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文檔簡介
中華人民共和國出入境檢驗(yàn)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)牛及其產(chǎn)品中轉(zhuǎn)基因成分實(shí)時(shí)熒光PCR檢測方法1PCR檢測方法24.1.1實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀。4.1.2超凈工作臺(tái)。4.1.3核酸蛋白分析儀。4.1.4高速冷凍離心機(jī)，臺(tái)式小型離心機(jī)，Mini個(gè)人離心機(jī)。4.2主要試劑除另有規(guī)定外，所有試劑均采用分析純或生化試劑。4.2.1實(shí)驗(yàn)用水：應(yīng)符合GB/T6582中一級(jí)水的規(guī)定。4.2.2PCR緩沖液。4.2.6其他藥品及試劑配制方法見附錄A。4.3引物和探針按照表1中提供的引物和探針序列合成引物及探針，加入無離子水配成100pmol/pL貯存，配成直接用于PCR反應(yīng)的10pmol/μL的工作液?；蛞镄蛄刑结樞蛄袀渥?nèi)源5'-CTGCTATGTGTATGGGTTCC-3’內(nèi)對(duì)照外源5’-TATGACTGGGCACAACAGAC-3’5'-CGTCTTGCAGTTCATTCAGG-3’TTCC-3’篩查檢測外源5'-GTTCCGCGTTACATAACTTACGG-3’5’-AAGTCCCTATTGGCGTTACTATGG-3’AC-3’篩查檢測外源5'-AACCGCATCGAGCTGAAG-3’5'-GTTGTGGCGGATCTTGAAG-3’篩查檢測外源5’-TCACAAATTTCACAAATAAAGC-3’5'-ACATGATAAGATACATTGATGAG-3’TTTGTCC-3’篩查檢測外源5'-CATAGACACCCATGCCTAGG-3’CCAAGA-3’外源5’-GCCTTTCTGGGTAATACTTGTC-3’5’-TGTCATCAGTAATGTCATCATCC-3’CCTGCCA-3’轉(zhuǎn)人乳清白檢測外源5’-TGGGAGAGTGGTTACAACAC-3’5’-TACACCAGTAGCGGCTATTG-3’基因檢測310×PCR反應(yīng)緩沖液(含MgCl?)各2.5mmol/I引物(上游)引物(下游)12注：表中DNA模板為原料的模板量，加工產(chǎn)品可視加工程度適當(dāng)增加模板量。4劇烈攪拌，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH值至8.0(約需20g氫氧化鈉顆粒),然后加雙蒸水定容至A.8動(dòng)物組織裂解緩沖液：量取1mol/LTris-HCl緩沖液(pH8.0)10mL,500mmol/L(pH8.0)10mL,5mol/LNaCl溶液30mL,10%SDS100mL至800
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