(高清版)GB∕T 38571-2020 植物次生代謝物生物堿的檢測 液相色譜-質(zhì)譜法

ICS07.080A21中華人民共和國國家標準植物次生代謝物生物堿的檢測液相色譜-L-國家市場監(jiān)督管理總局國家標準化管理委員會ⅠGB／T38571—2020本標準按照GB/T1.1—2009給出的規(guī)則起草。本標準由中國標準化研究院提出并歸口。本標準起草單位：中國測試技術(shù)研究院生物研究所、河北省食品檢驗研究院、中國標準化研究院、河北醫(yī)科大學、中國計量大學。GB／T38571—2020植物次生代謝物生物堿的檢測液相色譜-質(zhì)譜法本標準規(guī)定了用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀檢測植物次生代謝產(chǎn)物生物堿的方法。樹堿、毛果蕓香堿、鬼臼毒素的測定。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法樣品經(jīng)提取液超聲提取、離心后，用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測定，外標法定量。4試劑或材料除非另有規(guī)定，所用試劑均為分析純。水為GB/T6682規(guī)定的一級水。10mL乙腈+90mL去離子水，混勻。色譜純。準確移取甲酸1.0mL置于1L容量瓶中，用水定容，混勻。4.41%（體積分數(shù)）甲酸-乙腈溶液1mL甲酸+99mL乙腈，混勻。L乙酸銨溶液稱取乙酸銨3.854g,用去離子水溶解，定容至500mL。乙酸銨溶液用氨水調(diào)12GB／T38571—2020純度均不小于98%。生物堿儲備液準確稱取0.100g相應(yīng)的生物堿分別置于100mL容量瓶中，用甲醇定容，配制成濃度為1mg/mL的儲備液，于4℃避光保存，有效期2個月?；旌蠘藴蕛湟簶鋲A、毛果蕓香堿、鬼臼毒素標準儲備溶液1.0mL于100mL容量瓶中，用甲醇定容，混勻，配制成-東莨菪堿、番木鱉堿、烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿、秋水仙堿、阿托品、士的寧、喜樹堿、毛果蕓香堿、鬼臼毒素濃度為10mg/L的混合標準儲備溶液，于4℃避光保存，可使用一周。有機相。5儀器設(shè)備5.1液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀(LC-MS/MS)：配有電噴霧離子源(ESI)和四級桿質(zhì)量分析器。電子天平感量為5.3離心機：最高轉(zhuǎn)速不低于95005.4超聲波清洗儀。5.6渦旋混合器。離心管6試樣制備植物組織、動物組織等固體樣品，絞碎并使其均質(zhì)。血液、尿液等液體樣品，將取得的全部原始樣品充分混勻后，待測。7試驗步驟乙腈渦旋混合超聲輔助提取加入無水硫酸鎂迅速振搖3GB／T38571—2020離心5min。取上清液5.0mL在45℃水浴中氮吹濃縮至干，用1.0mL10%乙腈溶液復溶，過微孔濾取血液試樣0.5mL于10mL離心管中，加入1mL乙酸銨-氨水緩沖溶液，渦旋混合1min,加入甲醇超聲輔助提取離心取上清液殘渣加入2.0mL甲醇重復提取一次，合并上清液，45℃水浴中氮吹濃縮至干，用1.0mL10%乙腈溶液復溶，過微孔濾膜，待測定。取尿液試樣1.0mL于10mL離心管中，準確加入4.0mL含1%甲酸-乙腈溶液，渦旋混合1min45℃水浴中氮吹濃縮至干，用1.0mL10%乙腈溶液復溶，過微孔濾膜，待測定。7.2儀器參考條件7.2.1液相色譜參考條件如下：色譜柱內(nèi)徑或相當者。b)流動相：流動相A—甲酸水溶液；流動相B—乙腈。梯度洗脫，梯度洗脫程序參見附錄A。流速e)進樣量：2μL。7.2.2質(zhì)譜參考條件如下：a)電離方式：電噴霧電離，正離子模式；翹氣輔助氣吹掃氣h)掃描模式：多反應(yīng)監(jiān)測(MRM)模式，11種生物堿質(zhì)譜參數(shù)參見附錄B。7.3混合標準工作溶液的制備取相應(yīng)的空白樣品，按照6.2步驟進行處理，用得到的空白樣品提取液將混合標準儲備溶液逐級稀-東莨菪堿、番木鱉堿、烏頭堿、次烏頭堿、新烏頭堿、秋水仙堿、阿托品、士的寧、喜樹堿、毛果由低到高進行檢測，以定量離子峰面積對質(zhì)量濃度作圖，做出標準曲線回歸方程。將試樣溶液注入液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀中，得到11種生物堿的質(zhì)譜響應(yīng)值，根據(jù)標準曲線得到待測液中11種生物堿的濃度。樣品溶液中各組分的響應(yīng)值應(yīng)在標準曲線的線性范圍內(nèi)，超過線性范圍則應(yīng)4GB／T38571—2020稀釋后再進樣測定。7.5定性判定在相同條件測定樣品溶液和標準溶液，如果樣品溶液中檢出的色譜峰的保留時間與標準溶液中的某種組分峰的保留時間一致（變化范圍在±2.5%),并且所選擇的兩對子離子的質(zhì)荷比一致，樣品溶液中定性離子相對豐度與濃度相當標準工作溶液中定性離子的相對豐度進行比較時，相對偏差不超過表1規(guī)定的范圍，則可判斷樣品中存在該組分。11種生物堿標準物質(zhì)的總離子流圖參見附錄C。表1定性確定時相對離子豐度的最大允許偏差相對離子豐度>50%>20%~50%>10%~20%≤10%允許的相對偏差±20%±25%±30%±50%除不加試樣外，均按7.1~7.5測定條件和步驟進行。7.7方法的檢出限、定量限本標準的方法檢出限、定量限見附錄D。8試驗數(shù)據(jù)處理植物組織、動物組織組分含量按式(1)計算：式中：xi—試樣中待測組分含量，單位為微克每千克(μg/kg);i—由標準曲線得出的測試液中某種組分的質(zhì)量濃度，單位為微克每升(μg/L);V—定容體積，單位為毫升(mL);K—稀釋倍數(shù)；m—試樣質(zhì)量，單位為克(g)。計算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。體液組分含量按式(2)計算：式中：xi—試樣中待測組分含量，單位為微克每升(μg/L);i—由標準曲線得出的測試液中某種組分的質(zhì)量濃度，單位為微克每升(μg/L);V定容—定容體積，單位為毫升(mL);K—稀釋倍數(shù)；GB／T38571—2020V試樣—試樣體積，單位為毫升(mL)。計算結(jié)果保留三位有效數(shù)字。9精密度在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不得超過算術(shù)平均值的10%。56GB／T38571—2020附錄A（資料性附錄）梯度洗脫程序梯度洗脫程序見表A.1。表A.1梯度洗脫程序表時間/min流動相A/%流動相B/%002060007GB／T38571—2020附錄B（資料性附錄）11種生物堿質(zhì)譜參數(shù)11種生物堿質(zhì)譜參數(shù)見表B.1。序號物質(zhì)名稱母離子m/≈透鏡電壓V子離子m/≈碰撞能V1-東莨菪堿212番木鱉堿203烏頭堿434次烏頭堿435新烏頭堿416秋水仙堿217阿托品228士的寧219喜樹堿32毛果蕓香堿11鬼臼毒素01GB／T38571—2020附錄C（資料性附錄）11種生物堿標準物質(zhì)的提取離子質(zhì)譜圖11種生物堿標準物質(zhì)的提取離子質(zhì)譜圖見圖C.1。圖C.111種生物堿標準物質(zhì)的提取離子質(zhì)譜圖89GB／T38571—2020附錄D（規(guī)范性附錄）方法檢出限、定量限方法檢出限、定量限見表D.1。分析物血液尿液動物組織中藥材其他植物組織檢