臨床微生物檢驗(yàn)復(fù)習(xí)資料

臨床微生物檢驗(yàn)細(xì)菌整理(球菌)養(yǎng)鏈(液體培養(yǎng)要求不高，最適溫度最適耐干燥葡菌血瓊脂平明溶血環(huán)(β瓊脂中生長(大便發(fā)生菌群失調(diào)，平板上為黃色菌落觸酶試驗(yàn)(+) 片法——結(jié)合型——分泌型凝固為陰性或陽性均需做試管法(金葡菌、中間型 (+)，路登葡萄球菌玻片法(+)、素表現(xiàn)為敏感時(shí)(紙片法或MIC)進(jìn)行，陽性菌對(duì)不耐素耐藥 球菌試驗(yàn)③6.5%Nacl生長試驗(yàn)菌層球菌和草綠色鏈球菌pH7.4~7.6灰白色，透明或菌落②不別形成)③肺炎鏈球菌落④液體培粒沉淀)測(cè)(咽拭標(biāo)本的A群殖道標(biāo)本的 5%NaCl不生長，可確定為鏈球PYR試驗(yàn)、桿菌肽敏感試驗(yàn)(A大小兩種不同菌落)、CAMP試驗(yàn)(無乳鏈球菌的初步鑒定)分球菌毒素 GA群鏈球菌也稱化膿性鏈球菌或溶血性鏈球菌，是人類鏈球菌中致病力最強(qiáng)的細(xì)菌②B群β溶血性鏈球菌③α溶血性鏈球菌(甲型溶血性)n驗(yàn)S+—R——牛~牛R—+、高葉苷產(chǎn)生黑色菌落苷和PYR(+)、NaCl肉湯長驗(yàn)，根糖和精氨酸的代1)敏感結(jié)果，且作用于細(xì)胞壁的可出現(xiàn)協(xié)基霉素體外但臨基糖藥試驗(yàn)(HLAR)子①最適生長溫度35℃需氧生長，初分度刺激生長③需羊血、兔血或血可溶性淀粉力瓊脂平板上呈藍(lán)色菌落②或中度混濁氧化酶(+)觸酶(+)硝酸鹽還原(-)多糖合成(-)DNA酶(-)①初步鑒定：直徑1~2㎜、灰褐色、光滑、半透明、稍扁的菌落，G-雙球菌，氧化酶和觸酶試驗(yàn)(+)葡萄糖和麥芽糖發(fā)酵試驗(yàn)(+)，其他糖類發(fā)酵(—)可確定為腦膜炎~；葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn)(+)，其他糖類(—)可確素：菌膜蛋白時(shí)的注意事項(xiàng)①錯(cuò)誤的鑒定結(jié)果可帶腦++———淋+————脂平板上生長三丁酸甘油酯水解(丁酸酯酶)DNA酶(+)類產(chǎn)酸試驗(yàn)(+)可與奈瑟菌屬鑒別?？膳R床微生物檢驗(yàn)細(xì)菌整理(腸桿菌科)養(yǎng)毛生長2)對(duì)一般化學(xué)消毒劑敏料的已被培養(yǎng)糖(產(chǎn)酸或產(chǎn) 采用脂門革蘭陰性桿菌除志賀菌較少引起腸菌科許多細(xì)菌可引起染。鼠疫耶爾森菌引、慢性腹瀉、食物中抗原成分：包括菌體抗原(O)、鞭毛抗原(H)和表面抗原。①菌體抗原(O)：是細(xì)菌細(xì)胞壁成分，化學(xué)成是一個(gè)以核心多糖為中心的三O毛抗原(H)：是不熱的多糖抗原，在不同的菌屬中有不，-+--+科弧菌科氧物(LPS)，耐熱，加熱100℃不能滅活，目前能阻止清型別成較大的潤、灰白色的菌可發(fā)酵乳糖，形黏液型菌落IMViCAAAIUCSS央1、ETEC：生化反應(yīng)+血清分型+腸毒素檢測(cè) (最可靠)2、EIEC：①賴氨酸、動(dòng)力、乳糖、葡萄糖產(chǎn)氣均(-)②與志賀菌的生化反應(yīng)鑒別試驗(yàn)有醋酸鈉、葡萄糖胺利用和黏液酸鹽產(chǎn)酸、大腸埃希菌三者均(+)③鑒定內(nèi)容有生化反應(yīng)、血清學(xué)試驗(yàn)(國產(chǎn)血清OK1、OK2)、毒力測(cè)定(豚鼠眼角膜)。3、EPEC：生化反應(yīng)+血清凝集(國產(chǎn)血清有OK1、OK2、OK3)+細(xì)胞粘附試驗(yàn)4、EHEC：最重要的血清型O157：H7，鑒定：生化反應(yīng)+血清凝集，可不測(cè)定Vero也可確診5、EAEC：無抗血清，可用凝塊聚集試H養(yǎng)，次日觀察結(jié)果，表面形成凝塊者為陽性，均勻混濁無凝塊者為陰性。毒素 (LT)和耐熱腸毒素(ST)。兩種腸致菌①腸毒素型大腸埃希菌(ETEC)：引起兒童腹瀉和旅腹痛、低熱以及急性發(fā)作的類似②腸致病型大腸埃希菌(EPEC)：主要引起嬰幼兒腸道嘔吐、大量水樣便，便中含粘液但無③腸侵襲型大腸埃希菌(EIEC)：該菌引起的癥狀類似，如發(fā)熱、腹痛、水瀉或典型的菌痢腸埃希菌(STEC、VTEC或EHEC)⑤腸凝聚型大腸埃希菌(EAEC)高綠等染料邊緣整齊，有時(shí)乳糖(-)，三脂中產(chǎn)酸或產(chǎn)堿HS+)枸櫞酸鹽(-)酸(+)糞便的標(biāo)渣接用鹽，符合沙門菌屬特素染門★凡臨床分離菌乳糖、吲哚、脲酶(+)均不考慮為沙1、血清學(xué)診斷(肥達(dá)氏反應(yīng))：用已知的傷寒沙門菌的O、H抗原、副傷寒沙門菌(A、B、C表示)的H抗原，檢測(cè)患者的血清中的相應(yīng)抗體及其效價(jià)。用于輔助診斷傷寒、副傷寒甲、乙、丙。此方法與分離培養(yǎng)同時(shí)進(jìn)行或培養(yǎng)失敗時(shí)試驗(yàn)。方法:試管法和大孔反應(yīng)板2、抗原結(jié)構(gòu)：主要有三種，即菌體O抗原、鞭毛H抗原和表面(Vi等)抗原。①O抗原(菌體抗原)：多糖-類脂-蛋白質(zhì)復(fù)合物，耐熱如O2群(A)等。O抗原與相應(yīng)抗血清(IgM)發(fā)生顆粒狀凝集反應(yīng)。②H抗原(鞭毛抗原)：不穩(wěn)定的蛋白質(zhì)抗原，加熱60~70℃15分鐘或用乙醇處理臨床微生物檢驗(yàn)細(xì)菌整理(腸桿菌科)養(yǎng)G短H普通培養(yǎng)基抗力較菌為低基上形成乳糖不半透明的成粗糙型 (-)基(MAC指示劑為中性 去氧膽酸鹽(XLD指示劑為酚紅)培養(yǎng)基血清學(xué)鑒定痢疾志賀菌甘露醇(-)，宋內(nèi)志賀菌β-半乳糖苷酶和鳥氨酸脫羧酶(+)。腹等③外毒素(Vero毒素)： EIEC葡萄糖銨、粘質(zhì)酸鹽(+)志賀菌：醋酸鈉、葡萄糖銨、粘質(zhì)酸鹽(-)②與類志賀鄰單胞菌的鑒別：志賀菌：動(dòng)力、氧化酶(-)H2S、動(dòng)力(-)，血清學(xué)凝集(與沙門菌凝集，與志賀菌不凝集)G球℃最適生長，最適H長，但發(fā)育：可生長，但生菌科其它細(xì)菌力(-)，IMVC：-+--；均為(-)，對(duì)的形態(tài)、菌落特點(diǎn)和生化小腸結(jié)腸炎耶G偶長良好養(yǎng)基：無色、半透乳糖(-)、葡萄糖(+)、蔗糖(+)皆不產(chǎn)脲酶(+) 嗜冷性，脲酶(+)，硫化氫(-)，鳥氨酸脫羧酶(+)；發(fā)酵葡萄糖、蔗糖產(chǎn)酸不產(chǎn)和鼠李糖G-桿菌，有動(dòng)力(周身鞭毛)、無芽孢、無莢膜脂為渾濁的菌落③氧化酶(-)，觸酶(+)，葡IAAA愛德華菌屬鑒別：賴氨酸脫羧酶(-)②種間鑒別：弗勞地枸櫞酸桿菌大部分菌株吲哚(-)，硫化氫多數(shù)(+)臨床微生物檢驗(yàn)細(xì)菌整理(腸桿菌科)養(yǎng)較大、凸起灰白、紅色菌落氧化酶(-)，酸產(chǎn)、鳥DNA酶(-)，脲酶(+)，枸櫞二酸鹽(+)鳥氨酸脫羧酶(-)③種的鑒定：肺炎克雷伯菌吲哚(-)，產(chǎn)酸克雷伯菌吲哚(+)④特異性抗血清進(jìn)行莢膜腫原發(fā)性肺炎的感染成大而濕潤的黏液狀菌落②BAP：形成大而濕潤TSI或產(chǎn)酸/UREIND+/-),MOT(+)，VP(+/-)，ORN)-，動(dòng)力和鳥氨酸脫羧酶(+)②最終鑒定：各主要種間的鑒產(chǎn)生黃色色素菌引起一些腸道外感腸桿菌引起的新生兒G，有周。成團(tuán)+，彌散G有周身色 (紅色、粉紅色)菌落DNA酶(+)、脂酶(+)、明膠酶(+)屬間鑒定：三種酶(+)、對(duì)多粘菌素、頭染抗生素耐藥異變形桿在普通瓊脂平板狀薄膜不滿整個(gè)為遷徙現(xiàn)象，是、扁平、無色半硫化氫(+)、酶(+)、脲酶 (+)快速陽性的離抗炎形成有關(guān)→尿路呈持續(xù)酶(+)的細(xì)菌。酶，具有分解尿素的性能，感染后的+--+--入抗變量到5~7%同上枸櫞酸鹽(+)脲酶(-)，吲哚和動(dòng)力(+)，)①屬鑒定：與變形桿菌鑒別，硫化氫(-)；與摩登菌屬鑒別，鳥氨酸脫羧酶(-)斯圖雷極脲酶--/++-+-側(cè)金盞花醇+-+脫氨酶的細(xì)菌屬間鑒別變形桿菌屬普羅威登菌屬摩根菌屬H2S+--+/--+鹽+/-+-CITVPURE、IND、MOT、ORN(+)、腹瀉臨床微生物檢驗(yàn)細(xì)菌整理(不發(fā)酵革蘭陰性桿菌)養(yǎng)G短體培養(yǎng)種水溶性色素(綠膿素、滑，常融①氧化酶(+)、精氨酸水解(+)O型③吲哚(-)④明膠(+/-)、枸櫞酸鹽(+/-) 酸檢測(cè)形成類似沙門菌的菌落的感綠假單，引起銅綠惡臭熒光化酶+++精氨酸水解+++化葡萄糖++++++4℃生長--+2℃生長+---+氣味生姜?dú)馕缎瘸粑稛o+--素明養(yǎng)溫度、溶血的菌落，但菌下的培多數(shù)菌株產(chǎn)生黃色素上呈弱陽性)賴氨酸(+)、氧化快。明膠(+)、七葉苷(+)首選藥物：磺胺類、環(huán)丙沙星、替卡西林/克拉維酸?！锾烊荒退帲簛啺放嗄?+--S++-+RG成通培養(yǎng)最適溫長滑、邊緣整齊、直徑血不動(dòng)桿菌在血平板上可呈化酶(-)、硝酸鹽還原試驗(yàn)(-)、 (-)酸鹽還原試驗(yàn) (-)象臨床微生物檢驗(yàn)細(xì)菌整理(苛氧菌)養(yǎng)要求高，培養(yǎng)條件苛刻,普通培養(yǎng)基上不生長或很難生長的一類細(xì)菌。體外培養(yǎng)時(shí)需添加生長因子或其它營養(yǎng)成分，提供特殊的生長環(huán)境，需要長時(shí)間才能檢測(cè)到生長，故又稱“難培養(yǎng)的細(xì)菌”。養(yǎng)分離菌桿狀或物中呈多形性(長桿狀或絲狀)，的培養(yǎng)8小時(shí)出現(xiàn)中莢膜生②需要5%~10%的血或消圓小菌的菌，而無莢膜的菌株呈顆粒狀沉淀生顯混濁現(xiàn)上為灰白光滑、濕落；兔血為細(xì)小露羊血瓊脂脹試驗(yàn)星現(xiàn)象，配血桿菌菌菌落的流大，而遠(yuǎn)離血桿菌菌落不含血液的菌所進(jìn)行的的菌結(jié)果④(X+V)因子結(jié)果陰性的幾種可能原因：待測(cè)菌死亡、培養(yǎng)基缺乏營養(yǎng)、孵育條件未滿足、紙片失效(人獸共患病病株有微，很少蘭染色，因?yàn)楸粔A性色著色狀“。初次培養(yǎng)需要5%~10%的-37℃，最適或粗糙生長中需混濁無菌：無色、半凸起的菌液樣或干觸酶(+)、氧化酶(+/-)①細(xì)菌形態(tài)學(xué)(柯氏染色)~反應(yīng)：觸酶+、 (或生長試驗(yàn))：藥片周圍出現(xiàn)抑菌圈為敏感(抑制)，無抑)。④血清學(xué)凝完入宿的繁液會(huì)增不需要G球桿菌，常見、無鞭氧或兼性厭氧，長基道不呈粘型和粘液型養(yǎng)基：多不哚(+)，脲酶(-)，觸酶和氧化酶(+)、發(fā)酵葡萄臨床微生物檢驗(yàn)細(xì)菌整理(弧菌屬)有弧菌絕對(duì)需要鈉離子，某些細(xì)菌無鹽不生長。上不發(fā)酵乳糖：沙門菌、志賀菌、弧菌養(yǎng)，普進(jìn)行選擇在其表培養(yǎng)基(中心灰褐色的菌落)群樣排列2)動(dòng)力和制動(dòng)試驗(yàn)：陽性可推定。4)霍亂毒素的測(cè)定麝香草酚藍(lán))上形成的菌落較大，因分 (均含亞碲酸鉀)上，因細(xì)菌可將碲離。取玻片兩張，一張用來觀察動(dòng)力，另血清凝集試驗(yàn)：本試驗(yàn)主要用于霍亂弧菌的血清型鑒定 道傳染病——霍米泔樣弧菌屬的推測(cè)鑒定的混稠，用接種環(huán)挑取A、BA、CABCA為群特異性抗原，而B、C為型特異性抗原。-別型-紅細(xì)胞凝集-VP--D++R++霍亂弧菌具有色氨酸酶和還原硝酸鹽為，培養(yǎng)后所產(chǎn)生的兩種產(chǎn)物結(jié)合成亞硝酸鹽吲哚，滴加所共有的性質(zhì)(副溶血等除外)G極有氧①TCBS：藍(lán)綠色菌落(不發(fā)酵蔗久之不易刮①基本反應(yīng)：氧化酶試驗(yàn)(+)、葡萄糖(+)、乳糖(-)、吲哚(+)、脲酶(-)、VP(-)底沉淀物、魚蝦海產(chǎn)品中。主要性腹瀉，也可引素是產(chǎn)生性較高，對(duì)馬紅臨床微生物檢驗(yàn)細(xì)菌整理(氣單胞菌屬和鄰單胞菌屬)養(yǎng)G有，普嗜冷菌37℃不生長；嗜中溫③TCBS和SS：不生鑒別性胨水，液體培養(yǎng)基中MAC乳糖，應(yīng)與腸桿BAP(20ug/ml氨芐西林)：嗜水氣單胞隆氣單胞菌菌落有溶血現(xiàn)象。菌生化鑒定：氧化酶和觸酶(+)、硝酸鹽還原(+)、葡O/129敏感試驗(yàn)(R)、肌醇產(chǎn)酸、三種氨基酸、嗜鹽性、②種的鑒定：主要鑒別三個(gè)常見菌種，嗜水氣單胞菌、豚鼠氣單胞菌和威隆氣單胞菌。主要依據(jù)V-P、阿拉伯糖、氨基酸，其它種床上引起的感染常見病原菌之一。其為溶血毒素和細(xì)胞毒：氣單胞菌可引起多染，但以皮膚和軟組多數(shù)患者有與水或水，嗜水氣單胞菌和威G可林可抑現(xiàn)陽性P氧化酶和觸酶(+)、吲哚(+)、硝酸鹽還原(+)、發(fā)酵酸雙水解三者陽性和肌醇陽性為本菌一個(gè)種，既類志賀引起胃腸炎，好發(fā)狀可以是短時(shí)間的腹瀉。另外，還可膜炎、傷口感染等(1)與志賀菌屬細(xì)菌的鑒別：類志賀鄰單胞菌志賀菌OXI+—MOT+—(2)與氣單胞菌屬細(xì)菌的鑒別：試驗(yàn)類志賀鄰單胞菌氣單胞菌屬細(xì)菌肌醇+—O129SR(3)與弧菌屬細(xì)菌的鑒別：試驗(yàn)類志賀鄰單胞菌弧菌屬生長大多不生長TCBS不生長生長臨床微生物檢驗(yàn)細(xì)菌整理(棒狀桿菌屬)段或顆毛和芽?jī)啥伺虼?，排列如文字狀或亂放兩端或中異糖脂平板：棒狀桿菌的選擇性培養(yǎng)基。白喉菌落。在此培養(yǎng)基上生長的菌落分為三型柔軟，黑色、表面光滑有光澤，邊緣整整：重型表面有菌膜，其它兩型為均勻混濁或行染色，菌體染顆粒有明顯的顏色差別，易Albert(阿伯脫氏)：異染顆粒呈Neisser(奈瑟氏)：異染顆粒呈藍(lán)特征，作為頭氣管及鼻腔的粘膜，幾乎呈純時(shí)在皮膚、粘膜等部位的淺表性創(chuàng)強(qiáng)烈的外毒素胞毒作用③對(duì)組織有選擇性親癥和毒血癥染液中纖維蛋白將炎性細(xì)胞、黏膜壞死組織和菌體凝結(jié)在1)體外法：◆瓊脂平板毒力試驗(yàn)(EIek平板)：觀察待測(cè)菌與抗毒素2)體內(nèi)法(動(dòng)物試驗(yàn))：皮內(nèi)試驗(yàn)法U◆半小時(shí)后再次注射培養(yǎng)物于動(dòng)物的另一側(cè)體壁(對(duì)照)?！?4~72h觀察結(jié)果。臨床微生物檢驗(yàn)細(xì)菌整理(有芽孢需氧革蘭陽性桿菌)養(yǎng)芽胞和莢膜,接涂片：兩明顯莢膜,單的形態(tài)：形連接處有明標(biāo)本：因?yàn)榭垢瘮∧芰^菌體強(qiáng),所以在陳舊或?？梢娭挥小熬啊被虬菅堪?內(nèi)生芽胞)：卵體中央，小形成扁平、灰白、不透明、邊低倍鏡下呈卷：絮狀沉淀，無菌⑤重碳酸鹽血瓊脂上(CO2)：有絲現(xiàn)象。無毒 (+)、脲酶(-)、枸櫞酸鹽(-)。1)顯微鏡檢查：革蘭染色、莢膜染色(俄爾特2)莢膜熒光抗體染色3)核酸檢測(cè)1)普通培養(yǎng)基：灰白色、粗糙型菌血其它需血快速而法包括菌體和菌落長毒力試驗(yàn)：待測(cè)菌接種于素抑制聯(lián)合試驗(yàn)驗(yàn)驗(yàn)類具有我國列為乙類傳按甲類傳染病處畜或其尸體，以污染的環(huán)境及各體表接觸、消化夏秋季莢膜和毒素，均皮膚炭疽、肺炭次感染罕見大部分：細(xì)菌性抗原和炭利用此特點(diǎn)來進(jìn)行熱沉淀反應(yīng)(Ascoli)-與抗血原：特異性抗原吞噬作用，在體外可阻上的噬菌體受體，有助于細(xì)菌的繁常成為侵襲因子。用高價(jià)的莢膜抗腫脹試驗(yàn)，對(duì)細(xì)菌鑒定有一定的意質(zhì)組成的外毒素復(fù)合物。三種時(shí)均不能引起病理變化：應(yīng)在三級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行。生長中心或瓊脂平良好菌落較大，灰白玻璃樣或蠟：均勻混濁、有菌③卵黃瓊脂平板：卵黃反應(yīng)(乳光反應(yīng))：因卵磷脂被分解形成明膠(+)、卵磷脂酶(+)。經(jīng)過1~10-3于辨認(rèn)菌計(jì)數(shù)及生化反必要時(shí)進(jìn)行血清學(xué)分型起食物中季，引起食多為加熱烹米飯中極易無腐敗變質(zhì)防止二次污型：一類是的腸毒素引型，由耐熱：蠟樣芽胞桿菌在卵黃瓊，培養(yǎng)三個(gè)小時(shí)后，雖未見菌卵磷脂被分解形成的白色沉淀樣芽胞桿菌與病人標(biāo)本中的蠟樣芽臨床微生物檢驗(yàn)細(xì)菌整理(分枝桿菌屬)點(diǎn)：①菌體形態(tài)：為微彎曲或直的桿菌?！奔?xì)菌。同。抗酸桿菌的由來：本菌屬細(xì)菌大多數(shù)染色不易著色，經(jīng)加熱或延長時(shí)間才能著色，一旦著色后有抵抗鹽酸酒精脫色的性質(zhì)，故又稱抗酸桿菌(AFB)養(yǎng)①G+陽性，不易著色。②細(xì)長的直或略帶彎曲、兩端鈍圓的桿菌，有時(shí)可見分枝狀，單個(gè)散在或呈并常聚集成束狀、繩索狀或叢狀菌體堆積一團(tuán)時(shí)類似“菊花冠”狀桿菌團(tuán)。因衰老和抗結(jié)核藥物的作用可出現(xiàn)多形態(tài)，如球型、串珠狀或絲狀。③抗酸染色為紅色，背景為蘭色。PH.8。生長細(xì)顆粒成菌膜觸酶試驗(yàn)(+)假涂分枝不用因分應(yīng)冷(1)形態(tài)學(xué)檢查1)直接涂片染色鏡檢：2、根據(jù)對(duì)硝基苯甲酸(PNB)生長試驗(yàn)、噻吩-2-羧酸肼(TCH或T2H)生長試驗(yàn)、菌落形態(tài)和顏色，熱觸酶屬于結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群枝桿菌PNBTCH分枝桿菌++桿菌-+枝桿菌-+硝酸鹽還原試驗(yàn)型++最多的傳染卡介苗(BCG)就是有毒力的牛毒變異株我國的現(xiàn)狀：三高一低(患病核多見染枝桿菌不產(chǎn)生內(nèi)、外毒素及侵可能與細(xì)菌在組織細(xì)胞內(nèi)大量繁體成分及代謝產(chǎn)物的毒性以及機(jī)生的免疫損傷有關(guān)。結(jié)核分枝桿有利于結(jié)核分枝桿菌的黏附與入有使結(jié)核分枝桿菌在吞噬細(xì)胞內(nèi)長見菌體呈橘紫多藥干燥或金胺2)濃縮集菌涂片檢查法：法 (2)核酸檢測(cè)上陽性痰假陰性--核菌素注入受試者皮內(nèi)，若結(jié)核則結(jié)核菌素與致敏的淋態(tài)反應(yīng)性炎癥。如未感染過分析：0.5~1.5cm流行病學(xué)調(diào)查 密分枝菌酸與海藻糖結(jié)合的一種糖的結(jié)核分枝桿菌的細(xì)胞壁中。使中生長時(shí)相互粘連排列成長索：有毒株的細(xì)胞壁成分。能抑制吞體和溶菌酶的結(jié)合，減緩溶酶體分解作用，使細(xì)菌在吞噬細(xì)胞內(nèi)，可激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生遲發(fā)型超敏反一次。景清晰，抗酸菌呈紅色，其它細(xì)菌和細(xì)胞呈藍(lán)色⑩操作應(yīng)在生物安全柜中進(jìn)行。DNA、放線菌、螺旋體、支真核細(xì)胞型微生物(細(xì)胞核分化程度高，有核膜、核仁，細(xì)胞器完整，包括真菌和原蟲)非細(xì)胞型微生物(僅有一種核酸類型，包括病毒、亞病毒、朊粒)拮抗外來病原微生物和提供某些營養(yǎng)物的作用。位改變或寄居微生物叢平衡失調(diào)，能引起內(nèi)源性感染。)5.重視和加強(qiáng)與臨床的聯(lián)系踐。要是由于處理感染性物質(zhì)時(shí)的操作不當(dāng)造成的。8.消毒(disinfection)：通過物理或化學(xué)方法去除或殺滅大多數(shù)微生物的過程。滅菌(sterilization)：通過物理或化學(xué)方法殺滅或去除所有微生物的過程。消毒滅菌技術(shù)包括：熱力(濕熱滅菌和干熱滅菌)、化學(xué)(液體或氣體)、輻射(γ輻射和紫外線)、過濾技術(shù)。皮膚和軟組織感染，眼和結(jié)膜感染、子宮內(nèi)膜炎、產(chǎn)后生殖道感染，胃腸炎、肝炎等。2.臨床常見采血指征：1發(fā)熱(>38。C)或低溫(36。C)2寒戰(zhàn)3白細(xì)胞增多(計(jì)數(shù)大于12，000109/L，特別有“核左移”未成熟的或桿狀核的白細(xì)胞)4粒細(xì)胞減少(成熟的多核白細(xì)胞<1000109/L)5血小板減少6皮膚粘膜出血7昏迷，休克8多器官衰竭9CRP告流程1.壓滴法(濕片法)→不可有氣泡和外溢觀察于觀察厭氧菌的動(dòng)力熒光染色、特殊染色(鞭毛染色和莢膜染色)個(gè)原理，操作步驟與臨床意義復(fù)合物不易滲出。革蘭陰性菌細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)較疏松，肽聚糖層薄，含脂質(zhì)多，易被乙醇溶解，使細(xì)胞壁通透性增加，胞內(nèi)結(jié)晶○3等電點(diǎn)學(xué)說：革蘭陽性菌的等電點(diǎn)(pH2~3)比格蘭陰性菌(pH4~5)低，在相同pH的條件下，革蘭陽性菌比革蘭陰性菌所帶的負(fù)電荷(高層、斜面、高層斜面、平板)○1需氧培養(yǎng)法(37℃，18~24h)二氧化碳培養(yǎng)法：二氧化碳培養(yǎng)箱和燭缸法厭氧培養(yǎng)法(一)碳水化合物的代謝試驗(yàn)1.糖(醇、苷)類發(fā)酵試驗(yàn)(1)原理：不同細(xì)菌分解糖(醇、苷)的酶各異，代謝能力產(chǎn)物各不同，有的不分解，有的僅產(chǎn)酸，有的既產(chǎn)酸又產(chǎn)氣，利用此特點(diǎn)鑒(2)培養(yǎng)基：0.5~1.0%糖類等，內(nèi)有指示劑。細(xì)菌接種糖發(fā)酵管，37℃、24h孵育后觀察結(jié)果結(jié)果判斷：有的細(xì)菌能分解某些糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣(AG/+)，有的只能產(chǎn)酸而不產(chǎn)氣(A/+)，有的則不能分解糖類(N/-)★2.葡萄糖代謝類型鑒別試驗(yàn)(O/F試驗(yàn))在無氧環(huán)境下不能分解葡萄糖，稱為氧化型;在分解葡萄糖的過程中，可以萄糖；不分解葡萄糖的細(xì)菌稱為產(chǎn)堿型。HL培養(yǎng)基(O/F氧化-發(fā)酵培養(yǎng)基)h結(jié)果O加液體石蠟變色；F有氧或無氧環(huán)境中都能分解葡萄糖，兩管均變色N氧或無氧的環(huán)境中都不能分解葡萄糖，兩管均不變色K—開放管變藍(lán)，封閉管不變色3.β-半乳糖苷酶試驗(yàn)(ONPG)(1)原理：具有β-半乳糖苷酶的細(xì)菌，可分解鄰-硝基酚-β-D-半乳糖苷(ONPG)，生成黃色的鄰-硝基酚，在很低濃度下亦可檢出。(2)試劑：0.75MONPG溶液(4)應(yīng)用：迅速或遲緩分解乳糖的細(xì)菌ONPG試驗(yàn)為陽性，而不發(fā)酵乳糖的細(xì)菌為陰性。主要用于遲緩發(fā)酵乳糖菌株的快速鑒定aβ-半乳糖苷酶，可將乳糖分解糖快速運(yùn)到細(xì)胞內(nèi)所以需幾天乳糖才能被分解。苷水解試驗(yàn)(1)原理：有的細(xì)菌可將七葉苷水解成七葉素和葡萄糖，前者與二價(jià)鐵離子反應(yīng)，生成黑色化合物(2)培養(yǎng)基：七葉苷培養(yǎng)基、膽汁七葉苷培養(yǎng)基(3)方法及應(yīng)用：腸球菌陽性，其他鏈球菌陰性★5.甲基紅試驗(yàn)(MR)一步分解成甲酸、乙酸、乳酸等PH4.5以下，加入甲基紅試劑顯紅色(陽性)。如果酸進(jìn)一步轉(zhuǎn)化為其它物質(zhì)(醇、酮、醛、氣體和水)，或丙酮酸按PH在6.2以上，加入甲基紅試劑呈黃色(陰性)?！?.V-P試驗(yàn)VP的代謝試驗(yàn)(1)原理：細(xì)菌分泌的明膠酶(胞外蛋白水解酶)能分解明膠使明膠失去凝固能力而液化(3)應(yīng)用：a腸桿菌科細(xì)菌鑒別b厭氧菌鑒定c非發(fā)酵菌鑒定常用★2.吲哚試驗(yàn)(靛基質(zhì)試驗(yàn))成吲哚(靛基質(zhì))，吲哚與加入試劑對(duì)位二甲氨基苯甲醛作用，生成玫瑰吲酶試驗(yàn)②方法：將待檢菌接種于尿素培養(yǎng)基中，培養(yǎng)后出現(xiàn)紅色為陽性，不變色(橙色)為陰性 脫氨酶試驗(yàn)羧酶試驗(yàn)★方法及結(jié)果：將待檢菌分別接種于氨基酸脫羧酶培養(yǎng)基(含葡萄糖、精氨酸或鳥氨酸或賴氨酸，指示劑為溴甲酚紫)和氨基對(duì)照管 對(duì)照管為黃色，若培養(yǎng)基由黃色變?yōu)樽仙珵榘被崦擊让冈囼?yàn)陽性，若僅發(fā)酵葡萄糖顯黃色者為陰性。測(cè)定管由淡桔黃變紫(溴甲酚紫) (三)碳源利用試驗(yàn)枸櫞酸鹽(丙二酸鹽)利用試驗(yàn) (1)原理：某些細(xì)菌能枸櫞酸鹽(丙二酸鹽)為唯一碳源，可在枸櫞酸鹽培養(yǎng)基上生長，將其分解生成碳酸鈉，使培養(yǎng)基變?yōu)閴A性，指 為深藍(lán)色。 用于腸桿菌科細(xì)菌屬間的鑒定 (四)各種酶類試驗(yàn)★1.氧化酶試驗(yàn)使對(duì)苯二胺氧化，生成有色琨類化合物(二甲基為紅，四甲基為藍(lán))。★方法與結(jié)果：1)濾紙片法2)菌落法3)試劑紙片法：制成干紙片，便于保存。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，應(yīng)設(shè)陰、陽性對(duì)照菌株。★應(yīng)用：1)奈瑟菌屬陽性、莫拉菌屬陽性的鑒定2)腸桿菌科陰性、弧菌科、假單胞菌陽性及其它非發(fā)酵菌的鑒別化酶活性★2.過氧化氫酶試驗(yàn)(觸酶試驗(yàn))★注意事項(xiàng)①不宜用血平板上的菌落作試驗(yàn)，以免出現(xiàn)假陽性。②不宜用陳舊的培養(yǎng)物，以免出現(xiàn)假陰性③需設(shè)陰(鏈)、陽(葡)鮮配制驗(yàn)(1)原理：某些細(xì)菌可將硝酸鹽還原成亞硝酸鹽，后者在與乙酸作用生成亞硝酸，亞硝酸與對(duì)氨基苯磺酸作用，形成重氮苯磺酸，在與(3)結(jié)果：a加入試劑后顯紅色→陽性b加入試劑后不顯紅色→加入鋅粉，顯紅色為陰性,不顯紅色為陽性4.DNA酶試驗(yàn)★原理：細(xì)菌產(chǎn)生的DNA酶，可使長鏈脫氧核糖核酸(DNA)水解成寡核苷酸。因?yàn)殚L鏈DNA可被酸沉淀，而寡核苷酸則溶于酸，所用玻片法檢測(cè)；另一種是分泌到菌體外的游離凝固酶，可用試管法檢測(cè)菌液呈均勻混濁狀態(tài)，為陽性；菌液聚集呈團(tuán)塊或顆粒狀，為陰性mlml不凝固，則為陰性(24h后不凝固才報(bào)告陰性)。注意事項(xiàng)1)玻片法為篩選試驗(yàn)，陰、陽性結(jié)果均需進(jìn)行試管法。2)血漿必需新鮮。3)應(yīng)使用EDTA抗凝血而非枸櫞酸鹽抗凝。有些凝固酶陰性的葡萄球菌和腸球菌可利用枸櫞酸鹽，使抗凝血再次凝固而出現(xiàn)假陽性結(jié)果。4)最好不用人血。存在潛在的感染因子和凝固障礙6.CAMP試驗(yàn)(1)原理：B族鏈球菌能產(chǎn)生CAMP因子，可促進(jìn)葡萄球菌的β溶血素溶解紅細(xì)胞的活性，因此在兩菌(B族鏈球菌和葡萄球菌)的交(2)培養(yǎng)基：血瓊脂平板(3)應(yīng)用：B族鏈球菌陽性，特異性鑒定(4)注意事項(xiàng)ATCCATCC它金葡結(jié)果不典型，甚至出現(xiàn)假陰性結(jié)果。(1)原理：膽汁或膽鹽可溶解肺炎鏈球菌，可能是膽汁降低了細(xì)菌細(xì)胞膜表面的張力使菌體裂解，也可能是膽汁加速了肺炎鏈球菌的自(2)培養(yǎng)基：10%去氧膽酸鈉或純牛膽汁(3)方法：平板法35℃30min(4)應(yīng)用：肺鏈+與甲鏈-的鑒別(五)抑菌試驗(yàn)★1.O/129敏感(抑菌)試驗(yàn)(1)原理：O/129對(duì)弧菌屬和鄰單胞菌屬有抑菌作用，而對(duì)氣單胞菌無此作用。(2)培養(yǎng)基：堿性瓊脂平板(3)方法：10ug/片、150ug/片(4)結(jié)果與應(yīng)用：屬間鑒定(1)原理：A群鏈球菌對(duì)桿菌肽幾乎全部敏感，而其他群鏈球菌絕大多數(shù)對(duì)其耐藥。(2)培養(yǎng)基：血瓊脂平板(1)原理：肺炎鏈球菌對(duì)奧普拖欣敏感，而其他鏈球菌對(duì)其耐藥。(2)培養(yǎng)基：血瓊脂平板(3)結(jié)果及應(yīng)用：用于肺炎鏈球菌與其他鏈球菌的鑒別(六)其它試驗(yàn)A?！椒ㄅc結(jié)果：4%的KOH溶液保存期限不超過一周取一滴4%的氫氧化鉀水溶液(應(yīng)新鮮制)于潔凈的玻片上再取新鮮菌落少許，與氧化鉀溶液攪拌均勻，每隔幾秒上提接種環(huán)，觀察能否拉出絲來。能拉出粘絲為陽性結(jié)果(革蘭陰性菌)，仍為菌懸液者陰性(革蘭s出現(xiàn)陽性反應(yīng)，革蘭陽性菌60s以后仍為陰性反應(yīng)?！?.克氏雙糖鐵試驗(yàn)(復(fù)合生化反應(yīng))原理：克氏雙糖鐵(KIA)瓊脂用于觀察細(xì)菌對(duì)糖(葡萄糖和乳糖)的利用能力,以及是否產(chǎn)生硫化氫,可對(duì)細(xì)菌的種屬進(jìn)行初步鑒定。克氏雙糖鐵培養(yǎng)基制成高層(下層)和短的斜面(上層)其中乳糖濃度為葡萄糖濃度的10倍，。如果細(xì)菌只分解葡萄糖而不分解乳糖，葡萄糖分解產(chǎn)生少量的酸，在最初培養(yǎng)的8~12h內(nèi)也足以使高層和斜面變黃(酚紅指示劑6.8~8.4，黃~紅)，但隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長，培養(yǎng)基斜面部分所產(chǎn)的酸因接觸空氣被氧化，并因細(xì)菌利用含氮物質(zhì)生成堿性化合物，經(jīng)18~24h后整個(gè)斜面又恢復(fù)成紅色，深層在相，所產(chǎn)生的酸暫時(shí)不被氧化而仍呈黃色；如果細(xì)菌既分解葡糖糖，又分解乳糖，因培養(yǎng)基中含乳糖的濃度較高，產(chǎn)生大個(gè)培養(yǎng)基變黃；如果細(xì)菌分解培養(yǎng)基中的蛋白質(zhì)產(chǎn)生硫化氫，與培養(yǎng)基中的亞鐵離子生成硫化亞鐵黑色沉淀，使培養(yǎng)基7.抗原檢測(cè)：凝集反應(yīng)、免疫熒光技術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)平或患者恢復(fù)期抗體效價(jià)比急性期升高≥4倍才有意義。9.細(xì)菌毒素檢測(cè)：內(nèi)毒素(革蘭陰性)→鱟試驗(yàn)；外毒素：體內(nèi)試驗(yàn)→動(dòng)物試驗(yàn)、體外試驗(yàn)→抗原抗體反應(yīng)菌的抗菌效果：一代頭孢菌素>二代>三代；對(duì)革蘭陰性球菌的抗菌效果：一代頭孢菌素<二代<三代2.抗菌藥物敏感試驗(yàn)(AST)的意義3.敏感(S):血藥濃度達(dá)到MIC4~8倍或以上。是指分離菌株能被測(cè)試藥物使用推薦劑量時(shí)，在感染部位通?？蛇_(dá)到的抗菌藥物濃度所抑耐藥(R)：MIC高于藥物在血液或組織中的濃度。是指分離菌株不能被測(cè)試藥物使用推薦劑量時(shí)在感染部位通?？蛇_(dá)到的抗菌藥物濃度物對(duì)分離菌株的臨床療效不可靠。4.中介(I):血藥濃度相當(dāng)于或略高于MIC。是指抗菌藥物MIC接近血液和組織中通?？蛇_(dá)到的濃度，療效低于敏感菌株，在藥物生理濃效力，或者可用高于正常劑量的藥物進(jìn)行治療；另外中介還作為緩沖區(qū)，以避免微小的不能控制的技術(shù)因素造成重大5.非敏感(NS):由于沒有耐藥菌株或耐藥菌罕見，此分類特指僅有敏感解釋標(biāo)準(zhǔn)的分離菌株。對(duì)于這些菌株應(yīng)當(dāng)確證鑒定結(jié)果和藥敏結(jié)驗(yàn)方法:1.紙片擴(kuò)