用信號檢測與分析當細胞攜帶熒光素標記物,通過激光照射區(qū)時,受激激發(fā),產(chǎn)生代表細胞內(nèi)不同物質(zhì)、不同波長的熒光信號,這些信號經(jīng)A/D轉(zhuǎn)換成數(shù)字信號,送計算機進行儲存、作圖、統(tǒng)計分析流式細胞術(shù)應用激發(fā)光源與熒光標記物流式細胞術(shù)應用散射光信號前向角散射(FSC，F(xiàn)orwardScatter)：代表細胞體積的大小。側(cè)向角散射(SSC，SideScatter)：代表細胞內(nèi)的顆粒度。流式細胞術(shù)應用熒光信號一種是細胞自身在激光照射下發(fā)出微弱的熒光信號，稱為細胞自發(fā)熒光另一種是經(jīng)過特異熒光素標記細胞后，受激發(fā)射得到的熒光信號流式細胞術(shù)應用自發(fā)熒光

用流式細胞儀測定細胞的特異性熒光染料的熒光時，這種自發(fā)熒光對所欲測定的特異性熒光是一種本底信號，自發(fā)熒光在多種情況下都會干擾特異性熒光信號，尤其是對低水平結(jié)合的熒光抗體它能減低染色的和未染色的細胞間的區(qū)別，使我們難以確定細胞中熒光信號的水平。流式細胞術(shù)應用

自發(fā)熒光的強弱與細胞的大小、細胞的類型、激發(fā)光的波長、發(fā)射光的檢測范圍等都有關(guān)系。產(chǎn)生自發(fā)熒光的分子可能是正常細胞的組成成分如核黃素、細胞色素等。這些成分在較大的細胞中含量較多，相應的自發(fā)熒光也就強一些。自發(fā)熒光流式細胞術(shù)應用

培養(yǎng)的細胞中死細胞比活細胞的自發(fā)熒光要強，在某些細胞樣品如脾和骨髓中，除了含有淋巴細胞和其他低自發(fā)熒光的細胞外還可能會有一些占不同比例的亮細胞，它們會干擾用免疫熒光方法本應能檢測出來的稀有的、細胞數(shù)目較少的亞群。

自發(fā)熒光流式細胞術(shù)應用

為減少自發(fā)熒光，應選用較亮的熒光染料，還應使用與熒光發(fā)射光譜相匹配的光學品質(zhì)優(yōu)良的濾片系統(tǒng)。利用較長波長的光線，如染料激光器的激光做為激發(fā)光源，也可減弱自發(fā)熒光。最后，對自發(fā)熒光還可用電子線路補償?shù)姆椒▽⒆园l(fā)熒光補償?shù)簟Ｗ园l(fā)熒光流式細胞術(shù)應用熒光信號線性測量和對數(shù)測量線性放大:即放大器的輸出與輸入是線性關(guān)系，細胞DNA含量、RNA含量、總蛋白質(zhì)含量等的測量一般選用線性放大測量對數(shù)放大:如果原來輸出是1，當輸入增大到原來十倍時，輸出為2；當輸入增大到原來一百倍時輸出為3等,通常使用在細胞膜表面抗原等的熒光檢測流式細胞術(shù)應用細胞分選（cellsorting）的工作原理

液滴形成信號的頻率約30KHz，此信號加在壓電晶體上使之產(chǎn)生同頻的機械振動，流動室也就隨之振動。于是液柱斷裂成一連串均勻的液滴，其形成的速度為每秒3萬個。細胞通過噴嘴的速度大約每秒2000個以下，如以2000個計算則平均每15個液滴中有一個液滴包有細胞，而其他液滴無細胞。細胞的性質(zhì)是在進入液滴以前已經(jīng)被測定了的。流式細胞術(shù)應用細胞分選（cellsorting）的工作原理

如果其特性與被選定要進行分選的細胞特性相符，則儀器在這個被選定的細胞剛形成液滴時給整個液柱充以指定的電荷。這樣，當被選定的細胞形成液滴時就帶有特定的電荷，未被選定的細胞形成的細胞液滴及不包含細胞的空白液滴不被充電，也不帶電荷。帶有電荷的液滴向下落入指定的收集器內(nèi)，從而完成了細胞分類收集的目的。流式細胞術(shù)應用流式細胞儀的分選原理流式細胞術(shù)應用

流式細胞儀原理示意圖流式細胞術(shù)應用FCM測量數(shù)據(jù)的存儲、顯示與分析數(shù)據(jù)存儲:listmode數(shù)據(jù)顯示:直方圖(DistributionHistogram)

二維點圖(DotPlot)

等高線圖(ContourPlot)

密度圖(Density)等流式細胞術(shù)應用直方圖流式細胞術(shù)應用二維點圖流式細胞術(shù)應用等高圖密度圖流式細胞術(shù)應用細胞的參量和熒光探針

流式細胞術(shù)能夠測量細胞的很多參量?？煞譃閮深悾阂活愂莾?nèi)部參量，指不用任何熒光探針標記就可測量的細胞參量；另一類是外部參量，指需要外加熒光探針標記的細胞參量。同時又可將細胞參量分為結(jié)構(gòu)參量和功能參量，結(jié)構(gòu)參量描述細胞的形態(tài)特征和化學組成，功能參量描述細胞的理化特征。這被稱為細胞參量的二維分類。流式細胞術(shù)應用

測量細胞的外部參量必須用熒光探針進行標記。熒光探針（熒光染料）是探測細胞內(nèi)結(jié)構(gòu)的非常靈敏的工具。細胞的參量和熒光探針流式細胞術(shù)應用各種熒光標記的抗體流式細胞術(shù)應用常用的熒光素FITC異硫氰酸基熒光素488PE藻紅蛋白545PI碘化丙啶490EB溴化乙啶480AO丫啶橙490TRITC四甲基若丹明554TexasRed德州紅355流式細胞術(shù)應用參數(shù)

結(jié)構(gòu)

功能

內(nèi)部

細胞大小、形狀，細胞質(zhì)的顆粒

氧化還原狀態(tài)

性，色素量，蛋白熒光

外部

DNA量、堿基比例，染色體結(jié)構(gòu)膜的完整性，通透性，

酶

RNA量，總蛋白，堿性蛋白

活性，內(nèi)吞性，表面電荷，

表面糖類。

細胞內(nèi)受體，DNA合成，

膜的流動性或微粘度，細

胞質(zhì)/線粒體膜

電位，膜結(jié)合

的鈣離子，細胞內(nèi)PH細胞的內(nèi)部參量和外部參量流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)的標本制備流式細胞術(shù)的標本必需制備成單細胞懸液。測定組織標本需用酶消化成單細胞或機械制備。流式細胞術(shù)需用新鮮的標本，未固定的組織。流式細胞術(shù)應用免疫樣本制備儀流式細胞術(shù)應用組織標本機械制備單細胞懸液流式細胞術(shù)應用細胞周期與DNA倍體分析流式細胞術(shù)應用基本術(shù)語（一）倍體性（Ploidy）：反映細胞內(nèi)染色體的數(shù)量單倍體（Haploid）：生殖細胞或配子中僅含有正常體細胞一半的染色體二倍體（Diploid）：正常的體細胞均是二倍體細胞高二倍體（Hyperdiploid）：高于正常的二倍體染色體低二倍體（Hypodiploid）：低于正常的二倍體染色體高二倍體和低二倍體有時又稱為異倍體或非整倍體（Aneuploid）流式細胞術(shù)應用基本術(shù)語（二）DNA指數(shù)（DNAIndex，DI）：指所檢測細胞的DNA含量與正常二倍體細胞的DNA含量的比值變異系數(shù)（CoefficientofVariation，CV）：指G0/G1細胞DNA含量標準差的比值

流式細胞術(shù)應用細胞周期分析

一、細胞周期分析細胞周期分為DNA合成準備期（G1）、DNA合成期（S期）、分裂準備期（G2）以及分裂期（M期）。此外，如細胞停止增殖稱為靜止期（G0）期。由于DNA在各期中不同，可以確定G1/G0、S、G2/M各期的百分比。使用特定熒光染料如PI對細胞的DNA染色，用流式細胞儀分析細胞中DNA的含量。流式細胞術(shù)應用溴脫氧脲嘧啶核苷替代胸腺嘧啶脫氧核苷參與DNA的合成，測定DNA的合成速率。異染性熒光染料AO，同染DNA、RNA識別G0/G1期。細胞周期分析流式細胞術(shù)應用細胞周期分析

設一個指數(shù)生長的細胞群體全部細胞都處于增殖狀態(tài)，用細胞動力學的語言說，就是增殖比是1。細胞群體經(jīng)染色后,由于每個細胞結(jié)合的染料與DNA含量成正比。由于G1期細胞的DNA含量為2C，G2和M期細胞DNA含量為4C，S期細胞的DNA含量在2C—4C之間。流式細胞術(shù)應用細胞周期分析

從理論上說，這樣一個群體的DNA直方圖應該是：即G1期細胞全體都在同一熒光道上63道，G2和M期細胞則位于2*63=126道處，S期細胞位于63—126道之間，由于DNA合成速率不是均一的，因而在這一段范圍內(nèi)不會是均勻分布。流式細胞術(shù)應用典型的DNA直方圖G0-G1SG2-MFluorescenceIntensity#ofEvents流式細胞術(shù)應用SideScatter腫瘤異倍體細胞正常二倍體乳腺癌異倍體細胞ForwardScatter流式細胞術(shù)應用利用細胞倍體性檢測細胞凋亡凋亡細胞PI-Fluorescence#Events正常G0/G1細胞流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)檢測細胞內(nèi)細胞因子流式細胞術(shù)應用實驗方法流式細胞術(shù)應用細胞表面標記及抗原決定簇性質(zhì)流式細胞術(shù)應用細胞表面標記及抗原決定簇性質(zhì)的研究

流式細胞術(shù)在細胞表面標記，特別是腫瘤細胞表面標記的研究中，以及在細胞分類和亞群的分析上，開始了一場細胞免疫學的革命。尤其在細胞表面標記分析上，占有舉足輕重的地位。流式細胞術(shù)應用CD34陽性細胞記數(shù)流式細胞術(shù)應用血液系統(tǒng)細胞表面標記的研究可用于白血病細胞的免疫分型和淋巴瘤的研究。細胞群體及細胞表面標記變化的檢測可以發(fā)現(xiàn)體內(nèi)外細胞表型及細胞亞群的微小變化，有利于發(fā)現(xiàn)惡變的腫瘤細胞，或在免疫治療及宿主排異反應中抗原決定簇發(fā)生改變的細胞群體。細胞表面標記及抗原決定簇性質(zhì)的研究流式細胞術(shù)應用各期血細胞抗原的表達流式細胞術(shù)應用B淋巴細胞表面抗原表達順序流式細胞術(shù)應用B淋巴細胞表面抗原表達順序流式細胞術(shù)應用T淋巴細胞表面抗原表達順序流式細胞術(shù)應用髓細胞表面抗原表達情況流式細胞術(shù)應用淋巴細胞亞群分析流式細胞術(shù)應用抗體組合CD45/CD14:用于設置淋巴細胞分析門（setlymphocytegate)免疫球蛋白對照抗體（IsotypeIgG）：用于設置陰性對照域值（setnegativethresholds）CD3/CD19：用于計數(shù)T和B淋巴細胞百分比或值CD3/CD4：用于計數(shù)CD4＋的T淋巴細胞CD3/CD8：用于計數(shù)CD8＋的T淋巴細胞CD3/CD16和/或CD56：用于計數(shù)NK細胞流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應用正常骨髓細胞免疫表型流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應用白血病/淋巴瘤免疫分型流式細胞術(shù)應用白血病/淋巴瘤免疫分型的原則實際上并不存在對白血病和淋巴瘤特異性的抗原標記，免疫分型采用的單克隆抗體均是正常細胞表面和/或細胞內(nèi)抗原的抗體區(qū)分正常細胞和白血病、淋巴瘤細胞是根據(jù)：（1）抗原表達強度的改變；（2）異?？乖谋磉_；（3）抗原表達與細胞分化程度不同步性流式細胞術(shù)應用急性淋巴細胞性白血病流式細胞術(shù)應用急性淋巴細胞性白血病，前體B淋巴細胞型流式細胞術(shù)應用診斷：急性淋巴細胞性白血病，前體B淋巴細胞型（普通型）抗原表達特點：CD71,CD19,CD10,CD22,HLADR,CD34陽性

kappa和lambda輕鏈陰性流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應用急性淋巴細胞性白血病，T細胞型流式細胞術(shù)應用診斷：急性淋巴細胞性白血病，T細胞型抗原表達特點：CD7,CD5,CD3,CD34,CD10陽性CD4,CD8部分陽性流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應用急性淋巴細胞性白血病免疫表型特點流式細胞術(shù)應用急性髓細胞性白血病流式細胞術(shù)應用急性粒細胞性白血病流式細胞術(shù)應用診斷：急性髓細胞性白血病，M1型抗原表達特點：HLADR,CD13,CD34,CD38強表達，CD33,CD71弱陽性CD7,CD11b部分陽性流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應用急性髓細胞性白血病，M2型流式細胞術(shù)應用診斷：急性髓細胞性白血病，M2型抗原表達特點：CD71,CD33,HLADR,CD7,CD38,CD13陽性CD11b,CD15部分陽性流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應用急性早幼粒細胞白血病流式細胞術(shù)應用診斷：急性早幼粒細胞白血?。∕3）抗原表達特點：CD71,CD33,CD9,CD13,MPO陽性CD34,HLA-DR一般陰性流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應用急性單核細胞白血病流式細胞術(shù)應用診斷：急性單核細胞白血?。∕5）抗原表達特點：CD33,HLADR,CD4,CD64,CD11b和CD15陽性CD4可能是單核細胞分化最敏感的標記，但缺乏特異性CD64也可以作為單核細胞分化的標記流式細胞術(shù)明確區(qū)分M4和M5是很困難的，一定要結(jié)合細胞形態(tài)學檢查流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應用急性紅白血病流式細胞術(shù)應用診斷：急性髓細胞性白血?。∕6）抗原表達特點：CD33,CD71,CD34,CD38,CD13陽性CD15部分陽性CD71弱陽性可能是紅細胞碎片，需注意區(qū)分流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應用急性巨核細胞性白血病流式細胞術(shù)應用診斷：急性巨核細胞性白血病（M7）抗原表達特點：CD33,CD71,CD34,CD61陽性CD45的表達情況多變，可以陰性，也可以強陽性；CD34和CD7的表達也多變，但HLA-DR一般不表達有時血小板粘附在白細胞上也可以出現(xiàn)CD61陽性，需注意與M7鑒別流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應用急性混合細胞白血?。ㄋ杓毎岛蚑淋巴細胞系）流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應用診斷：急性混合細胞白血?。ㄋ杓毎岛蚑淋巴細胞系）抗原表達特點：同時表達T淋巴細胞系抗原（CD7,CD4,CD10,CD34,CD3）和髓細胞系抗原（CD33,DR,CD34,CD15和MPO）流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應用急性混合細胞白血?。˙前體細胞系和髓細胞系）流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應用診斷：急性混合細胞白血?。˙前體細胞系和髓細胞系）抗原表達特點：同時表達B前體細胞抗原（CD34,HLADR,CD19,CD10）和髓細胞抗原（CD33,CD13,CD117）流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應用流式細胞術(shù)應